Új j tumor marker Gastrin-Releasing. Peptide ProGRP riumunkban. Piros Alfrédn rium. MOLSZE Kongresszus PÉCS P

Átírás

1 Új j tumor marker a Pro-Gastrin Gastrin-Releasing Peptide ProGRP bevezetése laboratóriumunkba riumunkban Piros Alfrédn dné, Geider Viola BMK Klinikai és s Mikrobiológiai Laboratórium rium Pécs MOLSZ Kongresszus PÉCS P 2009

2 Az elıad adás s vázlatav Tumormarker definíci ció Mi a ProGRP Biológiai jellemzık Architect ProGRP teszt Mintavétel tel Az eredmények áttekintése

3 Definíci ció A tumormarker (TM) kifejezés s minden olyan test- azonos,, sejtek vagy szövetek által termelt anyagra vonatkozik, amely a daganatos beteg testfolyadékaiban emelkedett mértékben van jelen, míg m g az egészs szséges ember, vagy a nem daganatos beteg hasonló nedveiben csak alacsony koncentráci cióban (vagy egyáltal ltalán n nem) jelenik meg. A tumor növekedn vekedésének, a terápia eredményess nyességének nek az indikátora tora,, a monitorozás (remisszió, relapszus) és s a prognózis megítélésének fontos eszköze. ze. Tumormarkerek szőrésre sre nem használhat lhatóakak szenzitivitásuk suk és specificitásuk suk miatt.

4 Szoros összefüggés állapítható meg a tumor tömege, t aktivitása és s a tumormarker koncentráci ció között A különbk nbözı daganatok különbk nbözı tumormarkereket termelhetnek, ugyanaz a tumormarker különbözı daganatokban is elıfordulhat Bizonyos tumormarkerek megjelenhetnek,emelkedhetnek aspecifikusan,, nem tumoros betegségekben gekben is pl.: fertızés, terhesség g stb. Kémiailag lehetnek: hormonok, antigének, nek, aminosavak, nukleinsavak, enzimek, polyaminok,, specifikus sejtmembrán fehérj rjék és lipidek. A kimutatás s helye szerint lehet celluláris (szöveti) és extracelluláris ris (keringı) tumormarker ez utóbbiak mennyisége noninvazív módszerekkel meghatározhat rozható Ideális tumormarker nincs

5 Mi a ProGRP (Pro-Gastrin-Releasing Peptide) A ProGRP a gastrin-releasing releasing peptide(grp) prekurzora. A GRP egy vékonybv konybélben termelıdı hormon, amit eredetileg sertésgyomorb sgyomorból l izoláltak, ltak, gastrin kiválaszt lasztó képességgel. Proteolitikus bontás s következtk vetkeztében kisebb molekulatömegő peptidek keletkeznek, melyek a gastrointestinális traktus és s a központi k idegrendszer számos funkcióját t szabályozz lyozzák A humán n GRP gén g n a 18-as kromoszómán n lokalizálódik lıfordul fordulás: gastrointestinalis rendszer, légzıtraktus, központi idegrendszer, neuroendocrin sejtek Kis koncentráci cióban fiziológi giásan is mérhetm rhetı a vérbenv

6 ProGRP Neuroendocrin típusú tumorok is termelik mint pl.: small cell lung cancer (SCLC), differenciálatlan nagysejtes carcinoma, medulláris pajzsmirigy tumor, carcinoidok,, hormon-rezisztens rezisztens prostata tumor Hasonló eredető markerek: : az NS (neuron specifikus enoláz) és s a CgA (chromogranin A) A SCLC tumorok 60-65% 65%-a a termelnek ProGRP-t Az SCLC legspecifikusabb markerének tartják Mivel a GRP nagyon gyorsan degradálódik dik a szérumban, annak stabilabb elı-anyag anyagát, a ProGRP-t használt lták k fel a diagnosztikai tesztekben (japán fejlesztések) sek)

7 ProGRP: Pro-Gastrin Releasing Peptide ProGRP 1 115, 118, 125 GRP ProGRP or conformational not identical sequence 3D6-2 2B10 3G2

8 ABBOTT Architect ProGRP (31-98) assay Kvantitatív chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) humán n szérum, ill. plasma ProGRP meghatároz rozásárara Paramágneses gneses,, kétlk tlépéses sandwich assay Monoclonalis egér r antitestek Dinamikus test-range range: : pg/ml Reportable test-range automatikus hígítással: pg/ml Hat pontos kalibráci ció Három szintő kontroll Detektálási limit: 0,50 pg/ml unkcionális szenzitivitás: s: 0,89 pg/ml Ref.: ujirebio Serumlabo LISA

9 Architect ProGRP Assay Procedure Magnetic microparticle (3G2+2B10 Mix) 50 ul + ASD 20 ul + Sample 50 ul Incubate 18 minutes Wash 3D6-2 Acridinium labeled conjugate (3D6-2) 50 ul ProGRP Incubate 4 minutes 3G2 2B10 Wash Read Magnetic Microparticle Source: R&D Concept review for ARCHITCT ProGRP

10 Mintavétel, tel, mintatárol rolás Szérum, plazma egyaránt használhat lható,, de az alvadás s során n keletkezı proteázok degradálj lják k a ProGRP-t,, ezért a plazma stabilabb Thrombin tartalmú mintavételi teli csı használata tilos! (szerin proteáz) A mintavételt teltıl l számítva 3 órán n belül l el kell végezni v a meghatároz rozást, addig is 2 8 o C-on kell tartani a mintát. t. Amint lehet, azonnal centrifugálunk. Három óra elmúlt ltával lefagyasztjuk. Hét napontúl csak -70 o C alatt tárolhatt rolható

11 Tüdıtumorok A leggyakoribb daganatos halálok lok világszerte (évi 1.35 millió új eset) A világon évente 8 millióan halnak meg daganatos betegség következtében, ebbıl 1,18 millióan tüdırákban Tekintettel az eltérı klinikai tulajdonságokra gokra,, chemoés radioterápiai érzékenységekre,, a tüdırák két fı szövettani csoportba sorolható: Kissejtes tüdıtumortumor (SCLC) Nem kissejtes tüdıtumortumor (NSCLC)

12 NSCLC SCLC Adapted from Lifeart Medclip, Lippincott & Wilkins, 2001

13 Túlélési arány elfedezéskori stádium A tüdıtumorok kb. 84 %-a kiterjedt stádiumban kerül felismerésre. 3-ból 2 kissejtes tüdıtumoros beteg már felfedezéskor kiterjedt stádiumú. A túlélési adatok javítására a legnagyobb lehetıség a tüdıdaganatok korai felfedezése.

14 ProGRP szintek (pg/ml) gészséges Benignus beteg Carcinoma (nem tüdı) Vesebetegség!! Nem kis sejtes tüdı tumor Kis sejtes tüdı tumor!! Molina R, Clin Biochem

15 A tüdıt tumor markerei 100 SCLC n=167 NSCLC n= M M M0 M SCC CYRA 21.1 CA CA 125 NS ProGRP SCC CYRA 21.1 CA CA 125 NS ProGRP A pro-grp a legérzékenyebb marker SCLC-ben A Cyfra 21-1 a legérzékenyebb marker NSCLC-ben Molina, Tumor Biol M0= nincs metastasis M1= metastasis

16 A diagnosztikai bizonytalanság g tényezt nyezıi Cut-off érték k megítélése a szenzitivitás és specificitás tükrében Minta: szérum, vagy plasma (51%-os eltérés s!?) Mintaszáll llítás, minta elıkész szítés Vesefunkció? Azonos labor, azonos módszer m elve Az immunoassay-ket általában befolyásol soló tényezık figyelembe vétele v (interferencia, aspecifikus reakció) Markerek dinamikája Analitikai és s biológiai variabilitás

17 A lelet interpretálása, posztanalitika ABBOTT Architect ProGRP teszt cut-off értéke: 63 pg/ml (szérum) Az analitikai mutatók (pontosság, funkcionális szenzitivitás, recovery, linearitás, correláció) jók A biológiai variabilitásra vonatkozó összesítı adatok még nincsenek A multiparametrikus adatok bíztatóak

18 redmények 20 betegnél 28 mérést végeztünk 7 betegnél megismételtük a mérést kemoterápiás kezelés után. Nemi megoszlás: : N = 13 : 7 Korbeli megoszlás: Serum cut-off értékként 63 pg/ml értékkel számoltunk. 8 betegnél ez alatti, 12 betegnél e feletti értéket észleltünk. Valamennyi beteg vesefunkciója normális volt.

19 Diagnózis felállításakor vizsgált betegek: Betegszám: Kor Nem ProGRP pg/ml Stádium , N 25,60 L 2. 36,40 2. kezelés után ,00 L , ,60 3. kezelés után

20 Betegszám: Komplett remisszióban lévı betegek: Kor Nem ProGRP pg/ml Stádium N 31,4 58 N Kezelésre rezisztens betegek: L - 10 hónap L - 24 hónap 2 hónappal késıbb L - 5 hónap Betegszám: Kor Nem ProGRP pg/ml Stádium , N N 210,6 156,9 1. KZLÉS UTÁN N 502,8

21 Kezelés alatt álló betegek: Betegszám: Kor Nem ProGRP pg/ml Stádium ,2 L 2. KZLÉS UTÁN 30,7 3. KZLÉS UTÁN RAD.RGR ,7 2. KZLÉS UTÁN 32,9 3. KZLÉS UTÁN RAD.RGR ,4 1. KZLÉS UTÁN ,6 3. KZLÉS UTÁN ,5 2. KZLÉS UTÁN KZLÉS UTÁN 637,6 3. KZLÉS UTÁN RAD.RGR KZLÉS UTÁN N KZLÉS UTÁN KZLÉS UTÁN KZLÉS UTÁN RAD. RGR.

22 Nemzetközi ProGRP tanulmányok eredményei gészs szségeseknél és benignus betegségek gek esetén n (kivéve ve a vesebetegségeket), geket), valamint nem tüdıt eredető malignus betegeket, a vizsgált esetek 88%-ában a ProGRP szint 50 pg/ml alatti NSCLC-ben a ProGRP szint az esetek 74%-ában 50,0 pg/ml alatti, 96%-ában 120,0 pg/ml alatt van Kissejtes tüdıt tumorban 50 pg/ml feletti értékeket találtak ltak mérsékelt tünetek t esetén n 65%-ban, kiterjedt betegségben gben a betegek 78%-ában. ProGRP és s NS kombináci ciójával 61%-os szenzitivitással ssal és s 100%-os specificitással ssal el lehetett különíteni k a SCLC-t és a NSCLC-t egymást stól l 300 pg/ml ProGRP és s 40 ng/ml NS cut-off értéknél

23 Konkluzió A tüdıtumor világszerte az egyik leggyakoribb daganat és a daganatos halálozás leggyakoribb oka. Korai felfedezés és elkezdett terápia javíthatja a túlélési adatokat. A legnagyobb diagnosztikai igény egy megbízható biológiai markerre/panelre van. ABBOTT Architect ProGRP teszt analitikai mutatói (pontosság, funkcionális szenzitivitás, recovery, linearitás, correláció) jók Cut-off értéke: 63 pg/ml (szérum) További vizsgálatok szükségesek a marker helyének megítélésére, kombinálva értékelni más markerek eredményeivel.

24 Köszönöm a figyelmet