Terhes nık véralvadási paramétereinek monitorozása, fibrinogén eredmények statisztikai elemzése

Átírás

1 Terhes nık véralvadási paramétereinek monitorozása, fibrinogén eredmények statisztikai elemzése Réger Barbara, Füzin ziné Budos Julianna, Litter Ilona Baranya Megyei Kórh rház z Klinikai és Mikrobiológiai Laboratórium rium Pécs, MOLSZE XI. Nagygyőlés,

2 Bevezetés Köztudott tény, hogy a terhesség hypercoagulációs irányba változtatja a haemostasis rendszert A terhesség elırehaladtával az egyéb véralvadási faktorokkal együtt a fibrinogén (Fg, Faktor I.) szintje is megemelkedik Vizsgálatunk célja az volt, hogy ezt a folyamatot nyomonkövessük és megfelelı statisztikai módszerekkel értékeljük

3 Fibrinogén/Fibrin Fibrinháló létrehozásával a véralvadási rendszer egyik legfontosabb eleme Megakadályozza az érpályából történı vérvesztést A véralvadási folyamat végterméke Fibrinolitikus folyamat kiindulópontja Májban és a megakaryocytákban termelıdik

4 Fibrinogén 3000 AS ból álló, helikális szerkezető szolubilis glikoprotein Szerkezetileg 3-pár láncból áll: Aα, Bβ, γ, melyeket diszulfid hidak kötnek össze

5 Fibrinogén Fibrinolízis során a plazmin a trinoduláris molekulát egy centrális (E-domain) és két terminális (D-domain) részre hasítja

6 Fibrinogén A plazma fibrinogén (Fg) ~340 kd Kombinált analitikai eljárással többféle molekulatömegő Fg különíthetı el: VLMW-Fg LMW-Fg HMW-Fg VHMW-Fg = 280 kd = 300 kd = 340 kd = 420 kd

7 A fibrinogén akut fázis protein Pozitív akut fázis fehérje, a gyulladásos folyamatok, szövetszétesés indikátora Gyulladásos megbetegedések akut fázisában nagymérető molekulák szintetizálódnak (HMW-Fg, VHMW-Fg), melyek a keringésbe kerülve veszítenek glikáltsági és foszforiláltsági szintjükbıl, proteolitikus hatások következtében pedig egyre kisebb fragmentumokká degradálódnak

8 Akut fázis proteinek dinamikája

9 Fibrinogén Félélet idı: 3-4,5 nap Referencia tartomány: g/l (reagens, módszer, referens anyag; 2005) Korrekt haemostasis fenntartásához szükséges minimális koncentráció: 0.8 g/l Alacsony Fg-szint, vagy kóros molekulaszerkezet vérzésveszéllyel járhat

10 Emelkedett Fg-szint növeli a szív- és érrendszeri betegségek rizikóját, az artériásés vénás trombózis valószínőségét Fg mérsékelt emelkedése figyelhetı meg: Terhesség Dohányzás Orális fogamzásgátló Ösztrogén adás során

11 A fibrinogén biológiai variabilitása Fiziológiás folyamatok jelentısen befolyásolják a Fg biológiai variabilitásának értékét CV W = 15,8% (Westgard) Pl.: napi-, havi-, szezonális ciklus, nem, életkor, terhesség, életvitel, étkezési szokások, táplálék kiegészítık, gyógyszerek, stress stb.

12 Fibrinogén Rutin meghatározásának módszerei: Gravimetriás Fehérjemeghatározás fotometriásan (Biuretmódszer) Clauss módszer (rutinban legáltalánosabban használt) Kinetikus (derivált) Immunológiai

13 Kutatási terv Várandós nık véralvadási paramétereit követtük nyomon más laboratóriumi paramétereik mellett, terhességük alatt mind a 3 trimeszterben, a 16., 26. és 36. terhességi héten. Jelen elıadásban a Fg eredmények alakulását mutatjuk be a terhességi kor elırehaladtával, kétféle Fg meghatározási módszerrel.

14 Anyag és módszer Reagens: 1. HemosIL PT-Fibrinogen Recombinant thromboplastin (nyúlagy, derivált-fg módszer) Standard visszavezethetısége: International Reference Standard RTF/95 a WHO ajánlásával 2. HemosIL Fibrinogen-C Clauss (bovin thrombin) Standard visszavezethetısége: International Fibrinogen Standard Mérımőszer: IL ACL 9000 véralvadási automata

15 Anyag és módszer Minta: Na-citráttal (129 mmol/l) alvadásgátolt TCT-szegény plazma 89 terhes nı mintáit vizsgáltuk a várandósságuk alatt mind a 3 trimeszterben (16., 26. és 36. terhességi hétben) Centrifugálás: 2000 g, 20 perc, 24 C Tárolás: -80 C-on feldolgozásig Statisztikai elemzés: SPSS 15.0 programcsomaggal történt

16 Módszer precizitás Mindkét módszernél meghatároztuk az intra- (within run precision) ill. az intervariabilitás (day to day precision) mértékét Calibration plasma-, Normal control- és Low control bemérésével. Fg (g/l) Target Within run precision n=18 Day to day precision n=20 Átlag SD CV % Átlag SD CV % PT-R Calibration Plasma 3,23 g/l 3,046 0,178 5,843 2,975 0,197 6,629 PT-R Normal Control 3,03 g/l 3,029 0,112 3,713 3,054 0,194 6,362 PT-R Low Control 1,84 g/l 1,814 0,132 7,28 1,847 0,161 8,691 Clauss-Fg Calibration Plasma 3,02 g/l 3,122 0,051 1,619 3,167 0,144 4,547 Clauss-Fg Normal Control 2,91 g/l 3,104 0,07 2,27 3,102 0,165 5,311 Clauss-Fg Low Control 1,78 g/l 1,8 0,041 2,258 1,847 0,1 5,402

17 Statisztikai elemzés Normalitásvizsgálat: Grafikai tesztek: 1. Boxplot diagram (kiugró értékek elemzése) 2. Hisztogram (eloszlásdiagram, haranggörbe) 3. P-P Plot (Normál eloszlás ábra) Statisztikai tesztek: 1. Kolmogorov-Smirnov-próba 2. Shapiro-Wilk-próba Összesen hat adatsort vizsgáltunk: 3 trimeszter Fg adatai két módszerrel

18 Eredmények Boxplot ábra (mind a három trimeszterben, kiugró értékekkel) Derivált módszer Clauss módszer N = 89 Fibr (g/l) 16 hetes Fibr (g/l) 26 hetes 89 Fibr (g/l) 36 hetes 3 2 N = Fib C (g/l) 16. hét Fib C (g/l) 36. hét Fib C (g/l) 26. hét

19 Boxplot ábra (mindhárom trimeszterben, kiugró értékek kizárásával) Derivált módszer Eredmények Clauss módszer N = Fibr C (g/l) 16. hét Fibr C (g/l) 36. hét N = Fibr (g/l) 16 hetes Fibr (g/l) 36 hetes Fibr (g/l) 26 hetes 2 Fibr C (g/l) 26. hét

20 Eredmények Hisztogram (2. trimeszter) Derivált módszer Clauss módszer Std. Dev =,67 Mean = 5,62 0 N = 83,00 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00 6,50 7,00 4,25 4,75 5,25 5,75 6,25 6,75 7,25 Fibr (g/l) 26 hetes

21 Eredmények Normál eloszlás ábra (3. trimeszter) Derivált módszer Clauss módszer Normal P-P Plot of Fibr (g/l) 36 hetes Normal P-P Plot of Fibr C (g/l) 36. hét 1,0 1,0,8,8,5,5 Expected Cum Prob,3 0,0 0,0,3,5,8 1,0 Expected Cum Prob,3 0,0 0,0,3,5,8 1,0 Observed Cum Prob Observed Cum Prob

22 Eredmények Kiugró értékek nélküli adatok statisztikai jellemzıi Derivált módszer Clauss módszer N Mean Std. Error of Mean Median Mode Std. Deviation Variance Skewness Std. Error of Skewness Kurtosis Std. Error of Kurtosis Range Minimum Maximum Sum Percentiles Valid Missing a. Calculated from grouped data. Statistics b. Multiple modes exist. The smallest value is shown c. Percentiles are calculated from grouped data. Fibr (g/l) Fibr (g/l) Fibr (g/l) 16 hetes 26 hetes 36 hetes , , ,42420,078945,073781, ,10500 a 5,58800 a 6,32200 a 6,259 6,095 b 5,495 b,719220,672176,811808,517278,451820,659032,638,099,209,264,264,264 -,492 -,242 -,498,523,523,523 2,698 3,298 3,642 4,106 4,061 4,577 6,804 7,359 8, , , ,209 4,58250 c 5,20250 c 5,75325 c 5, , , , , ,01100 N Mean Std. Error of Mean Median Mode Std. Deviation Variance Skewness Std. Error of Skewness Kurtosis Std. Error of Kurtosis Range Minimum Maximum Sum Percentiles Valid Missing a. Calculated from grouped data. Statistics b. Multiple modes exist. The smallest value is shown c. Percentiles are calculated from grouped data. Fibr C (g/l) Fibr C (g/l) Fibr C (g/l) 16. hét 26. hét 36. hét , , ,02999,070566,084972, ,16920 a 4,90000 a 6,01425 a 3,937 4,756 b 5,885,598770,721013,842299,358525,519859,709468,523,262 -,136,283,283,283,152 -,696 -,488,559,559,559 2,875 3,081 3,615 2,999 3,670 4,075 5,874 6,751 7, , , ,159 3,83710 c 4,59767 c 5,60400 c 4, , , , , ,72650

23 Eredmények A Kolmogorov-Smirnov próba alátámasztja, hogy az összes adatsor - a páronkénti adatok is normál eloszlásúak (legkisebb p érték p=0,093) A normálistól való eltérés nem igazolható vagy kicsi, ezért páros t próbával ellenıríztük a trimeszterek alatti változást és a két metodika összehasonlítását

24 Eredmények A két módszerrel kapott Fg eredmények között szignifikáns a különbség mindhárom trimeszterben (p<0,001) Átlag, Fg (g/l) 1. trimeszter 2. trimeszter 3. trimeszter derivált-metodika 5,2 5,6 6,4 Clauss-metodika 4,3 5,1 6,0 Átlagok közti különbség, Fg (g/l) trimeszter trimeszter derivált-metodika 0,4 0,8 Clauss-metodika 0,8 0,9

25 Eredmények A két metodika közti különbség csökken a terhességi kor elırehaladtával, ill. a Fg-szint emelkedésével (p<0,001) Átlag, Fg (g/l) 1. Trimeszter 2. trimeszter 3. Trimeszter Két metodika közti különbség 0,9 0,5 0,4

26 Eredmények Fg (g/l) 16 hetes terhesek Fg (g/l) 26 hetes terhesek 7,9 7,4 6,9 6,4 5,9 5,4 4,9 4,4 3,9 3,4 2,9 y = 0,8654x + 1,3595 R 2 = 0,7613 2,9 3,9 4,9 5,9 6,9 7,9 Fibr (g/l) 16 hetes Lineáris (Fibr (g/l) 16 hetes) Fg Clauss (g/l) 8,5 7,5 6,5 5,5 4,5 3,5 y = 0,7645x + 1,6617 R 2 = 0,703 2,5 2,5 3,5 4,5 5,5 6,5 7,5 Fibr (g/l) 26 hetes Lineáris (Fibr (g/l) 26 hetes) Fg Clauss (g/l) Fg (g/l) 36 hetes terhesek 8,9 8,4 7,9 7,4 6,9 6,4 5,9 5,4 4,9 4,4 3,9 y = 0,759x + 1,7479 R 2 = 0,7563 3,9 4,9 5,9 6,9 7,9 8,9 9,9 Fibr (g/l) 36 hetes Lineáris (Fibr (g/l) 36 hetes) Fg Clauss (g/l)

27 Következtetés I. A terhesség elırehaladtával a Fg értékek szignifikánsan emelkednek A két módszerrel kapott Fg eredmények között szignifikáns a különbség A derivált módszerrel kapott adatok szignifikánsan nagyobbak A két módszer közti különbség a terhesség elırehaladtával csökken A magyarázat talán a biológiai folyamatokat alapvetıen eltérı módón prezentáló, más-más alapelven mőködı módszerekben rejlik

28 Következtetés II. Adataink szerint terhességben az alábbi fibrinogén referencia tartományok fogadhatók el: Clauss módszerrel (g/l): 16 hét: 4,43 ± 1,65 (91,6%) 26 hét: 5,14 ± 1,79 (95,2%) 36 hét: 6,15 ± 1,97 (94,0%) Derivált módszerrel (g/l): 16 hét: 5,22 ± 1,63 (96,6%) 26 hét: 5,59 ± 1,60 (94,4%) 36 hét: 6,40 ± 1,72 (95,5%)

29