A Flowcytometriás. en. Sinkovichné Bak Erzsébet,

HTML
DOWNLOAD

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "A Flowcytometriás. en. Sinkovichné Bak Erzsébet,"

Máté Szalai
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 A Flowcytometriás keresztpróba jelentısége élıdonoros veseátültet ltetést megelızıen. en. Sinkovichné Bak Erzsébet, Schmidt Lászlóné

2 Mikor végezhetv gezhetı el a veseátültet ltetés? Veseátültetés s akkor végezhetv gezhetı, ha a donor és s a recipiens között az ún. HLA-keresztpr keresztpróba negatív, azaz a donor HLA- antigénjeivel njeivel szemben specifikus antitestek nem mutathatók k ki a recipiens szérum mintájában. Az Európai Immungenetikai Társaság g elıírása (EFI standard) szerint cadaver veseátültet ltetést megelızıen en kötelezk telezı a CDC technikával kivitelezett keresztpróba. Élıdonoros átültetés s elıtt szüks kséges egy érzékenyebb technikával kivitelezett keresztpróba is, ugyanis az alacsonyabb titerő citotoxikus ellenanyag nem mutatható ki biztonságosan a CDC módszerrel. m Érzékenyebb módszer m a flowcytometriás keresztpróba.

3 Röviden a Flowcytometriáról A flowcytometria különálló sejtek rendkivül gyors, multiparaméteres teres vizsgálat latára alkalmas laboratóriumi riumi eljárás. Felhasználásával lehetıvé válik sejtpopuláci ciók k elkülönítése és s szétv tválasztása sa az immunfenotipus vagy a funkcionális állapot alapján. Nagyon fontos a minta elıkész szítés, s, a sejt szuszpenzió elıáll llítása. A szövetek szétv tválasztásánál l törekedni t kell az egyes sejtek életképességének megmaradására, ra, mert a vizsgálat elvégz gzésének, értékelhetıségének feltétele tele az ép p sejtek jelenléte.

5 A flowcytométer ter mőködési elve Az analizálni lni kívánt k sejtek morfológiai tulajdonságaik alapján n törtt rténı megkülönb nböztetésére, funkcionális állapotuk jellemzésére fluoreszkáló festékkel törtt rténı jelöléseket alkalmaznak. A jelölt lt sejteket lézer l sugár r világítja meg. A készk szülék k a lézer l indukálta optikai jeleket detektálja, és s dolgozza fel.

7 Mi a keresztpróba? Laboratóriumunkban riumunkban 1 éve kezdtük k el alkalmazni a flowcytometriás keresztpróbát t a CDC ( complement dependens citotoxicitás) ) keresztpróbával párhuzamosan, p az élıdonoros átültetések elıtt. A keresztpróba olyan eljárás, amikor a beteg savójához adjuk a donor sejtjét, t, inkubáljuk szobahın 30 percig, majd complement hozzá adása után n ismét inkubáljuk 1 óráig. Ezután n festjük, és s végül v l formalinnal leáll llítjuk a festési si reakciót t majd értékeljük k a keresztpróbát. t.

8 Három eset ismertetése se CDC technikával végzett v keresztpróba negatív v lett, szemben a flowcytometriás keresztpróba pozitív v eredményt adott. Két t esetben a donor a férj f volt. Az alloimmunizáci ciót a terhességek válthattv lthatták k ki. Az ELISA technikával végzett v ellenanyagszőrés s során igazolódott, hogy a betegek szérummint rummintájában, a férj f idegen HLA-antig antigénjével szemben mutatható ki az antitest.

9 Két t esetben pozitív v keresztpróba

10 Harmadik eset bemutatása A harmadik esetben potenciális donorként nt a testvér r szerepelt. Az ellenanyagszőrés s olyan specificitást st mutatott (anti-hla HLA-A2), A2), ami a testvér r idegen HLA-antig antigénjenje ellen irányult.

11 A harmadik eset diagrammja

12 Az eredmények értékelése A donor sejt+beteg szérum csövekben mért m Geo-Mean értékeket osszuk el a negatív v kontrollban mért m Geo-Mean értékekkel. Külön K n a T és s B sejt populáci ciókban. Ha a hányados h nagyobb mint 1.5, a keresztpróba POZITÍV. Ez azt jelenti, hogy a vizsgált keresztreakcióban az anti- humán IgG jelölıdés s több t mint másfm sfélszerese a negatív kontrollénak. nak. Gyenge aspecifikus kötıdés s szinte minden mintában láthatl tható (jobb alsó kvadráns) ez azonban nem zavarja a T ill. B sejteken megjelenı pozitivitás értékelését.

13 Egy különleges k eset Kétféle keresztpróba CDC-módszerrel erısen pozitív, flowcytométerrel terrel negatív Egy hónap h múlva m ismételt keresztpróba, csak CDC- módszerrel. Az eredmény negatív

14 A flowcytometria jelentısége Csak a humán n sejteket érzékeli a mérés m során, más m s eredető anyagok nem tudják megzavarni a pontos mérést. m A bemutatott esetek azt igazolják, hogy szüks kség g van olyan érzékeny módszer m alkalmazására, amely az alacsony titerő,, de a beültetett szervre káros k citotoxikus ellenanyagot is biztonságosan kimutatja.

15 Köszönöm m megtisztelı figyelmüket!

Hasonló dokumentumok

Jurásné Lukovics Mónika, Dr. Bohaty Ilona, Dr. Kozma László PhD OVSz Debreceni RVK

Jurásné Lukovics Mónika, Dr. Bohaty Ilona, Dr. Kozma László PhD OVSz Debreceni RVK Az újszülöttben kialakuló trombocitopénia (