Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen"

Nóra Szőke
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP /1/A

2 Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP /1/A Csősz Éva Molekuláris terápiák 7. előadás REKOMBINÁNS ANTITESTEK ÉS A PHAGE DISPLAY TECHNIKA

3 A 7. fejezet célja, hogy bemutassa a terápiák során felhasznált antitestek termelésének lehetőségeit és korlátait. A fejezet során bemutatásra kerül az antitestek termelődésének folyamata, a terápiás antitestek termelése hibridómákban illetve a nagyfokú antitest diverzitás biztosítása fág diszplay segítségével. A 7. fejezet témakörei 7.1. Áttekintés Az antitestek szerkezete és termelődése a szervezetben Antigén antitest kölcsönhatás 7.2. A terápiás antitestek termelése Antitestek termelése hibridómákban Humanizált antitestek Humán antitestek termelése 7.3. Antitestek termelése fág diszplay segítségével A fág diszplay technika bemutatása Fág könyvtárak készítése 7.4. A terápiás antitestek alkalmazása

4 Az antitestek szerkezete NH 3 + NH 3 + Szupervariábilis régió NH 3 + NH 3 + V L V H V H V L C H1 F ab régió C L COO - CH1 Könnyű lánc: C L konstans régió, variábilis régió COO - Diszulfid hidak C H2 Hinge régió Nehéz lánc: konstans régió, variábilis régió Fc régió C H3 COO - COO -

5 Az antitestek nehéz láncának szerkezete kb. 85 gén kb. 27 gén kb. 6 gén V H1 V H2 V H3 J H1 C V H4 V Hn D H1 D Hn J H2 J H3 J Hn C µ C C C α Nehéz lánc V H4 C IgG D H1 J H2

6 Az antitestek könnyű láncának szerkezete kb. 35 kappa gén kb. 5 kappa gén V L1 V L2 V L3 V L4 V Ln J L1 J L2 J L3 J Ln C kb. 30 lambda gén kb. 4 lambda gén V L2 J L3 C kappa könnyű lánc

7 Az antitestek termelése a B sejtekben B sejt Antitest

8 A klonális szelekció és klonális expanzió Rekombináció Kapcsolódási diverzitás Szomatikus hipermutáció Y Y Y Y B sejt BCR Klonális szelekció Antigén/epitóp B sejt Klonális expanzió Plazma sejt Specifikus antitest

9 Poliklonális antitestek B sejt Y Y Y B sejt Antitest Antigén Y Epitóp Antitest B sejt

10 Monoklonális antitestek B sejt Antitest Antigén Epitóp

11 Antitestek termelése hibridómákban Antigén Mielóma sejtek HGPRT Antitest termelés Egér immunizálása Lépsejtek izolálása HGPRT Antitest termelés Lépsejtek és mielóma sejtek fúziója, a hibridóma sejtek létrehozása Hibridómák szűrése és szaporítása Y Y Y Y Y Y Y Antitestek izolálása

12 Humanizált antitestek Egér antitest Humán antitest Humanizált antitest / kiméra antitest

13 Humán antitestek termelése génmódosított egerekben Egér immunoglobulin gén Humán immunoglobulin gén Humán vagy humanizált antitestek termelése

14 Az M13 bakteriofág szerkezete M13 bakteriofág 5 db p6 5 db p9 5 db p db p8 DNS kb 5 db p3 900 nm F-pilus E. coli

15 Az immobilizált fehérjékhez kötött fágok specifikus elúciója Specifikus elúció Immobilizált fehérje / affinitás mátrix

16 Enzim fág diszplay mátrix

17 Szubsztrát fág diszplay I. mátrix

18 Szubsztrát fág diszplay II. mátrix mátrix

19 Enzim-szubsztrát fág diszplay I. mátrix

20 Enzim-szubsztrát fág diszplay II. mátrix mátrix

21 Fág könyvtárak készítése Változatos szekvenciák sokasága Fágmid Rekombináns fágmid

22 Proteáz szubsztrát fág könyvtár készítése TÁMOP /1/A Változatos szekvenciák létrehozása Proteáz szubsztrát szekvencia hgh gén Proteáz szubsztrát M13 giii gén hgh gén Proteáz szubsztrát M13 giii gén Fágmid vektor Fágmid vektor Fág könyvtár

23 Szubsztrát fág diszplay proteáz hasítóhelyek fejlesztése Proteáz érzékeny szekvenciák Proteáz hgh receptor Proteáz Szekvenálás Alacsony ph mátrix Proteáz rezisztens szekvenciák

24 In vivo fág diszplay ér endothel sejtek térképezése A fágok az erek falán expresszált fehérjékhez kötődnek Fág könyvtár beadása intravénásan Biopszia A kötődött fágok lemosása A fágok által hordozott peptidek/fehérjék azonosítása A kötődött fágok szaporítása

25 Antitest könyvtárak készítése teljes vérből Teljes vér (Immunizált donor) Antitest gének Limfociták mrns Antitest specifikus primer Fágmid cdns E. coli sejtek 10 8 különböző antitest génjét tartalmazzák

26 Antitest függő citotoxicitás mechanizmusa Tumor ellenes antitestek Fc receptor Tumor sejt Ölő sejt (NK sejt vagy monocita)

arthritisz Crohn betegség Spondilitisz Basiliximab Humán-egér kiméra antitest IL2

27 Immunszupresszáns hatású terápiás antitestek alkalmazása Monoklonális antitestek Adalimumab Infliximab Golimumab Cetrolizumab pegol TNFalfa Pszoriázis Reumatoid arthritisz Crohn betegség Spondilitisz Basiliximab Humán-egér kiméra antitest IL2 receptor alfa lánc Transzplantáció utáni szervkilökődés megakadályozására, főként veseátültetések esetén

28 A terápiás antitestek változatai Bispecifikus antitest (kb. 300 kda) IgG - scfv (Fab scfv) 2

29 A kisméretű terápiás antitestek változatai Fab F(ab ) 2 scfv Tandem scfv Diabody Triabody Bispecifikus antitest Fv S-S S-S dsfv scfv 2 Nanobody

Hasonló dokumentumok

Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban

Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban 7. előadás Immunizálás. Poliklonális és monoklonális ellenanyag előállítása, tisztítása, alkalmazása Az antigén (haptén + hordozó) sokféle specificitású ellenanyag