Módszer az ASEA-ban található reaktív molekulák ellenőrzésére

HTML
DOWNLOAD

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Módszer az ASEA-ban található reaktív molekulák ellenőrzésére"

Viktória Borosné
9 évvel ezelőtt
Látták:

1 Módszer az ASEA-ban található reaktív molekulák ellenőrzésére Az ASEA-ban található reaktív molekulák egy komplex szabadalmaztatott elektrokémiai folyamat, mely csökkenti és oxidálja az alap sóoldatot, melynek eredménye számos ismert reaktív molekula egyensúlyi helyzete. Ezek a reaktív molekulák stabilak és standard analitikai módszerekkel mérhetők az ASEA-ban. Az ilyen reaktív molekulák azonosak az élő sejtekben természetes úton termelődő ilyen molekulákkal, melyek jelenlétét sikeresen mérték az elmúlt 30 évben bizonyos fluoreszcens színezékek, mint indikátorok használatával. Az ASEA-ban található reaktív molekulák ellenőrzése rendszeresen történik három standard fluoreszcens indikátor használatával, név szerint R- phycoerithrin (RPE), Aminophenyl fluorescein (APF) és Hydroxyphenil fluorescein (HPF). Ezek a fluoreszcens molekulák fizikailag megváltoztatják alakjukat (és fényességüket, amikor érintkezésbe

Az ilyen reaktív molekulák azonosak az élő sejtekben természetes úton termelődő ilyen molekulákkal, melyek jelenlétét sikeresen mérték az elmúlt 30 évben bizonyos fluoreszcens színezékek, mint

lépnek specifikus reaktív molekulákkal. Ezek a konform változások erősítik vagy csökkentik az indikátorok fluoreszcenciáját bizonyos meghatározott fényfrekvencián.

2 lépnek specifikus reaktív molekulákkal. Ezek a konform változások erősítik vagy csökkentik az indikátorok fluoreszcenciáját bizonyos meghatározott fényfrekvencián. A fluoreszcenciának ezt a változását mérik fluorospektrométerrel, ami az indikátorok által kibocsátott fényspektrum intenzitását méri. Az indikátorok leírása A két új eredeti szonda, az Aminophenyl fluorescein (APF) és Hydroxyphenil fluorescein (HPF) melyeket Tetsuo Nagano et al (1) fejlesztett ki, szelektívek az erősen reaktív oxigén fajok (hros) detektálásában. Mind a két szonda alacsony reaktivitást mutat a ROS egyéb formáival szemben. A vizsgálat alapelve: konform változások az APF-ben és HPF-ben molekulák fluoreszcens tulajdonság változások. alig fluoreszcens erősen fluoreszcens Phycobiliprotein fluoreszcens színezék színkép jellemzői Fluor Gerjesztés max Molekulatömeg (nm) Kibocsátás max (nm)

Az indikátorok leírása A két új eredeti szonda, az Aminophenyl fluorescein (APF) és Hydroxyphenil fluorescein (HPF) melyeket Tetsuo Nagano et al (1) fejlesztett ki, szelektívek az erősen reaktív

3 R-Phycoerytrin (RPE) 240, , 545, ábra A három, az ASEA-ban található reaktív molekulák koncentrációjának mérésére szolgáló indikátor leírása. Az alul található táblázat az R-PE alapvető tulajdonságait sorolja fel. Az indikátorokban bekövetkező változások a reaktív molekuláknak történő expozíció előtt és után, jelzik az ilyen reaktív molekulák létezését. A három indikátor mindegyike egy-egy specifikus reaktív molekulára érzékeny. Ezek az indikátor színezékek mindegyike nagyon rezisztens a hibás pozitív jelzésekre, és ezt nagy mélységekig tanulmányozták. Az ASEA, LLC a Thermo Fischer Scientific által gyártott Nanodrop 3300 fluorospektrométert és magasan képzett analitikusokat alkalmaz, hogy rutinszerűen mérhessék az egyes tétel ASEA-ban található reaktív molekulák mennyiségét. Egy a helyszínen működő független laboratórium majdnem mindennapos rutin alapján használja az ASEA expozíciónak kitett fluoreszcens indikátorok valamelyikét, így mérve az ASEA-ban található reaktív molekulák koncentrációját.

Az indikátorokban bekövetkező változások a reaktív molekuláknak történő expozíció előtt és után, jelzik az ilyen reaktív molekulák létezését.

4 A Minőségbiztosítási folyamat részeként, az ASEA Gold Standardban a reaktív molekulák koncentrációját folyamatosan mérik mindegyik mintában. Azok a tételek, melyekben nincs meg a Gold Standardnak megfelelő reaktív molekula koncentráció, azok megsemmisítésre kerülnek. Ezzel szemben a kiindulási alapnak tekintett sósoldat soha nem mutatott mérhető reaktív molekula koncentrációt, a szabadalmaztatott elektrokémiai folyamat végrehajtása előtt. A 2. ábra egy Nanodrop 3300 kalibrációjáról készült screen-shot, mely mutatja az R-PE indikátor reakcióját a különböző ASEA koncentrációkra. A különbségek a reaktív molekula koncentrációknál egyértelműen láthatók a görbéken. Három mérést végeznek mindegyik mintakoncentráción a megfelelő konzisztencia biztosítása érdekében. A kontroll alap kiindulási sósoldat nem mutat semmiféle fluoreszcenciát, jelezve, hogy reaktív molekulák nincsenek az alap sósoldatban. Ahogy (a kiindulási sósoldatban oldott) ASEA koncentrációja emelkedik, a fluoreszenciában történő változás is egyre nagyobb. 2. ábra: Screenshot, mely bemutatja az R-PE indikátor reakcióját az ASEA különböző koncentrációjánál, 15 önálló mérés (mintánként 3 mérés) eredményei lettek egymásra vetítve. A screenshot 2008 áprilisában egy

Ezzel szemben a kiindulási alapnak tekintett sósoldat soha nem mutatott mérhető reaktív molekula koncentrációt, a szabadalmaztatott elektrokémiai folyamat végrehajtása előtt. A 2.

5 tesztmérésen készült. A sósoldat nem vált ki reakciót és az öt különböző ASEA koncentráció egyértelműen meghatározott eredményeket mutat. A 2. ábrán bemutatott görbék magassága jelzi az egyes mintákban található reaktív molekulák mennyiségét. Mindenegyes tételt a Gold Standardnak megfelelően mérnek. Így az ASEA mindegyik tétele garantáltan tartalmazza a reaktív molekulák megfelelő mennyiségét és egyensúlyát. A Minőség Ellenőrző laboratóriumban a legmagasabb tudományos kiválóságnak

ábrán bemutatott görbék magassága jelzi az egyes mintákban található reaktív molekulák mennyiségét.

Hasonló dokumentumok

Ragyogó molekulák: dióhéjban a fluoreszcenciáról és biológiai alkalmazásairól

Ragyogó molekulák: dióhéjban a fluoreszcenciáról és biológiai alkalmazásairól Kele Péter egyetemi adjunktus Lumineszcencia jelenségek Biolumineszcencia (biológiai folyamat, pl. luciferin-luciferáz) Kemilumineszcencia