Endokrin vizsgálatok pediátriai mintákban Lányi Éva Pécs 2009.10.06.
Neonatalis szőrés (Crit Rev Clin Lab Sci 2009 46 55-82) -50 betegség g szőrése se beszárított vérbv rbıl módszerek: MS /MS, immunoassay, enzim-assay, elfo, HPLC, endokrin betegségek: gek: Congenitális Adrenális Hyperplasia 1:15 000 Congenitális Hypothyreosis 1:4000 - Magyarország: g: 2007/44 Eü.M. E Rendelet : kiterjesztett szőrés eddigi 4 mellett további 22 betegség g szőrése se
Congenitális Hypothyreoidismus 1. Dysgenesis 1:4000 85% sporadikus 2. Dyshormonogenesis 1:30000 10% 3. Hypothalamus-hypophysis 4. Transitorikus hypothyreoidismus - TBII transplacentáris ris transfer 1:50000 - Jód d expozíci ció - Koraszülöttek - Sick euthyroid syndrome 1:30000 10% autosom recesszív hypophysis 1:100000 5%
Érett újszülött szület letés s után n TSH peak (30 min, 80 mu /L) T4 és s T3 peak (24-36 h) okok: T4 maternalis-placentaris transfere megszőnik, hideg stressz? SZŐRÉS: S: 48 óra után! TSH cut off 20 mu/l T4 cut off 6.5 µg/dl
Kiszőrt újszülöttek Szőrés s hatékonys konysága 14% congenitális hypothyreosis 8% tranziens hypothyreosis 78% normális = fals pozitív Mit NEM diagnosztizál? 1. Centrális hypothyeroidismus 2. TBG deficiencia (X-kötött, tt, 1:5000, TSHn, T4,, ft4n) 3. Hypothyroxinemia a TSH késleltetett k eleváci ciójával
Koraszülöttek 1.Szület letést követk vetı TSH peak kisebb v. nincs T4 ( TBG ) T3 (periféri riás s konverzó ) 2. Abszolút értékben a TSH magasabb, azonban ennek fiziológi giás effektivitása alacsony (H-P P tengely) 3. Koraszülöttek leggyakoribb gyógyszerei gyszerei (glucocorticoidok, amidaron, propanolol, dopamin, dobutamin, furosemid) csökkentik a T4-T3 T3 konverziót
TSH referens értékei gyermekeknél Clin Biochem 2008 41 1091-98 98 (Elecsys 2010 system Roche )
T3 és s T4 referens értékei gyermekeknél Clin Biochem 2008 41 1091-98 98 ( Elecsys 2010 system Roche )
TSH és s thyroid hormonok covariánsai Clin Biochem 2008 41 1091-98 98 (Elecsys 2010 system Roche ) 1. Életkor prediktor 2. Nem nem prediktor (kivéve ve 16-20 év, T4 nıknél) 3. WBC nem prediktor 4. BMI - nem prediktor (populáci ció normál l súlys lyú!) DE! Obes TSH (BMI ~TSH), T4/ ft4 norm, ft3 norm, T3 n/ leptin: TRH neuronokat innervál T4 T3 átalakulást fokozza Obesitas szubklinikai hypothyreosis!
Congenitális Adrenális Hyperplasia (CAH)
CAH gyakoriság és s klinikai jellemzık
CAH klinikai és s laboratóriumi riumi jellemzık 1.Klasszikus forma- sóvesztı (75%) - csak virilizáló (25%) 1:15000 (homozygota gyakoriság g kaukázusi rasszban) 1: 60 (heterozygota gyakoriság g zárt z közössk sségben) 2.Non-klasszikus forma: prenatalisan nincs virilizáci ció 1:1000 heterozygota hordozó kaukázusi rasszban Laboratóriumi riumi jellemzık: Akut adrenális krízis Asymptomatikus Na,K,K,, (ok:aldosteron hiány) adrenalin (ok:cortisol ) Glucose,Metab.acid.(ok: kotrainzuláris ris faktorok ) 17-OH OH-Progesteron,
21-hydroxylase gén: g CYP21
CAH genotípus és s fenotípus összefüggése
CAH diagnosztika hagyományos ACTH stimuláci ciós s teszttel
Neonatalis szőrés 1. Beszárított vérminta:17v rminta:17- OH-Progesteron (Enzaplate ELISA, minimális keresztreakció egyéb endogén n steroidokkal?) alacsony cut off 4 ng/ml fals pozitív (koraszülöttek, kis súlys lyúak) 2. Beszárított vérminta:17v rminta:17- OH-Progesteron (J.Pharm.Biomed.Anal.2008 48 177-82) LC - ESI-MS/ MS
Neonatalis szőrés
Neonatalis szőrés 3. Nyálminta: 17- OH-Progesteron LC- ESI - MS/MS ( J. Chromat. 2008 867 49-56 )
4. RATIO = Neonatalis szőrés (17-OH OH-Progesteron+Androstendion)/Cortisol (Pediatric Research 2009 66 230-235) 235) módszer: UPLC - ESI-MS/MS novum:- oszloptöltet ltet partikulum méretem rete 2.5µm elválaszt lasztás s ideje sec,, minısége - a gyengén n ionizálhat lható steroidokat új derivatizáci ciós s eljárással jól j l ionizálhat lhatóvá tenni cél: fals pozitivitás s csökkent kkentése (koraszülöttek, kis súlys lyúak, stress hatás)
Neonatalis szőrés
Growth Hormon Deficiencia (GHD) diagnosztikai problémái - Diagnosztika: klinikai, antropometriai, radiológiai, biokémiai - GH neurosecretoros dysfunkció GH teljes hiány (GH provokáci ciós s teszt norm./igf1,, IGFBP ) (GH,IGF1,IGF1,IGFBP ) - Gyerek :GHD MINDEN formája kezelendı! Felnıtt: csak súlyoss - Milyen nehézs zséget jelent a klinikus számára a GH assay értelmezése? 1. Spontán n GH mérés m s diagnosztikai értéke alacsony 2. Provokatív v tesztek cut off értékei függnek: f - protokoll (L-dopa, clonidin, arginin, glucagon, insulin, GHRH) - életkor, BMI, - metodika (analitika)
GH molekuláris és s biológiai tulajdonságai - GH-N N gén g n transcriptum 2 2 fajta mrna 2 termék k : 22kD és s 20 kd - Posttranszláci ciós s modifikáci ció: : (22kD) - proteolítikus tikus (fragmensek) - oligomerek (kovalens és s non-kovalens) - deamináci ció,, acyláci ció,, glycoziláci ció,, foszforiláci ció - Biológiai aktivitás: 22kD a legaktívabb DE! 20 kd is biológiailag aktív 22 kd modifikált formái i is lehetnek aktívak
GH Binding Proteinek (GHBP) és s receptorok GH Binding Proteinek: 1.High affinity: K d ~ nmol szekvencia homológia a GHR extracelluláris ris doménj njével 2.Low affinity: 2.Low affinity: K d ~ µmol mol α 2 - macroglobulin
GH isoformok periféri riás s vérbenv
GH assay standardizálása sa 1. Kalibrátor 1994 elıtt: hypophysis kivonat ( 2.6 U/mg ) 1994 után: hrgh 22 kd monomer (µg/l,( 3U/mg) 2. Antitestek 1994 elıtt: poliklonális lis 1994 után: monoklonális lis - csak a 22kD monomért ismeri fel - a BP-hez kötött k tt GH-t t nem ismeri fel 3. Mátrix M hatás- GHBP probléma ( BP maga a receptor!) Az új, automatizált assayk NEM teszik lehetıvé az equilibráci ciót!
GH assay standardizálása sa
GH assay standardizálása sa Probléma: ma:- GH NEM homogén n molekula - GHBP magas affinitású=receptor - Calibrátor= 22kD monomer Amit mérünk, m az NEM tükrözi a fiziológi giát! GH immunfunkciós s mérése: m immunoassay + biológiai aktivitás szilárd fázis: f GHR site2 jelölı: : rhghbp biotin - streptavidin-* Azokat a GH molekulákat kat mérjm rjük, melyeknek mindkét kötıhelyük k intakt.
IFA: Immunfunkcionális assay, MIA, RIA: kétlk tlépéses IRMA, két t monoklonális lis Ab, kalibrátor: pituitary (Horm Res 2007 68 171-77) 77)
GHRH-ARG teszt cut-off értéke :BMI 25 (felnıtt,kor átl tl=47, módszer: m rgh IRMA) Eur J. Endocrinol 2005 153 257-264 264
GHRH-ARG teszt cut-off értéke : BMI = 25-30
GHRH-ARG teszt cut-off értéke : BMI 30
Journal of Pediatric Endocrinology and Metabolism 2009 22 2000 Consensus guidelines In a child with clinical criteria for GHD, a peak GH concentration below 10 µg/l has traditionally been used to support the diagnosis. This value needs to be revised when using newer monoclonal-based assays and recombinant hgh reference preparations. 2008 Consensus statement In a child with clinical criteria for GHD, a peak GH concentration below 10 ng /ml has traditionally been used to support the diagnosis. At the present time, a new GH reference standard is being introduced which may require a downward adjustment of the lower limit of normal. In addition, changes in assay methodology influence choice of cut-off values for the diagnosis of GHD. Eight years and nothing has changed.