Vizeletszteroid-profilok meghatározása GC-MS technikával

Átírás

1 Vizeletszteroid-profilok meghatározása GC-MS technikával Bufa Anita PTE ÁOK Bioanalitikai Intézet 2009

2 Bevezetés Magyarországon orvosi diagnosztikai célokra egyedül a PTE ÁOK Bionalitikai Intézetben alkalmazzuk a vizeletszteroid-profil módszert. Holland MCA szekció SKZL (Stichting Kwaliteitscewaking Klinisch Chemishie Ziekenhuislaboratoria) külsı minıségbiztosítási program.

3 Vizeletszteroid-profil elemzés A vizeletszteroid-profil módszer alapja C. H. L. Shackleton és mtsai által kidolgozott szteroid-profil meghatározás volt, melyet továbbfejlesztettünk. Minták győjtése és tárolása: 24 órás vizelet, fagyasztva (-20 C) tárolva Mintaelıkészítés: Szteroidok kivonása (Szilárd fázisú extrakcióval, oktadecilszilán fázist tartalmazó Sep-pak C18 oszlopokon). Konjugátumok hidrolízise és kivonása (β-glükuronidáz-arilszulfatáz enzim keverék alkalmazása, ismételt szilárd fázisú extrakció). Származékképzés Tisztítás

4 Gázkromatográftömegspektrometria Vizeletszteroid-profil elemzés Minıségi analízis (Szelektív ionkövetés, három jellemzı tömegion). Mennyiségi analízis (Belsı standard módszer, több-pontos kalibráció külön az alacsony és magas koncentráció tartományra). Mérési körülmények: 5975 tömegspektométer detektorral felszerelt 6890N gázkromatográf, HP-1-MS oszlop, He vivıgáz, split-splitless mintabemérı, elektronionizáció 70 ev-on, 2 µl minta bemérése splitless injektálási technikával, automata mintabemérés, hımérsékleti program.

5 A szteroid-profil segítségével meghatározott vizeletszteroidmetabolitok Triviális név Rövidítés Tudományos név 1 Androszteron An 5α-androsztán-3α-ol-17-on 2 Etiokolanolon Et 5β-androsztán-3α-ol-17-on 3 Dehidroepiandroszteron DHEA 5-androsztén-3β-ol-17-on 4 11β-hidroxi-androszteron 11-OH-An 5α-androsztán-3α,11β-diol-17-on 5 11β-hidroxi-etiokolanolon 11-OH-Et 5β-androsztán-3α,11β-diol-17-on 6 16α-hidroxi-DHEA 16-OH-DHEA 5-androsztén-3β,16α-diol-17-on 7 Pregnándiol PD 5β-pregnán-3α,20α-diol 8 Pregnántriol PT 5β-pregnán-3α,17α,20α-triol 9 Pregnéndiol 5-PD 5-pregnén-3β,20α-diol 10 Androszténtriol 5-AT 5-androsztén-3β,16α,17β-triol 11 Tetrahidro-11-deoxikortizol THS 5β-pregnán-3α,17α21-triol-20-on keto pregnántriol 11-O-PT 5β-pregnán-3α,17α,20α-triol-11-on 13 Pregnéntriol 5-PT 5-pregnén-3β,17α,20α-triol 14 Tetrahidrokortizon THE 5β-pregnán-3α,17α,21-triol-11,20-dion 15 Tetrahidro-11-dehidrokortikoszteron THA 5β-pregnán-3α,21-diol-11,20-dion 16 Tetrahidrokortikoszteron THB 5β-pregnán-3α,11β,21-triol-20-on 17 Allo-tetrahidrokortikoszteron athb 5α-pregnán-3α,11β,21-triol-20-on 18 Tetrahidrokortizol THF 5β-pregnán-3α,11β,17α,21-tetrol-20-on 19 Allo-tetrahidrokortizol athf 5α-pregnán-3α,11β,17α,21-tetrol-20-on 20 α-kortolon α-cl 5β-pregnán-3α,17α,20α,21-tetrol-11-on 21 β-kortolon β-cl 5β-pregnán-3α,17α,20β,21-tetrol-11-on 22 α-kortol α-c 5β-pregnán-3α,11β,17α,20α,21-pentol-11-on 23 Kortizol F 4-pregnén-11β,17α,21-triol-3,20-dion

6 A klinikai diagnosztikában leggyakrabban vizsgált, vizeletben ürülı szteroid-metabolitok eredete Koleszterin Cit P-450 koleszterin oldallánc hasítás Pregnenolon 17α-hidroxiláz 17α-OH-pregnenolon 17α-hidroxiláz/17, 20 liáz 17β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz Dehidroepiandroszteron Androszténdiol 3β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz 3β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz 3β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz Progeszteron 17α-hidroxiláz 17α-OH-progeszteron 17α-hidroxiláz/17, 20 liáz 17β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz Androszténdion Tesztoszteron 21-hidroxiláz 21-hidroxiláz Aromatáz Aromatáz 11-dezoxikortikoszteron Kortikoszteron 21-dezoxikortizol 11-dezoxikortizol 21-dezoxikortizon 11β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz Kortizon Kortizol 11β-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz Ösztron 17-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz 11-hidroxi-androszténdion Ösztradiol Szérum 5-PD PD THA THB athb 5-PT PT 11-O-PT THE α-cl β-cl THF athf α-c F THS DHEA 5-AT 16-OH-DHEA An Et 11-OH-An 11-OH-Et Vizelet Vizeletszteroid-metabolitok, szérum szteroid-hormonok, szintézisben résztvevı enzimek. (Andrew, 2001; Homma és mtsai, 2003; Honour, 1997a közleményei alapján).

7 Congenitalis adrenalis hyperplasia (CAH) 21-hidroxiláz hiány csökkent kortizol metabolitok emelkedett 21-deoxi-szteroidok (17-OH-Pg, PT, 11-O-PT) és androgén metabolitok enyhe formájában (néhány késın manifesztálódó formában is) a kortizol metabolitok szintje normális, de a 17-hidroxi-progeszteron és a kortizol metabolitok aránya megnövekszik Cushing szindróma hormontermelı tumorok androgéntermelés zavarai alacsony ösztrogén termelés terhesség hypothyreosis alatt policisztás ovárium szindróma hiány 3β-hidroxi-szteroiddehidrogenáz hiány 17α-hidroxiláz hiány StAR fehérje hiány mellékvese tumorok ivarmirigy tumorok 5α-reduktáz hiány 17β-hidroxi-szteroiddehidrogenáz hiány teljes defektusnál alig detektálhatók a kortizol metabolitok emelkedett 11-deoxi-kortizol (THS) és 11 -deoxi-androgén metabolitok (An, Et) csökkent kortizol metabolitok emelkedett 3β-hidroxi-5-én szteroid szulfátok (p1.: 5-PT) leányoknál túlzott, férfiakban elégtelen androgén termelés teljes defektusnál a kortizol és androgén metabolitok alig detektálhatóak fı vizelet szteroidok a kortikoszteron metabolitjai (THB, athb) csökkent szteroid metabolit szintek emelkedett az összes kortizol metabolit szintje bizonyos szteroidok szintje emelkedett (p1.: 3β-hidroxi-5-én szteroidok, különféle 11-OH-An) típusú petefészek (PT), ill. here eredető metabolitok emelkedett szintje 5α-redukált (tesztoszteron szteroidok és metabolitjai, alacsony szintje és 3β-hidroxi-5-én szteroidok) csökkent 5α/5β metabolit arány pl.: An/Et, THF/aTHF emelkedett An és Et szint méhlepény-szulfatáz hiány 3β-hidroxi-5-én szteroidok emelkedett szintje a terhes nı vizeletében, alacsony csökkent ösztriol 5α/5β szint metabolit arány emelkedett 5α/5β metabolit arány

8 16 éves, 21 hidroxiláz hiányban szenvedı nı vizelet mintájának szteroidprofil kromatogramja Abundance PT TIC: 2009sz0091.D\data.ms O-PT Time--> Idı (perc)

9 Köszönöm a figyelmet!