Endogén szteroidprofil vizsgálata folyadékkromatográfiával és tandem tömegspektrométerrel. Karvaly Gellért

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Endogén szteroidprofil vizsgálata folyadékkromatográfiával és tandem tömegspektrométerrel. Karvaly Gellért"

Dénes Sipos
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 Endogén szteroidprofil vizsgálata folyadékkromatográfiával és tandem tömegspektrométerrel Karvaly Gellért

2 Miért hasznos a vegyületprofilok vizsgálata? 1 mintából, kis mintatérfogatból, gyorsan nyerhető klinikai információ vegyületek hiánya a betegmintában azonnal és egyértelműen észlelhető mennyiségi arányok gyorsan meghatározhatók

klinikai információ vegyületek hiánya a betegmintában

3 Flexar FX-10 UHPLC Sciex 5500QTRAP MS

4 tömegspektrográfia ez az ős. tömegspektroszkópia elavult kifejezés tömegspektrometria erről lesz most szó.

5 A folyadékkromatográfiás elválasztás lényege eluenstartály HPLC pumpa mintabeviteli egység állófázis: komponensek elválasztása tömegspektrométer: komponensek detektálása

A tömegspektrometria alapjelenségei A tömegspektrometria az anyag tanulmányozására alkalmas technológia, amely gáz halmazállapotú ionok képződésén alapul, és ezek tömeg és töltés szerinti

6 A tömegspektrometria alapjelenségei A tömegspektrometria az anyag tanulmányozására alkalmas technológia, amely gáz halmazállapotú ionok képződésén alapul, és ezek tömeg és töltés szerinti szétválasztását, detektálását és jellemzését teszi lehetővé 1. 1 Murray KK et al: Pure Appl Chem 85 (2013), A kimutatási folyamat lépései: ionizáció fragmentáció ionok kiválasztása (m/z) tömegspektrum létrehozása

szétválasztását, detektálását és jellemzését teszi lehetővé 1.

7 A tandem tömegspektrometria elve

8 Az LC-MS/MS vizsgálat folyamata a minta komponenseit folyadékkromatográfiával elválasztjuk a komponenseket ionizáljuk: a molekulaion jellemző a szerkezetre a molekulaiont fragmentáljuk: kiválaszthatóak a szerkezetre nagymértékben vagy egészében specifikus ionok elvégezzük a mennyiségi analízist

molekulaion jellemző a szerkezetre a molekulaiont fragmentáljuk:

9 Az LC-MS/MS technika használatának előnyei kiemelkedő érzékenység, szelektivitás, reprodukálhatóság és kimutatási specifikusság gyors mérések nagy áteresztőképesség rugalmas vizsgálati spektrum: bővíthető, átalakítható a klinikusi igényekhez igazodva

specifikusság gyors mérések nagy áteresztőképesség rugalmas

10 Tömegspektrometria vs immunoassay szempont tömegspektrometria immunoassay érzékenység <1 nmol/l <1 nmol/l specifikusság kontrollálható nem kontrollálható módszer testreszabása lehetséges nem lehetséges gyári reagenskészlet nem jellemző jellemző mátrix változatos nem kontrollálható megbízhatóság megfelelő, kontrollálható nem kontrollálható üzemben tartási költség magas közepes egy paraméterre eső költség 0,5 50 USD széles tartományban változó a vizsgálatok elvégzése szakembert igényel igen nem bekerülési költség magas alacsony vagy nincs

kontrollálható megbízhatóság megfelelő, kontrollálható nem kontrollálható üzemben tartási költség magas közepes egy paraméterre eső

11 A szteroid profil felvételének jelentősége Szűrés, diagnózis és az állapot, illetve a terápia nyomon követése: kongenitális adrenális hiperplázia policisztás ovárium szindróma Cushing-kór Addison-kór az HPA tengely és a gonádok egyéb funkciózavarai gyógyszeres kezelések mellékhatásai

hiperplázia policisztás ovárium szindróma Cushing-kór Addison-kór az

12 A laboratóriumunkban vizsgált paraméterek Pang S. Trends Endocrinol Metab 1998;9: cortisone + 21-deoxycortisol + dihydrotestosterone + estriol

13 aldoszteron kortizol kortizon androsztendion dezoxikortikoszteron tesztoszteron DHEA 17α-hidroxiprogeszteron dihidrotesztoszteron progeszteron 25-hidroxi-D2 25-hidroxi-D3

14 Vizsgálati stratégia 3 mintából 4 mérést végzünk (összesen kb. 30 min) a 4 panel külön-külön vizsgálható/kérhető, méréstechnikailag nincs összefüggés vizsgálati minta: natív szérum, legalább 1,2 ml (részleges profilnál legalább 0,6 ml) ahol létezik olyan, független kalibrátorokat és kontrollokat használunk

összefüggés vizsgálati minta: natív szérum, legalább 1,2 ml (részleges

15 Vizsgálati stratégia 1. mérés (1. minta): 4,0 min aldoszteron, androsztendion, dehidroepiandroszteron, dezoxikortikoszteron, dihidrotesztoszteron, 25-hidroxiergokalciferol, 25-hidroxikolekalciferol, 17-hidroxiprogeszteron, progeszteron, tesztoszteron 2. mérés (1. minta): 10 min kortikoszteron, 11-deoxikortizol, 21-deoxikortizol 3. mérés (2. minta): 3,5 min dehidroepiandroszteron-szulfát, kortizol, kortizon 4. mérés (3. minta): 11 min ösztron, ösztradiol, ösztriol

25-hidroxiergokalciferol, 25-hidroxikolekalciferol, 17-hidroxiprogeszteron, progeszteron, tesztoszteron 2. mérés (1.

16 LC-MS/MS (pg/ml) LC-MS/MS (ng/ml) LCMS/MS (ng/ml) LC-MS/MS (ng/ml) Immunoassay módszerekkel történő összemérések eredményei y = 0,8006x - 0,1189 R² = 0,917 androsztendion immunoassay (ng/ml) y = 0,9957x - 7,8155 R² = 0,9582 ösztradiol immunoassay (pg/ml) hidroxiprogeszteron y = 0,6486x + 3,2016 R² = 0, immunoassay (ng/ml) y = 1,1251x - 0,0792 R² = 0,9216 tesztoszteron immunoassay (ng/ml)

0,9582 ösztradiol 0 50 100 150 200 250 immunoassay (pg/ml) 600 500 400 300 200 100 15 10 5 0 0 17-hidroxiprogeszteron y = 0,6486x +

17 %-os eltérés: IA eredmények- MS eredmények %-os eltérés: IA eredmények- MS eredmények 150% 125% 100% 75% 50% 25% 0% -25% -50% -75% -100% -125% androsztendion eredmények átlaga (ng/ml) 17-hidroxiprogeszteron 200% 175% 150% 125% 100% 75% 50% 25% -25% 0% -5-50% % -100% -125% eredmények átlaga (ng/ml)

androsztendion 0 10 20 30 eredmények átlaga (ng/ml) 17-hidroxiprogeszteron 200%

18 %-os eltérés: IA eredmények- MS eredmények %-os eltérés: IA eredmények- MS eredmények ösztradiol tesztoszteron 200% 150% 100% 50% 0% -50% -100% -150% -200% eredmények átlaga (pg/ml) 250% 200% 150% 100% 50% 0% -50% -100% -150% eredmények átlaga (ng/ml)

0% -50% -100% -150% -200% 0 30 60 90 120 150 180 eredmények átlaga

19 Kongenitális adrenális hiperplázia (21α-hidroxiláz hiány), 12 éves lány androsztendion: 7,62 ng/ml (<1,9 ng/ml) 17α-hidroxiprogeszteron: 93,2 ng/ml (<0,8 ng/ml) DHEA: 34,8 ng/ml (2-6 ng/ml) tesztoszteron: 0,742 ng/ml (<7-75 ng/ml) 5-dihidrotesztoszteron: 7,43 ng/ml (<0,3 ng/ml) progeszteron: 1,57 ng/ml (5-20 ng/ml)

(<0,8 ng/ml) DHEA: 34,8 ng/ml (2-6 ng/ml) tesztoszteron: 0,742 ng/ml (<7-75

20 Gyógyszeres kezeléssel kontrollált kongenitális adrenális hiperplázia (21α-hidroxiláz hiány), 2 éves fiú androsztendion: <0,18 ng/ml (<0,5 ng/ml) 17α-hidroxiprogeszteron: <0,1 ng/ml (<1,1 ng/ml) DHEA: nincs csúcs (<6,3 ng/ml) tesztoszteron: <0,05 ng/ml (<0,2 ng/ml) 5-dihidrotesztoszteron: nincs csúcs (<0,05 ng/ml) progeszteron: <0,15 ng/ml (<0,15 ng/ml)

<0,1 ng/ml (<1,1 ng/ml) DHEA: nincs csúcs (<6,3 ng/ml) tesztoszteron: <0,05 ng/ml (<0,2

21 Köszönöm a figyelmet!

Hasonló dokumentumok

A tömegspektrometria alapjai és alkalmazási köre a laboratóriumi diagnosztikában. Dr. Karvaly Gellért Balázs SE Laboratóriumi Medicina Intézet

A tömegspektrometria alapjai és alkalmazási köre a laboratóriumi diagnosztikában Dr. Karvaly Gellért Balázs SE Laboratóriumi Medicina Intézet tömegspektrográfia ez az ős. tömegspektroszkópia elavult kifejezés