Az újszülöttkori galactosaemia szűrés eredményei és differenciáldiagnosztikai lehetőségei

Átírás

1 Az újszülöttkori galactosaemia szűrés eredményei és differenciáldiagnosztikai lehetőségei Balázs Imre SZTE ÁOK Gyermekgyógyászati Klinika és Gyermekegészségügyi Centrum Anyagcsere-Szűrő Laboratórium Magyar Orvosi Laboratóriumi Szakdolgozók Egyesülete IX. Nagygyűlés; Bük, szeptember

2 A kötelező egészségbiztosítás ellátásairól szóló évi LXXXIII. törvény 83. ( 3 ) bekezdésének a) és b) pontjában megfogalmazottak alapján Phenylketonuria Galactosaemia Hypothyreosis Biotinidase hiány betegségekre van kötelező szűrés.

3 Mire irányul? A veleszületett anyagcsere betegségek korai diagnosztizálására. Klasszikus angol meghatározása: Egy enzim vagy hormon aktivitásának monogenetikus működési zavara az intermedier anyagcsere folyamatban.

4 Országos szűrőcentrumok Országos szűrőcentrumok 1. Fővárosi Önkormányzat Budai Gyermekkórháza 1. SZTE Gyermekklinika 2. Fővárosi SZTE Gyermekklinika Önkormányzat Budai Gyermekkórháza

5

6 Schleicher-Schüll szűrőpapír - Guthrie kártya Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem NÉV: NÉV: NÉV: NÉV:

7 Schleicher-Schüll szűrőpapír - Guthrie kártya Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Koraszülött: igen - nem Szül. Idő: Vérvétel ideje: Vérvétel helye: Anyja neve: Irányítószám: Lakcím: Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem Tejtáplálás elkezdve: Antibiotikum: Vércsere, transf.: igen - nem igen nem igen nem NÉV: NÉV: NÉV: NÉV:

8 Mi a galactosaémia? Enzimhiányon alapuló veleszületett anyagcsere betegség. / autoszomális, recesszív / Tejcukor ( Laktóz ) ( diszaharid ) Vékonybél bolyhainak tövében laktáz enzim Galaktóz Szőlőcukor monoszaharid monoszaharid Glükóz monoszaharid

9 Története: 1908 Von Ruess galactosaemia felfedezése / megfigyelés anyatej táplálásnál / 1917 Tejmentes diéta bevezetése 1935 Mason és Turner Leroir cukor metabolizmusának leírása / 1970 Nobel dij / 1956 Galactosaemia génjének felfedezése 1963 Guthrie és Paigen újszülöttkori szűrés bevezetése 1970 SZOTE szűrés megkezdése 1975 Kötelező szűrés bevezetése

10 glükóz-1-p ATP galaktóz aldózreduktáz galaktitol NADPH + H NADP ADP UTP galaktokináz galaktóz-1-p gal.-1-p uridil transzf. Weidemann P ~ P UDP galaktóz UDP gal.-4-epimeráz UDP glükóz Beutler UDPG pirofoszforiláz

11 - Galaktokináz enzimhiány: újszülöttkorban tünetmentes tejtáplálás után galactosaemia, cataracta felnőttkorban a galaktitól miatt vakság -Galaktóz-1-PUT enzimhiány: / klasszikus galactosaemia / hányás, hasmenés, elhúzódó sárgaság veseelégtelenség, máj megnagyobbodás fejlődési zavar, cataracta mentális retardáció -Duarte - galactosaemia

12 Mikrobiológiai tömegszűrés Galactosaemia újszülöttkori tömegszűrése Guthrie metabolitgátláson alapuló mikrobiológiai módszerével történik. Elve: galaktózra érzékeny mutáns E. coli baktérium-törzset tartalmazó agaróz táptalajra helyezzük fel a vérrel átitatott szűrőpapír korongokat

13

14

15 Zavaró tényezők: Ál-pozitív eredmény: 1. ha olyan antibiotikumot kapott az újszülött ami gátolja az E-coli növekedését 2. bármilyen szennyezés ami kioltási zónát ad Ál-negatív eredmény: 1. ha vérmintát a tejtáplálás megkezdése előtt vették le 2. ha a szűrőpapír nem volt megfelelően átitatva 3. ha az újszülött transzfúziót kapott

16 glükóz-1-p ATP galaktóz aldózreduktáz galaktitol NADPH + H NADP ADP UTP galaktokináz galaktóz-1-p gal.-1-p uridil transzf. Weidemann P ~ P UDP galaktóz UDP gal.-4-epimeráz UDP glükóz Beutler UDPG pirofoszforiláz

17 Weidemann teszt: galaktóz 30 mg % fölött Elve: A galaktóz dehidrogenáz ( Gal-DH ) enzim a galaktózról a NAD-ra hidrogént visz át, fluoreszkáló NADH-t képezve. Kontroll (mg % ) Minta

18 Beutler próba: a galaktóz-1-foszf foszfát- uridil-transzfer transzferáz ( G-1-PUT ) enzim hiányának kimutatása a klasszikus galaktozémia diagnózisának megerősítésére Minta: heparinnal levett teljes vér ( vérgázkapillárisban ) azonos körülmények között levett, tárolt és szállított egészséges kontroll minta

19 Elve: Vér G-1-PUT jelenlétében a NADP redukálódik fluoreszkáló NADPH-t képezve + galaktóz-1-foszfát + NADP Kontroll: Minta:

20 Idő ( perc ) Kontroll Galactosaemia heterzygote Galactosemic Duarte variant Duarte variant heterozygote

21 összgalaktóz totál galaktóz mérése / galaktóz és galaktóz-1- foszfát / Galaktót 1- foszfát alkalikus foszfatáz Galaktóz galaktóz dehidrogenáz Galaktóz + NAD+H 2 O Galaktono (1,4) lakton + NADH + H NADH + NBT ( sárga ) / nitroblu-terazolium / diaphorase NBT ( ibolya ) + NAD

22

23 Specifikus enzimvizsgálatok: galactokinase gal.-1-p uridil transzferase Németország A szűrésből kimaradó populációk pl.: roma török észak afrikai

24 1956 Galactosaemia génjének felfedezése Ma már több száz mutációt ismerünk Galactokinase: P28T G1PTU enzim: Q188R K285N Duarte: G1391A N314D

25 THE END

26 Köszönöm a figyelmet!