Az őssejtek alkalmazása az orvoslásban Dr. Font Gusztáv Dr. Andréka György Belvárosi Állatorvosi Rendelő, Budapest Xantus János Állatkert Kht. Győr SZIE Állatorvos-tudományi Kar Anatómiai és Szövettani Tanszék Dr. Kótai István Dr. Vértesaljai Márton Gottsegen György Országos Kardiológiai Intézet
Őssejt-özönben élünk
Múlt heti Nobel-díjas Martin Evans
Mi az őssejt? Egyáltalán nem, alig vagy kevéssé differenciált sejt, amely: képes önmagát újratermelni nagy potenciával rendelkezik intenzív osztódásra képes
Őssejtek csoportosítása potencia alapján Totipotens Pluripotens Multipotens Progenitor (?)
Őssejt-források Embrió Köldökzsinór vér Perifériás vér Csontvelő
Transplantatio módjai Xenogén Allogén Autológ
Mit végeztünk mi? Autológ transplantatiót Csontvelői eredetű multipotens BS sejtekkel
Sertéseken végzett első hazai intracoronariás őssejt transplantatio Európában a cardiovascularis betegségek tehetők felelőssé a halálokok kb. 50%-áért A WHO felmérése szerint 2001-ben, a világban ischaemiás szívbetegség vonatkozásában évente 7.2 millió halálesetet regisztráltak Becslések szerint, 2025-ben a mortalitás már 25 millió fő/év is lehet
Az állatkísérletes infarctus modellekben hatásos őssejt beültetéseket követték a humán vizsgálatok bíztató eredményei is. Autológ, intracoronariás csontvelői őssejt transzplantació akut szívizom infarctusban A GOKI projekt (2005.06.01-???):
Acut myocardialis infarctus (AMI ) kísérletes létrehozása sertéseken 2004-2005 A Kísérletet 12 egészséges, 4 hónapos, 25-28 kg-os magyar nagy fehér hússertésen végeztük Két csoportot alakítottunk ki: 6 kísérleti állat 6 állat kontroll 3 állat elhullott ( 2 kísérleti, 1 kontroll ) 1 esetben sem az MRI sem a későbbi kórbonctani vizsgálat nem igazolt infarctust
A kísérlet igazolta, hogy a sertésekben jól modellezhető a szívizom-infarctus Az EKG vizsgálatoknál jól látszott az ST-elevatio MR-nél az elhalt terület nagysága, kiterjedése, valamint elszórtan microvascularis obstructio is A vérlabor-vizsgálatoknál pedig a CK-MB és a CPK emelkedés az echocardiographiás szegmentalis falmozgászavar kialakulása CK-MB (IU/ml) 1000 800 600 400 200 0 CK-MB értékek változása az infarctus után 0. nap 1. nap 120. nap Infarctus után eltelt napok
Akut myocardialis infarctusban végzett autolog csontvelői őssejt transplantatiok során szerzett tapasztalataink sertésekben Infarctus létrehozása Infarctus bizonyítása Csontvelő kinyerése Csonvelő transportja, kezelése Őssejtek autológ transplantatioja
A szívet sokáig ún. posztmitotikus szervnek tartották, az elmúlt években elég bizonyíték gyűlt össze a tekintetben, hogy a szív rendelkezik regeneratív kapacitással, így mára már megdőltnek tekinthető a szívizomról alkotott statikus dogma.
Csontvelő vétel és tárolás
Az őssejtek bejuttatásának lehetőségei Alkalmazás módja Elönyök Hátrányok Intraoperatív, direkt intramyocardialis injekció Transendocardialis injekció Intracoronariás injekció Össejt-injekció perifériás vénába Citokin mobilizáció Böséges sejtrezervoár Biztonságos rövidtávon Széleskörü alkalmazhatóság a katéteres laborokban Nincs intramyocardialis laesio, uo. hatékony Széleskörü alkalmazási lehetöség Nem transzformálódnak Kamrai arrhythmiák Bonyolult képalkotó és katéteres feltételek Sejtpreparáció Autológ sejtek alacsony száma Kockázat, idözítés
Intraoperatív bejuttatás
Az infarctus vizsgálata MRI-vizsgálattal, az infarctus pontos helyeződésének meghatározása
A vizsgálat bevezető lépései
Ismételt coronarographia
Coronarographia: stenosis
Over-the-wire katéter bevezetése a RIP-be
Őssejt szuszpenzió (a dia a KPM laboratóriumában készült)
Igazolást nyert, hogy a cardiovascularis szervrendszert érő noxákra a szervezet fiziológiásan is őssejt-terápiával válaszol. Az őssejtek által indukált myocardium regeneráció tehát élettani folyamat, melynek három fő lépése ismert: sejtek rezervoárjukból való mobilizációja a sejteknek a károsodott területhez való specifikus kötődése a homing, azaz hazatalálás differenciálódás a károsodást elszenvedett sejttípussá
A ballon felfújása, az áramlás megszűntetése, az őssejtszuszpenzió bejuttatása
Őssejt beültetés over-the-wire katéteren keresztül
Az őssejtterápia lehetséges hatásai myocardialis infarctust követően Kisebb infarctus expanzió Angiogenesis Eltérő kollagén expresszió Myocardium megőrzés Őssejtterápia Myocardium regeneráció Csökkent apoptosis Myocyta képződés Remodeling csökkentése/meggátlása
Ezúton is szeretnék köszönetet mondani: Gottsegen György Országos Kardiológiai Intézet összes munkatársának Dr Andréka Péternek Dr Vértesaljai Mártonnak A munka a Magyar Tudományos Akadémia Bólyai János Kutatási Ösztöndíja (dr Andréka Péter), a Hungarian American Enterprise Scholarship Found (dr Andréka Péter), az ETT (302/2003, dr Andréka Péter) és OTKA (F043380, dr Andréka Péter) támogatásával jött létre.
Autológ, intracoronariás csontvelői őssejt transzplantáció akut szívizom infarktusban A GOKI projekt (2005.06.01-???): Vértesaljai M., Szőke S., Piróth Z., Fontos G., Tóth A., Simor T., Lueff S., Réti M., Masszi T., Andréka P. Gottsegen György Országos Kardiológiai Intézet; Pécsi Tudományegyetem Általános Orvostudományi Kar, Szívgyógyászati Klinika; Országos Gyógyintézeti Központ, Hematológiai és Őssejt-Transzplantációs Osztály
Intacoronarialis Őssejt Beültetés Humán Vizsgálatokban Strauer B.E. et al.: Circulation 2002;106:1913-1918
Beválasztási kritériumok Betegszám: 2X10-10 12 órán belül kezdődött mellkasi fájdalom, 12 órán túli kezdet esetén akkor, ha a mellkasi fájdalom perzisztál, Szignifikáns ST elevatio, 100 ng/ml-nél magasabb CK-MB és troponin pozitivitás, Első myocardialis infarktus, Sikeres PCI, A további revascularisatio szükségtelensége, Csökkent systoles bal kamra funkció, Minimum három egymáshoz tartozó szegmentum akinesise, Hemodinamikai stabilitás.
A vizsgálat menete 4. nap reggel: Szív MRI Sikeres PCI 12 órán belül 4-6. nap: Őssejt Tx 6. hónap: Ismételt Szív MRI, EPS STEMI 3.nap: Bevonás a vizsgálatba 4-6. nap: Őssejtlevétel Kontroll vizsgálatok havonta Idő
Intracoronariás sejtszuszpenzió Átl. Végvolumen: 17.4ml Átl. Fvs tartalom: 137.1G/l Átl. Magvas-sejt tartalom: 2.39x10 9 Átl. Viability: 98.9% Átl. CD34+ sejt tartalom: 11.2x10 6
Eredmények I. Eddig 10 esetben végeztük el az intracoronariás csontvelői őssejt transzplantációt acut myocardialis infarctust követően Nem: Átlagéletkor: LVESV: LVEDV: 200 5 nő vs. 5 férfi 54.3 év 102ml vs. 89ml 168ml vs. 190ml 150 100 50 LVESV LVEDV 0 MRI 0. hó MRI 6. hó
Eredmények II. Ejectios Frakció: 40.4% vs. 50.8% 60 50 40 30 20 0. hó 6. hó 10 0 Ejectios frakció
Résztvevő intézetek Gottsegen György Országos Kardiológiai Intézet Pécsi Tudományegyetem Szívgyógyászati Klinika Országos Gyógyintézeti Központ Haematológiai és Őssejt-Transzplantációs Osztály
Az őssejtek alkalmazása az állatorvoslásban Felhasználási lehetőségek: Ortopédiai Daganatterápiás
Őssejt típusok Embrionális őssejt Mesenchymalis őssejt Differenciálódni képes Szívizomsejt Endothelialis sejt Simaizomsejt Csont- és Porcsejt Vázizom myoblastok Csontvelői őssejtek Hematopoieticus őssejtek (CD34+) Endothelialis progenitor sejtek (CD133) Differenciálódni képes Vázizomsejt Májsejt Idegsejt Vaszkularis endothel Bőr epitheliumsejt Stb.
A mesenchymalis őssejtek alkalmazása az ortopédiában Izület porcregeneráció 3. generációs porcpótló eljárások Csonttörések gyorsabb regeneráció Implantátumok, protézisek Ínszövet regeneráció
Szalaghiányok pótlása
A mesenchymalis őssejtek alkalmazása a daganatterápiában TRAIL: tumor necrosis factor (TNF) related apoptosis inducing ligand APO-2 halálligand
TRAIL-hatás a halálligand kötődése a membrán specifikus receptoraihoz bonyolult biokémiai folyamatokon keresztül apoptosis létrehozása
TRAIL alkalmazható solubilis formában membránkötött formában
Mit használtunk mi? membránkötött halálligandot tartalmazó MSC sejteket
Nagyértékű állatok daganatterápiája
Altatás
Előkészítés
Citológiai mintavétel
Csontvelővétel a crista iliaca-ból
Csontvelő tárolása
Ébredés
2 héttel később
Műtéti előkészítés
A daganat felpreparálása
Izomszövetek alól előbukkanó daganat
Eltávolított daganat
TRAIL-lel transzfektált mesenchymalis őssejteket tartalmazó oldat
Autolog mesenchymalis őssejtek
Előkészítés a beinjektáláshoz
A daganatágyba való bejuttatás
2/0-s Prolene-nel megjelöltük a beinjektálás helyét
Sebzárás
A műtét befejeződött
Reakció Veterinarians are just animals extremely aggressive, inquisitive, with no rules. They want to do everything yesterday and not today Breithaupt
Köszönjük a figyelmet!