Sejtfeldolgozás Felhasználás

Átírás

1 Sejtterápia

2 Sejtfeldolgozás Felhasználás Fagyasztva tárolás Sejtmosás Alap sejtszelekció Komplex sejtszelekció Ex vivo sejtszaporítás Sejtaktiválás Immunizálás Génmodifikálás Köldökzsinórvér bank Limfocita génterápiás termék Plazma eltávolitás Reagens eltávolítás (pl. citokin, antitest, médium) Incompatibilis vvt eltávolítása Mononuklearis sejtek dúsítása CD14 + monociták dúsítása CD34 + csontvelői-, vér őssejtek dúsítása CD8 + limfocita depléció Felnőtt őssejtek szaporításon alapuló szelekciója Gén-manipulált limfociták Antigénnel feltöltött dendritikus sejtek Gén-manipulált őssejtek Limfocita-alapú immunterápia NK sejt-alapú immunterápia Dendritikus sejt-alapú immunterápia Génpótlás Szuicid gének bevitele

3 Őssejtterápia

4 Az őssejtek terápiás felhasználásának lehetőségei Csontvelő átültetés Szövetek pótlása: + máj, porc, csont, vese

5 Az őssejt transzplantáció chronológiája Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) 1957-első csontvelő átültetés; Edward Donall Thomas és mtsai; Nobel díj 1990-ben 1973-első magyar őssejt átültetés; Dr. Kelemen Endre 1984-első magyar csontvelő transzplantáció; Dr. Kelemen Endre és Dr. Hollán Zsuzsa 1989-köldökzsinórvér transzplantáció; Broxmeyer és Gluckmann 1998-PBMC transzplantáció; Reiffers és Gorin

6 Őssejt transzplantációs lehetőségek Allogén: testvér, rokon, idegen Autológ: saját Szingén: egypetéjű ikrek

7 Az őssejtek gyűjtése 1. embrió (tiltott) 2. csontvelő (aspiráció) 3. perifériás vér (G-CSF, majd aferezis) 4. köldökzsinórvér 5. zsírszövet (kísérleti)

8 1.

9 Blastocyta

10 2. Csontvelővétel

11

12

13

14

15 3. Leukaferezis

16 Sejtszeparáló készülékek GAMBRO COBE 2991 ELUTRA

17 Sejtszeparáló készülékek FRESENIUS AS 104

18 4. Köldökzsinórvér tárolása születés után

19

20

21

22

23 CliniMACS sejtszeparáló készülék

24 A sejtek jelölése szelekcióhoz

25 A CliniMACS készülék mágnescsapdája

26 A CliniMACS készülék működése

27 Minőségellenőrzés Biztonság Tisztaság/identifikálás Hatékonyság Stabilitás Sterilitás Endotoxin Mycoplasma Fertőző ágensek Sejtszám Életképesség (Tripán kék, akridin orange, propidium jodid, 7-ADD) Sejttipizálás (morfológia, immunfenotípus-flow cytometria) Maradék anyagok visszamérése Klonális szaporodási készség Citotoxicitás Antigén prezentáció Metabolikus-, szintetizáló képesség Rövid és hosszú idejű tárolást követő funkcionális aktivitás

28 MINŐSÉGELLENŐRZÉS ŐSSEJT Sejtszám Fenotípus vizsgálat (CD34 + ) Életképesség Endotoxin (LAL) Sterilitás (Ph.Hg.VIII. és Ph. Eur. 4.) Funkcionális tesztek: kolónia képzés, migráció

29 Csontvelő-transzplantációs szoba

30 Az allogén őssejttranszplantáció indikációi Veleszületett Immundeficiencia Vérképzőszervi betegségek anemia neutropenia trombocitopenia Anyagcserezavarok Szerzett Aplasztikus anémia Szerzett immunhiány szindróma Tiszta vörösvérsejt aplázia Tiszta megakariocita hiány Langerhans histiocitózis

31 Őssejttranszplantáció hematológiai betegségekben Autológ Malignus limfómák Mielóma multiplex Szolid tumorok Allogén Akut leukémiák Krónikus mieloid leukémia Mielodiszpláziás szindróma Mieloproliferatív betegségek

32 A sejtregeneráció kinetikája őssejt transzplantáció után 1. Phagocyták (polymorphonucleáris és mononucleáris) 2-3 hét 2. NK sejtek (CD3 - CD16 + CD56 + sejtek) 1 hó 3. T lymphocyták (CD3 + sejtek) 3-6 hó CD8 + CD4 + CD45RO + (memória) gyors CD45RA + (naiv) lassú, évek alatt 4. B sejtek (évek alatt) IgM IgG IgA (oligo/monoklonális ea)

33 A donor T sejtek szerepe 1. A transzplantált allogén donor őssejtek rejectiójának gátlása 2. Reziduális malignus sejtek elpusztítása (ismételt donor T sejt infúzió) 3. GVHD allogén transzplantáció esetén (T és NK sejtek mediálják)

34 Dendritikus sejt-alapú tumor vaccina

35 A dendritikus sejtek physiologiája

36 Dendritikus sejtek előállítása in vitro

37

38 MINŐSÉGELLENŐRZÉS DENDRITIKUS SEJT Sejtszám Fenotípus vizsgálat (CD86 +, CD1a, CD-SIGN) Életképesség Endotoxin (LAL) Sterilitás (Ph.Hg.VIII. és Ph. Eur. 4.) Funkcionális tesztek: IL-12 termelés, migráció, T sejt osztódás indukciója, IFNγ termelés indukció.

39

40 NaCl NaCl

41 2h 48h

42

43

44

45

46

47 SZÁMÍTÓGÉPES MONITOROZÓ RENDSZER

48 Primum nil nocere Először is ne árts