Parathormon és D-vitamin mérési módszerek és azok diagnosztikai értéke

Átírás

1 Parathormon és D-vitamin mérési módszerek és azok diagnosztikai értéke Dr. Bekő Gabriella Uzsoki Kórház, Központi Laboratórium

2 Parathormon (PTH) 84 aminosavból álló polipeptid A mellékpajzsmirigy fősejtjei termelik hypercalcemizáló hatás az intakt hormon első négy aminosavához köthető! A molekulák egy része még sejten belül lebomlik katepszin B (NH 2 -terminalis részt lehasítja) 7-84 PTH fragmentum (antagonizálja a parathormon hypercalcaemizáló hatását) A PTH szérumszintjét szabályozza: Szérum ionos kalcium szint Szérum foszfát szint (kisebb mértékben) 1,25 (OH) 2 -D 3 -vitamin

3 Parathormon biológiai hatásai a vesében a D-vitamin aktivációt Ezáltal a bélben a kalcium felszívódást Osteoclastok aktiválása révén mobilizálja a csontból a kalciumot A vesében csökkenti a foszfát és növeli a Ca visszaszívódást

4 Mellékpajzsmirigy túlműködés Primer hyperparathyreosis Ok: - 85 %- ban izolált parathyreoid adenoma - 15%-ban diffúz parathyreoid hyperplasia - > 1% parathyroid carcinoma Hyperparathyreosis biokémiai jellemzői: - se Ca - se P vagy normal érték alsó határán - hypercalcuria

5 Mellékpajzsmirigy túlműködés II. Szekunder hyperparathyreosis :kompenzatórikus hyperfunkció, amelyet az alacsony kalciumszint vagy a parathyreoid hormon periferiális rezisztenciája okoz Ha az alapbetegséget kezeljük, a szekunder hyperparathyreosis helyreáll Ok: Dializált krónikus veseelégtelenség hypocalcemiával és hyperfosphtemiával Calcium malabsorpció Osteomalacia D vitamin hiány Csökkent D vitamin metabolismus

6 Mellékpajzsmirigy túlműködés III Tercier hyperparathyroidosis Ha a seecunder hyperparathyreosis talaján kialakul mellékpajzsmirigy sejtek hypertrophiája, majd a tartós túlstimuláció, illetve a gátló hatások kiesése miatt a sejtek proliferálnak, és diffúz hyperplasia jön létre. Hyperfunkció és hyperszekréció az alapbetegség kezelése ellenére (pl. vesetransplantáció)is fennáll.

7 Krónikus veseelégtelenség leggyakoribb szövődménye a csont és ásványi anyagcsere zavar Kezdetben: parathormon D-vitamin Szövődmények kialakulása: csonttömeg vesztés csonttörés vaszkuláris kalcifikáció caliphylaxis magas kardiovaszkuláris morbiditás, mortalitás

8 Összehasonlító mérés a forgalomban levő PTH koncentrációt meghatározó kitek között Vizsgált betegcsoport: 130 dializált vesebeteg (110 hemodializált, 20 Platformok, assay-ek: Intakt PTH peritoneálisan dializált) Roche intakt PTH (ipth) ABBOTT intakt PTH (ipth) PTH 1-84 Roche PTH1-84 (Biointakt PTH ) Liaison/Diasorin PTH 1-84 Kérdések: 1. Analitikai teljesítőképesség 2. Módszerek közötti korreláció (összemérve, kielemezve) 3. A cut-off értékek figyelembe vételének következményei (elemezve)

9 Mit mérnek a különböző generációs PTH tesztek?

10 Preanalitika és analitika Preanalitika: A vizsgálathoz EDTA-s plasma, szérum, esetleg szöveti felülúszó szükséges! A levett mintákat jeges vízbe állítva kell szállítani! 1 órán belül hűtve centrifugálni! -20 ⁰C-on tárolni a mérésig! A tesztek funkcionális érzékenysége: TESZT KÉSZÜLÉK Funkcionális szenzitivitás BECKMAN COULTER intakt PTH UniCel Dxl pg/ml ABBOTT intact PTH ARCHITECT 4 pg/ml COBAS intact PTH Elecsys 2010 MODULAR E170 6 pg/ml 6 pg/ml COBAS biointact PTH (1-84) Elecsys MODULAR E LIAISON 1-84 PTH LIAISON 4 pg/ml

11 Dializált betegek PTH értékei második és harmadik generációs teszttel mérve * * *Szignifikánsan alacsonyabb

12 A renalis osteodystrophia (ROD) vizsgálata és kezelése Szakmai protokoll Felelős szervezetek: MANET/MOOT/MRE Az ipth értékéhez kötött eljárások/ajánlások: 1. Plazma ipth 33 pmol/l (300 pg/ml)-nél magasabb, és a szérum Ca a normál tartományban van, akkor a mellékpajzsmirigy működés kontrollálása céljából calcimimetikumot vagy aktív D vitamint kell adni (Cinacalcet: nem fokozza Ca és P szintet, csökkenti a CaxP szorzatot) plazma ipth 33 pmol/l (300 pg/ml)-nél magasabb és a szérum kalcium szint 2,1 mmol/l felett van. 2. Kalcium tartalmú foszfát kötők adása nem javasolt hypercalcaemia esetén, vagy ha az ipth két egymást követő mérés során 16,5 pmol/l (150 pg/ml) alatt van ipth 16,5 pmol (150 pg/ml) 3. Súlyos, terápia rezisztens hyperparathyreosis - ipth> 88 pmol/l (800 pg/ml) - esetén, amennyiben klinikai tünetek, hypercalcaemia és/vagy hyperphosphataemia társulnak hozzá, megfontolandó a parathyroidectomia

13

14 PTH POCT mérő készülékek

15 PTH pg/ml PTH koncentráció alakulása a mellékpajzsmirigy eltávolítása után Műtéti eltávolítás utáni percek Perc

16 Kőszegi Tamás Pécs

17 Kőszegi Tamás Pécs

18 D vitamin A legújabb irodalomban D-vitamin helyett inkább D-hormonról írnak. - szteránvázas vegyület - a szervezet felnőtt korban kellő mennyiségben állítja elő - nem kofaktora semelyik enzimnek sem - a neurohumorális rendszerrel a mellékpajzsmirigy hormonján keresztül van kapcsolata

19 Hogyan jut a szervezet kellő D vitaminhoz? D2 vitamint (ergokalciferol) -a növények termelik D3 vitamin (kolekalciferol) -7-dehidrokoleszterin biohasznosulása (bőrben, UV hatására) -legfontosabb források: halolaj, halak, tojássárgája, tejtermékek +Dvit., máj, számos más táplálék

20 D vitamin sorsa a szervezetben 1. 7-dehidroxikoleszterin fotolitikus átalakulása a bőrben D3-previtaminná majd D3 vitaminná ös szénatom hidroxilálódik a májban létrejön a 25-(OH)-D3 (CYP27 hatására) Szérumszintje tökéletes jelzője a D-vitamin háztartás állapotának 3. Bioaktiváció a vesében, létrejön az 1,25-(OH)2-D3 (CYP1hatására)

21 A D-vitamin biológiai hatásai 1.Segíti a Ca felszívódását 2.Normalis se kalcium- és foszfát-homeosztázist a csont reszorpcióján keresztül is szabályozza 3. Gátolja a parathormon secrecióját (hiányában secunder hyperparatyreosis alakul ki) 4. Vesékben növeli a Ca reabsorpciót, segíti a Ca transzportot a distalis tubulusokba.

22 Hiánybetegség D vitaminhiány: A gyermekekben angolkór (deformálódott koponyacsontok, "tyúkmell"/kiálló szegycsont, púposság, görbe vagy X lábak, duzzadt ízületek). A felnőttekben csontlágyulás (csontfájdalmak, puha csontok, spontán csonttörések, gerinctörés).

23 A D-vitamin metabolizmus veleszületett és szerzett zavarai a. Veleszületett - D vitamin dependens rachitis (I., II. típus) - Hypophosphatemiás, gyakran nemhez kötötten öröklődő, X kromoszómához kötött D-vitamin rezisztens rachitis - Felszívódási zavar b. Szerzett - Krónikus urémia - Tumor indukálta osteomalacia - Felszívódási zavar

24 A D vitamin biológiai hatásai idős emberek osteoporosisa esetén a csonttörések száma jelentősen csökkenthető D-vitamin-terápiával D-vitamin-kezeléskor a csont ásványianyag-tartalma nem nő számottevően, a törések száma mégis 30 70%- kal redukálódik. Ez a tény részben a D-vitamin-kezeléssel járó izomerő-fokozódásnak tulajdonítható, részben pedig a csont minőségében bekövetkező változásoknak

25 D-vitamin biológiai hatásai 2. Haematopoeticus szövetekben -antiproliferáció és - differenciáció serkentése A D-vitamin potenciális gyógyszerként szerepelhet a leukaemiák és más myeloproliferativ kórképek kezelésében.

26 D-vitamin biológiai hatásai 3 A D-vitamin szerepet játszhat az ischaemiás szívbetegség kivédésében D-vitamin-hiányban hozzávetőleg 20 30%-kal gyakoribbak az ischaemiás jellegű cardio-vascularis események.

27 D-vitamin biológiai hatásai 4 Hasnyálmirigyben az inzulinszintézis/-szekréció serkentése D-vitamin-hiányos területeken a 2-es típusú diabetes mellitus, a glükózintolerancia és a metabolikus X-szindróma gyakrabban fordul elő.

28 D-vitamin biológiai hatásai 5 Veseelégtelenségben számos ureamiás szövődmény okának az emelkedett PTH-t tekintik A D-vitamin terápia a krónikus vesebetegek gyógyszeres kezelésének fontos eleme

29 D-vitamin biológiai hatásai 6 Daganatok melanoma, leukaemia, osteo-, fibrosarcoma, adenoma, neuroblastoma, pancreas adenocarcinoma, hólyag-, emlő-, cervix-, prostata-, colon- és medullaris pajzsmirigy-carcinoma antiproliferatív, a differenciáció serkentése A D-vitamin sejtproliferációt gátló és sejtdifferenciálódást indukáló szerepét egyre nagyobb figyelem kíséri.

30 D-vitamin biológiai hatásai 7 Immunrendszer ( monocyta és macrophag, lymphocyta) antivirális/-bakteriális és tumorellenes hatás és a védekezés serkentése immunszuppresszió gátolja a B- és T-sejtek proliferációját, így hatásos autoimmun betegségekben

31 Páciensek osztályozása D vitamin szintjük alapján Súlyos D vitamin hiány: < 5 ng/ml /< 12.5 nmol/l D vitamin hiány: 5 10 ng/ml / nmol/l Enyhe D vitamin hiány: ng/ml 25 75nmol/L Megfelelő D vitamin szint: 30 80ng/ml/ 75 to 200nmol/L D vitamin toxicitás: > 200 ng/ml > 500 nmol/l

32 D vitamin mérés lehetőségei LC MS-MS (Referens módszer) HPLC RIA, ELISA Automatán mérhető immunkémiai tesztek: - DiaSorin LIAISON( ) 25 OH Vitamin D TOTAL - - Elecsys Vitamin D Total Roche (Elecsys, E170 Modular, Cobas e) - Siemens ADVIA Centaur( ) Vitamin D Total - ABBOTT ARCHITECT 25-OH Vitamin D - Immunodiagnostic Systems 25-Hydroxy VitaminD Assay onthe IDS-iSYS Analyser

33 A klinikai kémiai gyakorlatban alkalmazható 25(OH)D módszerekkel szemben támasztott követelmények: Visszavezethetősége olyan LC-MS/MS módszerrel szemben történjen, amelyet NIST (National Institute of Standards and Technology) standard referens preparátumra (SRM-972: Standard Reference Material) standardizáltak. A kötő ágens (protein, antitest) magas affinitással (>80-110%) kösse a 25(OH)D 3 -at és a 25(OH)D 2 -t egyaránt. A módszer tegye lehetővé a megbízható eredményszolgáltatást a nmol/l közötti mérési tartományban, a minta hígítását követően is. A klinikailag releváns tartományban a metodikai leírásokban szereplő módszerspecifikus populációs cut off érték, illetve a szakmai irányelvekben definiált (hiány: <50 nmol/l; elégtelen: nmol/l; elégséges: >75 nmol/l túladagolást jelző: nmol/l körül) határértékek körül a módszer inter assay variációs koefficiense (CV%) ne haladja meg a laboratóriumon belül a 15%-ot, laboratóriumok között - ugyanazon módszer alkalmazása esetén- a 20%-ot. Az eredményeket egységesen SI mértékegységben (nmol/l) javasoljuk megadni hazánkban. Átváltási faktorok: ng/ml x 2,5 = nmol/l; nmol/l x 0,4 =ng/ml. Az egészségre alapozott, szakmai irányelvek által megadott cutoff értékeket javasolt feltüntetni a leleten.

34 Preanalitikai megfontolások: Meggyőző preanalitikai vizsgálatokkal igazolták, hogy a 25(OH)D és 1,25(OH) 2 D vizsgálatra küldött vérminta, nem igényel megkülönböztetett bánásmódot, mivel a mintában lévő D-vitamin fehérjékhez kötött komplexe rendkívül stabil, hőre, fényre, nem érzékeny. Viszont a már előkezelt (fehérjekötésből felszabadított) mintát tárolni nem szabad, azt azonnal analizálni szükséges. Elméletileg a szérumból és plazmából is mérhető D- vitamin, de erre nézve mindig a reagenst gyártó utasításait kell figyelembe venni. Mint minden fehérjekötésen alapuló módszernél, itt is előfordulhat a beteg mintájában jelenlévő, az analitikát zavaró szubsztancia (pl. heterofil antitest, biotin, egyéb gyógyszer, interaktáló D-vitamin analóg.stb), amely a valós eredményt meghamisíthatja.

35 Lelet értékelése Az összes 25(OH)D szintek az alábbi tényezőktől függenek: D-vitamin bőrben való keletkezésétől és annak bevitelétől, a máj 25-hidroxilase aktivitásától, A szérum D vitamin binding globulin (DBP) és albumin szintjétől, azok kötőkapacitásától. Ez utóbbi rendkívül eltérő lehet a DBP izoformáktól függően. A 25(OH)D szöveti felhasználásától (1-alfa hidroxiláció) és eliminációjától (24-hidroxilase), amelyek regulált enzimatikus átalakulások.

36 Mikor mérjünk D vitamint? A 25(OH)D vitamin mérése szigorú szakmai értelemben csak 5 esetben indokolt: -osteomalácia -szekunder hyperparathyreosis - malabsorbciós szindróma - krónikus májelégtelenség - krónikus veseelégtelenség - egy alkalommal, a kezelés indítása előtt. Más esetben a 25(OH)D vitamin mérése, a klinikai kép és az egyéb laboreredmények mérlegelése alapján indokolt lehet, de többnyire nélkülözhető. Általában elmondható, hogy ezekben az esetekben inkább adjuk a D vitamint, mint mérjük!

37 Mikor nem érdemes D vitamint mérni? Nem javasolt a 25(OH)D vitamin mérése az átlag populációban az általános szűrés D-vitamin ellátottság vizsgálata céljából, mivel a D-vitamint nehéz túladagolni, inkább adjunk D vitamint, mintsem a várható hiányt az alacsony 25(OH)D szint méréssel igazoljuk. Nem javasolt a mérése terápia monitorozása céljából. Erre elegendő a szérum és vizelet kalcium és foszfát mérése, amely jóval olcsóbb vizsgálat. Nem javasolt kórházban fekvő betegek körében, egyrészt azért, mert általában (80-90%-ban) rendkívül alacsony szintek mérhetőek, amelyek hátterében nem csak a D- vitamin hiány, hanem a betegséggel összefüggő hormonális homeostasis sérülése miatt megváltozott regulációs mechanizmusok is állhatnak.

38 Köszönöm a figyelmet!