Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.5-1 07/2012:1250 OMEGA-3 ACIDORUM ESTERI ETHYLICI 90 Omega-3-sav-etilészterek 90 DEFINÍCIÓ Az alfa-linolénsav (C18:3 n-3), a moroktsav (sztearidonsav; C18:4 n-3), az ejkozatetraénsav (C20:4 n-3), a timnodonsav (ejkozapentaénsav) (C20:5 n-3; EPS), a henejkozapentaénsav (C21:5 n-3), a klupanodonsav (C22:5 n-3) és a cervonsav (dokozahexaénsav) (C22:6 n-3; DHS) etilésztereinek elegye. Az omega-3-sav-etilésztereket az Engraulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeridae, Salmonidae és Scombridae családok halfajtáiból, vagy a Cephalopoda osztályba tartozó élőlényekből származó olaj átészterezésével, majd ezt követő, karbamidos frakcionálást, majd vízgőzdesztillációt is magába foglaló fizikai-kémiai tisztító eljárásokkal állítják elő. Tartalom: EPS- és DHS-etilészter: legalább 80%; ezen belül legalább 40% EPS-etilészter és legalább 34% DHS-etilészter, összes omega-3-sav-etilészter: legalább 90%. Megfelelő antioxidáns tartalmazhat. ELŐÁLLÍTÁS A dioxinok és a dioxin-szerű PCB-k (poliklórozott bifenilek) mennyiségét, olyan módszerekkel és határértékek alkalmazása mellett ellenőrzik, melyek összhangban vannak az Európai Unióban megállapított követelményekkel vagy egyéb ide vonatkozó szabályzatokkal. SAJÁTSÁGOK Küllem: világossárga folyadék. Oldékonyság: vízben gyakorlatilag nem oldódik; acetonban, etanolban (96%), heptánban és metanolban nagyon bőségesen oldódik. AZONOSÍTÁS A. Az EPS- és DHS-etilészter tartalmi meghatározása során kapott kromatogramokat értékeljük. Értékelés: a b) vizsgálati oldat kromatogramján az ejkozapentaénsav-etilészternek és a dokozahexaénsav-etilészternek megfelelő csúcsok retenciós ideje és mérete egyezzen meg az a 1 ) és a 2 ) összehasonlító oldat kromatogramján látható megfelelő csúcsok retenciós idejével. B. A vizsgálandó anyag feleljen meg az összes omega-3-sav-etilészter-tartalomra előírt követelménynek.
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.5-2 VIZSGÁLATOK Abszorbancia (2.2.25): legfeljebb 0,55, 233 nm-en. A vizsgálandó anyag 0,300 g-ját R trimetilpentánnal 50,0 ml-re hígítjuk. Az így készített oldat 2,0 ml-ét R trimetilpentánnal 50,0 ml-re tovább hígítjuk. Savszám (2.5.1): legfeljebb 2,0. A vizsgálathoz az anyag 10 g-ját az előírt oldószerelegy 50 ml-ében oldjuk. Anizidin-érték (2.5.36): legfeljebb 20,0. Peroxidszám (2.5.5/A): legfeljebb 10,0. Oligomerek. Méretkizárásos kromatográfia (2.2.30). Vizsgálati oldat. 50,0 mg vizsgálandó anyagot R tetrahidrofuránnal 10,0 ml-re hígítunk. Összehasonlító oldat. 100 ml-es mérőlombikban 50 mg R monodokozahexaenoint, 30 mg R didokozahexaenoint és 20 mg R tridokozahexaenoint R tetrahidrofuránnal 100,0 ml-re oldunk. Oszlop: 3 oszlopot sorba kötünk: méretei: l = 0,3 m, Ø = 7,8 mm, állófázis: R sztirol divinilbenzol-kopolimer (5 µm), a következő pórusméretekkel: 1. oszlop: 50 nm; 2. oszlop: 10 nm; 3. oszlop: 5 nm; az oszlopok összekötésének sorrendje: injektor 1. oszlop 2. oszlop 3. oszlop detektor. Mozgófázis: R tetrahidrofurán. Áramlási sebesség: 0,8 ml/perc. Detektálás: differenciál-refraktométerrel. Injektálás: 40 µl. Rendszeralkalmasság: összehasonlító oldat: elúciós sorrend: tridokozahexaenoin, didokozahexaenoin és monodokozahexaenoin; csúcsfelbontás: a monodokozahexaenoin és a didokozahexaenoin között legalább 2,0; a didokozahexaenoin és a tridokozahexaenoin között legalább 1,0. Az oligomerek százalékos mennyiségét az alábbi kifejezés segítségével számítjuk ki: B 100, A ahol A = a kromatogramon látható összes csúcs területének összege, B = az etilészter-csúcsokénál kisebb retenciós idejű csúcsok területének összege. A kromatogramon látható legnagyobb csúcsok (1250.-1. ábra) az etilészter-csúcsok, amelyek egy szét nem vált kettős csúcs alakjában lehetnek láthatók.
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.5-3 Amennyiben monogliceridek jelenléte miatt a kapott eredmény nem felel meg a követelménynek, a következő módszert kell alkalmazni. 1. oligomerek 2. etilészterek 1250.-1. ábra Kromatogram az oligomerek vizsgálatához: mesterségesen szennyezett minta Vizsgálati oldat. Egy kvarckémcsőbe 50,0 mg vizsgálandó anyagot mérünk. Az anyagot R nátriumhidroxid R metanollal készített 20 g/l töménységű oldatának 1,5 ml-ében oldjuk, ezután R nitrogént vezetünk az oldat fölé, majd a kémcsövet egy teflonsapkával szorosan lezárjuk. A folyadékot kevertetés közben vízfürdőn 7 percig melegítjük, majd hagyjuk lehűlni; ezután 2 ml R metanolos bór-triklorid oldatot adunk hozzá, majd R nitrogént vezetünk az elegy fölé, és a kémcsövet ismét szorosan lezárjuk. A folyadékot kevertetés közben vízfürdőn 30 percig melegítjük, majd hagyjuk 40 50 C-ra lehűlni, 1 ml R trimetilpentánt adunk hozzá, majd a kémcsövet lezárjuk, és legalább 30 másodpercig erősen rázzuk. Ezután azonnal 5 ml R telített nátrium-klorid oldatot adunk az elegyhez, majd R nitrogént vezetünk fölé, a kémcsövet lezárjuk, és legalább 15 másodpercig alaposan rázzuk. A felső réteget átöntjük egy másik kémcsőbe. A metanolos réteget R trimetilpentán 1 ml-ével újból kirázzuk. Az összegyűjtött
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.5-4 trimetilpentános extraktumokat 2 1 ml R vízzel mossuk. Az oldószert R nitrogén áramoltatásával óvatosan elűzzük, majd a maradékhoz 10,0 ml R tetrahidrofuránt adunk. Az elegyhez R vízmentes nátrium-szulfátot adunk, majd a keveréket megszűrjük. Az oligomerek százalékos mennyiségét az alábbi kifejezés segítségével számítjuk ki: ahol B 100, A B = a metilészter-csúcsokénál kisebb retenciós idejű csúcsok területének összege. Követelmény: oligomerek: legfeljebb 1,0%. TARTALMI MEGHATÁROZÁS EPS- és DHS-etilészter (2.4.29). A csúcsok azonosításához lásd az 1250.-2. ábrát. Összes omega-3-sav-etilészter (2.4.29). Lásd az 1250.-2. ábrát. ELTARTÁS Inert gáztérben, légmentesen záró tartályban, fénytől védve. 1. fitánsav 7. C18:4 n-3 13. furánsav 7 19. C22:4 2. C16:3 n-4 8. C18:4 n-1 14. C20:4 n-3 20. furánsav 10 3. C16:4 n-1 9. furánsav 5 15. furánsav 8 21. C22:5 n-6 4. C18:3 n-6 10. C19:5 16. EPS 22. furánsav 11 5. C18:3 n-4 11. C20:3 n-6 17. furánsav 9 23. C22:5 n-3 6. C18:3 n-3 12. C20:4 n-6 18. C21:5 n-3 24. DHS
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.7.5-5 1250.-2. ábra A tartalmi meghatározás során kapott kromatogram