LACTULOSUM. Laktulóz

Átírás

1 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur /2009:1230 LACTULOSUM Laktulóz és C* epimere C 12 H 22 O 11 M r 342,3 [ ] DEFINÍCIÓ 4-O-(β-D-galaktopiranozil)-D-arabino-hex-2-ulofuranóz- Tartalom: 95,0 102,0 % (vízmentes anyagra). SAJÁTSÁGOK Küllem: fehér vagy csaknem fehér kristályos por. Oldékonyság: vízben bőségesen oldódik; metanolban mérsékelten oldódik; toluolban gyakorlatilag nem oldódik. op: kb. 168 C. AZONOSÍTÁS

2 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Első azonosítás: B, C, D, E. Második azonosítás: A, C, D, E. A. Vékonyréteg-kromatográfia (2.2.27). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 50,0 mg-ját R vízzel 10,0 ml-re oldjuk. Összehasonlító oldat. 50,0 mg CRS laktulózt R vízzel 10,0 ml-re oldunk. Lemez: R szilikagél G. Mozgófázis: R tömény ecetsav 50 g/l töménységű R bórsav R metanol R etil-acetát ( V/V). Felvitel: 2 µl. Kifejlesztés: 15 cm-es fronttávolságig. Szárítás: C-on 5 percig szárítjuk, majd hűlni hagyjuk. Előhívás: a lemezt 10 térfogatrész R tömény kénsav és 90 térfogatrész R metanol elegyítésével készült, 1,0 g/l töménységű R naftalin-1,3-diol oldattal bepermetezzük. A lemezt 110 C-on 5 percig melegítjük. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főfoltja helyét, színét és méretét tekintve egyezzék meg az összehasonlító oldat kromatogramjának főfoltjával. B. A Tartalmi meghatározás során nyert kromatogramokat értékeljük. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főcsúcsa helyét és méretét tekintve egyezzék meg a b) összehasonlító oldat kromatogramjának főcsúcsával. C. 50 mg anyagot 10 ml R vízben oldunk. Az oldatot 3 ml R réz(ii)-tartarát oldattal elegyítjük, majd melegítjük. Vörös csapadék képződik. D. 0,125 g anyagot 5 ml R vízben oldunk. Az oldatot 5 ml R ammónia oldattal elegyítjük, majd 80 C-os vízfürdőn 10 percig melegítjük. Vörös szín keletkezik. E. Az anyag feleljen meg a Fajlagos optikai forgatóképesség vizsgálatban (lásd Vizsgálatok) előírt követelménynek. VIZSGÁLATOK S oldat. 3,0 g anyagot R szén-dioxid-mentes vízzel 50 ml-re oldunk.

3 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Az oldat külleme. Az S oldat tiszta legyen (2.2.1). Színe nem lehet erősebb, mint a BS 5 szín mértékoldaté (2.2.2, II. módszer). ph (2.2.3): 3,0 7,0. A vizsgálathoz az S oldat 10 ml-ét R kálium-klorid telített oldatának 0,1 ml-ével elegyítjük. Fajlagos optikai forgatóképesség (2.2.7): 46,0 és 50,0 között. A vizsgálandó anyag 1,25 g-ját R vízben oldjuk, majd az oldatot 0,2 ml R tömény ammónia oldattal elegyítjük, és R vízzel 25,0 ml-re hígítjuk. Az eredményt a vízmentes anyagra vonatkoztatjuk. Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 1,00 g-ját 10 ml R vízben oldjuk. Az oldatot enyhe melegítés közben 12,5 ml R acetonitrillel elegyítjük, majd R vízzel 25,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (a). A vizsgálati oldat 3 ml-ét enyhe melegítés közben 47,5 ml R acetonitrillel elegyítjük, majd R vízzel 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (b). 1,00 g CRS laktulózt 10 ml R vízben oldunk. Az oldatot enyhe melegítés közben 12,5 ml R acetonitrillel elegyítjük, majd R vízzel 25,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). CRS rendszeralkalmassági vizsgálatra szánt laktulózt tartalmazó 1 injekciós üveg tartalmát R acetonitril és R víz egyenlő térfogatarányú elegyének 1 ml-ében oldjuk. Előtétoszlop: méretei: l = 0,05 m, Ø = 4,6 mm; állófázis: R kromatográfiás célra szánt, aminopropilszililezett szilikagél (3 µm); hőmérséklet: 38±1 C. Oszlop: méretei: l = 0,15 m, Ø = 4,6 mm; állófázis: R kromatográfiás célra szánt, aminopropilszililezett szilikagél (3 µm); hőmérséklet: 38±1 C. Mozgófázis: 0,253 g R nátrium-dihidrogén-foszfát-dihidrátot 220 ml R vízben oldunk, majd az oldatot 780 ml R acetonitrillel elegyítjük.

4 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektálás: állandó hőmérsékleten tartott refraktométer. Injektálás: a vizsgálati oldat, az a) és c) összehasonlító oldat 20 µl-ét injektáljuk. Kromatografálási idő: a laktulóz retenciós idejének 2,5-szerese. Relatív retenciók: a laktulózra (retenciós ideje kb. 18,3 perc) vonatkoztatva: E- szennyező kb. 0,38; D-szennyező kb. 0,42; B-szennyező kb. 0,57; A-szennyező kb. 0,90; C-szennyező kb. 1,17. Rendszeralkalmasság: c) összehasonlító oldat: csúcsfelbontás: legalább 1,3 a laktulóz és az A-szennyező között; szükség esetén módosítjuk a mozgófázis acetonitril koncentrációját 75,0 és 82,0 %V/V között; az így nyert kromatogram profilja meg kell egyezzen a CRS rendszeralkalmassági vizsgálatra szánt laktulózhoz mellékelt kromatogram profiljával. Követelmény: A-, B-, C., D- és E-szennyezők összesen: csúcsterületük összege nem lehet nagyobb, mint az a) összehasonlító oldat kromatogramján a laktulóznak megfelelő csúcs területe (3%); Metanol. Gőztér (head-space) gázkromatográfiás vizsgálatot végzünk (2.2.28). Belső standard oldat. 0,5 ml R 1-propanolt 100,0 ml R vízzel elegyítünk. Az oldat 1,0 ml-ét R vízzel 100,0 ml-re hígítjuk. A hígított oldat 5,0 ml-ét R vízzel 50,0 mlre hígítjuk. Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag 79 mg-ját 20 ml-es injekciós üvegbe mérjük, majd 1,0 ml belső standard oldatot és R metanol 0,1 %V/V-os oldatának 5 µl-ét adjuk hozzá. Összehasonlító oldat. A belső standard oldat 1,0 ml-ét 20 ml-es injekciós üvegbe mérjük, majd R metanol 0,1 %V/V-os oldatának 5 µl-ével elegyítjük. Oszlop: méretei: l = 2 m; Ø = 2 mm; állófázis: R etil-vinilbenzol-divinilbenzol-kopolimer (180 µm). Vivőgáz: R kromatográfiás célra szánt hélium. Áramlási sebesség: 30 ml/perc.

5 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur A statikus gőztér injektáláshoz javasolt körülmények: egyensúly beállítás hőmérséklete: 60 C; egyensúly beállítás ideje: 1 óra; a nyomás alá helyezés időtartama: 1 perc; Hőmérséklet: oszlop: 140 C; injektor: 200 C; detektor: 220 C; Detektálás: lángionizációs detektor. Injektálás: 1 ml a gőzfázisból. Kiszámoljuk a metanoltartalmat, annak sűrűségét (2.2.5) 20 C-on 0,79 g/ml-nek tekintve. Követelmények: metanol: kiszámoljuk az összehasonlító oldat kromatogramján a metanol csúcsterületének és a belső standard csúcsterületének arányát (R); kiszámoljuk vizsgálati oldat kromatogramjának ugyanezen csúcsaiból számított arányt: ez utóbbi nem lehet nagyobb, mint 2R (50 ppm). Bór: legfeljebb 9 ppm. Üvegeszközök használatát lehetőleg kerüljük. Összehasonlító oldat. 50,0 mg R bórsavat R vízzel 100,0 ml-re oldunk. Az így készült oldat 5,0 ml-ét R vízzel 100,0 ml-re hígítjuk. Az oldatot jól záró polietilén tartályban tartjuk. 4 db 25 ml-es politetilén lombikba a következőket töltjük: 0,50 g vizsgálandó anyag 2,0 ml R vízzel készült oldatát (A oldat), 0,50 g vizsgálandó anyag 1,0 ml összehasonlító oldat és 1,0 ml R víz elegyével készült oldatát (B oldat), 1,0 ml összehasonlító oldatot és 1,0 ml R vizet (C oldat), 2,0 ml R vizet (D oldat). Mindegyik lombikba 4,0 ml R acetát-edetát tompítóoldatot (ph 5,5) mérünk, tartalmukat megkeverjük, majd hozzáadunk 4,0 ml frissen készített R azometin-h oldatot. Az oldatokat keverjük, majd 1 órán át állni hagyjuk. Az A, B és C oldatok

6 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur abszorbanciáját (2.2.25) 420 nm-en határozzuk meg, kompenzáló folyadékként a D oldatot használjuk. A vizsgálat csak abban az esetben értékelhető, ha a C oldat abszorbanciája legalább 0,25. A B oldat abszorbanciája nem lehet kisebb az A oldat abszorbanciájának kétszeresénél. Ólom (2.4.10) legfeljebb 0,5 ppm. Víztartalom (2.5.12): legfeljebb 2,5%. 0,500 g anyagot vizsgálunk. Szulfáthamu (2.4.14): legfeljebb 0,1%. 1,0 g anyagot vizsgálunk. Mikrobiológiai szennyezés. TAMC: elfogadhatósági követelmény: 10 2 CFU /g (2.6.12). Escherichia coli nem lehet jelen (2.6.13). TARTALMI MEGHATÁROZÁS Folyadékkromatográfia (2.2.29), a Rokon vegyületek pontban leírtak szerint, az alábbi módosítással. Injektálás: vizsgálati oldat és b) összehasonlító oldat. Az anyag százalékos C 12 H 22 O 11 -tartalmát a CRS laktulóz deklarált tartalma alapján számítjuk ki. SZENNYEZŐK és C* epimere A. 4-O-(β-D-galaktopiranozil)-D-mannopiranóz (epilaktóz), B. galaktóz,

7 Lactulosum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur C. laktóz, D. fruktóz, és C* epimere E. D-lixo-hex-2-ulopiranóz (tagatóz).