IECORIS ASELLI OLEUM A. Csukamájolaj (A típus)

Átírás

1 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur /2012:1192 IECORIS ASELLI OLEUM A Csukamájolaj (A típus) DEFINÍCIÓ A vadon élő tőkehal Gadus morhua L. és más Gadus-fajok friss májából nyert, tisztított zsíros olaj, amelyből a szilárd anyagokat hűtéssel és szűréssel eltávolították. Alkalmas antioxidánst tartalmazhat. Tartalom: A-vitamin: grammonként NE ( μg); D 3 -vitamin: grammonként NE (1,5 6,25 μg). ELŐÁLLÍTÁS A dioxinok és a dioxin-szerű PCB-k (poliklórozott bifenilek) mennyiségét, olyan módszerekkel és határértékek alkalmazása mellett ellenőrzik, melyek összhangban vannak az Európai Unióban megállapított követelményekkel vagy egyéb ide vonatkozó szabályzatokkal. SAJÁTSÁGOK Küllem: tiszta, sárgás színű folyadék. Oldékonyság: vízben gyakorlatilag nem oldódik; petroléterrel elegyedik; etanolban (96%) kevéssé oldódik. AZONOSÍTÁS Első azonosítás: A, B, C. Második azonosítás: C, D. A. Az A-vitamin A-módszer szerinti tartalmi meghatározásában a vizsgálati oldat 325±2 nm-nél abszorpciós maximumot (2.2.25) mutat. Az A-vitamin B-módszer szerinti tartalmi meghatározásában a vizsgálati oldat kromatogramján legyen látható az összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő all-transz-retinol csúcsának megfelelő csúcs. B. A D 3 -vitamin tartalmi meghatározásában az a) vizsgálati oldat kromatogramján legyen látható egy, a b) összehasonlító oldat kromatogramján a kolekalciferolnak megfelelő csúcs. C. Az anyag feleljen meg a Zsírsavösszetétel vizsgálatában (lásd Vizsgálatok) előírt követelménynek. D. 0,1 g anyagot 0,5 ml R diklórmetánnal és 1 ml R antimon(iii)-klorid oldattal elegyítünk. Az elegy kb. 10 másodpercen belül sötétkékre színeződjék. VIZSGÁLATOK Szín. Az olaj színe nem lehet erősebb, mint a következő összehasonlító oldaté: 3,0 ml piros törzsoldathoz 25,0 ml sárga törzsoldatot elegyítünk és az elegyet R tömény sósav 10 g/l töménységű oldatával 50,0 ml-re hígítjuk (2.2.2, II. módszer). Relatív sűrűség (2.2.5): 0,917 0,930.

2 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur Törésmutató (2.2.6): 1,477 1,484. Savszám (2.5.1): legfeljebb 2,0. Anizidin-érték (2.5.36): legfeljebb 30,0. Jódszám (2.5.4, B módszer): R2 keményítő oldatot használunk. Peroxidszám (2.5.5, B módszer): legfeljebb 10,0. El nem szappanosítható rész (2.5.7): legfeljebb 1,5%. A vizsgálathoz 2,0 g anyagot 3 50 ml R peroxidmentes éterrel extrahálunk. Sztearin. Legalább 10 ml anyagot C-ra felmelegítünk, majd az anyagot jeges vízben vagy termosztált vízfürdőben, 0±0,5 C-on 3 órán át hűtjük; amennyiben az oldhatatlan anyagok eltávolítása érdekében szükséges, a melegítés után megszűrjük a mintát. A minta tiszta maradjon. Zsírsavösszetétel. Gázkromatográfia (2.2.28). A zsírsav triviális neve Nevezéktan Terület alsó határa (%) Terület felső határa (%) Telített zsírsavak: Mirisztinsav 14:0 2,0 6,0 Palmitinsav 16:0 7,0 14,0 Sztearinsav 18:0 1,0 4,0 Egyszeresen telítetlen zsírsavak: Palmitoleinsav 16:1 n-7 4,5 11,5 cisz-vakcénsav 18:1 n-7 2,0 7,0 Olajsav 18:1 n-9 12,0 21,0 Gadoleinsav 20:1 n-11 1,0 5,5 Ejkozénsav 20:1 n-9 5,0 17,0 Erukasav 22:1 n-9 0 1,5 Cetoleinsav (22:1 n-11) 22:1 n ,0 12,0 Többszörösen telítetlen zsírsavak: Linolsav 18:2 n-6 0,5 3,0 α-linolénsav 18:3 n-3 0 2,0 Sztearidonsav 18:4 n-3 0,5 4,5 Ejkozapentaénsav (EPS) 20:5 n-3 7,0 16,0 Dokozahexaénsav (DHS) 22:6 n-3 6,0 18,0 Vizsgálati oldat. A vizsgálandó anyag kb. 0,45 g-ját 10 ml-es mérőlombikba mérjük és literenként 50 mg R butil-hidroxitoluolt tartalmazó R hexánnal 10,0 ml-re oldjuk. Az oldat 2,0 ml-ét kvarc kémcsőbe pipettázzuk, és az oldószert R nitrogén enyhe áramoltatásával elpárologtatjuk. A maradékhoz R nátrium-hidroxid R metanollal készült, 20 g/l töménységű oldatának 1,5 ml-ét adjuk, a folyadék feletti légteret R nitrogénnel töltjük, majd a kémcsövet teflonborítású kupakkal szorosan lezárjuk. Tartalmát megkeverjük és vízfürdőben 7 percig melegítjük, majd lehűtjük. 2 ml R metanolos bór-triklorid oldat hozzáadása után újból R nitrogént rétegezünk föléje, majd szorosan lezárjuk, megkeverjük és vízfürdőben 30 percig melegítjük; ezután C-ra hűtjük, 1 ml R trimetilpentánt adunk hozzá, lezárjuk és legalább 30 másodpercig vortex-keverőn kevertetjük vagy erőteljesen rázzuk. Rögtön ezután 5 ml R telített nátrium-klorid oldatot adunk a folyadékhoz, R nitrogén légteret létesítünk, a kémcsövet lezárjuk és legalább 15 másodpercig erőteljesen rázzuk. A felső réteget feltisztulása után kis választótölcsérbe visszük át. A metanolos réteget 1 ml R trimetilpentánnal még egyszer kirázzuk,

3 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur és a trimetilpentános kivonatokat egyesítjük. Az egyesített kivonatokat 2 1 ml R vízzel mossuk, majd R vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. Mintánként 2 oldatot készítünk. Oszlop: anyaga: kvarcüveg, méretei: l = 30 m, = 0,25 mm, állófázis: R makrogol (filmvastagság 0,25 μm). Vivőgáz: R kromatográfiás célra szánt hidrogén vagy R kromatográfiás célra szánt hélium; az oxigén eltávolítására előtétként megfelelő mosópalackot kapcsolunk. Mintaáram-elosztási arány: 1:200. Hőmérséklet: Idő (perc) Hőmérséklet ( C) Oszlop Injektor 250 Detektálás 280 Detektálás: lángionizáció. Injektálás: 1 μl, kétszer. Rendszeralkalmasság: a vizsgálandó 15 zsírsav a jellemző kromatogramból ( ábra) kielégítően azonosítható legyen, R metil-palmitát, R metil-sztearát, R metil-arachinát és R metil-behenát azonos mennyiségét tartalmazó elegy injektálása után a zsírsav-metilészterek százalékos területe sorrendben 24,4, 24,8, 25,2 és 25,6 (± 0,5%) legyen, csúcsfelbontás: a metil-oleát és a metil-cisz-vakcenát között legalább 1,3; a metil-gadoleát és a metil-ejkozenát közti csúcsfelbontás mind az azonosítás, mind a területmérés céljára elegendő legyen. Az egyes zsírsav-metilészterek százalékos területét az alábbi képletből számítjuk: Ax 100 At A x = az x-edik zsírsav csúcsterülete, A t = a csúcsterületek összege (C22:6 n-3 ig bezárólag). A számítás csak abban az esetben érvényes, ha a csúcsok összterületét kizárólag az egyes zsírsav-metilésztereknek megfelelő csúcsok alapján számoljuk, az összterület 0,05%-át meghaladó zsírsav-metilészter-csúcsok száma legalább 24, a 24 legnagyobb metilésztercsúcs területösszege meghaladja az összterület 90%-át. (Ezek a szokásos elúciós sorrend esetén a következők: 14:0, 15:0, 16:0, 16:1 n-7, 16:4 n-1, 18:0, 18:1 n-9, 18:1 n-7, 18:2 n-6, 18:3 n-3, 18:4 n-3, 20:1 n-11, 20:1 n-9, 20:1 n-7, 20:2 n-6, 20:4 n-6, 20:3 n-3, 20:4 n-3, 20:5 n-3, 22:1 n-11, 22:1 n-9, 21:5 n-3, 22:5 n-3, 22:6 n-3.)

4 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur ábra. A csukamájolaj (A típus) kromatogramja a zsírsav-összetétel vizsgálatához TARTALMI MEGHATÁROZÁS A-vitamin. A tartalmi meghatározást a lehető leggyorsabban végezzük, elkerülve a bomlást előidéző fény és levegő behatását, oxidáló anyagok és oxidációs katalizátorok (pl. réz és vas) valamint savak behatását. Az A-módszert alkalmazzuk. Ha az A-módszer alkalmatlannak bizonyul, a B-módszert alkalmazzuk. A-MÓDSZER Ultraibolya abszorpciós spektrofotometria (2.2.25). Vizsgálati oldat. Gömblombikba mért 1,00 g anyaghoz R kálium-hidroxid frissen készített 50 %m/mos oldatának 3 ml-ét és R etanol 30 ml-ét adjuk. A folyadékot, visszafolyóhűtő alkalmazásával, R nitrogén áramoltatása közben, 30 percig forraljuk. Gyorsan lehűtjük és 30 ml R vizet adunk hozzá, majd 50 ml R éterrel kirázzuk. A kirázást háromszor megismételjük; a fázisok teljes szétválása után az alsó réteget elvetjük. Az egyesített felső fázisokat 4 50 ml R vízzel mossuk, majd 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, lassú R nitrogén áramban, szárazra párologtatjuk. A bepárologtatást, rotációs bepárlókészülékkel, 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, csökkentett nyomáson (vízlégszivattyú) is végezhetjük. A maradékot annyi R1 2-propanolban oldjuk, hogy az oldat várható A- vitamin koncentrációja NE/ml legyen. Megmérjük az oldat abszorbanciáját 300, 310, 325 és 334 nm-en, valamint a maximum hullámhosszán, alkalmas 1 cm-es küvettában, R1 2-propanollal, mint kompenzációs folyadékkal szemben. Az all-transz-retinolban kifejezett, NE/g-ban megadott A-vitamin-tartalmat, az alábbi képlet segítségével számítjuk ki: 1821 A 325 V 100m A 325 = a 325 nm-en mért abszorbancia, m = a vizsgálandó anyag tömege, g-ban, V = a ml-enként NE A-vitamint tartalmazó oldat össztérfogata,

5 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur = faktor az all-transz-retinol fajlagos abszorpciós koefficiensének Nemzetközi Egységre való átszámításához. A fenti képlet csak abban az esetben alkalmazható, ha A 325 értéke nem nagyobb az A 325,corr /0,970 tört értékénél, A 325,corr a 325 nm-nél mért korrigált abszorbancia,amely az alábbi egyenlettel számítható: A 325,corr = 6,815 A 325 2,555A 310 4,260A 334 A az alsó indexben jelzett hullámhosszra vonatkozó abszorbanciát jelenti. Ha A 325 értéke nagyobb az A 325,corr /0,970 tört értékénél, úgy az A-vitamin-tartalmat az alábbi képlettel számítjuk: 1821 A325, corr V 100 m A tartalmi meghatározás csak abban az esetben értékelhető, amennyiben az abszorpciós maximum 323 nm és 327 nm között jelenik meg, a 300 nm-nél mért és a 325 nm-nél mért abszorbanciák aránya legfeljebb 0,73. B-MÓDSZER Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. A mintából két párhuzamos mérést végzünk. Gömblombikba mért 2,00 g anyaghoz R aszkorbinsav frissen készített, 100 g/l töménységű oldatának 5 ml-ét, R kálium-hidroxid frissen készített, 800 g/l töménységű oldatának 10 ml-ét, valamint R vízmentes etanol 100 ml-ét adjuk. A folyadékot visszafolyóhűtő alkalmazásával, 15 percig vízfürdőn melegítjük, majd R nátrium-klorid 10 g/l-es oldatának 100 ml-ével elegyítjük és lehűtjük. Az oldatot 500 ml-es választótölcsérbe visszük át és a gömblombikot R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának kb. 75 ml-ével, majd R1 petroléter és R éter egyenlő térfogatarányú elegyének 150 ml-ével átöblítjük. 1 percig tartó rázást követően, a rétegek teljes szétválása után, az alsó fázist elvetjük. A felső fázist előbb R káliumhidroxid R vízmentes etanollal (10 %V/V-os) készült, 30 g/l töménységű oldatának 50 ml-ével, majd R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának 3 50 ml-ével mossuk. Az átmosott felső fázist gyors szűrőpapírra rétegezett, 5 g R vízmentes nátrium-szulfáton át rotációs bepárlókészülékhez csatlakoztatható 250 ml-es lombikba szűrjük. A tölcsért a kivonóelegy újabb 10 ml-ével mossuk, szűrjük; a szerves fázisokat egyesítjük, majd csökkentett nyomáson (víz-légszivattyú), 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten ledesztilláljuk. A teljes elpárologtatást követően a maradék fölé R nitrogént rétegezünk. Az oldószert 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, lassú R nitrogén árammal is elpárologtathatjuk. A maradékot R 2-propanolban oldjuk, az oldatot 25 ml-es mérőlombikba visszük át és R 2-propanollal jelig töltjük. Enyhe melegítés pl. ultrahangos vízfürdőben szükséges lehet. A fehér maradék nagy hányada koleszterin, amely a csukamájolaj el nem szappanosítható részének mintegy 50 %-át teszi ki. Összehasonlító oldat (a). CRS retinol-acetátból R1 2-propanollal olyan oldatot készítünk, amely mlenként kb.1000 NE all-transz-retinolt tartalmaz. Az a) összehasonlító oldat pontos koncentrációját ultraibolya abszorpciós spektrofotometriás módszerrel határozzuk meg (2.2.25). Az a) összehasonlító oldatot R1 2-propanollal olyan mértékben hígítjuk, hogy feltételezett koncentrációja NE/ ml legyen. 326 nm-en, 1 cm-es küvettában, R1 2-propanol kompenzációs folyadékkal szemben, megmérjük az oldat abszorbanciáját. Az a) összehasonlító oldat NE/ml-ben kifejezett A-vitamin-tartalmát a következő a CRS retinolacetát megadott tartalmát figyelembe vevő képlet felhasználásával számítjuk: 1900 V2 A V A 326 = a 326 nm-en mért abszorbancia, 1

6 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur V 1 = a felhasznált a) összehasonlító oldat térfogata, V 2 = a hígított oldat térfogata, 1900 = faktor a CRS retinol-acetát fajlagos abszorpciós koefficiensének Nemzetközi Egységekre való átszámításához. Összehasonlító oldat (b). A vizsgálati oldatra leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a vizsgálandó anyag helyett 2,00 ml a) összehasonlító oldatot használunk. A b) összehasonlító oldat pontos koncentrációját ultraibolya abszorpciós spektrofotometriás módszerrel határozzuk meg (2.2.25). A b) összehasonlító oldatot R1 2-propanollal olyan mértékben hígítjuk, hogy feltételezett all-transz-retinol koncentrációja NE/ml legyen. 325 nm-en, 1 cm-es küvettában, R1 2-propanol kompenzációs folyadékkal szemben megmérjük az oldat abszorbanciáját. A b) összehasonlító oldat NE/ml-ben kifejezett all-transz-retinol-tartalmát a következő képlet felhasználásával számítjuk: 1821 V3 A V4 A 325 = a 325 nm-en mért abszorbancia, V 3 = a hígított oldat térfogata, V 4 = a felhasznált b) összehasonlító oldat térfogata, 1821 = faktor az all-transz-retinol fajlagos abszorpciós koefficiensének Nemzetközi Egységre való átszámításához. Oszlop: méretei: l = 0,25 m, = 4,6 mm, állófázis: R kromatográfiás célra szánt oktadecilszililezett szilikagél (5-10 μm). Mozgófázis: R víz R metanol (3+97 V/V). Áramlási sebesség: 1 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 325 nm-en. Injektálás: 10 μl; a vizsgálati oldatot is és a b) összehasonlító oldatot is háromszor injektáljuk. Retenciós idő: all-transz-retinol 5±1 perc. Rendszeralkalmasság: a vizsgálati oldat kromatogramján jelenjék meg egy, a b) összehasonlító oldat kromatogramján az all-transz-retinol csúcsának megfelelő csúcs, a vizsgálati oldat esetében a két párhuzamosra kapott eredmény legfeljebb 5%-kal térhet el egymástól, direkt abszorpciós spektrofotometriás módszerrel mérve, a b) összehasonlító oldat all-transzretinol-tartalmának visszanyerése legalább 95%. Az A-vitamin-tartalmat a következő képlet felhasználásával számítjuk: C V 1 A1 A m A 1 = az all-transz-retinol csúcsterülete a vizsgálati oldat kromatogramján, A 2 = az all-transz-retinol csúcsterülete a b) összehasonlító oldat kromatogramján, 2

7 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur C = a CRS retinol-acetát koncentrációja az a) összehasonlító oldatban, elszappanosítás előtt meghatározva, NE/ml-ben (= 1000 NE/ml), V = a felhasznált a) összehasonlító oldat térfogata (2,00 ml), m = a vizsgálandó anyag tömege a vizsgálati oldatban (2,00 g). D 3 -vitamin. Folyadékkromatográfia (2.2.29). A tartalmi meghatározást a lehető leggyorsabban végezzük, elkerülve a bomlást előidéző fény és levegő behatását. Belső standard oldat. 0,50 mg CRS ergokalciferolt 100 ml R etanolban oldunk. Vizsgálati oldat (a). Gömblombikba mért 4,00 g anyaghoz R aszkorbinsav frissen készített, 100 g/l töménységű oldatának 5 ml-ét és R kálium-hidroxid frissen készített, 800 g/l töménységű oldatának 10 ml-ét, valamint R etanolt 100 ml-ét adjuk. A folyadékot, visszafolyóhűtő alkalmazásával, 30 percig vízfürdőn melegítjük, majd R nátrium-klorid 10 g/l-es oldatának 100 ml-ével elegyítjük és szobahőmérsékletre hűtjük. Az oldatot 500 ml-es választótölcsérbe visszük át és a gömblombikot R nátrium-klorid 10 g/l-es oldatának kb. 75 ml-ével, majd R1 petroléter és R éter egyenlő térfogatarányú elegyének 150 ml-ével átöblítjük. 1 percig tartó rázást követően, a rétegek teljes szétválása után, az alsó fázist elvetjük. A felső fázist előbb R kálium-hidroxid R etanollal (10 %V/Vos) készült, 30 g/l töménységű oldatának 50 ml-ével, majd R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának 3 50 ml-ével mossuk. A felső fázist gyors szűrőpapírra rétegezett, 5 g R vízmentes nátriumszulfáton át rotációs bepárlókészülékhez csatlakoztatható 250 ml-es lombikba szűrjük. A tölcsért a kivonóelegy újabb 10 ml-ével mossuk. A szerves fázisokat ezután szűrjük és egyesítjük, majd csökkentett nyomáson (víz-légszivattyú), 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten ledesztilláljuk. A teljes elpárologtatást követően a maradék fölé R nitrogént rétegezünk. Az oldószert 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, lassú R nitrogén árammal is elpárologtathatjuk. A maradékot a Tisztítás részben leírt mozgófázis 1,5 ml-ében oldjuk. Enyhe melegítés pl. ultrahangos vízfürdőben szükséges lehet. A fehér maradék nagy hányada koleszterin, amely a csukamájolaj el nem szappanosítható részének mintegy 50 %m/m-át teszi ki. Vizsgálati oldat (b). Két párhuzamos mérést végzünk. 4,00 g anyaghoz 2,0 ml belső standard oldatot adunk és a továbbiakban az a) vizsgálati oldatra leírtak szerint járunk el. Összehasonlító oldat (a). 0,50 mg CRS kolekalciferolt 100,0 ml R etanolban oldunk. Összehasonlító oldat (b). Egy gömblombikba 2,0 ml a) összehasonlító oldatot és 2,0 ml belső standard oldatot pipettázunk, és a továbbiakban az a) vizsgálati oldatra leírtak szerint járunk el. TISZTÍTÁS Oszlop: méretei: l = 0,25 m, = 4,6 mm, állófázis: R kromatográfiás célra szánt cianopropilszililezett szilikagél (filmvastagság 10 μm). Mozgófázis: R izopentil-alkohol R hexán (1,6+98,4 V/V). Áramlási sebesség: 1,1 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 265 nm-en. A b) összehasonlító oldat 350 μl-ét injektáljuk. Az eluátumot olyan időszakaszban, amely a kolekalciferol retenciós idejét megelőző 2 perctől a retenciós időt követő 2 percig tart, olyan csiszoltdugós kémcsőbe gyűjtjük, amely R butil-hidroxitoluol R hexánnal készült 1 g/l-es oldatának 1 ml-ét tartalmazza. A műveletet elvégezzük az a) és a b) vizsgálati oldattal is. A b) összehasonlító oldatból, valamint az a) és a b) vizsgálati oldatból nyert eluátumokat, külön-külön, 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, enyhe R nitrogén áramban, szárazra párologtatjuk. Az egyes maradékokat 1,5 1,5 ml R acetonitrilben oldjuk. MEGHATÁROZÁS Oszlop: méretei: l = 0,15 m, = 4,6 mm,

8 Iecoris aselli oleum A Ph.Hg.VIII. Ph. Eur állófázis: R kromatográfiás célra szánt oktadecilszililezett szilikagél (5 μm). Mozgófázis: R tömény foszforsav R acetonitril 96 %V/V-os oldata (0,2+99,8 V/V). Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 265 nm-en. Injektálás: a Tisztítás részben előállított három oldat mindegyikéből kétszer, 200 μl-t meg nem haladó mennyiséget injektálunk. Rendszeralkalmasság: csúcsfelbontás: a b) összehasonlító oldat kromatogramján az ergokalciferol és a kolekalciferol között legalább 1,4 legyen, a b) vizsgálati oldat esetében a két párhuzamosra kapott eredmény legfeljebb 5%-kal térhet el egymástól. A NE/g-ban kifejezett D 3 -vitamin-tartalmat a CRS kolekalciferol megadott tartalmát figyelembe véve a következő képlet felhasználásával számítjuk: A2 A3 m2 V2 40 A A 6 5 A A m V 2 A 1 m 1 = a minta tömege a b) vizsgálati oldatban, grammban, m 2 = a CRS kolekalciferolnak az a) összehasonlító oldat készítésére felhasznált össztömege, mikrogrammban (500 μg), A 1 = a kolekalciferol-csúcs területe (vagy magassága) az a) vizsgálati oldat kromatogramján, A 2 = a kolekalciferol-csúcs területe (vagy magassága) a b) vizsgálati oldat kromatogramján, A 3 = az ergokalciferol-csúcs területe (vagy magassága) a b) összehasonlító oldat kromatogramján, A 4 = az ergokalciferol-csúcs területe (vagy magassága) a b) vizsgálati oldat kromatogramján, A 5 = az olyan lehetséges csúcs területe (vagy magassága) az a) vizsgálati oldat kromatogramján, amelynek retenciós ideje az ergokalciferoléval megegyezik és a b) vizsgálati oldatban az ergokalciferollal együtt eluálódik, A 6 = a kolekalciferol-csúcs területe (vagy magassága) a b) összehasonlító oldat kromatogramján, V 1 = az a) összehasonlító oldat össztérfogata (100 ml), V 2 = a b) összehasonlító oldat készítéséhez felhasznált a) összehasonlító oldat térfogata (2,0 ml). ELTARTÁS Színültig töltött, légmentesen záró tartályban, fénytől védve. Ha az anyag antioxidáns adalékot nem tartalmaz, inert gáz alatt kell tárolni. A felnyitott tartály tartalmát a lehető leggyorsabban fel kell használni. Az azonnal fel nem használt anyagot inert gáz alkalmazásával védjük. FELIRAT A feliraton fel kell tüntetni: az A-vitamin-tartalmat, Nemzetközi Egység/grammban kifejezve, a D 3 -vitamin-tartalmat, Nemzetközi Egység/grammban kifejezve.