UV-VIS spektrofotometriás tartomány. Analitikai célokra: nm

Átírás

1

2 UV-VIS spektrofotometriás tartomány nalitikai célokra: nm

3 Elektron átmenetek és az atomok spektruma E h h c

4 Molekulák elektron átmenetei és UVlátható spektruma

5 Elektron átmenetek formaldehidben exciting

6 Kromofórok kromofór példa gerjesztés λ max, nm ε oldószer C=C Ethene p p* 7 5,000 Hexan C C -Hexyne p p * 80 0,000 Hexan C=O N=O C-X X=Br X=I Ethanal Nitromethane Methyl bromid Methyl jodid n p * p p * n p * p p * n σ* n σ* , , hexan hexan ethanol ethanol hexan hexan

7 konjugáció jelentősége

8 Spektrumeltolódások - auxokróm csoportok Benzaldehid: 50 nm Szubsztituens hatás: -NR : o-, m- 0 nm, p- 80 nm -OH : o-, m- 7 nm, p- 5 nm z eltolódás iránya elnevezés hiper Hosszabb hullámhossz Rövidebb hullámhossz batokróm hipszokrom hipszo bato Nagyobb abszorbancia hiperkrom hipo Kisebb abszorbancia hipokrom

9 Oldószerek cut off hullámhosszai lkoholok L L0 methanol ethanol n-propanol propanol n-butanol 45 5 s-butanol isobutanol lkánok L L0 pentan hexan 5 95 heptan cyclopentan 0 95 cyclohexan Vegyes L L0 acetonitril NN-dimethylformamid dimethylsulphoxid nitromethan > pyridin víz L = >0,05 vízzel szemben L 0 = > vízzel szemben Halogénezett szénhidrogének L L0 chloroform dichloromethan 45 30

10 Konvencionális Spektrofotométer

11 Diódasoros spektrofotométer felépítése

12 Fotodióda sorozat felépítése Readout cycle

13 Résszélesség hatása a spektrumra (exit slit) Slit (nm) 0,,0,0 5,0 0,0

14 Spektrum felvételi sebesség és pont sűrűség hatása a spektrumra Rés:nm; 40 nm/perc; 0, nm Rés:0, nm; 40 nm/perc;,0 nm Rés: nm; 00 nm/perc;,0 nm

15 Küvetta korrekció bs Wavelength [nm]

16 Beer-(Bouguer)-Lambert törvény logt log( I I 0 ) I0 log( I ) c l = (a fény 90%-a elnyelődik [log(00/0)] = (a fény 99%-a elnyelődik [log(00/)] =3 (a fény 99,9%-a elnyelődik) [log(00/0,)] =moláris abszorbancia (fiziko-kémiai paraméter, jellemző az anyagra) c= mól koncentráció (mol/dm 3 ) [ % ] cm cl % cm = specifikus abszorbancia c = vegyes százalékos koncentráció (g /00 ml )

17 Összefüggés a specifikus és a moláris abszorbancia között % cm 0 M Benzaldehid =00 (=80 nm, M w =06; küvetta l= cm) dja meg a vegyesszázalékos koncentrációját annak az oldatnak amelyiknek az abszorpciója 0,5 =*c*l 0,50=00*c* c=0,5/00 = 0, mol/l mol 06 g 0, mol = x g x=0,048 g (in 000 ml)!!!!! x =0,0048 g /00 ml Vagy: % cm= ( * 0)/M w (00*0)/06=03,8 és 0,5=03,8*X* x=0,5/03,77=0,0048 w

18 Gyógyszerkönyvi felhasználás: zonosítás : max helye és intenzitása, spektrális adatok hányadosa, fajlagos abszorpciós állandó ( % cm ) értéke Tisztaságvizsgálat : spektrális adatok hányadosai Tartalmi meghatározás: kalibrációs sor CRS standard (esetleg standard addicíó*) eredeti spektrum módosított spektrum Indirekt felhasználás: HPLC detektor *Főleg készítményekből hatóanyag visszanyerhetősége a mátrixból

19 zonosítás Paracetamolum: 0, g anyagot R metanollal 00,0 ml-re oldunk. z oldat,0 ml-éhez R tömény sósav 0,3 g/l-es oldatának 0,5 ml-ét elegyítjük, majd az oldatot R metanollal 00,0 ml-re hígítjuk. z oldatot erős fénytől védjük és abszorbanciáját (..5) a 49 nm-es abszorpciós maximumon haladéktalanul mérjük. z abszorpciós maximumon a fajlagos abszorpciós koefficiens Ibuprofenum : z anyag 50 mg-ját R nátrium-hidroxid 4 g/l töménységű oldatával 00,0 ml-re oldjuk. z oldat spektrumát 40 és 300 nm között vizsgálva (..5),,0 nm-es sávszélességet és 50 nm/perc-nél nem nagyobb regisztrálási sebességet alkalmazva, 64 és 7 nm-en abszorpciós maximum, 58 nm-en váll található. 64 nm-es maximumon és a 58 nm-es vállon mért abszorbanciák aránya,0-,30. 7 nm-es maximumon és a 58 nm-es vállon mért abszorbanciák aránya,00-,0. Tisztaságvizsgálat (spektrális adatok hányadosai) Vitaminum z anyag abszorpciós maximuma nm közé essen. Megmérjük 300, 350 és 370 nm-nél az abszorpciót és kiszámítjuk a 36 nm-es hullámhosszra vonatkoztatott hányadost. Ezek értéke nem lehet nagyobb mint 0,60; 0,54; 0,4.

20 TRTLMI MEGHTÁROZÁS midbs midbs Linear Fit of midbs Küvetta korrekció nélkül Tengelymetszet Meredekség 0,09 37,0 ±0,0039 ±,437 R =0, Residual of midbs mid Mért Becsült Y Maradékok Residual of midbs Independent Variable

21 0.9 Linear Fit of Küvetta korrekcióval Tengelymetszet Meredekség -8.45E-4 37,0 ±0,0039 ±,437 R =0, mid Residual of Residual of Independent Variable

22 STNDRD DDICÍÓ 3 4 : készítmény : készítmény +*ha 3: készítmény +*ha 4: készítmény +3*ha 0,8 0,6 0,4 +H bs 0 0,4785 0,00 0,75 3 0,005 0, ,00 0,939 M: 6,88 Tm: 0, =0,4795+6,88*x X=-0,00mg 0, 0-0,005-0,005-0,0005 0,0005 0,005 0,005-0,

23 ph hatása a spektrumra ph

24 Többkomponensű rendszerek i n i i... i n i i i i ) c ( l l) c (... l) c ( l c l c c l c c ) c ( c c ) c ( Feltétel: fajlagos abszorpciós állandók szignifikánsan különbözzenek! (+Monomer, azonos molekuláris állapot)

25 Többkomponensű rendszerek bs Wavelength [nm] készítmény spektruma minophenazon Koffein % cm(a min ofenazon ) % cm(koffein ) c c c c l l

26 .5.00E E-03.00E E E E E E-0 Mért Számolt S PHE resid -.0E E E-0

27 Többkomponensű rendszerek 73,4 nm 303,4 nm % cm % cm Szalicilsav resorcin 5 0 bs c c c c l l Wavelength [nm] Spiritus salicylatus cum resorcino resorcino: ; szalicilsav ; készítmény

28 Differencia spektroszkópia (kromofór megszűntetése illetve kialakítása) bs 0. bs Wavelength [nm] Wavelength [nm] Retabolil injekció spektruma Redukált nandrolon spektruma Differencia spektrum OH OH O HO

29 Derivativ spektroszkópia: Konstans háttér eliminációja