Mátrix effektus a 25(OH)D-vitamint és a parathormont mérő módszerekben valamint. a 2013-as QuliCont eredményekből levonható tanulságok

Hasonló dokumentumok
A MINTATÁROL ENDOKRIN PARAMÉTEREK EREDMÉNY. Vas Megyei Markusovszky Lajos Általános, Rehabilitáci. Központi Laboratórium, rium, Szombathely

Vitamin D 3 (25-OH) mérése Elecsys 2010 automatán

A troponin módszerek m analitikai bizonytalansága a diagnosztikus

Indikátorok alkalmazása a labordiagnosztikai eljárások minőségbiztosításában

Endogén szteroidprofil vizsgálata folyadékkromatográfiával és tandem tömegspektrométerrel. Karvaly Gellért

Posztanalitikai folyamatok az orvosi laboratóriumban, az eredményközlés felelőssége

Esetismertetés II. Dr. Bekő Gabriella Uzsoki Kórház Központi Laboratórium

Pajzsmirigy specifikus Calcitonin Tg Tg-Ab? Általános

Intraoperatív és sürgıs endokrin vizsgálatok. Kıszegi Tamás Pécsi Tudományegyetem Laboratóriumi Medicina Intézet

Engedélyszám: /2011-EAHUF Verziószám: Műszer és méréstechnika követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai

Nemzeti Akkreditáló Testület. SZŰKÍTETT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (7) a NAT /2012 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban

Lakos István WESSLING Hungary Kft. Zavaró hatások kezelése a fémanalitikában

SZÛKÍTETT RÉSZLETEZÕ OKIRAT (5)

a NAT /2008 számú akkreditálási ügyirathoz

SZÛKÍTETT RÉSZLETEZÕ OKIRAT (2)

A vér élettana 1./12 Somogyi Magdolna. A vér élettana

SZÛKÍTETT RÉSZLETEZÕ OKIRAT (1)

Laboratóriumi vizsgálatok összehasonlító elemzése

Endogén antitest interferenciák III. Tld Toldy Erzsébet

A laboratórium feladata. Interferáló tényezők

Klinikai kémia. Laboratóriumi diagnosztika. Szerkesztette: Szarka András. Írta: Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem Semmelweis Egyetem

Fagyasztás, felolvasztás, preparálás hatása a humán DNS fragmentáltságára. Nagy Melinda. MART VII. kongresszusa Sümeg,

Hogyan lesznek új gyógyszereink? Bevezetés a gyógyszerkutatásba

Quality Control a napi gyakorlatban

Bevezetés a Korreláció &

szerepe a gasztrointesztinális

Célérték típusok, elfogadási tartományok

D-vitamin. és további csontanyagcsere paraméterek. LIAISON 25OH Vitamin D TOTAL. LIAISON 1-84 PTH Assay LIAISON BAP Ostase LIAISON Osteocalcin

Felelősségünk. Diagnosztikai folyamatok Az alma minőségét (érettségi állapot, szüretidei ásványi összetétel) befolyásoló tényezők

Az immunanalitikában felmerülő in vivo és in vitro interakciók az endokrin és a sürgősségi labordiagnosztikában. Toldy Erzsébet

Bízom benne, új szolgáltatásunk segíteni fog abban, hogy Ön és munkatársai minél hatékonyabban vegyék igénybe az Intézet laborszolgáltatásait.

15-25C -20 fok fok. 2-8 C fok -20 fok. Nem tárolható. Nem tárolható 1 hónap Vérvétel után a csövet azonnal centrifugálni, szeparálni és -

LINEÁRIS REGRESSZIÓ (I. MODELL) ÉS KORRELÁCIÓ FELADATOK

ÉRZÉS NÉLKÜLI ÁLLAPOTOK Az ájulással összefüggésbe hozható pszichés sajátosságok Disszociáció és alexitímia vizsgálata syncopés betegek körében

Rubella-IgG-ELISA PKS medac. Magyar 136-PKS-VPU/010512

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

Eredmény. értelmezése Vizsgálatkérés. Eredmény. Fekete doboz: a labor. Mintavétel ANALITIKA

LIAISON Troponin I. a jelenlegi legérzékenyebb módszer. nagy érzékenység kiváló fajlagosság a megbízható, gyors eredményhez

4. SZÉRUMFEHÉRJÉK MENNYISÉGI MEGHATÁROZÁSA ÉS FRAKCIONÁLÁSA (BGY:15-18 old.)

Fórum Fórumon regisztrált résztvevők száma

A keringı tumor markerek klinikai alkalmazásának aktuális kérdései és irányelvei

Célérték típus, elfogadási tartomány

1. Adatok kiértékelése. 2. A feltételek megvizsgálása. 3. A hipotézis megfogalmazása

Immundiagnosztikai módszerek

Tisztelt Partnerünk!

Genomikai Medicina és Ritka Betegségek Intézete Semmelweis Egyetem

Nemekre szabott terápia: NOCDURNA

Nemzeti Akkreditáló Testület. BŐVÍTETT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAT /2014 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

Összesítés az osztályos teljesítményről térítési kategóriánként

QualcoDuna jártassági vizsgálatok - A évi program rövid ismertetése

Hormon-meghatározások: preanalitikai körülményekből adódó diagnosztikus tévedések Ph.D.értekezés. rövid értekezés + közlemények forma

Az új Thermo Scientific icap TQ ICP-MS bemutatása és alkalmazási lehetőségei. Nyerges László Unicam Magyarország Kft április 27.

Az ophthalmopathia autoimmun kórfolyamatára utaló tényezôk Bizonyított: A celluláris és humorális autoimmun folyamatok szerepe.

A megbízható pontosság

Kórház összes (24. HBCS) közvetlen költsége (100%)» 3 kritikus HB. » 2 kritikus. » 10 tovább. » Hátrányos he

Adszorbeálható szerves halogén vegyületek kimutatása környezeti mintákból

a NAT /2008 számú akkreditálási ügyirathoz

Eredmények (technikai) jóváhagyása Eredmények klinikai validálása Eredmények interpretálása Konzultáció További vizsgálatok Leletek küldése

BIOMETRIA_ANOVA_2 1 1

A Flowcytometriás. en. Sinkovichné Bak Erzsébet,

KISTERV2_ANOVA_

KEDVEZMÉNYES VIZSGÁLATI CSOMAGOK

Szennyvíziszap dezintegrálási és anaerob lebontási kísérlete. II Ökoenergetika és X. Biomassza Konferencia Lipták Miklós PhD hallgató

301. TUDOMÁNYOS KOLLOKVIUMON füzet

KEDVEZMÉNYES VIZSGÁLATI CSOMAGOK

Módszer az ASEA-ban található reaktív molekulák ellenőrzésére

BETEGTÁJÉKOZTATÓ RHEUMATOID ARTHRITISBEN SZENVEDŐ BETEGEK SZÁMÁRA I. RHEUMATOID ARTHRITIS. origamigroup.

Témák, amihez kérem az együtt gondolkodást

Új könnyűlánc diagnosztika. Dr. Németh Julianna Országos Gyógyintézeti Központ Immundiagnosztikai Osztály MLDT-MIT Továbbképzés 2006

A BELLA PROGRAM SZEGEDI ADAPTÁCIÓJA

Szakmai Protokollok rövid összefoglalás. Dr Böcskei Gyöngyi laborvezető főorvos

KEDVEZMÉNYES VIZSGÁLATI CSOMAGOK

In vivo interferencia: rjék, antitestek

A VÁGÁSI KOR, A VÁGÁSI SÚLY ÉS A ROSTÉLYOS KERESZTMETSZET ALAKULÁSA FEHÉR KÉK BELGA ÉS CHAROLAIS KERESZTEZETT HÍZÓBIKÁK ESETÉBEN

UV-sugárzást elnyelő vegyületek vizsgálata GC-MS módszerrel és kimutatásuk környezeti vízmintákban

A tisztítandó szennyvíz jellemző paraméterei

Hantavírus (Puumala) IgG/IgM-ELISA. 4. Szükséges anyagok és reagensek, amelyeket a teszt nem tartalmaz. Használati Utasítás /Instruction Sheet/

Célkitűzés/témák Fehérje-ligandum kölcsönhatások és a kötődés termodinamikai jellemzése

Készítette: NÁDOR JUDIT. Témavezető: Dr. HOMONNAY ZOLTÁN. ELTE TTK, Analitikai Kémia Tanszék 2010

DOWN-KÓR INTRAUTERIN SZŰRÉSI LEHETŐSÉGEI szeptemberi MLDT-tagozati ülésen elhangzottak

A vér folyékony sejtközötti állományú kötőszövet. Egy átlagos embernek 5-5,5 liter vére van, amely két nagyobb részre osztható, a vérplazmára

Engedélyszám: /2011-EAHUF Verziószám: Kémiai vizsgálatok követelménymodul szóbeli vizsgafeladatai

A gyógyszertörvény. Két fontos gyógyszerügyi törvényünk. Gyógyszertörvény egy kis történelem

IQ TM 200 vizeletüledék vizsgáló automata

Sav-bázis egyensúly. Dr. Miseta Attila

TÁJÉKOZTATÁS évi eredményességi elemzés

Mikroalbumin meghatározás jelentısége a diabéteszes nefropátia korai felismerésében

A év tapasztalatai és a évi jártassági vizsgálati program rövid ismertetése

CMV IgG Avidity. Cytomegalovírus elleni IgG antitestek. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 602

A PET szerepe a gyógyszerfejlesztésben. Berecz Roland DE KK Pszichiátriai Tanszék

szerzett tapasztalataink

Vércsoport szerológiai kompatibilitás Választott vörösvérsejt készítmények indikációja. Dr. Csépány Norbert Transzfúziós tanfolyam Debrecen

Toxikológiai Vizsgálatok a PTE Laboratóriumi Medicina Intézetében. Lajtai Anikó és Lakatos Ágnes PTE Laboratóriumi Medicina Intézet

Mesterséges és természetes ellenanyagokon alapuló analitikai módszerek antiepileptikumok meghatározására

Parathormon és D-vitamin mérési módszerek és azok diagnosztikai értéke

III. Népegészségügyi Konferencia, Megnyitó A év szűrővizsgálatainak eredményei. Dr. Barna István

Közös elektronpár létrehozása

Az állományon belüli és kívüli hőmérséklet különbség alakulása a nappali órákban a koronatér fölötti térben május és október közötti időszak során

Hipotézis vizsgálatok

Átírás:

Mátrix effektus a 25(OH)D-vitamint és a parathormont mérő módszerekben valamint a 2013-as QuliCont eredményekből levonható tanulságok Toldy Erzsébet, Kányási Mária, Walentin Szilvia QuliCont Fórum 2015. január 30. Budapest, Lurdy Konferencia-és Rendezvényközpont Könyves Kálmán Krt. 12-14.

Fehérjekötésen alapuló módszerek speciális hibalehetőségei I. Analittel összefüggő a standardként használt molekula nem azonos a páciensével- oka az analit in nate heterogenitása II. A biológiai minta mátrixával összefüggő Interferencia Keresztreakció Mátrix effektus

Interferencia: A mért eredményben torzítást okozó olyan szubsztancia jelenléte, amely zavaró interferenciát okoz. Jelenléte izolálható. Keveréses vizsgálat. Eltérő módszerek között is ellentmondásos leletet okozhat. Complementek, fibrinogén, EDTA, bilirubin, haemolisis,

Keresztreakció: a biológiai testnedvekben előforduló keresztreagáló metabolit, gyógyszer, vagy antitest (Rf, HAMA, HAHA, endogén antitestek) A potenciálisan keresztreagáló ágensek nincsenek jelen a standardokban és kontroll mintákban, de jelen lehetnek a beteg szérumában.

MÁTRIX EFFEKTUS: Főként a fehérjekötésen alapuló (immunoassay, protein binding assay) analitikai módszereknél tapasztalható az eredményekben olyan torzítás, amely az analit mátrix összetétel különbözőségből adódik. pl. szérum-plazma; aktív szénnel kezelt szérum-natív szérum, vagy vizelet-szérum, ascites-szérum, liquor-szérum között. A gyakorlatban a mátrix effektus jelenséget a kalibrátor görbéhez használt szérum-mátrix és a biológiai minta-mátrix között fennálló különbség okozza.

Ambient assay - R. Ekins Az eredmény függ f a biológiai minta-mátrixt trixtól Az analit és az antitest közötti kötést befolyásolja a reakciótérben lévő környezet: = analit (pl. hormon) ph-ja, ion erőssége, protein jelenléte, szintje. fehérjefrakciók mennyisége és aránya a hidrofób molekulák - döntő fontosságú a Ag-Ab Ab komplexek kialakulásához hoz Globulin Albumin

Lehetőségek a mátrix effektus csökkentésére a biológiai minta mennyiségének csökkentése, a reagens mennyiség javára, amelyben növeljük a protein és ionkoncentrációt valamint a puffer kapacitást. Ugyanakkor a biológiai mintamennyiség csökkentésével rontjuk a módszer szenzitivitását is. - Klinikai használatra a standardok készítésénél egészséges fehérje és ionkoncentrációkra beállított humán szérum matrixot használjuk. Ettől eltérő a súlyos betegek szérum mátrixa. - Kérdés, hogy a reakciótérben a reagensek milyen fokban képesek ezt az eltérést kompenzálni?

MUNKACSOPORTUNK MÁTRIX EFFEKTUS IRÁNYÚ VIZSGÁLATA: Több irodalmi adattal rendelkezünk már arra nézve, hogy a D vitamin ellátottság javításával egyes betegségek iránti fogékonyság, valamint a már fennálló betegségek relapszusának elkerülése is jobban biztosítható. Ezért, a klinikai gyakorlatban egyre gyakrabban felmerül az igény a 25OHD szintek pontos mérésére olyan biológiai mintákban is, ahol a normálistól eltérő fehérjefrakciókkal (pl. alacsony albumin, alacsony v. magas D vitamin bindig protein (DBP), stb ) is számolnunk kell. Ezért végeztünk in vitro és in vivo vizsgálatokat a hazánkban a klinikai kémiai gyakorlatban leggyakrabban alkalmazott két 25OHD vitamint mérő módszerrel.

Albuminfüggés vizsgálata: in vitro ANYAG ÉS MÓDSZER: Összesen 6 db alacsony albuminszintű szérum poolhoz 5 lépésben adtunk 20%-os human albumint tartalmazó oldatot annyi mennyiségben, hogy lépcsőzetesen növeltük a minta albuminszintjét addig, hogy annak értéke a normális albuminszintet elérje, illetve meghaladja. Mindegyik mintából (N=36) meghatároztuk mindkét módszerrel a 25OHD szinteket

25(OH)D vitamint mérő két teljesen automatizált módszer I. Antitest kötésen alapuló: IMMUNO-ASSAY CLIA (DiaSorin) DBP 25(OH)D 25(OH)D a szérumban Albumin II. Fehérje kötésen alapuló : ECL-PBA (Roche)

A két módszerrel mért 25OHD szintek az albuminmanipulációt követően Mérhető 25OHD szintek 25OHD szintek változása%

25OHD vitamin szintek az alacsony és a közel normális albuminszintű minták esetében 70 PBA KW-H(1;36) = 7,85; p = 0,005 36 34 IMMUNO-ASSAY KW-H(1;36) = 1,1725; p = 0,279 N.S. 25(OH)D nmol/l 60 50 40 30 ** 25(OH)D nmol/l 32 30 28 26 24 22 20 20 18 10 <30 >30 g/l Albumin szintek Median 25%-75% Min-Max 16 <30 >30 g/l Albumin szintek Media 25%-7 Min-M

KORRELÁCIÓK AZ ALBUMINSZINTEK ÉS A MÉRT 25OHD VITAMIN SZINTEK KÖZÖTT Protein Binding-Assay Immuno-Assay *** N.S. *** *** %-os változás a 25OHD szintekben

In vitro albuminmanipuláció eredményekből levonható következtetések

IN VIVO: klinikai tapasztalat elemzése A Belgyógyászati betegek diagnózis szerinti megoszlása Nephrosis+Malnutritio N=64. Chronical renal faileure Cirrhosis Kontrollként állítottunk 48 nemben és életkorban illesztett, aktív életvitelű személyt Elemzett paraméterek: albumin, DBP, PTHi, 25OHD vitamin szintek.

A kontroll és a beteg csoportban mért albumin és DBP szintek közötti különbség 50 48 46 Albumin g/l: KW-H(1;112) = 80,6; p = 0.0000 D-vitamin binding protein mg/l: KW-H(1;111) = 27,5 ; p = 0,000 360 340 Albumin g/l 44 42 40 38 36 34 32 *** D-vitamin binding protein mg/l 320 300 280 260 *** 30 28 240 26 Beteg Aktív-Kontroll Mean Mean±SE Mean±1,96*SE 220 Beteg Aktív-Kontroll Mean Mean±SE Mean±1,96*SE

25OHD szintek a két módszerrel mérve: a módszerek között szignifikáns különbséget csak az alacsony albuminszintű betegekben találtunk

Korrelációk az albumin és a 25OHD szintek között Beteg Kontroll Log25(OH)D nmol/l PBA 2,0 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 *** r = 0,40; p = 0,001 Log25(OH)D nmol/l PBA 2,2 2,1 2,0 1,9 1,8 1,7 1,6 1,5 1,4 1,3 N.S. Nincs korreláció 0,8 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 Albumin g/l 0,95 Conf.Int. 1,2 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 Albumin g/l 0,95 Conf.Int. Log25(OH)D nmol/l Immunoassay 2,0 1,9 1,8 1,7 1,6 1,5 1,4 1,3 1,2 1,1 1,0 *** r = 0,40; p = 0,001 Log25(OH)D nmol/l Immunoassay 2,1 2,0 1,9 1,8 1,7 1,6 1,5 1,4 1,3 N.S. Nincs korreláció 0,9 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 Albumin g/l 0,95 Conf.Int. 1,2 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 Albumin g/l 0,95 Conf.Int.

A DBP és albumin között csak a betegek esetében áll fenn szignifikáns pozitív korreláció Beteg Kontroll

A két 25OHD módszer albumin függése A betegminták csoportosításában PBA P=0,057 IA N.S. In vitro kísérletnek ellentmond az IA esetében Albumin

Korreláció a 25OHD és a DBP között Beteg Kontroll Log25(OH)D nmol/l PBA 2,0 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 * r = 0,30; p = 0,020; Log25(OH)D nmol/l PBA 2,2 2,0 1,8 1,6 1,4 N.S. Nincs korreláció Log25(OH)D nmol/l Immuno assay 0,8 50 100 150 200 250 300 350 400 450 2,0 1,9 1,8 1,7 *** DBP mg/l r = 0,44; p = 0,0004 0,95 Conf.Int. 1,6 1,5 1,4 1,3 1,2 1,1 1,0 0,9 50 100 150 200 250 300 350 400 450 DBP mg/l 0,95 Conf.Int. Log25(OH)D nmol/l Immunoassay 1,2 100 150 200 250 300 350 400 450 DBP mg/l Nincs Korreláció 2,1 2,0 1,9 1,8 1,7 1,6 1,5 1,4 1,3 N.S. 0,95 Conf.Int. 1,2 100 150 200 250 300 350 400 450 DBP mg/l 0,95 Conf.Int.

A két módszerrel mért 25OHD szintek az alacsony és a normál DBP szintű mintákban A 25OHD IA módszer DBP függése erősebb, mint a PBA esetében PBA IA

Klinikai adatokból levonható következtetések, összevetve az In vitro albuminmanipuláció eredményekkel

A 2013-as QuliCont eredményekből levonható tanulságok QuliCont: Gyógyszerek, hormonok- 196-os és Cametabolismus 301-es 4 ill. 6 körvizsgálat/év 25(OH)D vitamin és PTHi adatok.

25(OH)D-vitamin

Beküldött kontroll eredmények száma 2010-2013

A 25(OH)D vitamint mérő módszerek megoszlása

Melyik tartományt ellenőrizték a QuliCont kontroll szérumok 2013-ban Nem ellenőriztük: Elégtelen Hiány 1.) Toxikus tartományt ( >250 nmol/l) 2.)Súlyos hiányt (<20-25nmol/l) Súlyos hiány

Miként is mérünk összességében 25OHD Szinteket a módszertől függetlenül: K1 szérum!!

Miként is mérünk összességében? módszertől függetlenül: K2 szérum?!!

Eltérés a célértékektől százalékban

Laboratóriumonként leadott 25OHD eredmények 4 azonos kontroll szérum esetében Szaggatott vonal: Célértékek átlaga

Laboratóriumonként leadott eredmények eltérése a módszer specifikus célértéktől Cél

Célértéktől való eltérések az 5 módszer esetében

PTH intact H 2 N COOH

Parathormon (PTH) mérés Mit mérnek a PTH-intact módszerek? PTH molekulaformák a keringésben 3. Generáció BIO-intact (1-84) 2011-2. Generáció 4. generáció!!! 2014-től

A 40 laboratórium által alkalmazott 7 PTHi módszer megoszlása

Beküldött PTH kontroll eredmények száma 2010-2013

Melyik PTHi tartományt ellenőrizték a QuliCont kontroll szérumok 2013-ban Alacsonyabb N=6 Magasabb N=6

Miként is mérjük a PTHi szinteket az alacsony és a magas mérési tartományban: Alulmérünk picit? Referencia tartományok: átváltási faktor: 1 pg/ml=0,106 pmol/l ECLIA (Roche): 1,6-6,9 pmol/l CLMA (DiaSorin): 1,2-6,48 pmol/l Vesepotló terápiában: 5,3-31,8 pmol/l

PTHi kontrollok %-os eltérése a célértéktől a két mérési tartományban Cél

Kontroll eredmények eltérése a célértékektől 6 módszerrel mérve

Laboratóriumonként leadott PTH eredmények 3 kontroll szérum esetében-i.

Laboratóriumonként leadott PTH eredmények 3 kontroll szérum esetében-ii.

Laboratóriumonként leadott PTH eredmények eltérése a módszer specifikus célértéktől

Köszönöm a megtisztelő figyelmet! ÉS

Köszönet munkatársaimnak éstdk hallgatóimnak! Köszönet a klinikus kollégáknak

Regression Summary for Dependent Variable: t-25(oh)d-ia nmol/l (Csak betege-belosztaly- Modszer-osszemereshez) R=,45624200 R2=,20815676 Adjusted R2=,18219469 F(2,61)=8,0177 p<,00081 Std.Error of estimate: 15,908 b* Std.Err. - of b* b Std.Err. - of b t(61) p-value Intercept -5,46458 10,97342-0,497983 0,620286 Albumin g/l 0,123779 0,129317 0,37988 0,39687 0,957178 0,342256 D-vitamin binding protein mg/l 0,384466 0,129317 0,09596 0,03228 2,973058 0,004217

Regression Summary for Dependent Variable: t-25(oh)d-pba nmol/l (Csak betege-belosztaly-modszerosszemereshez) R=,29824732 R2=,08895146 Adjusted R2=,05908102 F(2,61)=2,9779 p<,05835 Std.Error of estimate: 15,741 b* Std.Err. - of b* b Std.Err. - of b t(61) p-value Intercept -1,63906 10,85820-0,150951 0,880512 Albumin g/l 0,157101 0,138709 0,44478 0,39271 1,132595 0,261817 D-vitamin binding protein mg/l 0,189871 0,138709 0,04372 0,03194 1,368839 0,176069