Vérbiztonság g növeln velése: HIV, HCV, HBV szőrés s NAT módszerrel Dr. Barabás Éva, Péterfi Zsuzsanna OVSzK Konfirmáló Laboratórium rium
Vérbiztonság és s szőrıvizsg vizsgálatok Az allogén vér r potenciálisan fertızı,, a legnagyobb fokú biztonságra kell törekedni. t Standardizált módszerekkel m elıáll llított vérkv rkészítmények. Egyre érzékenyebb szőrıtesztek alkalmazása. Globális lis standard: HBsAg, anti-hiv HIV, anti-hcv Regionális rendelkezések: anti-hbc HBc,, HIVp24 antigén, n, nukleinsav alapú technika (NAT) Magyarország: g: HBsAg, a-hiv, a-hcv, a-hbc Cél: a maradék k rizikó csökkent kkentése.
A szőrıvizsg vizsgálati rendszerek kritériumai riumai 1) Vérszőrésre sre kifejlesztett (nagy érzékenységő, kvalitatív) v) 2) Minısített kitek (CE) 3) Nagyfokú (lehetıleg leg teljes) automatizálts ltság
Kimutatási eljárások a vérszv rszőrésbensben Vírus antigén és s ellenanyag kimutatása: EIA (MEA, ChLIA) Nukleinsav detektálás s (NAT): -target amplifikáci ciós módszerek: PCR (polimer( polimeráz-láncreakció) TMA (transzkripci( transzkripció-mediálta-amplifikáci ció)
A PCR módszer elve: Ciklikus hımérséklet változás. Enzim: Taq DNS polimeráz Target: DNS Termék: DNS 1 templát 2 Hőtés 40-60 ºC-ra Melegítés 72 ºC-ra
A PCR technika fejlıdése Tradicionális: Végpont analízis. Gél- elektroforézis zis, biotin-avidin avidin-tormaperoxidáz rendszer a termék k detektálására. Kvalitatív v (igen- nem) válasz v esetén n jól j l alkalmazható. Valós s idejő (real-time): Jel: fluoreszcens molekula. Minden ciklusban törtt rténik mérés. m Az így kapott adatokból l meghatározhat rozható a minta mennyisége. Kvantitatív, v, kvalitatív. v.
A TMA módszer elve: Izotermális reakció, 41,5 ºC. Enzim: RT-áz,, RNS polimeráz Target: : RNS, DNS Termék: RNS 1 templát 100-1000 1000
A vérszv rszőrés s globális lis helyzete 80 millió E véradv radás évente NAT (vírus nukleinsav teszt) több,, mint 25 országban 40 millió E-et szőrnek évente NAT módszerrelm NAT NAT nélkül
NAT vérszőrı rendszerek Vizsgálat PROCLEIX (TMA) ULTRIO és DUPLEX Chiron Novartis 55% Taqscreen MPX Roche (valós s idejő PCR) <40% Házi kivitel (PCR) <10% Teszt rendszerek Procleix Tigris rendszer: teljesen automatizált, egy gépben Procleix Optiva rendszer: fél-automata, elemekbıl áll Cobas s 201: minden lépés l automatizált, de manuális transzf zfer szüks kséges, elemekbıl áll elemekbıl álló rendszerek
Chiron TIGRIS automaták k Európában 12 országban Dánia 1 hely / 1 Tigris Franciaorsz iaország 2 hely / 2 Tigris Görögország 2 hely / 4 Tigris Írország 1 hely / 1 Tigris Olaszország 16 hely / 23 Tigris Litvánia Lengyelország Portugália Szlovákia Szlovénia Spanyolorsz yolország Svájc FSE TSS Buffer Stocks Tigris Site 1 hely / 2 Tigris 3 hely / 4 Tigris 2 hely / 2 Tigris 1 hely / 2 Tigris 1 hely / 2 Tigris 7 hely / 12 Tigris 1 hely / 3 Tigris
Roche s201 rendszer Európában 8 országban 1 2 4 Magyarország: kipróbálás, OVSzK Konfirmáló Laboratórium 1 15 1 2 7 1
PROCLEIX OPTIVA rendszer Chiron PROCLEIX család termékei PROCLEIX TIGRIS rendszer PROCLEIX ULTRIO assay PROCLEIX NAT TRACKER szoftver PROCLEIX PROCLEIX rendszer (hardver és szoftver) PROCLEIX HIV-1/ HCV assay PROCLEIX WNV Assay
TM : Procleix Ultrio TM HCV, HIV-1, HBV detektálás s egy csıben A célszekvencia elfogása Elfogó próbák Mágneses mikropartikulákon kon fogja el a vírus v specifikus nukleinsav szekvenciákat kat HIV-1 HCV HBV Mágneses mikropartikula Transzkripció mediálta amplifikáci ció (TMA) Amplifikálja lja a nuklein savak target régióját Detektálás _ Akridinium-észterrel jelölt lt próba Hibridizáci ciót t védıv eljárás (HPA) Inaktiválja a nem-hibridiz hibridizált próbákat, így minimalizálja lja a háttereth Kettıs s kinetikus eljárás (DKA) Párhuzamosan detektálja az IC és s az RNS amplikon szignált IC HIV-1 HCV HBV IC HIV-1 HCV HBV IC Amplifikált RNS
A TIGRIS organizáci ciója és s a Automated System Design Goal Automatizált minta preparálás 1,000 minta 14 óra alatt Elsı eredmények 4 órán belül 100 eredmény: 5 óra múlva, majd 100/óra Belsı/ külsı futtatási kontroll Magas szintő folyamat ellenırzés munkafolyamat Koncepció:1 személy 2 gépet tud üzemeltetni TIGRIS: 1 személy 1,000 csı 14 óra X 2 TIGRIS = 2,000 csı tesztelése Félautomata: 1 személy 188 csı 7 óra = 376 csı vizsgálata 14 óra alatt
A vírus v markerek kimutathatósága a fertızés s után n (Chiron( Ultrio) Szerológiai szőrés ea+ag NAT (egyedi) HIV-1 20,3 nap 5,6 nap HCV 58,3 nap 4,9 nap HBV 53,3 nap 35,4 nap
1,2,3 Chiron NAT szőrıvizsg vizsgálatok Vírus Procleix Nem specif. Más / Nem spec. 6 Össz kiszőrt HIV-1 51 4 18 73 HCV 223 12 87 322 HBV 154-272 426 Szőrt véradások 50.4 MóM 1.8 MóM 19.3 MóM 71.5 Mó 1. Szőrések kb. 1999-2006. feb. 2. 18 ország adatai 3. Nem specifikált a nem definiáltprocleix assay-re vonatkozik. 4. Konfirmált, nem-konfirmált, mini-pool és egyedi minták adatainak keveréke. Néhány absztrakt nem specifikálta. 5. Az adatokat a 2005. and 2006. évi ISBT és a 2006. évi AABB kongresszusokon közölték. 6. Szeronegatív, NAT pozitív minta
A NAT szőrıvizsg vizsgálat bevezetése Költség/nyereség g arány Epidemiológiai helyzet: országos, véradv radó populáci ció Prevalencia: : a szeropozitív összes eset a vizsgált populáci cióban Incidencia: : az új j esetek gyakorisága ga a vizsgált idıtartam alatt a szeronegatív populáci cióban Magas I: ablak periódus átviteli kockázata nı, n NAT jelentısége nagy
A fertızöttek ttek száma Magyarországon gon HIV-1 HBV HCV Általános populáci ció P=0,01%, 1385 (2007.03.31.) I (?) =81 fı f (2006) Kf<2% P=0,6-1% HCV Véradó populáci ció 2006. 1/450 000 E 1/100 000 E HBsAg 1/2500 a-hbc+hbsag 1/1360 a-hbc 1/2000 E (AP~1/1 000 000 E)
Donor populáci ció: : alacsony szero- prevalencia és incidencia A A jelenleg alkalmazott szőrı módszerek illeszkednek a magyar epidemiológiai helyzethez. Cél: a vérbiztonsv rbiztonság g további növeln velése a technológiai fejlıdés s követk vetésével. vel.
KÖSZÖNÖM A MEGTISZTELİ FIGYELMET!