(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

Méret: px
Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "(11) Lajstromszám: E 008 371 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA"

Átírás

1 !HU T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E (22) A bejelentés napja: (96) Az európai bejelentés bejelentési száma: EP (97) Az európai bejelentés közzétételi adatai: EP A (97) Az európai szabadalom megadásának meghirdetési adatai: EP B (1) Int. Cl.: C07K 14/43 (06.01) A61K 38/17 (06.01) C12N 1/12 (06.01) A61P 31/00 (06.01) (87) A nemzetközi közzétételi adatok: WO PCT/EP 06/0661 () Elsõbbségi adatok: DK (72) Feltaláló: SPODSBERG, Nikolaj, DK-2880 Bagsvaerd (DK) (73) Jogosult: Novozymes Adenium Biotech A/S, 2880 Bagsvaerd (DK) (74) Képviselõ: dr. Svingor Ádám, DANUBIA Szabadalmi és Jogi Iroda Kft., Budapest (4) Antimikrobiális aktivitású polipeptidek és ezeket kódoló polinukleotidok HU T2 A leírás terjedelme oldal Az európai szabadalom ellen, megadásának az Európai Szabadalmi Közlönyben való meghirdetésétõl számított kilenc hónapon belül, felszólalást lehet benyújtani az Európai Szabadalmi Hivatalnál. (Európai Szabadalmi Egyezmény 99. cikk (1)) A fordítást a szabadalmas az 199. évi XXXIII. törvény 84/H. -a szerint nyújtotta be. A fordítás tartalmi helyességét a Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala nem vizsgálta.

2 A találmány tárgyköre A találmány tárgyát antimikrobiális aktivitású izolált polipeptidek és az izolált polipeptideket kódoló polinukleotidok képezik. Továbbá, a találmány tárgyát a polinukleotidokat tartalmazó nukleinsavkonstrukciók, vektorok és gazdasejtek mellett a polipeptidek elõállítására és alkalmazására szolgáló eljárások is képezik. A találmány háttere Ovchinnikova és munkatársai: egy tengeri soksertéjû faj (Arenicola marina, csaliféreg) másodlagos testüregének sejtjeibõl leírtak két, Gram-pozitív és Gramnegatív baktériumok, illetve gombák ellen aktivitást mutató, 21 aminosavból álló, antimikrobiális peptidet, az arenicin-1¹et és arenicin-2¹öt [Purification and primary structure of two isoforms of arenicin, a novel antimicrobial peptide from marine polychaeta Arenicola marina, FEBS Lett, 77, (04)]. Szerkezetüket vagy szekvenciájukat tekintve, az arenicinek egyetlen korábban azonosított antimikrobiális peptidhez sem hasonlítanak. A találmány szerinti megoldás egyik célját antimikrobiális aktivitású polipeptidek és a polipeptideket kódoló polinukleotidok elõállítása képezi. A találmány összefoglalása A találmány tárgyát antimikrobiális aktivitású és a SEQ ID NO:2 alatt megadott szekvencia aminosavaival legalább 70%-ban azonos aminosavszekvenciájú izolált polipeptidek képezik. A találmány tárgyát olyan izolált polinukleotidok is képezik, amelyek antimikrobiális aktivitású, és a SEQ ID NO:2 alatt megadott szekvencia aminosavaival legalább 70%-ban azonos aminosavszekvenciájú polipeptideket kódolnak. A találmány tárgyát a polinukleotidokat tartalmazó nukleinsavkonstrukciók, rekombináns expressziós vektorok és rekombináns gazdasejtek is képezik. A találmány tárgyát ilyen, antimikrobiális aktivitású polipeptidek elõállítására szolgáló eljárások is képezik, amely eljárások a következõ lépéseket tartalmazzák: (a) a polipeptidet kódoló polinukleotidot tartalmazó nukleinsavkonstrukciót tartalmazó rekombináns gazdasejtek tenyésztése a polipeptid elõállítására alkalmas körülmények között; és (b) a polipeptid kinyerése. A találmány tárgyát a találmány szerinti polipeptidek és polinukleotidok alkalmazására szolgáló eljárások is képezik. Meghatározások Antimikrobiális aktivitás: A leírás szerinti értelemben, az antimikrobiális aktivitás kifejezés mikrobiális sejtek elpusztítására vagy szaporodásuk gátlására képes aktivitást jelent. A leírás szerinti értelemben, az antimikrobiális kifejezés azt jelenti, hogy létezik olyan baktericid és/vagy bakteriosztatikus és/vagy fungicid és/vagy fungisztatikus hatás és/vagy virucid hatás, ahol a baktericid kifejezés baktériumsejtek elpusztítására való képességet jelent. A bakteriosztatikus kifejezés a baktériumok szaporodásának gátlását, azaz baktériumsejtek szaporodásának gátlását jelenti. A fungicid kifejezés a gombasejtek elpusztítására való képességet jelent. A fungisztatikus hatás a gombák szaporodásának gátlását, azaz gombasejtek szaporodásának gátlását jelenti. A virucid kifejezés vírust inaktiváló képességet jelent. A mikrobiális sejtek kifejezés bakteriális vagy gombasejteket (köztük élesztõket) jelent. A leírás szerinti értelemben, a mikrobiális sejtek szaporodásának gátlása kifejezés azt jelenti, hogy a sejtek a nem szaporodó stádiumban vannak, azaz, hogy nem képesek szaporodni. A találmány céljaira, az antimikrobiális aktivitás a Lehrer és munkatársai: által leírtak szerinti [Journal of Immunological Methods, 137, (1991)] eljárással határozható meg. Esetleg, az antimikrobiális aktivitás meghatározható az a CLSI-bõl származó (Clinical and Laboratory Standards Institute; korábban National Committee for Clinical and Laboratory Standards néven volt ismert) NCCLS útmutatások szerint. Antimikrobiális aktivitású polipeptidek képesek lehetnek az Escherichia coli (DSM 176) élõ sejtjeinek számát 24 órán át (elõnyösen 12 óra elteltével, elõnyösebben 8 óra elteltével, legelõnyösebben 1 óra elteltével és különösen perc elteltével), C¹on, az antimikrobiális aktivitású polipeptid 2%¹os (w/w) vizes oldatában [elõnyösen %¹os (w/w) vizes oldatában, elõnyösebben %¹os (w/w) vizes oldatában, még elõnyösebben 1%¹os (w/w) vizes oldatában, legelõnyösebben 0,%¹os (w/w) vizes oldatában és különösen 0,1%¹os (w/w) vizes oldatában] végzett inkubálással 1/0¹ra csökkenteni. Mikrobiális növekedési szubsztrátumhoz 00 ppm koncentrációban, elõnyösen 00 ppm koncentrációban, elõnyösebben ppm koncentrációban, még elõnyösebben 0 ppm koncentrációban, legelõnyösebben 0 ppm koncentrációban, és különösen 2 ppm koncentrációban adagolt antimikrobiális aktivitású polipeptidek 2 C¹on 24 óra alatt képesek lehetnek gátolni az Escherichia coli (DSM 176) túlszaporodását. Antimikrobiális aktivitású polipeptidek képesek lehetnek a Bacillus subtilis (ATCC 6633) élõ sejtjeinek számát 24 órán át (elõnyösen 12 óra elteltével, elõnyösebben 8 óra elteltével, legelõnyösebben 1 óra elteltével és különösen perc elteltével), C¹on, az antimikrobiális aktivitású polipeptid 2%¹os (w/w) vizes oldatában (elõnyösen %¹os (w/w) vizes oldatában, elõnyösebben %¹os (w/w) vizes oldatában, még elõnyösebben 1%¹os (w/w) vizes oldatában, legelõnyösebben 0,%¹os (w/w) vizes oldatában és különösen 0,1%¹os (w/w) vizes oldatában) végzett inkubálással 1/0¹ra csökkenteni. Mikrobiális növekedési szubsztrátumhoz 00 ppm koncentrációban, elõnyösen 00 ppm koncentrációban, elõnyösebben ppm koncentrációban, még elõnyösebben 0 ppm koncentrációban, legelõnyösebben 0 ppm koncentrációban, és különösen 2 ppm koncentrációban adagolt antimikrobiális aktivitású polipeptidek 2 C¹on 24 óra alatt képesek 2

3 lehetnek gátolni az Bacillus subtilis (ATCC 6633) túlszaporodását. A találmány szerinti polipeptidek antimikrobiális aktivitása legalább 26%¹a, elõnyösen legalább %¹a, elõnyösebben legalább 0%¹a, elõnyösebben legalább %¹a, elõnyösebben legalább 70%¹a, elõnyösebben legalább 80%¹a, még ennél is elõnyösebben legalább 90%¹a, legelõnyösebben legalább 9%¹a és még ennél is elõnyösebben legalább 0%¹a a SEQ ID NO:2 alatt megadott szekvencia aminosavait tartalmazó polipeptidének. Izolált polipeptid: A leírás szerinti értelemben, az izolált polipeptid kifejezés olyan polipeptidet jelent, amely SDS-PAGE-vel meghatározva legalább %¹os tisztaságú, elõnyösen legalább %¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább %¹os tisztaságú, ennél is elõnyösebben legalább 80%¹os tisztaságú, legelõnyösebben legalább 90%¹os tisztaságú, és még ennél is elõnyösebben legalább 9%¹os tisztaságú. Lényegében tiszta polipeptid: A leírás szerinti értelemben, a lényegében tiszta polipeptid kifejezés olyan polipeptidkészítményt jelent, amely a természetes körülmények között hozzá asszociált más polipeptidanyagból maximum tömeg%¹ot, elõnyösen maximum 8 tömeg%¹ot, elõnyösebben maximum 6 tömeg%¹ot, elõnyösebben maximum tömeg%¹ot, elõnyösebben maximum 4 tömeg%¹ot, maximum 3 tömeg%¹ot, még elõnyösebben maximum 2 tömeg%¹ot, legelõnyösebben maximum 1 tömeg%¹ot, és még ennél is elõnyösebben maximum 0, tömeg%¹ot tartalmaz. Ennélfogva, elõnyös, ha a lényegében tiszta polipeptid a készítményben lévõ összes polipeptid-anyagot tekintve legalább 92 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösen legalább 94 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább 9 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább 96 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább 96 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább 97 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább 98 tömeg%¹os tisztaságú, még elõnyösebben legalább 99 tömeg%¹os tisztaságú, legelõnyösebben legalább 99, tömeg%¹os tisztaságú és még ennél is elõnyösebben legalább 0 tömeg%¹os tisztaságú. A találmány szerinti polipeptidek elõnyösen lényegében tiszta formában vannak. Konkrétan, elõnyös, ha a polipeptidek lényegében tiszta formában vannak, azaz hogy a polipeptidkészítmény lényegében mentes a polipeptiddel természetes körülmények között asszociálódott más polipeptidanyagtól. Ez, például, a polipeptid jól ismert rekombináns eljárásokkal vagy klasszikus tisztítási eljárásokkal való elõállításával teljesíthetõ. A leírás szerinti értelemben, a lényegében tiszta polipeptid kifejezés az izolált polipeptid és az izolált formában lévõ polipeptid kifejezésekkel azonos jelentésû. Azonosság: Két aminosavszekvencia közötti vagy két nukleotidszekvencia közötti rokonságot az azonosság paraméter írja le. A találmány céljaira, a két aminosavszekvencia közötti azonosság mértékének meghatározása a FASTA programcsomag2.0x verziójának részét képezõ FASTA program alkalmazásával történik [lásd Pearson és Lipman, Improved Tools for Biological Sequence Analysis, PNAS 8, (1988); és Pearson, Rapid and Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTA, Methods in Enzymology 183, (1990)]. Az alkalmazott mátrix a BLOSUM0 volt (gap penalty: 12, gap extension penalty: 2). A két nukleotidszekvencia közötti azonosság mértékének meghatározása ugyanezzel az algoritmussal és szoftvercsomaggal történik, a fentiekben leírtak szerint. Az alkalmazott mátrix az identity matrix mátrix volt (gap penalty: 16, gap extension penalty: 4). Esetleg, két aminosavszekvencia egymáshoz rendezettségét az EMBOSS csomag ( ver Needle programjának alkalmazásával is meghatározható. A Needle program a Needleman és Wunsch publikációjában [J. Mol. Biol. 48, (1970)] leírt globális összerendezési algoritmust alkalmazza. Az alkalmazott szubsztitúciós mátrix a BLO- SUM62 volt (gap penalty:, gap extension penalty: 0,). A találmány szerinti aminosavszekvencia (például, a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavai) és valamilyen más aminosavszekvencia közötti azonosság mértéke a két összerendezett szekvenciában a pontos egyezések számának a találmány szerinti szekvencia hosszával (az aminosavak száma) való elosztásával kerül kiszámításra; vagy, esetleg, a Needle a leghosszabb azonosságként jelzett kimenetét alkalmazzuk a százalékos azonosság kiszámítására a következõk szerint: (azonos aminosavak 0)/(az összerendezésben a rések összerendezési számának hossza). Az eredményt százalékos azonosságként fejezzük ki. Polipeptidfragmentum: A leírás szerinti értelemben, a polipeptidfragmentum kifejezés olyan, a SEQ ID NO:2 szerinti vagy azzal homológ szekvenciájú polipeptidet jelent, amelynek amino- és/vagy karboxiterminálisából egy vagy több aminosav ki lett törölve, és amely fragmentumnak antimikrobiális aktivitása van. A találmány egyik megvalósítási módjában, a fragmentum legalább 1, elõnyösen legalább 16, elõnyösebben legalább 17, még elõnyösebben legalább 18, legelõnyösebben legalább 19, és különösen legalább, egymást kõvetõ aminosavat tartalmaz a SEQ ID NO:2 szerinti szekvenciából. Alszekvencia: A leírás szerinti értelemben, az alszekvencia kifejezés olyan, a SEQ ID NO:1 szerinti vagy azzal homológ szekvenciájú nukleotidszekvenciát jelent, amelynek ¹ és/vagy 3 ¹végébõl egy vagy több nukleotid ki lett törölve, és amely alszekvencia antimikrobiális aktivitású polipeptidfragmentumot kódol. Allélváltozat: A leírás szerinti értelemben, az allélváltozat kifejezés ugyanazon kromoszomális lokuszt elfoglaló gén egy vagy több alternatív formájának egyikét jelenti.. Allélváltozatok természetes körülmények között mutációval jönnek létre, és populáción belüli polimorfizmust eredményezhetnek. Génmutációk lehetnek csendes mutációk (nincs változása kódolt polipeptidben) vagy kódolhatnak megváltozott aminosavszek- 3

4 venciájú polipeptideket. Egy adott polipeptid allélváltozata egy adott gén allélváltozata által kódolt polipeptidet jelent. Lényegében tiszta polinukleotid: A leírás szerinti értelemben, A lényegében tiszta polinukleotid kifejezés más külsõ eredetû vagy nem kívánt nukleotidoktól mentes és géntechnológiás fehérjetermelési rendszerekhez való alkalmazásra megfelelõ formában lévõ polinukleotidkészítményt jelent. Eszerint, a lényegében tiszta polinukleotid a természetes körülmények között hozzá asszociált más polinukleotidanyagból maximum tömeg%¹ot, elõnyösen maximum 8 tömeg%¹ot, elõnyösebben maximum 6 tömeg%¹ot, elõnyösebben maximum tömeg%¹ot, elõnyösebben maximum 4 tömeg%¹ot, maximum 3 tömeg%¹ot, még elõnyösebben maximum 2 tömeg%¹ot, legelõnyösebben maximum 1 tömeg%¹ot, és még enné] is elõnyösebben maximum 0, tömeg%¹ot tartalmaz. Azonban, a lényegében tiszta polinukleotid tartalmazhat természetes körülmények között elõforduló és 3 nem transzlálódó régiókat, például promotereket és terminátorokat. Elõnyös, ha a lényegében tiszta polinukleotid legalább 90 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösen legalább 92 tömeg%¹os tisztaságú, elõnyösebben legalább 94 tömeg%¹os tisztaságú, még elõnyösebben legalább 9 tömeg%¹os tisztaságú, még elõnyösebben legalább 96 tömeg%¹os tisztaságú, még ennél is elõnyösebben legalább 97 tömeg%¹os tisztaságú, még elõnyösebben legalább 98 tömeg%¹os tisztaságú, legelõnyösebben legalább 99 tömeg%¹os tisztaságú, és még ennél is elõnyösebben legalább 99, tömeg%¹os tisztaságú. A találmány szerinti polinukleotidok elõnyösen lényegében tiszta formában vannak. Konkrétan, elõnyös, ha a találmány szerinti polinukleotidok lényegében tiszta formában vannak, azaz hogy a polinukleotidkészítmény lényegében mentes a polinukleotiddal természetes körülmények között asszociálódott más polinukleotidanyagtól. A leírás szerinti értelemben, a lényegében tiszta polinukleotid kifejezés az izolált polinukleotid és az izolált formában lévõ polinukleotid kifejezésekkel azonos jelentésû. A polinukleotidok lehetnek genomi¹, cdns¹, RNS¹, félszintetikus, szintetikus eredetûek vagy ezek bármilyen kombinációi. cdns: A leírás szerinti értelemben, a cdns kifejezés eukarióta sejtbõl nyert érett, illesztett mrns-molekula fordított transzkripciójával elõállítható DNS-molekulát jelent. A cdns-bõl hiányoznak a megfelelõ genomi DNS-ben rendszerint jelen levõ intronszekvenciák. Az induló, primer RNS-transzkriptum egy prekurzor mrns, amely érett, illesztett mrns-ként való megjelenése elõtt számos lépésben kerül feldolgozásra. E lépések közé tartozik az intronok eltávolítása egy illesztésnek nevezett folyamat során. Ennélfogva, a mrnsbõl származó cdns-ben semmilyen intronszekvencia sincs. Nukleinsavkonstrukció: A leírás szerinti értelemben, a nukleinsavkonstrukció kifejezés egyes vagy kettõs szálú nukleinsavmolekulát jelent, amely természetes körülmények között elõforduló génbõl lett izolálva, vagy amely úgy lett módosítva, hogy a természetben egyébként nem elõforduló módon tartalmazzon nukleinsav-szegmentumokat. A nukleinsavkonstrukció kifejezés akkor egyenértékû az expressziós kazetta kifejezéssel, ha a nukleinsavkonstrukció a találmány szerinti kódolószekvencia expresszálásához szükséges szabályozószekvenciákat tartalmaz. Szabályozószekvencia: A leírás szerinti értelemben, a szabályozószekvenciák kifejezés magában foglal minden olyan összetevõt, amely szükséges vagy elõnyös a találmány szerinti polipeptidet kódoló polinukleotid expresszálásához. A polipeptidet kódoló nukleotidszekenciához képest az egyes szabályozószekvenciák lehetnek natívak vagy idegenek. Ilyen szabályozószekvenciák közé tartoznak minden korlátozás nélkül a következõk: leader, poliadenilációs szekvencia, propeptidszekvencia, promoter, szignálpeptidszekvencia, és transzkripciós terminátor. A szabályozószekvenciák közé minimum a promoter, transzkripciós és transzlációs stopszignálok tartoznak. A szabályozószekvenciákat el lehet látni olyan linkerekkel, amelyek a szabályozószekvenciáknak a polipeptidet kódoló nukleotidszekvencia kódolórégiójával való ligációt elõsegítõ specifikus restrikciós helyeket tartalmaznak. Mûködõképesen kapcsolt: A leírás szerinti értelemben, a mûködõképesen kapcsolt kifejezés olyan konfigurációt jelent, amelyben szabályozószekvencia van elhelyezve a polinukleotidszekvencia kódolószekvenciájához képest megfelelõ pozícióban úgy, hogy a szabályozószekvencia irányítsa a polipeptid kódolószekvenciájának expresszióját. Kódolószekvencia: A leírás szerinti értelemben, a kódolószekvencia kifejezés fehérjetermékének aminosavszekvenciáját közvetlenül leíró nukleotidszekvenciát jelent. A kódolószekvencia határait általában egy nyitott leolvasási keret határozza meg, amely rendszerint ATG startkodonnal vagy alternatív startkodonokkal, például GTG és TTG, kezdõdik. A kódolószekvencia lehet DNS, cdns, vagy rekombináns nukleotidszekvencia. Expresszió: Az expresszió kifejezés magában foglal minden olyan lépést, amire a polipeptid termelése során sor kerül, így minden korlátozás nélkül a transzkripció, transzkripció utáni módosítások, transzláció, transzláció utáni módosítások, és szekréció. Expressziós vektor: A leírás szerinti értelemben, az expressziós vektor kifejezés lineáris vagy cirkuláris DNS-molekulát jelent, amely tartalmazza a találmány szerinti polipeptidet kódoló polinukleotidot, és amely mûködõképesen van kapcsolva az expresszióját biztosító további nukleotidokhoz. Gazdasejt: A leírás szerinti értelemben, a gazdasejt kifejezés magában foglal bármilyen olyan sejttípust, amely fogékony a találmány szerinti polinukleotidot tartalmazó nukleinsavkonstrukcióval történõ transzformációra, transzfekcióra, transzdukcióra és hasonlókra. Módosítás: A leírás szerinti értelemben, a módosítás kifejezés a SEQ ID NO:2 számú szekvencia aminosavat tartalmazó polipeptid bármilyen kémiai mó- 4

5 dosítását vagy a polipeptidet kódoló DNS genetikai manipulálását jelenti. A módosítás(ok) lehet(nek) aminosavszubsztitúció(k), ¹deléció(k) és/vagy ¹inzerció(k), illetve aminosav-oldallánc(ok) helyettesítése; vagy az aminosavszekvenciában hasonló jellemzõjû nem természetes aminosavak alkalmazása. Elõnyösen, a módosítás(ok) lehet(nek) amidációk, például a C¹terminális amidálása. Mesterséges változat: A leírás szerinti értelemben, a mesterséges változat kifejezés olyan, antimikrobiális aktivitású polipeptidet jelent, amelyet módosított, SEQ ID NO:1 szerinti nukleotidszekvenciát expresszáló szervezet állít elõ. A módosított nukleotidszekvencia a SEQ ID NO:1 szerinti nukleotidszekvencia emberi beavatkozással történt módosításával lett elõállítva. A találmány részletes leírása Antimikrobiális aktivitású polipeptidek A találmány elsõ szempontja szerint, a találmány tárgyát izolált polipeptidek képezik, amelyek aminosavszekvenciája legalább 70%-ban, elõnyösen legalább 7%-ban, elõnyösebben legalább 80%-ban, még elõnyösebben legalább 8%-ban, még ennél is elõnyösebben legalább 90%-ban, legelõnyösebben legalább 9%-ban, és legeslegelõnyösebben legalább 97%-ban azonosak az antimikrobiális aktivitású SEQ ID NO:2 szekvencia aminosavaival (a továbbiakban homológ polipeptidek ). A találmány egy elõnyös szempontja szerint, a homológ polipeptidek aminosavszekvenciája tíz aminosav, elõnyösen öt aminosav, elõnyösebben négy aminosav, még elõnyösebben három aminosav, legelõnyösebben két aminosav, és legeslegelõnyösebben egy aminosav tekintetében eltér a SEQ ID NO:2 szekvencia aminosavaitól. A találmány szerinti polipeptid elõnyösen tartalmazza a SEQ ID NO:2 szerinti aminosavszekvenciát. A találmány egy másik elõnyös szempontja szerint, a polipeptid a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavait tartalmazza. A találmány egy másik elõnyös szempontja szerint, a polipeptid a SEQ ID NO:2 szerinti aminosavszekvenciából áll. A találmány egy másik elõnyös szempontja szerint, a polipeptid a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia 21. aminosavaiból áll. Elõnyös, ha az aminosavváltozások jelentéktelen természetûek, vagyis a fehérje feltekeredését és/vagy aktivitását jelentõs mértékben nem befolyásoló, konzervatív aminosavszubsztitúciók vagy ¹inzerciók; kisméretû amino- vagy karboxiterminális kiterjesztések, például aminoterminális metionin; maximum 2 aminosavból álló linkerpeptid; az össztöltés vagy más funkció megváltoztatásával a tisztítást elõsegítõ kisméretû kiterjesztések, például polihisztidintoldalék, antigénepitóp vagy kötõdomén. Konzervatív szubsztitúciók például a következõk: a bázikus aminosavak csoportjában (arginin, lizin vagy hisztidin), savas aminosavak közül (glutaminsav és aszpartinsav), poláros aminosavaknál (glutamin és aszparagin), a hidrofób aminosavak esetében (leucin, izoleucin és valin), aromás aminosavaknál (fenil-alanin, triptofán és tirozin), és kisméretû aminosavak esetében (glicin, alanin, szerin, treonin, és metionin). A specifikus aktivitást általában meg nem változtató aminosavszubsztitúciók az irodalomban ismertek és le vannak írva például Neurath és Hill közleményében [The Proteins, kiad.: Academic Press, New York (1979)]. A legáltalánosabban elõforduló változások a következõk: Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, AlaA/al, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/He, Leu/Val, Ala/Glu, és Asp/Gly. A standard aminosav mellett, nem standrad aminosavakkal (például, 4¹hidroxi-prolin, 6¹N-metil-lizin, 2¹amino-vajsav, izovalin, és alfa-metil-szerin) is lehet a vad típusú polipeptid aminosavait szubsztituálni. Korlátozott számban nem konzervatív aminosavak, a genetikai kód által nem kódolt aminosavak, és nem természetes aminosavak is alkalmazhatók aminosavak szubsztituálására. A nem természetes aminosavak a fehérjeszintézis után lettek módosítva és/vagy oldalláncuk(aik)ban a standard aminosavaktól eltérõ kémiai szerkezet van. Nem természetes aminosavak kémiai úton szintetizálhatók, és elõnyösen, kereskedelmi forgalomban beszerezhetõk. Ilyenek közé tartozik a pipekolsav, tiazolidin-karboxilsav, dehidroprolin, 3¹ és 4¹metil-prolin, és 3,3-dimetil-prolin. Esetleg, az aminosavváltoztatások olyan természetûek, hogy megváltoztatják a polipeptidek fizikokémiai tulajdonságait, például, aminosavváltoztatások javíthatják a polipeptid hõstabilitását, megváltoztathatják a szubsztrátumspecificitását, megváltoztathatják a ph optimumot, és így tovább. A kiindulási polipeptidben lévõ esszenciális aminosavak a technikában ismert eljárásokkal például irányított mutaganezis vagy pásztázó alaninmutagenezis [Cunningham és Wells, Science 244, 81 8 (1989)] azonosíthatók. Az utóbbi eljárásban, a molekulában lévõ minden aminosavat mutációval egyenként alaninra cserélnek, és a kapott mutáns molekulákat biológiai aktivitásra (azaz, antimikrobiális aktivitásra) tesztelik azon aminosavak azonosítása végett, amelyek a molekula aktivitása szempontjából kritikus fontosságúak [Lásd még: Hilton és munkatársai, J. Biol. Chem. 271, (1996)]. A biológiai kölcsönhatás a szerkezet például, mágneses magrezonanciával, krisztallográfiával, elektronszórással vagy fotoaffinitás jelöléssel végzett fizikai analízisével is, az érintkezési helyen lévõ aminosavak mutációjával együtt [Lásd például: de Vos és munkatársai, Science 2, (1992); Smith és munkatársai, J. Mol. Biol. 224: (1992); Wlodaver és munkatársai, FEBS Lett. 9, 9 64 (1992)]. Az esszenciális aminosavak azonosságai a találmány szerinti polipeptiddel rokon polipeptidekkel való azonossági analízissel is bizonyíthatók. Egyszeres vagy többszörös aminosavszubsztitúciók végezhetõk és tesztelhetõk ismert mutagenezises, rekombinációs és/vagy doménkeveréses eljárásokkal és az azt követõ szûrési eljárással [lásd például Reidhaar-Olson és Sauer, Science 241, 3 7 (1988); Bowie and Sauer, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, (1989); WO 9/17413 számú vagy

6 WO 9/2262 számú nemzetközi szabadalmi iratok]. Más alkalmazható eljárások közé tartozik a hibára hajlamosított ( error-prone ) PCR, fágkimutatás [például: Lowman és munkatársai, Biochem., (1991); US számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat; WO 92/064 számú nemzetközi szabadalmi irat], és régióra irányított mutagenezis [Derbyshire és munkatársai, Gene 46, 14 (1986); Ner és munkatársai, DNA 7, 127 (1988)]. Mutagenezises/doménkeverési eljárások kombinálhatók nagy teljesítményû, automatizált szûrési eljárásokkal a gazdasejtek által expresszált, klónozott, mutagenezissel megváltoztatott polipeptidek. Aktív polipeptideket kódoló, mutagenizált DNS-molekulák a gazdasejtekbõl kinyerhetõk és a technikában ismert standard eljárások alkalmazásával gyorsan szekvenálhatók. Ezek az eljárások a kérdéses polipeptidben lévõ egyedi aminosavak fontosságának gyors meghatározását teszik lehetõvé, és ismeretlen szerkezetû polipeptidekre alkalmazhatók. A SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavait érintõ aminosavszubsztitúciók, ¹deléciók és/vagy ¹inzerciók összes száma, elõnyösen 9, elõnyösebben 8, elõnyösebben 7, elõnyösebben maximum 6, elõnyösebben maximum, elõnyösebben 4, még elõnyösebben 3, legelõnyösebben 2, és legeslegelõnyösebben 1. A találmány egyik megvalósítási módjában, a találmány szerinti polipeptidek legalább 4 cisztein aminosavat, elõnyösen a polipeptidek pontosan 4 cisztein aminosavat tartalmaznak. A találmány egy másik megvalósítási módjában a polipeptidek ciklikus polipeptidek. N-terminális kiterjesztés A találmány szerinti polipeptidek N¹terminális lánchosszabbítása alkalmasan állhat1 0 aminosavból, elõnyösen 2 aminosavból, különösen 3 1 aminosavból. A találmány egyik megvalósítási módjában, az N¹terminális peptidkiterjesztése nem tartalmaz arginint (Arg, R). A találmány egyik megvalósítási módjában, az N¹terminális kiterjesztés az alábbiakban részletesebben tárgyalt kex2 vagy kex2-szerû hasítási helyet tartalmaz. A találmány egyik elõnyös megvalósítási módjában, az N¹terminális kiterjesztés peptid, amely legalább két Glu (E) és/vagy Asp (D) aminosavat tartalmaz, például az N¹terminális kiterjesztés tartalmazza a következõ szekvenciák egyikét: EAE, EE, DE és DD. Kex2 helyek A kex2 helyek [lásd Methods in Enzymology, 18. köt., szer.: Goeddel, kiad.: Academic Press Inc., San Diego, CA, Gene Expression Technology (1990)] és kex2-szerû helyek a propeptidet kódoló régió és bizonyos fehérjék érett régióiban talált kétbázisos felismerési helyek (azaz hasítóhelyek). Kex2-hely vagy kex2-szerû hely beillesztésérõl bizonyos esetekben kimutatták, hogy javítja a propeptid hasítóhelyén folyó endopeptidáz általi korrekt processzálást, amely fokozott fehérjeszekréciós szinteket eredményez A találmánnyal összefüggésben, kex2 vagy kex2- szerû hely beillesztése azt a lehetõséget eredményezi, hogy az N¹terminális kiterjesztés egy bizonyos helyén hasítóhely legyen, mely a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaihoz képest meghosszabbodott antimikrobiális polipeptidet eredményez. Fuzionált polipeptidek A találmány szerinti polipeptidek közé tartoznak fuzionált polipeptidek vagy hasítható fuzionált polipeptidek, amelyekben a találmány szerinti polipeptid vagy annak fragmentuma N¹terminálisához vagy C¹terminálisához más polipeptid van fuzionálva. Fuzionált polipeptid elõállítása egy másik polipeptidet kódoló nukleotidszekvenciának (vagy annak részének) a találmány szerinti nukleotidszekvenciához való fuzionálásával történik. Fúziós polipeptidek elõállítására szolgáló eljárások a technikában ismertek, és ilyen eljárások közé tartozik a polipeptidet kódoló kódolószekvenciák ligálása oly módon, hogy azok leolvasási keretben legyenek és a fuzionált polipeptid expressziója ugyanazon promoter(ek) és terminátor szabályozása alatt álljon. Antimikrobiális aktivitású polipeptidek forrásai A találmány szerinti polipeptid kinyerhetõ bármilyen génuszba tartozó mikroorganizmusból. A találmány céljaira, a leírás szerinti értelemben, egy adott forrással kapcsolatban alkalmazott kinyer kifejezés azt jelenti, hogy a nukleotidszekvencia által kódolt polipeptidet a forrás állítja elõ, vagy olyan törzs termeli, amelybe a forrásból származó nukleotidszekvencia be lett illesztve. A találmány elõnyös szempontja szerint, az adott forrásból kinyert polipeptid extracellulárisan szekretálódik. A találmány szerinti polipeptid lehet bakteriális polipeptid. például, a polipeptid lehet Gram-pozitív baktériumból származó polipeptid például Bacillus-eredetû polipeptid, például, Bacillus alkalophilus, Bacillus amylolique-faciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus coagulans, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, vagy Bacillus thuringiensis polypeptide; vagy Streptomyces-eredetû polipeptid, például Streptomyces lividans vagy Streptomyces murinus polipeptid; vagy Gram-negatív baktériumból származó polipeptid, például E. coli vagy Pseudomonas sp. eredetû polipeptid. A találmány szerinti polipeptid lehet gombaeredetû polipeptid, és elõnyösebben élesztõbõl származó polipeptid, például Candida, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces, Schizosaccharomyces, vagy Yarrowia polipeptid; vagy elõnyösebben filamentális gombapolipeptid, például Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium, Cryptococcus, Filibasidium, Fusarium, Humicola, Magnaporthe, Mucor, Myceliophthora, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Piromyces, Schizophyllum, Talaromyces, Thermoascus, Thielavia, Tolypocladium, vagy Trichoderma eredetû polipeptid. A találmány elõnyös szempontja szerint, a polipeptid Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces 6

7 cerevisiae, Saccharomyces diastaticus, Saccharomyces douglasii, Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces norbensis, vagy Saccharomyces oviformis eredetû, antimikrobiális aktivitású polipeptid. A találmány egy másik elõnyös szempontja szerint, a polipeptid Aspergillus aculeatus, Aspergillus awamori, Aspergillus fumigatus, Aspergillus foetidus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxysporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sulphureum, Fusarium torulosum, Fusarium trichothecioides, Fusarium venenatum, Humicola insolens, Humicola lanuginosa, Mucormie hei, Myceliophthora thermophila, Neurospora crassa, Penicillium purpurogenum, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei, vagy Trichoderma viride eredetû polipeptid. A találmány egy másik elõnyös szempontja szerint, a polipeptid Arenicola marina-eredetû polipeptid, például a SEQ ID NO:2 szerinti polipeptid. Egyértelmû, hogy a fent említett fajok esetében, a találmány egyaránt tartalmaz tökéletes és nem tökéletes stádiumokat, és más taxonómiai ekvivalenseket, például, anamorfokat, függetlenül attól a fajnévtõl, amelyrõl ismertek. A szakember könnyen felismeri és azonosítani tudja a megfelelõ ekvivalenseket. E fajok törzsei a nyilvánosság számára könnyen elérhetõk a számos tenyészgyûjtemény valamelyikébõl, például a következõktõl: American Type Culture Collection (ATCC), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM), Centraalbureau Voor Schimmelcultures (CBS), és Agricultural Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center (NRRL). Továbbá, ilyen polipeptidek más forrásokból többek között a természetbõl (például talaj, komposzt, víz stb.) izolált mikroorganizmusokból is azonosíthatók és kinyerhetõk a fent említett próbák alkalmazása révén. Mikroorganizmusok természetes élõhelyükrõl való izolálására szolgáló eljárások a technikában jól ismertek. A polinukleotid hasonló szûréssel kinyerhetõ egy másik mikroorganizmus genomi vagy cdns-könyvtárából. Miután egy adott polipeptidet kódoló nukleotidszekvencia a próba(próbák) segítségével kimutatásra került, a polinukleotidot a szakember számára jól ismert eljárások alkalmazásával [lásd például: Sambrook és munkatársai, mint fenn (1989)]. A találmány szerinti polipeptidek közé tartoznak olyan fuzionált polipeptidek vagy hasítható fuzionált polipeptidek is, amelyekben a polipeptid vagy annak fragmentuma N¹terminálisához vagy C¹terminálisához egy másik polipeptid van fuzionálva. Fuzionált polipeptid elõállítása egy másik polipeptidet kódoló nukleotidszekvenciának (vagy annak részének) a találmány szerinti nukleotidszekvenciához való fuzionálásával történik. Fúziós polipeptidek elõállítására szolgáló eljárások a technikában ismertek, és ilyen eljárások közé tartozik a polipeptidet kódoló kódolószekvenciák ligálása oly módon, hogy azok leolvasási keretben legyenek és a fuzionált polipeptid expressziója ugyanazon promoter(ek) és terminátor szabályozása alatt álljon. Polinukleotidok A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti polipeptidet kódoló nukleotidszekvenciájú izolált polinukleotidok. A találmány egyik elõnyös szempontja szerint, a nukleotidszekvencia a SEQ ID NO:1 alatt van megadva. A találmány egy másik elõnyös szempontjában, a nukleotidszekvencia a SEQ ID NO:1 szerinti szekvenciának az érett polipeptidet kódoló régiója. A találmány részét olyan nukleotidszekvenciák is képezik, amelyek a SEQ ID NO:2 szerinti aminosavszekvenciájú polipeptidet vagy annak érett polipeptidjét kódolják, ami a genetikai kód degeneráltsága miatt különbözik a SEQ ID NO:1 szerinti szekvenciától. A találmány tárgyát képezik továbbá a SEQ ID NO:1 azon alszekvenciái, amelyek a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia antimikrobiális aktivitású fragmentumait kódolják. Továbbá, a találmány tárgyát mutáns polinukleotidok képezik, amelyeknél az érett polipeptid SEQ ID NO:1 szerinti kódolószekvenciájában legalább egy mutációt tartalmaznak, amely polinukleotidokban a mutáns nukleotidszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaiból álló polipeptidet kódol. A polipeptidet kódoló polinukleotid izolálására vagy klónozására alkalmazott eljárások a technikában jól ismertek és ezek közé tartozik a genomi DNS-bõl való izolálás, cdns-bõl való elõállítás, illetve ezek kombinálása. A találmány szerinti polinukleotidok ilyen genomi DNS-bõl való klónozása megvalósítható, például, a jól ismert polimeráz-láncreakció (PCR) alkalmazásával, vagy expressziós könyvtárak antitesttel való szûrésével közös szerkezeti tulajdonságokat mutató klónozott DNS-fragmentumok kimutatása céljából [lásd Innis és munkatársai, PCR: A Guide to Methods and Application, kiad.: Academic Press, New York (1990)]. Más nukleinsavamplifikációs eljárások, például ligáz-láncreakció (LCR), ligált aktivált transzkripció (LAT) és nukleinsavszekvencián alapuló amplifikáció (NASBA) is alkalmazható. A polinukleotidok klónozhatók valamilyen Arenicola törzsbõl vagy egy másik vagy rokon szervezetbõl, így elõállítható, például, a nukleotidszekvencia kódoló régiója szerinti polipeptid valamilyen allélikus vagy fajra jellemzõ változata. A találmány tárgyát képezik továbbá olyan nukleotidszekvenciájú polinukleotidok, amelyek legalább %-ban, elõnyösen legalább 6%-ban, elõnyösebben legalább 70%-ban, elõnyösebben legalább 7%-ban, elõnyösebben legalább 80%-ban, elõnyösebben legalább 8%-ban, elõnyösebben legalább 90%-ban, még elõnyösebben legalább 9%-ban, és legelõnyösebben legalább 97%-ban azonosak a SEQ ID NO:1 érett polipeptidet kódoló szekvenciájával (azaz, a nukleotidokkal), amely aktív polipeptidet kódol. 7

8 A találmány szerinti polipeptidet kódoló nukleotidszekvencia módosítása szükséges lehet a polipeptidhez lényegében hasonló polipeptidek szintézise esetén. A polipeptidhez lényegében hasonló kifejezés a polipeptid természetes körülmények között elõ nem forduló formáit jelenti. Ezek a polipeptidek bizonyos, génsebészeti változtatások terén különbözhetnek a természetes forrásából izolált polipeptidtõl, például specifikus aktivitásban, hõstabilitásban, ph¹optimum tekintetében stb. különbözõ mesterséges változatok. A szekvenciaváltozat elkészíthetõ a SEQ ID NO:1 szerinti szekvencia polipeptidet kódoló régiójaként, például annak alszekvenciájaként, megadott nukleotidszekvencia alapján, és/vagy olyan nukeotidszubsztitúciók bevitelével, amelyek eredményeként a nukleotidszekvencia által kódolt polipeptidnek nem lesz eltérõ aminosavszekvenciája, viszont ami megfelel az enzim elõállítására szánt gazdaszervezet kodonhasználatának, vagy olyan nukeotidszubsztitúciók bevitelével, amelyek más aminosavszekvenciát eredményezhetnek. Nukleotidszubsztitúciók általános leírása az irodalomban elérhetõ [lásd például Ford és munkatársai, Protein Expression and Purification 2, 9 7 (1991)]. A szakember számára egyértelmû, hogy ilyen szubsztitúciók a molekula mûködése szempontjából kritikus régiókon kívül is végezhetõk, és a szubsztitúció még így is eredményezhet aktív polipeptidet. A találmány szerinti izolált polinukleotid által kódolt polipeptid aktivitásához elengedhetetlen és ennélfogva, elõnyösen, a szubsztitúció tárgyát nem képzõ aminosavak azonosíthatók a technikában ismert eljárások alkalmazásával, például irányított mutagenezissel vagy pásztázó alaninmutagenezissel [Cunningham és Wells, Science 244, 81 8 (1989)] Az utóbbi eljárásban, a molekulában lévõ minden pozitív töltésû aminosavat mutációval egyenként alaninra cserélnek, és a kapott mutáns molekulákat biológiai aktivitásra tesztelik azon aminosavak azonosítása végett, amelyek a molekula aktivitása szempontjából kritikus fontosságúak. A szubsztrátumenzim kölcsönhatás helyei is meghatározhatók a háromdimenziós szerkezet elemzésével, például mágneses magrezonancia-analízissel, krisztallográfiával, vagy fotoaffinitás-jelöléssel [lásd például, de Vos és munkatársai, Science 2, (1992); Smith és munkatársai, Journal of Molecular Biology 224, (1992); Wlodaver és munkatársai, FEBS Letters 9, 9 64 (1992)]. Továbbá, a találmány tárgyát olyan, a találmány szerinti polipeptidet kódoló izolált polinukleotidok is képezik, amelyek alacsony sztringenciájú körülmények között, elõnyösen közepes sztringenciájú körülmények között, elõnyösebben közepesen magas sztringenciájú körülmények között, még elõnyösebben magas sztringenciájú körülmények között, és legelõnyösebben igen magas sztringenciájú körülmények között hibridizálnak (i) a SEQ ID NO:1 szerinti szekvencia nukleotidjaival, (ii) a SEQ ID NO:1 szerinti szekvencia nukleotidjai által tartalmazott cdns-szekvenciával, vagy (iii) az (i) vagy (ii) komplementer szálával, vagy azok allélváltozataival és alszekvenciáival [lásd például: Sambrook és munkatársai, mint fenn (1989)], a leírásnak megfelelõen. A találmány tárgyát képezik továbbá (a) (i) a SEQ ID NO:1 szerinti szekvencia nukleotidjaival, a SEQ ID NO:1 szerinti szekvencia nukleotidjai által tartalmazott cdns-szekvenciával, vagy (iii) az (i) vagy (ii) komplementer szálával alacsony, közepes, közepesen magas, magas vagy igen magas sztringenciájú körülmények között hibridizáló DNS-populáció révén elõállított izolált polinukleotidok; és (b) s hibridizáló polinukleotid izolálása, amely polinukleotid antimikrobiális aktivitású polipeptidet kódol. Nukleinsavkonstrukciók Továbbá, a találmány tárgyát képezik a találmány szerinti izolált polinukleotidot egy vagy több olyan szabályozószekvenciához mûködõképesen kapcsolva tartalmazó nukleinsavkonstrukciók is, amelyek a kódolószekvencia expresszióját irányítják valamilyen alkalmas gazdasejtben a szabályozószekvenciákkal összeegyeztethetõ körülmények között. A találmány szerinti polipeptidet kódoló izolált polinukleotidot különféle módokon lehet manipulálni a polipeptid expressziójának biztosítása céljából. A polinukleotidszekvenciájának a vektorba illesztést megelõzõ manipulálása az expressziós vektortól függõen kívánatos vagy szükséges. Polinukleotidszekvenciák rekombináns DNS-eljárásokkal való módosítására szolgáló eljárások a technikában jól ismertek. A szabályozószekvencia lehet valamilyen megfelelõ promoterszekvencia, gazdasejt által a találmány szerinti polipeptidet kódoló polinukleotid expresszálására felismert nukleotidszekvencia. A promoterszekvencia a polipeptid expresszióját közvetítõ transzkripcionális szabályozószekvenciákat tartalmaz. A promoter lehet bármilyen olyan szekvencia, amely a választott gazdasejtben transzkripcionális aktivitást mutat, például mutáns¹, csonkolt¹, és hibrid promoter, és ilyen promoter a gazdasejttel homológ vagy heterológ, extracelluláris vagy intracelluláris polipeptideket kódoló génekbõl egyaránt kinyerhetõ. A találmány szerinti nukleinsavkonstrukció transzkripciójának (különösen bakteriális gazdasejtben való) irányítására alkalmas promoterek közé tartozik például az E. coli lac operonjából, Streptomyces coelicolor agaróz génjébõl (daga), a Bacillus subtilis levanszukráz génjébõl (sacb), a Bacillus licheniformis alfa-amiláz génjébõl (amyl), Bacillus stearothermophilus maltogén amiláz génjébõl (amym), Bacillus amyloliquefaciens alfa-amiláz génjébõl (amyq), Bacillus licheniformis penicillináz génjébõl (penf), Bacillus subtilis xyla és xylb génjébõl, és prokarióta béta-laktamáz génbõl [Villa-Kamaroff és munkatársai, Proceedings of the National Academy of Sciences USA 7, (1978) kinyerhetõ promoterek, illetve a tac promoter [DeBoer és munkatársai, Proceedings of the National Academy of Sciences USA 80, 21 2 (1983). Az irodalomban további promoterek is le vannak írva [lásd például Useful proteins from recombinant bacteria Scientifíc American, 242, (1980); Sambrook és munkatársai, mint fenn (1989)]. 8

9 A találmány szerinti nukleinsavkonstrukciók transzkripciójának szálas gombasejtekben való irányítására alkalmas promoterek közé tartoznak például a következõ génekbõl származó promoterek: Aspergillus oryzaetaka amiláz, Rhizomucor miehei aszparaginsav-proteináz, Aspergillus niger semleges alfa-amiláz, Aspergillus niger acid stabil alfa-amiláz, Aspergillus niger vagy Aspergillus awamori glükoamiláz (glaa), Rhizomucor miehei lipáz, Aspergillus oryzae lúgos proteáz, Aspergillus o/yzaetriose foszfát izomeráz, Aspergillus nidulans acetamidáz, Fusarium venenatum amiloglükozidáz (WO 00/6900 számú nemzetközi szabadalmi irat), Fusarium venenatum Daria (WO 00/6900 számú nemzetközi szabadalmi irat), Fusarium venenatum Quinn (WO 00/6900 számú nemzetközi szabadalmi irat), Fusarium oxysporum trypsin-like protease (WO 96/00787), Trichoderma reesei béta-glükozidáz, Trichoderma reesei cellobiohidroláz I, Trichoderma reesei endoglükanáz I, Trichoderma reesei endoglükanáz II, Trichoderma reesei endoglükanáz III, Trichoderma reesei endoglükanáz IV, Trichoderma reesei endoglükanáz V, Trichoderma reesei xilanáz I, Trichoderma reesei xilanáz II, Trichoderma reesei béta-xilozidáz, és az NA2-tpi promoter (az Aspergillus niger semleges alfa-amilázát és az Aspergillus oryzae triózfoszfát-izomerázát kódoló gének promotereinek hibridje); és ezek mutáns, csonkolt és hibrid promoterei. Élesztõben alkalmas promotereket a Saccharomyces cerevisiae enolázát (ENO¹1), Saccharomyces cerevisiae galaktokinázát (GAL1), Saccharomyces cerevisiae alkohol dehidrogenázát/gliceraldhid-3-foszfát dehidrogenázát (ADH1, ADH2/GAP), Saccharomyces cerevisiae triózfoszfát-izomerázát (TPI), Saccharomyces cerevisiae metallotioninjét (CUP1), vagy Saccharomyces cerevisiae 3¹foszfoglicerát-kinázát kódoló génekbõl lehet elõállítani. Élesztõben való alkalmazásra szolgáló további alkalmas promoterek le vannak írva az irodalomban [lásd például Romanos és munkatársai, Yeast 8, (1992)]. A szabályozószekvencia lehet alkalmas terminátorszekvencia egy adott gazdasejt által a transzkripció leállítására felismert szekvencia. A terminátorszekvencia a polipeptidet kódoló nukleotidszekvencia 3 ¹végéhez van mûködõképesen kapcsolva. A választott gazdasejtben mûködõ bármilyen terminátor alkalmazható a találmány szerinti megoldásban. Szálas gombasejtekhez elõnyös terminátorok kinyerhetõk az Aspergillus oryzae TAKA amilázát, Aspergillus niger glükoamilázát, Aspergillus nidulans antranilát-szintetázát, Aspergillus niger alfa-glükozidázát, vagy a Fusarium oxysporum tripszinszerû proteázát kódoló génekbõl. Élesztõsejtkehez elõnyös terminátorok kinyerhetõk a Saccharomyces cerevisiae enolázát, Saccharomyces cerevisiae citokróm C¹jét (CYC1), vagy Saccharomyces cerevisiae gliceraldhid-3-foszfát dehidrogenázát kódoló génekbõl. Élesztõben való alkalmazásra szolgáló további alkalmas promotereket is le írtak az irodalomban [lásd például, Romanos és munkatársai, mint fenn (1992)] A szabályozószekvencia alkalmas leaderszekvencia is lehet ami egy mrns-nek a gazdasejtben való transzlációhoz fontos, nem transzlálódó régiója. A leaderszekvencia a polipeptidet kódoló nukleotidszekvencia ¹végéhez van mûködõképesen kapcsolva. A választott gazdasejtben mûködõ bármilyen leaderszekvencia alkalmazható a találmány szerinti megoldásban. Szálas gombasejtekhez elõnyös leaderek kinyerhetõk kinyerhetõk az Aspergillus oryzae TAKA amílázát és az Aspergillus nidulans triózfoszfát izomerázát kódoló génekbõl. Élesztõsejtkehez alkalmas leaderek kinyerhetõk a Saccharomyces cerevisiae enolázát (ENO 1), Saccharomyces cerevisiae 3¹foszfoglicerát-kinázát, Saccharomyces cerevisiae alfa-faktorát, vagy a Saccharomyces cerevisiae alkohol dehidrogenázát/gliceraldhid-3-foszfát dehidrogenázát (ADH1, ADH2/GAP) kódoló génekbõl. A szabályozószekvencia poliadenilációs szekvencia is lehet, ami a nukleotidszekvencia 3 ¹terminálisához van mûködõképesen kapcsolva, és amelyet átíráskor a gazdasejt jelként ismer fel arra, hogy poliadenozint adjon az átírt mrns-hez. A választott gazdasejtben mûködõ bármilyen poliadenilációs szekvencia alkalmazható a találmány szerinti megoldásban. Szálas gombasejtekhez elõnyös poliadenlációs szekvenciák kinyerhetõk az Aspergillus oryzae TAKA amilázát, Aspergillus niger glükoamilázát, Aspergillus nidulans antranilát-szintetázát, a Fusarium oxysporum tripszinszerû proteázát vagy az Aspergillus niger alfaglükozidázát kódoló génekbõl. Élesztõsejtekhez alkalmas poliadenilációs szekvenciák az irodalomban le vannak írva [Guo és Sherman, Molecular Cellular Biology 1, (199)]. A szabályozószekvencia lehet szignálpeptidet kódoló régió, amely a polipeptid aminoterminálisához kapcsolt aminosavszekvenciát kódol és a kódolt polipeptidet a sejt szekréciós útvonalába irányítja. A nukleotidszekvencia kódolószekvenciájának ¹vége benne rejlõen tartalmazhat, a szekretált polipeptidet kódoló kódolószekvencia szegmentumával természetes körülmények között egy transzlációs leolvasási keretbe kapcsolt, szignálpeptidet kódoló régiót. Esetleg, a kódolószekvencia ¹vége olyan szignálpeptidet kódoló régiót tartalmazhat, amely a kódolószekvenciától idegen. Az idegen szignálpeptidet kódoló régióra akkor lehet szükség, ha a kódolószekvencia természetes körülmények között nem tartalmaz szignálpeptidet kódoló régiót. Esetleg, a polipeptid szekréciójának fokozása céljából a természetes körülmények között elõforduló szignálpeptidet kódoló régió idegen szignálpeptidet kódoló régióval egyszerûen helyettesíthetõ. Azonban, az expresszált polipeptidet a választott gazdasejt szekréciós útvonalába irányító bármilyen szignálpeptidet kódoló régió alkalmazható a találmány szerinti megoldásban. Bakteriális gazdasejtben hatékony szignálpeptidet kódoló régiók a Bacillus NCIB maltogén amilázát, Bacillus stearothermophilus alfa-amilázát, Bacillus licheniformis szubtilizint, Bacillus licheniformis bétalaktamázát, Bacillus stearothermophilus semleges pro- 9

10 teázait (nprt, nprs, nprm), és Bacillus subtilis prsa¹t kódoló génekbõl nyert, szignálpeptidet kódoló régiók. További szignálpeptidek is le vannak írva az irodalomban [Simonen és Palva, Microbiological Reviews 7, (1993)]. Szálas gombasejtekhez hatékony, szignálpeptidet kódoló régiók az Aspergillus oryzae TAKA amilázát, Aspergillus niger semleges amilázát, Aspergillus niger glükoamilázát, Rhizomucor miehei aszparaginsav-proteinázát, Humicola insolens cellulázát, és Humicola lanuginosa lipázát kódoló génekbõl nyert, szignálpeptidet kódoló régiók. A találmány elõnyös szempontjában, a szignálpeptidet kódoló régió a SEQ ID NO:2 szerinti szekvenciában 16-tõl a 142¹ig terjedõ aminosavakat kódoló, a SEQ ID NO:1 szerint megadott1 72. nukleotidokkal azonos. Elesztõsejtekhez alkalmas szignálpeptideket a Saccharomyces cerevisiae alfa-faktort és a Saccharomyces cerevisiae invertázát kódoló génekbõl állítunk elõ. További alkalmas szignálpeptidek az irodalomban le vannak írva [lásd például Romanos és munkatársai, mint fenn (1992)]. Szabályozószekvencia lehet a polipeptid aminoterminálisánál elhelyezkedõ aminosavszekvenciát kódoló, propeptideredetû kódolórégió. Az eredményül kapott polipeptid proenzimként vagy propolipeptidként (bizonyos esetekben zimogénként) ismert. A propolipeptid általában inaktív és a propeptidnek a propolipeptidrõl való katalitikus vagy autokatalitikus lehasításával alakítható érett aktív polipeptiddé. A propeptidet kódoló régió kinyerhetõ a Bacillus subiilis alkalikus proteázát (apre), Bacillus subtilis semleges proteázát (nprt), Saccharomyces cerevisiae alfa-faktorát, Rhizomucor miehei aszpartikus proteinázát, vagy a Myceliophthora thermophila laktázát [WO 9/33836 számú nemzetközi szabadalmi irat] kódoló génekbõl. A találmány elõnyös szempontja szerint, a propeptidet kódoló régió a a SEQ ID NO:2 szerinti szekvenciában a 141-tõl a 1¹ig terjedõ aminosavakat kódoló, a SEQ ID NO:1 szerinti szekvencia nukleotidjaival azonos. Amennyiben a polipeptid aminoterminálisán szignálpeptid- és propeptidrégió egyaránt jelen van, akkor a propeptid régiót a polipeptid aminoterminálisa mellé, a szignálpeptidet pedig a propeptid aminoterminálisa mellé pozicionáljuk. Olyan szabályozószekvenciák hozzáadása is kívánatos lehet, amelyek a polipeptid expressziójának szabályozását a gazdasejt szaporodásától teszik függõvé. Ilyen szabályozórendszerek például azok, amelyek a gén expresszióját valamilyen kémiai vagy fizikai stimulusra ideértve valamilyen szabályozóvegyületet adott válaszként kapcsolják be és ki. Prokarióta rendszerekben mûködõ szabályozórendszerek közé tartoznak a lac, tac, és trp operátorrendszerek. Élesztõben az ADH2 rendszer vagy GAL1 rendszer alkalmazható. Szálas gombákban, a TAKA alfa-amiláz promotere, Aspergillus niger glükoamiláz promotere, és az Aspergillus oryzae glükoamiláz promotere alkalmazható szabályozószekvenciaként. Szabályozó szekvenciák közé tartoznak például azok is, amelyek génamplifikációt tesznek lehetõvé. Eukarióta rendszerekben ezek közé tartozik a dihidrofolát-reduktáz gén, amely metotrexát jelenlétében amplifikálódik, és a metallotionein gének, amelyek nehézfémek jelenlétében amplifikálódnak. Ezen esetekben, a polipeptidet kódoló nukleotidszekvenciát mûködõképesen lehet kapcsolni a szabályozószekvenciához. Expressziós vektorok A találmány tárgyát a találmány szerinti polinukleotidot, valamilyen promotert, illetve transzkripciós és transzlációs stopszignálokat tartalmazó rekombináns expressziós vektorok is képezik. A fentiekben leírt különféle nukleinsavak és szabályozószekvenciák egymáshoz csatlakoztatásával olyan rekombináns expressziós vektort lehet elõállítani, amely tartalmazhat egy vagy több kényelmes restrikciós helyet a polipeptidet kódoló nukleotidszekvencia ilyen helyekre történõ inzerciójához vagy szubsztitúciójához. Esetleg, a találmány szerinti nukleotidszekvencia expresszálható a nukleotidszekvencia vagy a szekvenciát tartalmazó nukleinsavkonstrukció expresszióra megfelelõ vektorba való beillesztésével. Az expressziós vektor készítésekor, a kódolószekvencia úgy helyezkedik el a vektorban, hogy a kódolószekvencia mûködõképesen kapcsolódik az expresszióhoz megfelelõ szabályozószekvenciákhoz. A rekombináns expressziós vektor lehet bármilyen vektor (például, plazmid vagy vírus), amely rekombináns DNS-eljárásoknak kényelmesen alávethetõ és amivel a nukleotidszekvencia expressziója elérhetõ. A vektor kiválasztása jellemzõen függ a vektor azon gazdasejttel való összeegyeztethetõségétõl, amibe a vektor bevitelre kerül. A vektorok lehetnek lineáris vagy zárt cirkuláris plazmidok. A vektor lehet önmagától replikálódó vektor, azaz extrakromoszomális entitásként létezõ vektor, amelynek replikációja nem függ a kromoszóma replikációjától (például, plazmid, extrakromoszomális elem, minikromoszóma, vagy mesterséges kromoszóma). A vektor önmaga replikációjának biztosítására tartalmazhat bármilyen eszközt. Esetleg, vektor lehet olyan, amely a gazdasejtbe való bevitelét követõen integrálódik a genomba és azzal (azokkal) a kromoszómá(kkal) együtt replikálódik, amely(ek)be integrálódott. Továbbá, alkalmazható egyetlen vektor vagy plazmid vagy két vagy több vektor vagy plazmid, amelyek együtt tartalmazzák a gazdasejt genomjába való bevitelre szánt teljes DNS¹t; vagy transzpozon is alkalmazható. A találmány szerinti vektorok elõnyösen tartalmaznak egy vagy több szelektálható markert, ami megkönnyíti a transzformált sejtek szelektálását. Szelektálható marker olyan gén, amelynek terméke biocid vagy vírus elleni rezisztenciát, nehézfémek elleni rezisztenciát, auxotrófoknak prototrófíát, és ilyeneket biztosít. Bakteriális szelektálható markerek a Bacillus subtilis vagy Bacillus licheniformis fajokból származó dal gének, vagy antibiotikumok például, ampicillin, kana-

11 micin, kloramfenikol vagy tetraciklin elleni rezisztenciát biztosító markerek. Élesztõeredetû gazdasejtekre alkalmas markerek az ADE2, HIS3, LEU2, LYS2, MET3, TRP1, és URA3. Szálas gombasejtekhez való alkalmazásra szolgáló markerek közé tartozik minden korlátozás nélkül az amds (acetamidáz), argb (ornitin-karbamoil-transzferáz), bar (foszfino-tricin-acetil-transzferáz), hf (higromycin foszfotranszferáz), niad (nitrát-reduktáz), pyrg (orotidin- -foszfát-dekarboxiláz), sc (szulfát-adenil-transzferáz), és trpc (antranilát szintetáz), és ezek ekvivalensei. Aspergillus sejtben való alkalmazásra elõnyös az Aspergillus nidulans vagy Aspergillus oryzae amds és pyrg génjei és a Streptomyces hygroscopicus bar génje. A találmány szerinti vektorok elõnyösen tartalmaznak olyan eleme(ke)t, amelyek lehetõvé teszik a vektor integrációját a gazdasejt genomjába vagy a vektor autonóm replikációját a sejtbe a genomtól függetlenül. A gazdasejt genomjába való integrációhoz a vektor alapulhat a polipeptidet kódoló polinukleotidszekvencián vagy a vektor bármely más elemén a genomba homológ vagy nem homológ rekombinációval történõ integrációhoz. Esetleg, a vektor tartalmazhat a gazdasejt genomjában a kromoszóma(ák) pontos helyére(ire) homológ rekombinációval történõ integráció irányítására szolgáló további nukleotidszekvenciákat. Egy pontosan meghatározott helyre való integráció valószínûségének növelésére elõnyös, ha az integrációs elemek elegendõ számú olyan nukleinsavat például bázispárt, elõnyösen bázispárt, és legelõnyösebben bázispárt tartalmaznak, amelyek nagymértékben azonosak a megfelelõ célszekvenciával a homológ rekombináció valószínûségének fokozása céljából. Integrációs elem lehet a gazdasejt genomjában lévõ célszekvenciával homológ bármilyen szekvencia. Továbbá, az integrációs elemek lehetnek nem kódoló vagy kódoló nukleotidszekvenciák. Másfelõl, a vektor nem homológ rekombinációval is integrálódhat a gazdasejt genomjába. Autonóm replikációhoz, a vektor replikációs origót is tartalmazhat, ami lehetõvé teszi, hogy a vektor önmagától replikálódjon a kérdéses gazdasejtben. A replikációs origó lehet egy adott sejtben mûködõ autonóm replikációt közvetítõ bármilyen plazmidreplikátor. A leírás szerinti értelemben, a replikációs origó vagy plazmidreplikátor kifejezés olyan nukleotidszekvenciát jelent, ami lehetõvé teszi, hogy egy adott plazmid vagy vektor in vivo replikálódjon. Bakteriális replikációs origók közé tartoznak például az E. coliban való replikációt lehetõvé tevõ pbr322, puc19, pacyci 77, és pacyc184, és a Bacillusban való replikációt lehetõvé tevõ pub1, pe194, pta, és pampi plazmidok replikációs origói. Élesztõeredetû gazdasejtben való alkalmazásra szolgáló replikációs origók például a következõk: 2 mikronos replikációs origó, ARS1, ARS4, az ARS1 és CEN3 kombinációja, az ARS4 és CEN6 kombinációja. Szálas gombák sejtjeiben alkalmas replikációs origó például az AMA1 és ANSI [Gems és munkatársai, Gene 98, (1991); Cullen és munkatársai, Nucleic Acids Research 1, (1987); WO 00/24883 számú nemzetközi szabadalmi irat). Az AMA1 gén izolálni és a gént tartalmazó plazmidok vagy vektorok készíteni a WO 00/24883 számú nemzetközi szabadalmi iratban leírtak szerint lehet. A találmány szerinti polinukleotid egynél több kópiája is beilleszthetõ a gazdasejtbe a géntermék elõállításának növelése céljából. A polinukleotid kópiaszáma növelhetõ a szekvencia legalább még egy további kópiájának a gazdasejt genomjába való beillesztésével, vagy ha a polinukleotiddal együtt valamilyen amplifikálható szelektálható markergént építünk be, ahol a szelektálható markergén amplifikált kópiáit és így a polinukleotid további kópiáit tartalmazó sejtek szelektálhatók a sejtek megfelelõ szelektálható ágens jelenlétében való tenyésztésével. A találmány szerinti rekombináns expressziós vektorok konstrukciójához, a fenti elemek ligálására alkalmazott eljárásokat a szakember ismeri [Sambrook és munkatársai, mint fenn (1989)]. Gazdasejtek A találmány tárgyát továbbá a polipeptidek rekombináns elõállítására elõnyösen alkalmazott, találmány szerinti polinukleotidot tartalmazó rekombináns gazdasejtek is képezik. A találmány szerinti polinukleotidot tartalmazó vektort gazdasejtbe visszük be oly módon, hogy a fentiekben leírtak szerint a vektor kromoszómába integrálva vagy önmagától replikálódó extrakromoszomális vektorként maradjon fenn. A gazdasejt kifejezés tartalmazza egy adott kiindulási sejt bármely olyan utódját, amely a replikáció során elõforduló mutációk miatt nem azonos a kiindulási sejttel. A gazdasejt kiválasztása nagymértékben függ a polipeptidet kódoló géntõl és annak forrásától. A gazdasejt lehet egysejtû mikroorganizmus, például prokarióta, vagy lehet nem egysejtû mikroorganizmus, például eukarióta. Alkalmas egysejtû mikroorganizmusok a bakteriális sejtek, mint például Gram-pozitív baktériumok, így minden korlátozás nélkül a Bacillus sejt, például Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacilluscoagulans, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, és Bacillus thuringiensis; vagy Streptomyces sejt, például Streptomyces lividans és Streptomyces murinus; vagy Gram-negatív baktériumok, például E. coli és Pseudomonas sp. A találmány elõnyös szempontjában, a bakteriális gazdasejt Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus stearothermophilus, vagy Bacillus subtilis sejt, A találmány egy másik elõnyös szempontjában, a Bacillus sejt alkalofil Bacillus. A vektor bakteriális gazdasejtbe való bevitele befolyásolható, például, protoplaszttranszformációval [lásd például Chang és Cohen, Molecular General Genetics 168, (1979)], kompetens sejtek alkalmazásával [lásd például Young és Spizizin, Journal of Bacte- 11

12 riology 81, (1961), vagy Dubnau és Davidoff- Abelson, Journal of Molecular Biology 6, (1971)], elektroporációval [lásd például Shigekawa és Dower, Biotechniques 6, (1988)], vagy konjugációval [lásd például Koehler és Thome, Journal of Bacteriology 169, (1987)]. A gazdasejt eukarióta, például emlõs¹, rovar¹, növényi vagy gombasejt is lehet. A találmány elõnyös szempontjában, a gazdasejt gombasejt. A leírás szerinti értelemben, a gomba kifejezésbe az Ascomycota, Basidiomycota, Chytridiomycota, és Zygomycota törzs [Hawksworth és munkatársai, Ainsworth and Bisbys Dictionary of The Fungi, 8. kiadás, kiad.: CAB International, University Press, Cambridge (199) szerint] és az Oomycota törzs [idézve: Hawksworth és munkatársai, mint fenn (199)], illetve minden mikroszkópikus gomba [Hawksworth és munkatársai, mint fenn (199)]. A találmány elõnyösebb szempontjában, a gombaeredetû gazdasejt élesztõsejt. A leírás szerinti értelemben, az élesztõ kifejezésbe tartoznak aszkospórás élesztõk (Endomycetales), bazidiospórás élesztõk, és a sarjadzógombák (Blastomycetes) közé sorolt élesztõk. Mivel az élesztõk rendszertana változhat a jövõben, a találmány céljaira, az élesztõket a Biology and Activities of Yeast [(szerk.: Skinner, Passmore, és Davenport, kiad.: Soc. App. Bacteriol. Symposium Series No. 9, (1980)] kiadványban leírtak szerint határozzuk meg. A találmány még elõnyösebb szempontjában, az élesztõeredetû gazdasejt Candida, Hansenula, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces, Schizosaccharomyces, vagy Yarrowia sejt. A találmány legelõnyösebb szempontjában, az élesztõeredetû gazdasejt Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces diastaticus, Saccharomyces douglasii, Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces norbensis vagy Saccharomyces oviformisce W. A találmány másik legelõnyösebb szempontjában, az élesztõeredetû gazdasejt Yarrowia lipolytica sejt. A találmány egy másik elõnyösebb szempontjában, a gombaeredetû gazdasejt szálasgombasejt. A szálasgomba kifejezésbe tartoznak az Eumycota és Oomycota alosztály összes szálas formái [Hawksworth és munkatársai, mint fenn (199) által meghatározottak szerint]. A szálasgombák micéliumának fala általában kitinbõl, cellulózból, glükánból, kitozánból, mannánból és más komplex poliszacharidokból áll. A vegetatív szaporodás a hifák meghosszabbodásával történik, a szénkatabolizmus pedig obligát aerob. Ezzel szemben, az élesztõk, például a Saccharomyces cerevisiae vegetatív szaporodása egysejtû tallusz bimbózásával történik, és a szénkatabolizmus pedig lehet fermentatív. A találmány még elõnyösebb szempontjában, a szálasgomba-gazdasejt Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium, Bierkandera, Ceriporiopsis, Coprinus, Coriolus, Cryptococcus, Filibasidium, Fusarium, Humicola, Magnaporthe, Mucor, Myceliophthora, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Phanerochaete, Phlebia, Piromyces, Pleurotus, Schizophyllum, Talaromyces, Thermoascus, Thielavia, Tolypocladium, Trametes, vagy Trichoderma sejt. A találmány legelõnyösebb szempontjában, a szálasgomba-gazdasejt Aspergillus awamori, Aspergillus fumigatus, Aspergillus foetidus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger vagy Aspergillus oryzaece W. sejt A találmány egy másik legelõnyösebb szempontjában, a szálasgomba-gazdasejt Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crook-wellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxysporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sulphureum, Fusarium torulosum, Fusarium trichothecioides, vagy Fusarium venatumce W. sejt. A találmány egy másik legelõnyösebb szempontjában, a szálasgomba-gazdasejt Bjerkandera adusta, Ceriporiopsis aneiria, Ceriporiopsis aneirina, Ceriporiopsis caregiea, Ceriporiopsis gilvescens, Ceriporiopsis pannocinta, Ceriporiopsis rivulosa, Ceriporiopsis subrufa, vagy Ceriporiopsis subvermispora, Coprinus cinereus, Coriolus hirsutus, Humicola insolens, Humicola lanuginosa, Mucor miehei, Myceliophthora thermophila, Neurospora crassa, Penicillium purpurogenum, Phanerochaete chrysosporium, Phlebia radiata, Pleurotus eryngii, Thielavia terrestris, Trametes villosa, Trametes versicolor, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei, vagy Trichoderma viride törzsbõl származó sejt. Gombasejtek protoplasztképzõdést, protoplasztok transzformációját és a sejtfal önmagában ismert módon történõ regenerálódását tartalmazó folyamattal transzformálhatók. Aspergillus és Trichoderma gazdasejtek transzformációjára szolgáló alkalmas eljárások az irodalomban le vannak írva [EP számú európai szabadalmi irat; Yelton és munkatársai, Proceedings of the National Academy of Sciences USA 81, (1984)]. Fusarium fajok transzformációjára szolgáló alkalmas eljárások is le vannak írva az irodalomban [Malardier és munkatársai, Gene 78, (1989), és WO 96/00787 számú nemzetközi szabadalmi irat]. Élesztõ a Becker és Guarente [Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, szerk.: Abelson és Simon, Methods in Enzymology, 194. köt., , kiad.: Academic Press, Inc., New York], Ito és munkatársai: [Journal of Bacteriology 13, 163 (1983)], illetve Hinnen és munkatársai: által leírt eljárás [Proceedings of the National Academy of Sciences USA 7, 19 (1978)] alkalmazásával transzformálható. Elõállítási eljárások A találmány tárgyát a találmány szerinti polipeptid elõállítására szolgáló eljárások is képezik, amelyek a következõket tartalmazzák: (a) olyan sejt, amelynek vad típusa képes a polipeptidet elõállítani, tenyésztése a polipeptid elõállítására alkalmas körülmények között; és (b) a polipeptid kinyerése. Elõnyõs, ha a sejt az Arenicola faj sejtje, elõnyösebben Arenicola marina sejtje. 12

13 A találmány tárgyát a találmány szerinti polipeptid elõállítására szolgáló eljárások is képezik, amelyek a következõket tartalmazzák: (a) gazdasejt tenyésztése a polipeptid elõállítására alkalmas körülmények között; és (b) a polipeptid kinyerése. A találmány tárgyát a találmány szerinti polipeptid elõállítására szolgáló eljárások is képezik, amelyek a következõket tartalmazzák: (a) gazdasejt tenyésztése a polipeptid elõállítására alkalmas körülmények között, ahol a gazdasejt az érett polipeptid SEQ ID NO:1 szerinti kódoló régiójában legalább egy mutációt hordozó, mutáns nukleotidszekvenciát tartalmaz, ahol a mutáns nukleotidszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavait tartalmazó polipeptidet kódol; és (b) a polipeptid kinyerése. A találmány szerinti elõállítási eljárásokban, a sejt tenyésztése a polipeptid elõállítására alkalmas tápoldatban a technikában jól ismert eljárások alkalmazásával történik, például, a sejt tenyészthetõ rázatott flaskában, és kisléptékû vagy nagyléptékû fermentációval (ideértve a folyamatos, szakaszos, szakaszosan táplált, vagy szilárd stádiumú fermentációkat) laboratóriumi vagy ipari fermentorokban, alkalmas tápoldatban és a polipeptid expresszálását és/vagy izolálását lehetõvé tevõ körülmények között. A tenyésztés szén- és nitrogénforrásokat, illetve szervetlen savakat tartalmazó alkalmas tápoldatban történik a technikában ismert eljárások alkalmazásával. Megfelelõ tápoldatok kereskedelmi forgalomban beszerezhetõk vagy (például az American Type Culture Collection katalógusaiban) leközölt készítmények alapján elkészíthetõk. Amennyiben a polipeptid a tápoldatba szekretálódik, a polipeptid közvetlenül kinyerhetõ a tápoldatból. Amennyiben a polipeptid nem szekretálódik, akkor sejtlizátumokból nyerhetõ ki. A polipeptidek a technikában ismert, a polipeptidekre specifikus eljárások alkalmazásával kimutatható. E kimutatási eljárásokban specifikus antitestek alkalmazására is sor kerülhet, például antimikrobiális aktivitási vizsgálat alkalmazható a polipeptid aktivitásának meghatározására a találmányban leírtak szerint. Az eredményül kapott polipeptid kinyerhetõ a technikában ismert eljárások alkalmazásával, például a tápoldatból a polipeptid hagyományos eljárásokkal így például, minden korlátozás nélkül, centrifugálással, szûréssel, extrakcióval, befúvásos szárítással, elpárologtatással vagy lecsapással nyerhetõ ki. A találmány szerinti polipeptidek a technikában ismert különféle eljárásokkal tisztíthatók, ideértve minden korlátozás nélkül a kromatográfiát (például, ioncserélõ, affinitás, hidrofób, kromatofókuszálás, és méretkizárás), elektroforetikus eljárásokat (például, preparatív izoelektromos-fokuszálás), differenciális oldékonyságot (például, alumínium-szulfáttal végzett lecsapás), SDS-PAGE, vagy extrakció [lásd például Protein Purification, szerk.: Janson és Ryden, kiad.: VCH Publishers, New York (1989)] Készítmények A találmány tárgyát a találmány szerinti polipeptidet tartalmazó készítmények, például gyógyászati készítmények, is képezik. Elõnyös, ha a készítmények ilyen polipeptidekben feldúsított készítmények. A feldúsított kifejezés jelzi, hogy a készítmény antimikrobiális aktivitása fokozott, például 1.1 dúsítási faktorral. A készítmények további, gyógyászatilag aktív ágenst például további biocid vagy biosztatikus ágenst, mint például egy másik, a fentiekben meghatározottak szerint antimikrobiális aktivitást mutató antimikrobiális polipeptidet is tartalmazhatnak. A biocid ágens lehet antibiotikum, a technikában ismertek szerint. Antibiotikumok osztályai közé tartoznak a következõk: penicillinek, például penicillin G, penicillin V, meticillin, oxacillin, karbenicillin, nafcillin, ampicillin stb.; penicillinek kombinációi béta-laktamázt gátlókkal, cefalosporinok, mint amilyen a cefaklor, cefazolin, cefuroxim, moxalaktám stb.; karbapenemek; monobaktámok; aminoglikozidok; tetraciklinek; makrolidok; linkomicinek; polimixinek; szulfonamidok; kinolonok; kloramfenikál; metronidazol; spektinomicin; trimetoprin; vankomicin stb. A biocid ágens lehet gombaellenes ágens, így poliének, például amfotericin B, nisztatin; ¹flukozin; és azolok, például mikonazol, ketokonazol, itrakonazol és flukonazol. A találmány egyik megvalósítási módjában, a biocid ágens nem enzimatikus kémiai ágens. A találmány egyik másik megvalósítási módjában, a biocid ágens nem polipeptid kémiai ágens. A készítmények tartalmazhatnak alkalmas hordozóanyagot. A készítmények gyógyszerként való alkalmazása esetén, a készítmények tartalmazhatnak a találmány szerinti antimikrobiális polipeptideknek a kívánt lokuszba való bevitelére képes, alkalmas hordozót. A polipeptidkészítmény elõállítható a technikában ismert eljárások szerint és a készítmények lehetnek folyékony vagy száraz készítmény formájában, például, a polipeptidkészítmény lehet granulátum vagy mikrogranulátum formájában. A készítménybe szánt polipeptid a technikában ismert eljárások szerint stabilizálható. Az alábbi példák a találmány szerinti polipeptidkészítmények elõnyös alkalmazásait mutatják be. A találmány szerinti polipeptidkészítmény dozírozása és a készítmény alkalmazásának körülményei meghatározhatók a technikában ismert eljárások alapján. Eljárások és alkalmazások A találmány tárgyát az antimikrobiális aktivitású polipeptidek alkalmazására szolgáló eljárások is képezik. Az antimikrobiális polipeptidek jellemzõen alkalmasak baktériumok, gombák, élesztõk vagy algák általi kontaminációnak kitett bármelyik lokuszon. Jellemzõ, hogy a lokuszok olyan vizes rendszerben, például, hûtõvízrendszer, mosáskor keletkezett öblítõvíz; olajrendszerekben, például hûtõ-kenõ folyadékok, kenõolajok, olajmezõk és hasonlókban vannak, ahol a mikroorganizmusokat el kell pusztítani vagy ahol azok szaporodását szabályozni kell. Azonban, a találmány alkalmazható minden olyan alkalmazásban, amelyre az ismert antimikrobiális készítmények alkalmazhatók, mint például fa, latex, ragasztó, csiriz, papír, kartonpapír, textil, bõr, mûanyag, tömítés és táp. 13

14 Más alkalmazások közé tartoznak élelmiszerek, üdítõk, kozmetikumok, például borogatóvizek, krémek, gélek, kenõcsök, szappanok, samponok, testápolók, izzadásgátlók, dezodorok, szájöblítõk, kontaktlencsetermékek, enzimkészítmények, vagy élelmiszer-összetevõk. Ennek megfelelõen, a találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek alkalmazhatók fertõtlenítõszerek, például, a szem és a száj fertõzéseinek, bõrfertõzésnek kezelésére; izzadásgátlókban vagy dezodorokban; kontaktlencsék és fogak (szájápolás) tisztítására és fertõtlenítésére. Általában, a találmány szerinti antimikrobiális peptidek alkalmasak tisztítására, fertõtlenítésére vagy a baktériumok elszaporodásának gátlására bármilyen felszínen. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidekkel elõnyösen érintkezésbe hozható felszínek közé tartozik például a feldolgozóberendezések például, tejüzemek, kémiai vagy gyógyszergyárak, vízfertõtlenítõ üzemek, olajfeldolgozó üzemek, papírgyárak, vízkezelõ üzemek és hûtõtornyok felszínei. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptideket olyan mennyiségben kell alkalmazni, amely hatékony a tisztítására, fertõtlenítésére vagy a baktériumok elszaporodásának gátlására a kérdéses felszínen. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek továbbá alkalmazhatók élelmiszer-feldolgozó üzemekben különféle felszínek és konyhaedények és bármely olyan terület tisztítására, ahol ételt készítenek vagy feldolgoznak, például kórházak, szanatóriumok és éttermek. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek alkalmazhatók vizes alapú festékekben tartósítószerként vagy fertõtlenítõ ágensként. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptid vagy készítmény gyógyszerként való alkalmazása is a találmány tárgyát képezi. Továbbá, a találmány szerinti antimikrobiális polipeptid vagy készítmény továbbá alkalmazható mikroorganizmusok például, gombaszervezetek vagy baktériumok, elõnyösen Gram-pozitív baktériumok szabályozására szolgáló vagy azok elleni gyógyszer gyártására. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptid vagy készítmény alkalmazható állatgyógyászati vagy emberi, terápiás vagy megelõzõ ágensként Eszerint, a találmány szerinti antimikrobiális polipeptid vagy készítmény alkalmazható mikrobiális fertõzések, például baktériumok vagy gombák okozta fertõzések, elõnyösen Gram-pozitív baktériumok okozta fertõzések, kezelésére szolgáló állatorvosi vagy humán terápiás vagy megelõzõ ágens elõállítására. Elõnyösen, a mikrobiális fertõzések járhatnak tüdõbetegségekkel, ideértve minden korlátozás nélkül a tuberkulózist, tüdõgyulladást és cisztikus fibrózist; és szexuális úton terjedõ betegségekkel, ideértve minden korlátozás nélkül a gonorreát és a klamidiát. A találmány szerinti készítmény a találmány szerinti antimikrobiális polipeptid hatékony mennyiségét tartalmazza. A leírás szerinti értelemben, a hatékony mennyiség kifejezés a találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek olyan mennyiségét jelenti, amely elegendõ a kérdéses mikroorganizmus szaporodásának gátlására. A találmány tárgyát sebgyógyító készítmények vagy termékek, például kötszerek, orvosi eszközök, például katéterek, illetve korpásodás elleni hajkezelõ termékek, például samponok, is képezik. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek beadhatók mikrobiális fertõzéstõl szenvedõ vagy arra hajlamos gazdának. A specifikus mikroorganizmustól függõen a beadás lehet topikális, helyi vagy szisztemikus, elõnyösen helyi. Általában, a találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek dózisa elegendõ a mikrobiális populáció legalább 0%¹os csökkentéséhez, rendszerint legalább 1 log és feltehetõen 2 vagy több log pusztításhoz. A találmány szerinti vegyületek beadása a mikrobiális populációt, bármilyen mellékhatás minimalizálása mellett csökkentõ dózisban történik. Egyértelmû, hogy a készítmény beszerzése és alkalmazása a felügyelõ orvos utasításai alapján történik. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek különösen alkalmasak Gram-negatív baktériumok, így Pseudomonas aeruginosa és Chlamydia trachomatis, és Gram-pozitív baktériumok, így sztreptokokkuszok például Streptococcus pneumonia, S. uberis, S. hyointestinalis, S. pyogenes és S. agaiactiae és sztafilokokkuszok például, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S. simulans, S. xylosus és S. camosus pusztítására. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptideket tartalmazó készítmények beadhatók mikrobiális tüdõfertõzéstõl, például tüdõgyulladás, vagy mikrobiális sebfertõzéstõl, például baktériumok okozta sebfertõzés, szenvedõ vagy arra hajlamos gazdának. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptideket tartalmazó készítmények beadhatók bõrfertõzéstõl, például szõrtüszõgyulladás, atopikus dermatitis vagy seborrheás dermatitis, szenvedõ vagy arra hajlamos gazdának; a bõrfertõzés elõnyösen bakteriális bõrfertõzés, például olyan, amit a Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes, Pityrosporum ovale vagy Malassezia furfur okoz. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek in vitro készítményekben is alkalmazhatók a mikrobák elpusztítására, különösen olyan esetekben, amikor a hagyományos antibiotikumokból nem kívánunk mennyiségeket bejuttatni, például a találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek hozzáadhatók állati és/vagy emberi élelmiszerkészítményekhez; vagy sejtek in vitro tenyészetéhez adalékként a szövettenyészetben a mikrobák túlszaporodásának megakadályozása céljából. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek pusztító hatására egy adott mikroba fogékonysága in vitro teszteléssel meghatározható (részletesebben lásd kísérletes rész). Jellemzõen, a mikroba tenyészetét az antimikrobiális polipeptid különbözõ koncentrációival kombináljuk a fehérje hatásának kifejtéséhez elegendõ hosszú ideig, rendszerint egy óra és egy nap közötti idõtartamig. Ezután megszámoljuk az életképes mikrobákat, és meghatározzuk a pusztítás mértékét. Fontos mikrobák közé tartoznak minden korlátozás nélkül Gram-negatív baktériumok, például: Citro- 14

15 bacter sp.; Enterobacter sp.; Escherichia sp., például E. coli; Klebsiella sp.; Morganella sp.; Proteus sp.; Providencia sp.; Salmonella sp., például S. typhi, S. typhimurium; Serratia sp.; Shigella sp.; Pseudomonas sp., például P. aeruginosa; Yersinia sp., például Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica; Franciscella sp.; Pasturella sp.; Vibrio sp., például V. cholerae, V. parahemolyticus; Campylobacter sp., például C. jejuni; Haemophilus sp., például H. influenzae, H. ducreyi; Bordetella sp., például B. pertussis, B. bronchiseptica, B. parapertussis; Brucella sp., Neisseria sp., például N. gonorrhoeae, N. meningitidis, stb. Más érdekes baktériumok közé tartoznak a következõk: Legionella sp., például L. pneumophila; Listeria sp., például L. monocytogenes; Mycoplasma sp., például M. hominis, M. pneumoniae; Mycobacterium sp., például M. tuberculosis, M. leprae; Treponema sp., például T. pallidum; Borrelia sp., például B. burgdorferi; Leptospirae sp.; Rickettsia sp., például R. rickettsii, R. typhi; Chlamydia sp., például C. trachomatis, C. pneumoniae, C. psittaci; Helicobacter sp., például H. pylori stb. Érdeklõdésre számottartó, nem bakteriális kórokozók közé tartoznag gomba- és protozoakórokozók, például Plasmodia sp., például P. falciparum, Trypanosoma sp., például T brucei; shistosomák; Entaemoeba sp., Cryptococcus sp., Candida sp., például C. albicans stb. Különbözõ beadási módok alaklmazhatók. A polipeptid-készítmény beadható orálisan, vagy injektálható intravaszkulárisan, szubkután, peritoneálisan, aeroszollal, szembe, hólyagba, topikálisan stb. például, az inhaláció révén történõ beadási eljárások a technikában jól ismertek. A terápiás készítmény adagolása a beadandó speciális antimikrobiális polipeptidtõl, a betegség természetétõl, a beadás gyakoriságától, a beadás módjától, és az ágensnek a gazdából való kitisztulásától, és hasonlóktól függõen széles tartományban változik. A kezdeti dózis lehet nagyobb, amit azután kisebb, fenntartó dózis követ. A dózis beadható nem gyakran, hetente vagy kéthetente, vagy szétosztható kisebb dózisokba és beadható naponta egyszer vagy többször, félhetente stb. egy hatékony dózisszint fenntartása céljából. Sok esetben, az orális beadáshoz nagyobb dózisra van szükség, mint az intravénás beadáshoz. Orális beadáshoz a nagy stabilitás biztosítására az amidkötéseket és az amino¹, illetve karboxiterminálist módosítani lehet, például a karboxiterminálist amidálni lehet. Készítmények A találmány szerinti vegyületek beépíthetõk különféle, terápiás beadásra szánt készítményekbe. Elõnyösebben, a találmány szerinti vegyületek megfelelõ, gyógyászatilag elfogadható hordozókkal vagy hígítókkal kombinálva gyógyászati készítményekké alakíthatók, és szilárd, félszilárd, folyadék- vagy gázkészítményekké például tabletták, kapszulák, porok, szemcsék, kenõcsök, krémek, habok, oldatok, kúpok, injekciók, inhalálók, gélek, mikrogömbök, borogatóvizek és aeroszolok formulázhatók. Mint ilyen, a vegyületek különféle módokon beadhatók, így például orálisan, a szájüregbe, végbélbe, parenterálisan, intraperitoneálisan, intradermálisan, transzdermálisan, intracheálisan stb. Beadás után, a találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek lehetnek szisztemikusak, vagy valamilyen implantátum vagy az aktív dózist az implantáció helyén tartó más formuláció alkalmazásával egy adott helyre lokalizálhatók. A találmány egyik megvalósítási módjában, topikális alkalmazásra szánt formuláció kelátképzõ ágenst tartalmaz, amely csökkenti a kétértékû kationok elõnyösen a kalcium és magnézium hatékony koncentrációját, például, a készítmény részét képezhetik olyan ágensek, mint a citrát, EGTA vagy EDTA, ahol a citrát elõnyös. A citrát koncentrációja rendszerint legalább 1 mm és legfeljebb mm. A találmány szerinti vegyületek beadhatók önmagukban, egymással kombinálva, vagy alkalmazhatók más ismert vegyületekkel (például, perforin, gyulladásgátló ágensek, antibiotikumok stb.) kombinálva. Gyógyászati dózisformákban, a vegyületek beadhatók gyógyászatilag elfogadható sóik formájában. A következõ eljárások és adalék anyagok pusztán illusztrációs célokat szolgálnak és a találmány szerinti megoldást semmiben sem korlátozzák. Orális készítményekhez, a vegyületek alkalmazhatók önmagukban vagy tabletták, porok, szemcsék vagy kapszulák készítésére alkalmas adalék anyagokkal például hagyományos adalék anyagokkal például laktóz, mannitol, kukoricakeményítõ vagy burgonyakeményítõ kötõanyagokkal például kristályos cellulóz, cellulózszármazékok, akácia, kukoricakeményítõ vagy zselatin málasztóanyagokkal például, kukoricakeményítõ, burgonyakeményítõ és nátrium-karboxi-metilcellulóz síkosítóanyagokkal például talkum vagy magnézium-sztearát és ha kívánatos, hígítókkal, pufferelõágensekkel, nedvesítõágensekkel, tartósítószerekkel és ízanyagokkal kombinálva. A vegyületek injektálásra szolgáló készítményekké is formulázhatók vizes vagy nemvizes oldószerekben például, zöldség- vagy valamilyen hasonló olajok, szintetikus alifás gliceridek, magasabb alifás savak észterei vagy propilénglikol való feloldással, szuszpendálással vagy emulgeálással; és ha kívánatos a készítmények tartalmazhatnak hagyományos adalék anyagokat, például szolubilizálókat, izotonikus ágenseket, szuszpendálóágenseket, emulgeálóágenseket, stabilizálókat és tartósítószereket. A vegyületek inhalációval beadható aeroszolkészítményben is alkalmazhatók. A találmány szerinti vegyületek összepréselt, elfogadható hajtóanyagokban például, diklór-difluor-metán, propán, nitrogén, és ilyenek formulázhatók. Hagyományos adalék anyagokkal például, szolubilizálók, izotonikus ágensek, szuszpendálóágensek, emulgeálóágensek, stabilizálók és tartósítószerek kiszerelve a vegyületek alkalmazhatók borogatóvízként, például égést követõ fertõzés megakadályozására. Továbbá, különféle bázisanyagokkal, például emulgeálóbázisokkal vagy vízoldékony bázisokkal összeke- 1

16 verve a vegyületek kúpokká is alakíthatók. A találmány szerinti vegyületek kúpként beadhatók a végbélen át. A kúp tartalmazhat olyan hordozókat, például, kakaóvaj, karbovaxok és polietilénglikolok, amelyek testhõmérsékleten megolvadnak, de szobahõmérsékleten szilárdak. A találmány tárgyát orális vagy rektális beadásra szolgáló egységnyi dózisformák, például szirupok, elixírek, és szuszpenziók képezhetik, ahol minden dózisegység például, teáskanálnyi, evõkanálnyi, tabletta vagy kúp elõre meghatározott mennyiséget tartalmaz a találmány szerinti egy vagy több vegyületet tartalmazó készítménybõl. Hasonlóképpen, injektálásra vagy intravénás beadásra szolgáló egységnyi dózisformák a találmány szerinti vegyületet steril vízben, normális sóoldatban vagy más, gyógyászatilag elfogadható hordozóban oldva tartalmazhatják. A technikában jól ismertek az elhúzódó felszabadulást biztosító implantátumok. Implantátumok biológiailag lebontható vagy biológiailag nem lebontható polimerekkel mikrogömbökké, lapokká stb. vannak formulázva, például tejsav- és/vagy glikolsavpolimerek a gazda által jól tolerált, lebontható polimert képeznek. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptideket tartalmazó implantátumot a fertõzés helyéhez közel helyezzük el, így az aktív ágens helyi koncentrációja megnõ a test többi részéhez képest. A leírás szerinti értelemben, az egységnyi dózisforma kifejezés emberi vagy állati alanyok egységnyi dozírozására alkalmas, fizikailag elkülönült egységeket jelent, ahol minden egység a találmány szerinti vegyület elõre meghatározott, a kívánt hatás kiváltására elégséges mennyiségét és gyógyászatilag elfogadható diluenst, hordozót vagy vivõanyagot tartalmaz. A találmány szerinti egységnyi dózisforma részletes leírása függ a konkrétan alkalmazott vegyülettõl és az elérni kívánt hatástól, illetve a gazdában a vegyülettel kapcsolatos farmakodinamikától. A gyógyászatilag elfogadható kötõanyagok, például vivõanyagok, adjuvánsok, hordozók vagy diluensek, a nyilvánosság számára könnyen elérhetõk. Ezenfelül, gyógyászatilag elfogadható kiegészítõanyagok, például ph¹t beállító és pufferelõ ágensek, az izotonikusság beállítására szolgáló ágensek, stabilizálók, nedvesítõágensek és hasonlók, a nyilvánosság szamára könnyen elérhetõk. Szisztemikus beadásra szolgáló jellemzõ dózisok beadásonként a legalább 0,1 pg és a legfeljebb 0 mg tartományba esnek az alany egy testsúlykilogrammjára számítva. Jellemzõ dózis lehet naponta egyszer hatszor szedendõ egy-egy tabletta, vagy napi egyszer szedendõ, idõbeli felszabadulást biztosító, az aktív összetevõ arányosan nagyobb dózisát tartalmazó kapszula vagy tabletta. Idõbeli felszabadulás esetén, a hatást különbözõ ph¹értékeknél oldódó kapszulaanyaggal, ozmotikus nyomásra lassú felszabadulást biztosító kapszulákkal vagy a szabályozott felszabadulás bármely más módjával lehet elérni. A szakember számára egyértelmû, hogy a dózisszintek a specifikus vegyülettõl, a tünetek súlyosságától és az alany mellékhatásokra való fogékonyságától függõen változhatnak. A specifikus vegyületek némelyike hatékonyabb a többinél. Egy adott vegyület elõnyös dózisait a szakember különféle módokon tudja állapítani. Az elõnyös kifejezés egy adott vegyület fiziológiai hatékonyságának mértékét jelenti. A liposzómák bevivõanyagként való alkalmazása az egyik fontos eljárás. A liposzómák fuzionálnak a célbavett hely sejtjeivel és tartalmukat a sejten belüli térbe szállítják. A liposzómákat a fúzióhoz elegendõ ideig tartjuk érintkezésbe a sejtekkel. Az érintkezés fenntartására különféle eljárások alkalmazhatók, például izolálás, kötõanyagok és hasonlók. A találmány egyik szempontjában, a liposzómák tüdõbe való bevitelre szolgáló aeroszolhoz vannak tervezve. Liposzómák elõállíthatók olyan tisztított fehérjékkel vagy peptidekkel, amelyek közvetítik a membránokkal való fúziót (például, Sendai vírus vagy influenzavírus stb.). A lipidek lehetnek az ismert liposzómaképzõ lipidek például zwitterionos lipidek, például foszfatidil-kolin bármilyen kombinációi. A maradék lipid semleges vagy savas lipid, például koleszterol, foszfatidil-szerin, foszfatidili-glicerin stb. Liposzómák elõállítására az irodalomban leírt eljárás [Kato és munkatársai, J. Biol. Chem. 266, 3361 (1991)] alkalmazható. Röviden, a lipideket és a peptideket tartalmazó lumenkészítményt megfelelõ vizes közegben, kényelmesen sóoldatban, kombináljuk, ahol a teljes szilárdanyag-tartalom körülbelül az 1 súly% tartományba esik. Rövid ideig (körülbelül percig) tartó intenzív keverés után, a csövet meleg (körülbelül 2 C¹os) vízfürdõbe tesszük, és a ciklust körülbelül -szer megismételjük. A készítményt ezután bizonyos ideig általában körülbelül 1 mp¹ig szonikáljuk, majd vortexeléssel tovább keverhetjük. A térfogatot vizes közeg hozzáadásával megnöveljük általában 1 2-szeresére majd rázatjuk és hûtjük, Ez az eljárás lehetõvé teszi a nagy molekulasúlyú molekulák beépülését a lumenbe. Formulázás más aktív ágensekkel A kérdéses eljárásokban való alkalmazáshoz, a találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek más, gyógyászatilag aktív ágensekkel, elõnyösen más antimikrobiális ágensekkel együtt formulázható. További lényeges ágensek közé különféle antibiotikumok tartoznak, a technikában ismertek szerint. Antibiotikumosztályok közé tartoznak a következõk: penicillinek, például penicillin G, penicillin V, meticillin, oxacillin, karbenicillin, nafcillin, ampicillin stb.;penicillinek kombinációi béta-laktamázt gátlókkal, cefalosporinok, mint amilyen a cefaklor, cefazolin, cefuroxim, moxalaktám stb.; karbapenemek; monobaktámok; aminoglikozidok; tetraciklinek; makrolidok; linkomicinek; polimixinek; szulfonamidok; kinolonok; kloramfenikál; metronidazol; spektinomicin; trimetoprin; vankomicin stb. Gombaellenes ágensek, így poliének, például amfotericin B, nisztatin; ¹flukozin; és azolok, például mikonazol, ketokonazol, itrakonazol és flukonazol is alkalmazhatók. Tuberkulózis elleni gyógyszerek közé 16

17 tartozik az izoniazid, etánbutol, sztreptomicin és rifampin. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptideket tartalmazó készítmények tartalmazhatnak citokineket, például gamma-interferont, alfa-tumornekrózis-faktort, interleukin 12¹t stb In vitro szintézis A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidek in vitro szintézissel, a technikában ismert hagyományos eljárásokkal elõállíthatók. Kereskedelmi forgalomban különféle szintetizáló berendezések elérhetõk, például Applied Biosystems Inc., Beckman stb. gyártmányú automata szintetizálók. Természetes körülmények között elõforduló aminosavak szintetizálók alkalmazásával helyettesíthetõk nem természetes aminosavakkal, elõnyösen D¹izomerekkel (vagy D¹formákkal), például D¹alaninnal és D¹izoleucinnal, diasztereomerekkel, különféle hosszúságú vagy mûködésû oldalláncokkal, és hasonlókkal. A konkrét szekvencia és a készítés módja meghatározható a kényelem, gazdaságosság, a szükséges tisztaság stb. szerint. Kötéshez kényelmes funkciós csoportokat például, aminocsoportok amid vagy szubsztituált amin, például reduktív aminálással történõ kialakításához, tiolcsoportok tioéter vagy diszulfid kialakításához, karboxilcsoportok amidképzéshez stb. tartalmazó különféle fehérjék és peptidek kémiai úton összekapcsolhatók. Ha kívánatos, más molekulákhoz vagy valamilyen felszínhez való kötést lehetõvé tevõ különféle csoportok vihetõk be a peptidbe a szintézis vagy expresszió során. A ciszteinek tioéterek készítéséhez, fémionkomplexekhez való kötéshez hisztidinek, amidok vagy észterek kialakításához karboxilcsoportok, amidképzéshez aminocsoportok stb. alkalmazhatók. A polipeptidek a hagyományos rekombináns szintetikus eljárások szerint izolálhatók és tisztíthatók. Az expressziós gazdából lizátum készíthetõ, és a lizátum tisztítható HPLC, kizárásos kromatográfia, gélelektroforézis, affinitáskromatográfia, vagy tisztítási eljárások alkalmazásával. Legnagyobbrészt, az alkalmazott készítmény legalább tömeg%¹ot, gyakrabban legalább körülbelül 7 tömeg%¹ot, elõnyösen legalább körülbelül 9 tömeg%¹ot, és terápiás célokra rendszerint legalább körülbelül 99, tömeg%¹ot tartalmaz a kívánt termékbõl a termék elõállítási és tisztítási eljárásával kapcsolatos szennyezõ anyagokhoz képest. Rendszerint, a százalékban megadott értékek az összfehérjén alapulnak. A találmány a következõ példák révén részletesebb leírásra kerül, ez azonban a találmány oltalmi körét nem korlátozza. Példák Pufferként és szubsztrátumként alkalmazott kémiai anyagok kereskedelmi forgalomban beszerezhetõk és legalább reagens minõségûek voltak. A következõ példákban, a szekvencialistában 2. azonosító számon megadott szekvencia aminosavaiként bemutatott, antimikrobiális peptidet arenicin -nek neveztük el. 1. példa Az arenicin antimikrobiális aktivitása A szekvencialistában 2. azonosító számon megadott szekvencia aminosavaiként bemutatott, antimikrobiális peptid szintetikus úton lett elõállítva. A minimális gátlókoncentrációt [Minimal Inhibitory Concentration (MIC)] az arenicin antimikrobiális aktivitásának az a CLSI-bõl származó (Clinical and Laboratory Standards Institute; korábban National Committee for Clinical and Laboratory Standards néven volt ismert) NCCLS útmutatások szerinti (M7 A6 számú protokol,. köt, No. 2: Aerob úton szaporodó baktériumok antimikrobiális fogékonyságának hígításos tesztjei (Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically) tesztelés céljából határoztuk meg. A találmány szerinti antimikrobiális polipeptidet az American Type Culture Collection (ATCC)-tõl beszerzett12 baktériumtörzs ellen teszteltük. Az 1. táblázatban megadott eredmények két, egymástól függetlenül végzett értékelés átlagos adatai. 1. táblázat Az arenicin antimikrobiális aktivitása Törzs Elérési szám MIC Escherichia coli ATCC ,2 g/ml Escherichia coli ATCC 24 0, g/ml Enterobacter aerogenes ATCC 148 1, g/ml Enterobacter cloacae ATCC 147 1, g/ml Shigella sonnei ATCC 1 0, g/ml Citrobacter freundii ATCC , g/ml Pseudomonas aeruginosa ATCC , g/ml Pseudomonas aeruginosa ATCC , g/ml Stenotrophomonas maltophlila ATCC , g/ml Aeromonas salmonicida ATCC , g/ml Acinetobacter iwoffii ATCC 19 0,2 g/ml Moraxella catarrhalis ATCC 2238 <0,06 g/ml 17

18 2. példa Klinikai gombák elleni minimális gátlókoncentráció Az arenicin élesztõk és gombák elleni minimális gátló koncentrációinak meghatározása lényegében az NCCLS/CLSI (Klinikai és Laboratóriumi Standardok Intézete) által leírtak szerint történt. Összegezve, körülbelül 1 McFarlan egység gombaés élesztõszuszpenziót PD tápoldatban (8 g/l burgonyadextróz) 1:0 arányban hígítottunk és arenicin dupla sorozathígításai (0,03 32 ( g/ml) ellen teszteltük. Vizsgálati lemezeket Candida albicans, Candida tropicalis, Cryptococcus neoformans, Trichophyton mentagrophytes és Epidermophyton floccosum esetében 2 27 C¹on, Candida glabrata, Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae és Aspergillus niger fajoknál pedig C¹on inkubáltunk. A szaporodást vizuálisan (szabad szemmel, ferde világítás mellett) vizsgáltuk körülbelül órás inkubálás után. Az eredményeket az alábbi 2. táblázat mutatja be. 2. táblázat Az arenicin antimikrobiális aktivitása Törzs Elérési szám MIC Candida albicans ATCC g/ml Candida albicans ATCC g/ml Candida albicans ATCC g/ml Candida tropicalis DSM g/ml Candida glabrata DSM g/ml Cryptococcus neoformans DSM g/ml Pichia pastoris ATCC g/ml Pichia pastoris ATCC g/ml Saccharomyces cerevisiae DSM g/ml Aspergillus niger ATCC g/ml Trichophyton mentagrophytes DSM g/ml Szekvencialista <1> Novozymes A/S <1> Polypeptides having antimicrobial activity <1> 86.4 WO <1> 2 <170> PatentIn version 3.3 <2> 1 <211> 8 <212> DNA <213> Arenicola marina <2> <221> CDS <222> (1)..(8) <2> <221> sig_peptide <222> (1)..(72) <2> <221> mat_peptide <222> (496)..(8) <0> 1 atg gga tat tca atg aac atc gcc ctg gtt tac gcc acg gta ctt 4 Met Gly Tyr Ser Met Asn Ile Ala Leu Val Tyr Ala Thr Val Leu att ggt gta ctg cat gtc ggc ggc ata cac tgt aac aac cag ata 90 Ile Gly Val Leu His Val Gly Gly Ile His Cys Asn Asn Gln Ile

19 HU T2 cag gag ttt gat ttg gcg ggc gat aag ttt gtg ata gac gcc gag 13 Gln Glu Phe Asp Leu Ala Gly Asp Lys Phe Val Ile Asp Ala Glu aac aac agg gaa gtc atc caa ctc tcg gac gga gat ctc gaa gga 180 Asn Asn Arg Glu Val Ile Gln Leu Ser Asp Gly Asp Leu Glu Gly tct atc atg gtc atc gac cac gcc aag agt ctg att ggc tgg ttc att 228 Ser Ile Met Val Ile Asp His Ala Lys Ser Leu Ile Gly Trp Phe Ile ccg aac act gat gag tgt tac ctg att ggc ggg gtg gac agg aag ttg 276 Pro Asn Thr Asp Glu Cys Tyr Leu Ile Gly Gly Val Asp Arg Lys Leu ctg gac tcc agg gag ctt ttg gca caa ttt caa gcc gga cag ttt aag 324 Leu Asp Ser Arg Glu Leu Leu Ala Gln Phe Gln Ala Gly Gln Phe Lys 70 6 gaa act gcg gac gag gac gtg gag gac tcg ctg acc tac gtc aag gtc 372 Glu Thr Ala Asp Glu Asp Val Glu Asp Ser Leu Thr Tyr Val Lys Val 0 4 gac gac cgt gag gtc agt gac ctg agt ctg ttg cca aac gag ctt ctg 4 Asp Asp Arg Glu Val Ser Asp Leu Ser Leu Leu Pro Asn Glu Leu Leu 3 gag ccc tgc tcg gga aag gac gtc ttc tgg ctg gag agg aac aac atc 468 Glu Pro Cys Ser Gly Lys Asp Val Phe Trp Leu Glu Arg Asn Asn Ile 2 1 cag aga acg ggc aat cgg cag aag aga ggt ttc tgc tgg tac gtc tgc 16 Gln Arg Thr Gly Asn Arg Gln Lys Arg Gly Phe Cys Trp Tyr Val Cys 1 1 gtc tac agg aac gga gtc cgc gtc tgc tac cga cgg tgc aac 8 Val Tyr Arg Asn Gly Val Arg Val Cys Tyr Arg Arg Cys Asn 1 <2> 2 <211> 186 <212> PRT <213> Arenicola marina <0> 2 Met Gly Tyr Ser Met Asn Ile Ala Leu Val Tyr Ala Thr Val Leu Ile Gly Val Leu His Val Gly Gly Ile His Cys Asn Asn Gln Ile 14 1 Gln Glu Phe Asp Leu Ala Gly Asp Lys Phe Val Ile Asp Ala Glu Asn Asn Arg Glu Val Ile Gln Leu Ser Asp Gly Asp Leu Glu Gly Ser Ile Met Val Ile Asp His Ala Lys Ser Leu Ile Gly Trp Phe Ile

20 Pro Asn Thr Asp Glu Cys Tyr Leu Ile Gly Gly Val Asp Arg Lys Leu Leu Asp Ser Arg Glu Leu Leu Ala Gln Phe Gln Ala Gly Gln Phe Lys 70 6 Glu Thr Ala Asp Glu Asp Val Glu Asp Ser Leu Thr Tyr Val Lys Val 0 4 Asp Asp Arg Glu Val Ser Asp Leu Ser Leu Leu Pro Asn Glu Leu Leu 3 Glu Pro Cys Ser Gly Lys Asp Val Phe Trp Leu Glu Arg Asn Asn Ile 2 1 Gln Arg Thr Gly Asn Arg Gln Lys Arg Gly Phe Cys Trp Tyr Val Cys 1 1 Val Tyr Arg Asn Gly Val Arg Val Cys Tyr Arg Arg Cys Asn 1 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Antimikrobiális aktivitású polipeptid, amely a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaival legalább 70%-ban azonos aminosavszekvenciát tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, ahol az aminosavszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaival legalább 7%-ban azonos. 3. Az 1 2. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid, ahol az aminosavszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaival legalább 80%- ban azonos. 4. Az 1 3. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid, ahol az aminosavszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaival legalább 8%- ban azonos.. Az 1 4. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid, ahol az aminosavszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaival legalább 90%- ban azonos. 6. Az 1. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid, ahol az aminosavszekvencia a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaival legalább 9%- ban azonos. 7. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, amely tartalmazza a SEQ ID NO:2 szerinti aminosavszekvenciát. 8. A 7. igénypont szerinti polipeptid, amely a SEQ ID NO:2 szerinti szekvenciából áll. 9. A 7. igénypont szerinti polipeptid, amely a SEQ ID NO:2 szerinti szekvencia aminosavaiból áll.. Izolált polinukleotid, amely az 1 9. igénypontok bármelyike szerinti polipeptidet kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz Nukleinsavkonstrukció, amely a. igénypont szerinti polinukleotidot tartalmaz, adott expressziós gazdában a polipeptid termelését irányító egy vagy több szabályozószekvenciához mûködõképesen kapcsoltan. 12. Rekombináns expressziós vektor, amely a 11. igénypont szerinti nukleinsavkonstrukciót tartalmaz. 13. Rekombináns gazdasejt, amely a 11. igénypont szerinti nukleinsavkonstrukciót tartalmaz. 14. Eljárás az 1 9. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid elõállítására, amely magában foglalja (a) vad típusú formájában a polipeptidet elõállítani képes sejt tenyésztését, vagy a polipeptidet kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó nukleinsavkonstrukciót tartalmazó gazdasejt tenyésztését a polipeptid elõállítására alkalmas körülmények között; és (b) a polipeptid kinyerését. 1. Készítmény, amely az 1 9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott antimikrobiális polipeptidet és gyógyászatilag elfogadható vivõanyagot tartalmaz. 16. In vitro eljárás mikrobiális sejtek elpusztítására vagy szaporodásuk gátlására, amely magában foglalja a mikrobiális sejtek érintkeztetését az 1 9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott antimikrobiális polipeptiddel. 17. Az 1 9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott antimikrobiális polipeptid gyógyszerként történõ alkalmazásra. 18. Az 1 9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott antimikrobiális polipeptid alkalmazása mikrobiális fertõzés kezelésére szolgáló, állatgyógyászati vagy humán terápiás ágens elõállítására. Kiadja a Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala, Budapest Felelõs vezetõ: Szabó Richárd osztályvezetõ Windor Bt., Budapest

Fehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia

Fehérje expressziós rendszerek. Gyógyszerészi Biotechnológia Fehérje expressziós rendszerek Gyógyszerészi Biotechnológia Expressziós rendszerek Cél: rekombináns fehérjék előállítása nagy tisztaságban és nagy mennyiségben kísérleti ill. gyakorlati (therapia) felhasználásokra

Részletesebben

Klónozás: tökéletesen egyforma szervezetek csoportjának előállítása, vagyis több genetikailag azonos egyed létrehozása.

Klónozás: tökéletesen egyforma szervezetek csoportjának előállítása, vagyis több genetikailag azonos egyed létrehozása. Növények klónozása Klónozás Klónozás: tökéletesen egyforma szervezetek csoportjának előállítása, vagyis több genetikailag azonos egyed létrehozása. Görög szó: klon, jelentése: gally, hajtás, vessző. Ami

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 370 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 370 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008370T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 370 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 750224 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 952 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 952 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000792T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 92 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 73892 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 751 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 751 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007751T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 751 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 810619 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 257 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 257 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000827T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 27 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 727848 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 472 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 472 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006472T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 472 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 788982 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 557 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 557 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 7 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 026690 (22) A bejelentés napja: 03.

Részletesebben

transzláció DNS RNS Fehérje A fehérjék jelenléte nélkülözhetetlen minden sejt számára: enzimek, szerkezeti fehérjék, transzportfehérjék

transzláció DNS RNS Fehérje A fehérjék jelenléte nélkülözhetetlen minden sejt számára: enzimek, szerkezeti fehérjék, transzportfehérjék Transzláció A molekuláris biológia centrális dogmája transzkripció transzláció DNS RNS Fehérje replikáció Reverz transzkriptáz A fehérjék jelenléte nélkülözhetetlen minden sejt számára: enzimek, szerkezeti

Részletesebben

TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301)

TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301) Biokémia és molekuláris biológia I. kurzus (bb5t1301) Tematika 1 TEMATIKA Biokémia és molekuláris biológia IB kurzus (bb5t1301) 0. Bevezető A (a biokémiáról) (~40 perc: 1. heti előadás) A BIOkémia tárgya

Részletesebben

IPARI ENZIMEK 2. Proteázok. Alkalikus proteázok. Pécs Miklós: Biotermék technológia 1. 6. fejezet: Ipari enzimek 2.

IPARI ENZIMEK 2. Proteázok. Alkalikus proteázok. Pécs Miklós: Biotermék technológia 1. 6. fejezet: Ipari enzimek 2. IPARI ENZIMEK 2 Proteázok A proteázok az ipari enzimek egyik legfontosabb csoportja (6200 t tiszta E/év) Peptid kötéseket bont (létrehoz) (hidrolízis, szintézis) Fehérje lebontás: élelmiszer, tejalvadás,

Részletesebben

Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén

Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén Dr. Dallmann Klára A molekuláris biológia célja az élőlények és sejtek működésének molekuláris szintű

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 015 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 015 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008015T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 015 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 778847 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 532 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 532 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000832T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 32 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 783231 (22) A bejelentés

Részletesebben

A sejtek élete. 5. Robotoló törpék és óriások Az aminosavak és fehérjék R C NH 2. C COOH 5.1. A fehérjeépítőaminosavak általános

A sejtek élete. 5. Robotoló törpék és óriások Az aminosavak és fehérjék R C NH 2. C COOH 5.1. A fehérjeépítőaminosavak általános A sejtek élete 5. Robotoló törpék és óriások Az aminosavak és fehérjék e csak nézd! Milyen protonátmenetes reakcióra képes egy aminosav? R 2 5.1. A fehérjeépítőaminosavak általános képlete 5.2. A legegyszerűbb

Részletesebben

A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének

A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének A növény inváziójában szerepet játszó bakteriális gének merisztéma korai szimbiotikus zóna késői szimbiotikus zóna öregedési zóna gyökér keresztmetszet NODULÁCIÓ növényi jel Rhizobium meliloti rhizobium

Részletesebben

MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI AZ AMINOSAVAK ÉS FEHÉRJÉK 1. kulcsszó cím: Aminosavak

MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI AZ AMINOSAVAK ÉS FEHÉRJÉK 1. kulcsszó cím: Aminosavak Modul cím: MEDICINÁLIS ALAPISMERETEK AZ ÉLŐ SZERVEZETEK KÉMIAI ÉPÍTŐKÖVEI AZ AMINOSAVAK ÉS FEHÉRJÉK 1. kulcsszó cím: Aminosavak Egy átlagos emberben 10-12 kg fehérje van, mely elsősorban a vázizomban található.

Részletesebben

GÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ

GÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ GÉNKLÓNOZÁS ÉS GÉNMANIPULÁCIÓ Génklónozás Bármilyen klónozási eljárás célja, hogy egy ún. klónt, azaz tökéletesen egyforma szervezetek csoportját állítsák elő. Néhány növény, egyszerűen dugványozással

Részletesebben

A preventív vakcináció lényege :

A preventív vakcináció lényege : Vakcináció Célja: antigénspecifkus immunválasz kiváltása a szervezetben A vakcina egy olyan készítmény, amely fokozza az immunitást egy adott betegséggel szemben (aktiválja az immunrendszert). A preventív

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 949 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 949 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007949T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 949 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 835738 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A molekuláris biológia eszközei

A molekuláris biológia eszközei A molekuláris biológia eszközei I. Nukleinsavak az élő szervezetekben Reverz transzkripció replikáció transzkripció transzláció DNS DNS RNS Fehérje DNS feladata: információ tárolása és a transzkripció

Részletesebben

A PENICILLIUM CHRYSOGENUM LAKTÓZ HASZNOSÍTÁSÁNAK VIZSGÁLATA

A PENICILLIUM CHRYSOGENUM LAKTÓZ HASZNOSÍTÁSÁNAK VIZSGÁLATA EGYETEMI DOKTORI (PH.D.) ÉRTEKEZÉS TÉZISEI A PENICILLIUM CHRYSOGENUM LAKTÓZ HASZNOSÍTÁSÁNAK VIZSGÁLATA Nagy Zoltán Témavezet : Dr. Biró Sándor Debreceni Egyetem Mikrobiológiai és Biotechnológiai Tanszék

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 780 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 780 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003780T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 780 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 701 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

I. A sejttől a génekig

I. A sejttől a génekig Gén A gének olyan nukleinsav-szakaszok a sejtek magjainak kromoszómáiban, melyek a szervezet működését és növekedését befolyásoló fehérjék szabályozásához és előállításához szükséges információkat tartalmazzák.

Részletesebben

avagy az ipari alkalmazhatóság kérdése biotechnológiai tárgyú szabadalmi bejelentéseknél Dr. Győrffy Béla, Egis Nyrt., Budapest

avagy az ipari alkalmazhatóság kérdése biotechnológiai tárgyú szabadalmi bejelentéseknél Dr. Győrffy Béla, Egis Nyrt., Budapest Iparilag alkalmazható szekvenciák, avagy az ipari alkalmazhatóság kérdése biotechnológiai tárgyú szabadalmi bejelentéseknél Dr. Győrffy Béla, Egis Nyrt., Budapest Neutrokin α - jelentős kereskedelmi érdekek

Részletesebben

IPARI ENZIMEK. 1. Az enzimek használatának története

IPARI ENZIMEK. 1. Az enzimek használatának története IPARI ENZIMEK 1. Az enzimek használatának története Az enzimek a biológiai anyagok, biológiai makromolekulák, amelyeket élő szervezetek állítanak elő, és amelyek egy meghatározott biokémiai reakció katalizátoraként

Részletesebben

ENZIMEK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA

ENZIMEK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 ENZIMEK BIOTECHNOLÓGIAI

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007147T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 147 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 007068 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

13. RNS szintézis és splicing

13. RNS szintézis és splicing 13. RNS szintézis és splicing 1 Visszatekintés: Az RNS típusai és szerkezete Hírvivő RNS = mrns (messenger RNA = mrna) : fehérjeszintézis pre-mrns érett mrns (intronok kivágódnak = splicing) Transzfer

Részletesebben

Kis molekulatömegű antimikrobiális fehérjék és kódoló génjeik vizsgálata

Kis molekulatömegű antimikrobiális fehérjék és kódoló génjeik vizsgálata A dolgozat témaköréhez kapcsolódó közlemények DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI 1. Galgóczy, L., Papp, T., Pócsi, I., Leiter, É., Marx, F., Papp, T. and Vágvölgyi, Cs. (2005) Sensitivity of different Zygomycetes

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 384 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 384 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007384T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 384 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 757801 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

NUKLEINSAVAK. Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag

NUKLEINSAVAK. Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag NUKLEINSAVAK Nukleinsav: az élő szervezetek sejtmagvában és a citoplazmában található, az átöröklésben szerepet játszó, nagy molekulájú anyag RNS = Ribonukleinsav DNS = Dezoxi-ribonukleinsav A nukleinsavak

Részletesebben

A szamóca érése során izolált Spiral és Spermidin-szintáz gén jellemzése. Kiss Erzsébet Kovács László

A szamóca érése során izolált Spiral és Spermidin-szintáz gén jellemzése. Kiss Erzsébet Kovács László A szamóca érése során izolált Spiral és Spermidin-szintáz gén jellemzése Kiss Erzsébet Kovács László Bevezetés Nagy gazdasági gi jelentıségük k miatt a gyümölcs lcsök, termések fejlıdésének mechanizmusát

Részletesebben

Génszerkezet és génfunkció

Génszerkezet és génfunkció Általános és Orvosi Genetika jegyzet 4. fejezetének bővítése a bakteriális genetikával 4. fejezet Génszerkezet és génfunkció 1/ Bakteriális genetika Nem szükséges külön hangsúlyoznunk a baktériumok és

Részletesebben

In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van.

In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van. In Situ Hibridizáció a pathologiai diagnosztikában és ami mögötte van. Kneif Józsefné PTE KK Pathologiai Intézet Budapest 2017. 05. 26 Kromoszóma rendellenesség kimutatás PCR technika: izolált nukleinsavak

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 625 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 625 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000076T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 6 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 79689 (22) A bejelentés napja: 0.

Részletesebben

3. Sejtalkotó molekulák III. Fehérjék, enzimműködés, fehérjeszintézis (transzkripció, transzláció, poszt szintetikus módosítások)

3. Sejtalkotó molekulák III. Fehérjék, enzimműködés, fehérjeszintézis (transzkripció, transzláció, poszt szintetikus módosítások) 3. Sejtalkotó molekulák III. Fehérjék, enzimműködés, fehérjeszintézis (transzkripció, transzláció, poszt szintetikus módosítások) 3.1 Fehérjék, enzimek A genetikai információ egyik fő manifesztálódása

Részletesebben

2012.5.30. Az Európai Unió Hivatalos Lapja L 140/55

2012.5.30. Az Európai Unió Hivatalos Lapja L 140/55 2012.5.30. Az Európai Unió Hivatalos Lapja L 140/55 A BIZOTTSÁG 451/2012/EU VÉGREHAJTÁSI RENDELETE (2012. május 29.) a szilázs-adalékanyagok funkcionális csoportba tartozó egyes élelmiszer-adalékanyagoknak

Részletesebben

IPARI ENZIMEK IPARI ENZIMEK ENZIMEK ALKALMAZÁSAI MEGOSZLÁS IPARÁGAK SZERINT IPARI ENZIMEK PIACA IPARI ENZIMEK FORRÁSAI

IPARI ENZIMEK IPARI ENZIMEK ENZIMEK ALKALMAZÁSAI MEGOSZLÁS IPARÁGAK SZERINT IPARI ENZIMEK PIACA IPARI ENZIMEK FORRÁSAI IPARI ENZIMEK Történelem, mérföldkövek Ősrégi: borjúgyomor tejalvasztó enzim, rennin maláta keményítőbontó enzimek, amilázok 1836 Schwann: pepszin a gyomornedvből (triviális név) 1876 Kühne: enzim elnevezés

Részletesebben

Bakteriális identifikáció 16S rrns gén szekvencia alapján

Bakteriális identifikáció 16S rrns gén szekvencia alapján Bakteriális identifikáció 16S rrns gén szekvencia alapján MOHR ANITA SIPOS RITA, SZÁNTÓ-EGÉSZ RÉKA, MICSINAI ADRIENN 2100 Gödöllő, Szent-Györgyi Albert út 4. info@biomi.hu, www.biomi.hu TÖRZS AZONOSÍTÁS

Részletesebben

A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben

A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben A genetikai lelet értelmezése monogénes betegségekben Tory Kálmán Semmelweis Egyetem, I. sz. Gyermekklinika A ~20 ezer fehérje-kódoló gén a 23 pár kromoszómán A kromoszómán található bázisok száma: 250M

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 003 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 003 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007003T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 003 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 7882 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

DNS replikáció. DNS RNS Polipeptid Amino terminus. Karboxi terminus. Templát szál

DNS replikáció. DNS RNS Polipeptid Amino terminus. Karboxi terminus. Templát szál DNS replikáció DNS RNS Polipeptid Amino terminus Templát szál Karboxi terminus Szuper-csavarodott prokarióta cirkuláris DNS Hisztonok komplexe DNS hisztonokra történő felcsvarodása Hiszton-kötött negatív

Részletesebben

Molekuláris biológus M.Sc. Prokarióták élettana

Molekuláris biológus M.Sc. Prokarióták élettana Molekuláris biológus M.Sc. Prokarióták élettana Bakteriális DNS replikáció. A génexpresszió szabályozása prokariótákban. Plazmidok, baktériumok transzformálása. A prokarióta genom nukleoid egyetlen cirkuláris

Részletesebben

RNS-ek. 1. Az ősi RNS Világ: - az élet hajnalán. 2. Egy már ismert RNS Világ: - a fehérjeszintézis ben résztvevő RNS-ek

RNS-ek. 1. Az ősi RNS Világ: - az élet hajnalán. 2. Egy már ismert RNS Világ: - a fehérjeszintézis ben résztvevő RNS-ek RNS-ek RNS-ek 1. Az ősi RNS Világ: - az élet hajnalán 2. Egy már ismert RNS Világ: - a fehérjeszintézis ben résztvevő RNS-ek 3. Egy újonnan felfedezett RNS Világ: - szabályozó RNS-ek 4. Transzkripció Ősi

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 815 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 815 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000781T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 81 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 024638 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A T sejt receptor (TCR) heterodimer

A T sejt receptor (TCR) heterodimer Immunbiológia - II A T sejt receptor (TCR) heterodimer 1 kötőhely lánc lánc 14. kromoszóma 7. kromoszóma V V C C EXTRACELLULÁRIS TÉR SEJTMEMBRÁN CITOSZÓL lánc: VJ régió lánc: VDJ régió Nincs szomatikus

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 405 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 405 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 77970 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 213 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A01C 7/04 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 003 213 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A01C 7/04 (2006.01) !HU000003213T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 213 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 005442 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 499 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 499 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006499T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 499 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 78626 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A replikáció mechanizmusa

A replikáció mechanizmusa Az öröklődés molekuláris alapjai A DNS megkettőződése, a replikáció Szerk.: Vizkievicz András A DNS-molekula az élőlények örökítő anyaga, kódolt formában tartalmazza mindazon információkat, amelyek a sejt,

Részletesebben

5. Molekuláris biológiai technikák

5. Molekuláris biológiai technikák 5. Molekuláris biológiai technikák DNS szaporítás kémcsőben és élőben. Klónozás, PCR, cdna, RT-PCR, realtime-rt-pcr, Northern-, Southernblotting, génexpresszió, FISH 5. Molekuláris szintű biológiai technikák

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 263 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 263 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004263T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 263 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 70014 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 080 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 080 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000080T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 080 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 790932 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

Biológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek

Biológus MSc. Molekuláris biológiai alapismeretek Biológus MSc Molekuláris biológiai alapismeretek A nukleotidok építőkövei A nukleotidok szerkezete Nukleotid = N-tartalmú szerves bázis + pentóz + foszfát N-glikozidos kötés 5 1 4 2 3 (Foszfát)észter-kötés

Részletesebben

III/3. Gének átvitele vektorokkal

III/3. Gének átvitele vektorokkal III/3. Gének átvitele vektorokkal Vektor: (molekuláris) biológiai rendszer, amely képes új/idegen genetikai információt bejuttatni egy sejtbe. Független szaporodásra képes. Fajtái: Plazmidok (1-10 kb)

Részletesebben

Poligénes v. kantitatív öröklődés

Poligénes v. kantitatív öröklődés 1. Öröklődés komplexebb sajátosságai 2. Öröklődés molekuláris alapja Poligénes v. kantitatív öröklődés Azok a tulajdonságokat amelyek mértékegységgel nem, vagy csak nehezen mérhetők, kialakulásuk kevéssé

Részletesebben

DNS-szekvencia meghatározás

DNS-szekvencia meghatározás DNS-szekvencia meghatározás Gilbert 1980 (1958) Sanger 3-1 A DNS-polimerázok jellemzői 5'-3' polimeráz aktivitás 5'-3' exonukleáz 3'-5' exonukleáz aktivitás Az új szál szintéziséhez kell: templát DNS primer

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 467 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 467 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006467T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 467 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 767909 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI

A BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI A BIOTECHNOLÓGIA TERMÉSZETTUDOMÁNYI ALAPJAI Műszaki menedzser MSc hallgatók számára Előadó: 2 + 0 + 0 óra, félévközi számonkérés 3 ZH: március 06?, április 10?, május 02?. dr. Pécs Miklós egyetemi docens

Részletesebben

Genomadatbázisok Ld. Entrez Genome: Összes ismert genom, hierarchikus szervezésben (kromoszóma, térképek, gének, stb.)

Genomadatbázisok Ld. Entrez Genome: Összes ismert genom, hierarchikus szervezésben (kromoszóma, térképek, gének, stb.) Genomika Új korszak, paradigmaváltás, forradalom: a teljes genomok ismeretében a biológia adatokban gazdag tudománnyá válik. Új kutatási módszerek, új szemlélet. Hajtóerõk: Genomszekvenálási projektek

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008262T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 262 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 725251 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

Kromoszómák, Gének centromer

Kromoszómák, Gének centromer Kromoszómák, Gének A kromoszóma egy hosszú DNS szakasz, amely a sejt életének bizonyos szakaszában (a sejtosztódás előkészítéseként) tömörödik, így fénymikroszkóppal láthatóvá válik. A kromoszómák két

Részletesebben

(1) A T sejtek aktiválása (2) Az ön reaktív T sejtek toleranciája. α lánc. β lánc. V α. V β. C β. C α.

(1) A T sejtek aktiválása (2) Az ön reaktív T sejtek toleranciája. α lánc. β lánc. V α. V β. C β. C α. Immunbiológia II A T sejt receptor () heterodimer α lánc kötőhely β lánc 14. kromoszóma 7. kromoszóma 1 V α V β C α C β EXTRACELLULÁRIS TÉR SEJTMEMBRÁN CITOSZÓL αlánc: VJ régió β lánc: VDJ régió Nincs

Részletesebben

3. Aminosavak gyártása

3. Aminosavak gyártása 3. Aminosavak gyártása Előállításuk Fehérje-hidrolizátumokból: cisztein, leucin, aszparaginsav, tirozin, glutaminsav Kémiai szintézissel: metionin, glicin, alanin, triptofán (reszolválás szükséges) Biotechnológiai

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004045T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 045 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 770559 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban

A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban A humán tripszinogén 4 expressziója és eloszlási mintázata az emberi agyban Doktori (PhD) értekezés Siklódi Erika Rozália Biológia Doktori Iskola Iskolavezető: Prof. Erdei Anna, tanszékvezető egyetemi

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 814 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 814 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007814T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 814 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 719993 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

EGYSEJTŰ REAKTOROK BIOKATALÍZIS:

EGYSEJTŰ REAKTOROK BIOKATALÍZIS: EGYSEJTŰ REAKTOROK BIOKATALÍZIS: A GÉNMÓDOSÍTÁSTÓL AZ IPARI FERMENTÁCIÓIG SZAMECZ BÉLA BIOKATALÍZIS - DEFINÍCIÓ szerves vegyületek átalakítása biológiai rendszer a katalizátor Enzim: élő sejt vagy tisztított

Részletesebben

NANOTECHNOLOGIA 6. előadás

NANOTECHNOLOGIA 6. előadás NANOTECHNOLOGIA 6. előadás A plazmid: Ha meg akarjuk ismerni egy fehérje működését, akkor sokat kell belőle előállítanunk. Ezt akár úgy is megtehetjük, hogy a kívánt géndarabot egy baktérumba ültetjük

Részletesebben

Bioinformatika előadás

Bioinformatika előadás 10. előadás Prof. Poppe László BME Szerves Kémia és Technológia Tsz. Bioinformatika proteomika Előadás és gyakorlat Genomika vs. proteomika A genomika módszereivel nem a tényleges fehérjéket vizsgáljuk,

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 570 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 570 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000070T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 70 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 80947 (22) A bejelentés napja: 2006.

Részletesebben

Szerkesztette: Vizkievicz András

Szerkesztette: Vizkievicz András Fehérjék A fehérjék - proteinek - az élő szervezetek számára a legfontosabb vegyületek. Az élet bármilyen megnyilvánulási formája fehérjékkel kapcsolatos. A sejtek szárazanyagának minimum 50 %-át adják.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 537 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 537 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000637T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 37 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 708911 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

TÉMAKÖRÖK. Ősi RNS világ BEVEZETÉS. RNS-ek tradicionális szerepben

TÉMAKÖRÖK. Ősi RNS világ BEVEZETÉS. RNS-ek tradicionális szerepben esirna mirtron BEVEZETÉS TÉMAKÖRÖK Ősi RNS világ RNS-ek tradicionális szerepben bevezetés BIOLÓGIAI MOLEKULÁK FEHÉRJÉK NUKLEINSAVAK DNS-ek RNS-ek BIOLÓGIAI MOLEKULÁK FEHÉRJÉK NUKLEINSAVAK DNS-ek RNS-ek

Részletesebben

INFORMATIKA EMELT SZINT%

INFORMATIKA EMELT SZINT% Szövegszerkesztés, prezentáció, grafika, weblapkészítés 1. A fényképezés története Táblázatkezelés 2. Maradékos összeadás Adatbázis-kezelés 3. Érettségi Algoritmizálás, adatmodellezés 4. Fehérje Maximális

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 217 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 217 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000217T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 217 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 777132 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

IPARI MIKROORGANIZMUSOK ALKALMAZÁSA ÉS TÖRZSJAVÍTÁSUK DR. MARÁZ ANNA E. TANÁR BUDAPESTI CORVINUS EGYETEM, MIKROBIOLÓGIA ÉS BIOTECHNOLÓGIA TANSZÉK

IPARI MIKROORGANIZMUSOK ALKALMAZÁSA ÉS TÖRZSJAVÍTÁSUK DR. MARÁZ ANNA E. TANÁR BUDAPESTI CORVINUS EGYETEM, MIKROBIOLÓGIA ÉS BIOTECHNOLÓGIA TANSZÉK IPARI MIKROORGANIZMUSOK ALKALMAZÁSA ÉS TÖRZSJAVÍTÁSUK DR. MARÁZ ANNA E. TANÁR BUDAPESTI CORVINUS EGYETEM, MIKROBIOLÓGIA ÉS BIOTECHNOLÓGIA TANSZÉK 2004/2005. TANÉV ÚJ HATÓANYAGOT TERMELŐ MIKRÓBATÖRZS ÉS

Részletesebben

DER (Felületén riboszómák találhatók) Feladata a biológiai fehérjeszintézis Riboszómák. Az endoplazmatikus membránrendszer. A kódszótár.

DER (Felületén riboszómák találhatók) Feladata a biológiai fehérjeszintézis Riboszómák. Az endoplazmatikus membránrendszer. A kódszótár. Az endoplazmatikus membránrendszer Részei: DER /durva (szemcsés) endoplazmatikus retikulum/ SER /sima felszínű endoplazmatikus retikulum/ Golgi készülék Lizoszómák Peroxiszómák Szekréciós granulumok (váladékszemcsék)

Részletesebben

Juhász Angéla MTA ATK MI Alkalmazott Genomikai Osztály SZEKVENCIA ADATBÁZISOK

Juhász Angéla MTA ATK MI Alkalmazott Genomikai Osztály SZEKVENCIA ADATBÁZISOK Juhász Angéla MTA ATK MI Alkalmazott Genomikai Osztály SZEKVENCIA ADATBÁZISOK Fehérjét kódol? Tulajdonságai? -Hol lokalizálódik? -Oldható? -3D szerkezete? -Accession #? -Annotációja elérhető? Már benne

Részletesebben

AZ IS30 BAKTERIÁLIS INSZERCIÓS ELEM CÉLSZEKVENCIA VÁLASZTÁSÁNAK MOLEKULÁRIS TÉNYEZŐI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI SZABÓ MÓNIKA

AZ IS30 BAKTERIÁLIS INSZERCIÓS ELEM CÉLSZEKVENCIA VÁLASZTÁSÁNAK MOLEKULÁRIS TÉNYEZŐI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI SZABÓ MÓNIKA AZ IS30 BAKTERIÁLIS INSZERCIÓS ELEM CÉLSZEKVENCIA VÁLASZTÁSÁNAK MOLEKULÁRIS TÉNYEZŐI DOKTORI ÉRTEKEZÉS TÉZISEI SZABÓ MÓNIKA Gödöllő 2007. 1 A Doktori Iskola megnevezése: Szent István Egyetem Biológia Tudományi

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 549 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 549 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000649T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 49 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 76718 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

ADATBÁNYÁSZAT I. ÉS OMICS

ADATBÁNYÁSZAT I. ÉS OMICS Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 ADATBÁNYÁSZAT

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 115 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 115 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000011T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 11 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 21 (22) A bejelentés napja: 0. 06.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 868 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 868 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003868T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 868 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 73619 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 900 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 900 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006900T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 900 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 737113 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

Aminosavak általános képlete NH 2. Csoportosítás: R oldallánc szerkezete alapján: Semleges. Esszenciális aminosavak

Aminosavak általános képlete NH 2. Csoportosítás: R oldallánc szerkezete alapján: Semleges. Esszenciális aminosavak Aminosavak 1 Aminosavak általános képlete N 2 soportosítás: oldallánc szerkezete alapján: Apoláris Poláris Bázikus Savas Semleges Esszenciális aminosavak 2 (apoláris) Glicin Név Gly 3 Alanin Ala 3 3 Valin

Részletesebben

Zsírsav szintézis. Az acetil-coa aktivációja: Acetil-CoA + CO + ATP = Malonil-CoA + ADP + P. 2 i

Zsírsav szintézis. Az acetil-coa aktivációja: Acetil-CoA + CO + ATP = Malonil-CoA + ADP + P. 2 i Zsírsav szintézis Az acetil-coa aktivációja: Acetil-CoA + CO + ATP = Malonil-CoA + ADP + P 2 i A zsírsav szintáz reakciói Acetil-CoA + 7 Malonil-CoA + 14 NADPH + 14 H = Palmitát + 8 CoA-SH + 7 CO 2 + 7

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 802 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 802 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007802T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 802 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 79176 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 418 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 418 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000005418T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 005 418 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 743779 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 866 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 866 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007866T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 866 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 73966 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

Táplálkozási ismeretek. Fehérjék. fehérjéinek és egyéb. amelyeket

Táplálkozási ismeretek. Fehérjék. fehérjéinek és egyéb. amelyeket Táplálkozási ismeretek haladóknak I. Az előző három fejezetben megismerkedtünk az alapokkal (táplálék-piramis, alapanyag-csere, napi energiaszükséglet, tápanyagok energiatartalma, naponta szükséges fehérje,

Részletesebben

Kereskedelmi forgalomban lévő rekombináns gyógyszerkészítmények

Kereskedelmi forgalomban lévő rekombináns gyógyszerkészítmények Kereskedelmi forgalomban lévő rekombináns gyógyszerkészítmények Írta: Barta Zsolt Biomérnök hallgató 2007 Tartalomjegyzék 1 Rekombináns inzulin [1]... 3 2 A humán növekedési hormon rekombináns módon történő

Részletesebben

C. MEMBRÁNFUNKCIÓT GÁTLÓ ANTIBIOTIKUMOK I. POLIÉNEK (GOMBAELLENES ANTIBIOTIKUMOK) Közös tulajdonságok. Az antifungális hatás összehasonlítása

C. MEMBRÁNFUNKCIÓT GÁTLÓ ANTIBIOTIKUMOK I. POLIÉNEK (GOMBAELLENES ANTIBIOTIKUMOK) Közös tulajdonságok. Az antifungális hatás összehasonlítása C. MEMBRÁNFUNKCIÓT GÁTLÓ ANTIBIOTIKUMOK I. POLIÉNEK (GOMBAELLENES ANTIBIOTIKUMOK) KÖZÖS TULAJDONSÁGOK: - nagy laktongyűrű (26-38 tagú), - konjugált kettős kötések (3-7 db.), - aminocukrok (pl. mikózamin),

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 612 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 612 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008612T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 612 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 76412 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 730 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 730 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000005730T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 005 730 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 741052 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

12/4/2014. Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció. 1952 Hershey & Chase 1953!!!

12/4/2014. Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció. 1952 Hershey & Chase 1953!!! Genetika 7-8 ea. DNS szerkezete, replikáció és a rekombináció 1859 1865 1869 1952 Hershey & Chase 1953!!! 1879 1903 1951 1950 1944 1928 1911 1 1. DNS szerkezete Mi az örökítő anyag? Friedrich Miescher

Részletesebben

Antiszenz hatás és RNS interferencia (a génexpresszió befolyásolásának régi és legújabb lehetőségei)

Antiszenz hatás és RNS interferencia (a génexpresszió befolyásolásának régi és legújabb lehetőségei) Antiszenz hatás és RNS interferencia (a génexpresszió befolyásolásának régi és legújabb lehetőségei) Az antiszenz elv története Reverz transzkripció replikáció transzkripció transzláció DNS DNS RNS Fehérje

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 597 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 597 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004597T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 597 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 716248 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 803 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 803 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007803T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 803 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 706613 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben