(11) Lajstromszám: E (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

Méret: px
Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "(11) Lajstromszám: E 007 751 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA"

Átírás

1 !HU T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E (22) A bejelentés napja: (96) Az európai bejelentés bejelentési száma: EP (97) Az európai bejelentés közzétételi adatai: EP A (97) Az európai szabadalom megadásának meghirdetési adatai: EP B (51) Int. Cl.: C12N 15/37 ( ) A61K 39/12 ( ) A61K 48/00 ( ) C12N 15/81 ( ) C07K 14/025 ( ) (87) A nemzetközi közzétételi adatok: WO PCT/US 04/ (30) Elsõbbségi adatok: P US (72) Feltalálók: BRYAN, Janine, T., Rahway, New Jersey (US); BROWNLOW, Michelle, K., Rahway, New Jersey (US); SCHULTZ, Loren, D., Rahway, New Jersey (US); WANG, Xin-Min, Rahway, New Jersey (US); JANSEN, Kathrin, U., Rahway, New Jersey (US) (73) Jogosult: MERCK SHARP & DOHME CORP., Rahway, New Jersey (US) (74) Képviselõ: dr. Svingor Ádám, DANUBIA Szabadalmi és Jogi Iroda KFt., Budapest (54) HPV58 L1 optimalizált expressziója élesztõben HU T2 A leírás terjedelme 22 oldal (ezen belül 6 lap ábra) Az európai szabadalom ellen, megadásának az Európai Szabadalmi Közlönyben való meghirdetésétõl számított kilenc hónapon belül, felszólalást lehet benyújtani az Európai Szabadalmi Hivatalnál. (Európai Szabadalmi Egyezmény 99. cikk (1)) A fordítást a szabadalmas az évi XXXIII. törvény 84/H. -a szerint nyújtotta be. A fordítás tartalmi helyességét a Magyar Szabadalmi Hivatal nem vizsgálta.

2 1 HU T2 2 A találmány tárgyát képezi általánosságban humán eredetû papillomavírus ( human papillomavirus, HPV) fertõzés megelõzése és/vagy terápiája. Közelebbrõl, a találmány tárgyát képezik HPV58 L1 proteint kódoló, szintetikus polinukleotidok és ilyen polinukleotidokat tartalmazó rekombináns vektorok és gazdák. A találmány tárgyát képezik HPV58 vírusszerû részecskék ( virus-like particles, VLPs), amelyeket rekombináns HPV58 L1 vagy L1+L2 expressziójával állítottunk elõ élesztõsejtekben, valamint eljárás HPV-fertõzések megelõzésére és kezelésére alkalmas vakcinák és gyógyászati készítmények elõállítására A találmány háttere A humán eredetû papillomavírusoknak (HPV) több mint 80 típusa létezik, amelyek közül többet biológiai fenotípusok széles körével hoznak összefüggésbe, jóindulatú proliferatív szemölcsöktõl a rosszindulatú karcinómákig [összefoglalást lásd McMurray és mtsai.: Int. J. Exp. Pathol. 82(1), (2001)]. A HPV6 és HPV11 típusokat hozzák a leggyakrabban összefüggésbe jóindulatú szemölcsökkel, valamint nem rosszindulatú condyloma acuminata és/vagy genitális vagy légúti nyálkahártyán jelentkezõ, enyhe fokú dysplasia kórképekkel. A HPV16 és HPV18 súlyos kockázatú típusok, amelyeket leggyakrabban a méhnyak, hüvely, vulva és a végbél in situ és invazív karcinómájával hoznak összefüggésbe. A méhnyak karcinómáinak több mint 90%¹át hozzák összefüggésbe a HPV16, HPV18 vagy a kevésbé gyakori HPV31, -33, -45, 52 és -58 típusokkal [Schiffman és mtsai.: J. Natl. Cancer Inst. 85(12), (1993)]. Az a megfigyelés, hogy a méhnyakrákok több mint 90%-ában kimutatható HPV DNS, nyomós epidemiológiai bizonyíték arra nézve, hogy a HPV¹k méhnyakkarcinómát okoznak. A papillomavírusok kis (50 60 nm), burok nélküli, ikozaéder DNS-vírusok, amelyek legfeljebb nyolc korai és két késõi gént kódolnak. A vírusgenom nyitott leolvasási keretének ( open reading frame, ORF) elnevezése E1 E7, valamint L1 és L2, ahol E jelentése korai ( early ) és L jelentése késõi ( late ). Az L1 és L2 a vírus kapszidproteinjeit kódolja, míg az E gének olyan funkciókkal függenek össze, mint a vírusreplikáció és a sejtek transzformálása. Az L1 protein a fõ kapszidprotein és molekulatömege kda. Az L2 protein a minor kapszidprotein. Immunológiai adatok arra utalnak, hogy az L2 protein a víruskapszidban az L1 proteinhez képest beljebb helyezkedik el. A különbözõ papillomavírusokban az L1 és L2 proteinek nagyfokú konzerváltságot mutatnak. Az L1 proteinnek vagy az L1 és L2 proteinek kombinációjának az expresszálódása élesztõben, rovareredetû sejtekben, emlõseredetû sejtekben vagy baktériumokban vírusszerû részecskék ( virus-like particles, VLPs) önszervezõdõ összeállásához vezet [összefoglalásért lásd Schiller és Roden: Papillomavirus reviews: Current Research on Papillomaviruses szerk.: Lacey; Leeds, Egyesült Királyság, Leeds Medical Information (1996)]. A VLP¹k morfológiailag hasonlítanak az eredeti virionokhoz és állatnak vagy embernek beadva, neutralizáló ellenanyagok magas titerét képesek kiváltani. Mivel a VLP¹k nem tartalmazzák a potenciálisan onkogén vírusgenomot, HPV-vakcinák fejlesztése során biztonságos alternatívát nyújtanak az élõ vírusok alkalmazásával szemben [összefoglalást lásd Schiller és Hidesheim: J. Clin. Virol. 19, (2000)]. Ebbõl az okból, az L1 és L2 géneket immunológiai célpontként azonosították HPV fertõzések és betegségek elleni profilaktikus és terápiás vakcinák kifejlesztése céljára. Tobery T. W. és mtsai. (2003) két vakcinatípus összehasonlítását ismertetik HPV16L1-specifikus humorális immunválasz kiváltására: makákó majmokat immunizáltunk HPV16L1¹et kódoló, adenovírus (Ad) eredetû vektorral, HPV16L1¹et kódoló plazmid DNS vektorral, élesztõben elõállított HPV16L1-proteinnel vagy élesztõben elõállított HPV16L1+E1/E2/E7 kiméra vírusszerû részecskékkel (1541. oldal, jobb oldali hasáb, utolsó bekezdés). Azt tapasztalták, hogy az L1 VLP csoport jelentõsen magasabb neutralizáló titereket mutatott, mint a cvlp, L1 DNS és adeno¹l1 csoportok (1542. oldal, jobb oldali hasáb, elsõ bekezdés). A HPV-vakcinák fejlesztését és forgalmazását hátráltatta, hogy nehézségbe ütközött a kapszidproteinek magas expressziós szintjeinek elérése sikeresen transzformált gazdaszervezetekben, ami korlátot szabott a tisztított protein elõállításának. Ennek megfelelõen, HPV L1 proteineket, például HPV58 L1 proteint kódoló, vad típusú nukleotidszekvenciák azonosítása ellenére, igény mutatkozik könnyen megújítható, nyers HPV L1 proteinforrásra, amely olyan, HPV58 L1¹et kódoló nukleotidszekvenciákat alkalmaz, amelyeket a kívánt gazdasejtben történõ alkalmazásra optimalizáltak. Ezen túlmenõen, igény mutatkozik a natív proteinek immunitást kiváltó tulajdonságát mutató HPV58 L1 VLP¹k nagy mennyiségének az elõállítására vakcinák fejlesztése céljából. A találmány összefoglalása A találmány tárgyát képezik készítmények és eljárások HPV58 L1 gének által expresszált proteintermékeken alapuló vakcina elõállítására. A találmány tárgyát képezik HPV58 L1 proteint kódoló polinukleotidok, ahol a polinukleotidokat élesztõsejtben való magas szintû expresszióra kodonoptimalizáltuk. A találmány tárgyát képezik továbbá HPV58 L1 vírusszerû részecskék (VLP¹k), ahol az említett VLP-ket rekombináns HPV58 L1 vagy L1+L2 expresszáltatásával állítjuk elõ élesztõsejtben, a találmány tárgyát képezi továbbá HPV58 VLP¹k alkalmazása HPV-asszociált rákok megelõzésére és/vagy kezelésére alkalmas gyógyászati és vakcinakészítményekben. A találmány tárgyát képezik HPV58 L1 proteint kódoló, szintetikus DNS-molekulák. A szintetikus molekulák kodonjait úgy terveztük meg, hogy azok élesztõsejt által preferált kodonokat tartalmazzanak. A szintetikus molekulák alkalmazhatók a HPV58 L1 protein forrásaként, amely protein VLP¹vé önszervezõdhet. Ezek a VLP¹k alkalmazhatók VLP-alapú vakcinában. 2

3 1 HU T2 2 Közelebbrõl, a találmány tárgyát képezi szintetikus nukleinsavmolekula, amely HPV58 L1 proteint kódol, és amelyet a SEQ ID NO 2 azonosító számú szekvencia ismertet, amely nukleinsavszekvencia a SEQ ID NO 1 azonosító számú szekvencia szerinti nukleotidok szekvenciáját tartalmazza (a leírásban 58 L1 R szekvencia ). A találmány tárgyát képezik továbbá mind prokarióta, mind eukarióta eredetû, rekombináns vektorok és rekombináns gazdasejtek, amelyek a leírásban ismertetett nukleinsavmolekulákat tartalmazzák. A találmány egyik elõnyös megvalósítási módja szerint, a gazdasejt élesztõsejt. A találmány tárgyát képezik továbbá eljárások HPV58 VLP¹k elõállítására, valamint eljárások HPV58 VLP¹k alkalmazására. A találmány egyik elõnyös megvalósítási módja szerint, az élesztõ az alábbiak közül választott: Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces lactis és Schizosaccharomyces pombe. A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás HPV58 vírusszerû részecskéket (VLP-ket) tartalmazó vakcina elõállítására, ahol a HPLV58 VLP-ket élesztõben állítjuk elõ. A találmány ezen szempontjának másik megvalósítási módja szerint, az eljárás tartalmazza továbbá legalább egy további HPV-típusba tartozó VLP¹k hozzáadását. A legalább egy további HPV lehet bármely adott HPV, beleértve azokat, amelyeket a szakirodalom már ismertetett, vagy amelyeket azt követõen azonosítottak. A találmány egyik elõnyös megvalósítási módja szerint, a további HPV-típus olyan típus, amelyet klinikai fenotípussal, például szemölcsökkel vagy méhnyakrákkal hoznak összefüggésbe. Az egyik további megvalósítási mód szerint, a legalább egy további HPV-típus az alábbiak közül választott: HPV6, HPV11, HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, HPV51, HPV52, HPV55, HPV56, HPV59 és HPV68. A leírásban és a csatolt igénypontokban alkalmazott egy határozatlan névelõ és az határozott névelõ egyes számú alakja többes számot is jelenthet, kivéve ha a szövegkörnyezet egyértelmûen az ellenkezõjére utal. A leírásban és a csatolt igénypontokban az alábbi definíciókat és rövidítéseket alkalmazzuk: Promoter kifejezés alatt DNS-szálon levõ olyan felismerõhelyet értünk, amelyhez az RNS-polimeráz kötõdik. A promoter iniciáló komplexet képez az RNSpolimerázzal, hogy iniciálja és irányítsa a transzkripciós aktivitást. A komplex módosítható aktiváló szekvenciákkal, amelyeket enhancereknek (expressziót fokozó szekvenciáknak), vagy 5 irányú aktiváló szekvenciáknak, vagy gátló szekvenciákkal, amelyeket silencerek-nek (csendesítõ szekvenciáknak) nevezünk. Vektor kifejezés alatt bármely olyan eszközt értünk, amely révén DNS-fragmensek gazdaszervezetbe vagy gazdaszövetbe bevihetõk. A vektorok számos típusa létezik, beleértve plazmidokat, vírusokat (így például adenovírusokat), bakteriofágokat és kozmidokat Kazetta kifejezés alatt olyan nukleotidot vagy szekvenciát értünk, amelyet adott vektorból expresszáltatni kívánunk, például a HPV58 L1 proteint kódoló nukleotidot vagy génszekvenciát. Általánosságban, egy adott kazetta vektorba inszertált génszekvenciát tartalmaz, és néhány megvalósítási mód szerint a vektor szabályozószekvenciákat szolgáltat a nukleotid vagy génszekvencia expresszálódásához. Más megvalósítási módok szerint, a szabályozószekvenciákat a nukleotid vagy génszekvencia biztosítja saját expresszálódásához. További megvalósítási módok szerint, a vektor szolgáltat néhány szabályozószekvenciát, és a nukleotid vagy génszekvencia biztosít további szabályozószekvenciákat. Például, a vektor biztosíthatja a promotert a nukleotid vagy génszekvencia transzkripciójához, és a nukleotid vagy génszekvencia biztosíthatja a transzkripció leállításához szükséges szekvenciát. A vektor által biztosított szabályozószekvenciák a korlátozás szándéka nélkül lehetnek expressziót fokozó szekvenciák ( enhancer szekvenciák), transzkripciót leállító szekvenciák ( terminátor szekvenciák), vágási hely befogadó és vágási hely donor szekvenciák ( splice acceptor és splice donor szekvenciák), riboszómakötõ szekvenciák és poli¹a oligonukleotidot hozzáadó szekvenciák. Az 58 L1 vad típusú szekvencia és 58 L1 wt szekvencia kifejezések alatt a leírásban a SEQ ID NO 3 azonosító számú szekvencia szerinti szekvenciát értjük. Bár az 58 L1 vad típusú szekvenciát már korábban ismertették, nem ritka, hogy kisebb szekvenciavariációkat találunk klinikai izolátumokból származó DNS¹ek között. Ennek megfelelõen, reprezentatív 58 L1 vad típusú szekvenciát izoláltunk olyan klinikai mintákból, amelyekrõl korábban kimutatták, hogy HPV58 DNS¹t tartalmaznak (lásd az 1. példát). Az 58 L1 vad típusú szekvenciát alkalmaztuk referenciaszekvenciaként, a leírásban ismertetett, kodonoptimalizált 58 L1 szekvenciákkal történõ összehasonlítás céljára (lásd az 1. ábrát). A HPV58 L1 R és 58 L1 R kifejezések alatt a leírásban ismertetett, példaként szolgáló HPV58 L1 nukleotidszekvenciát értünk (SEQ ID NO 1), amelyben a szekvenciát úgy építettük át, hogy olyan kodonokat tartalmaznak, amelyek elõnyösek magas szintû expresszálódásra élesztõsejtekben. Hatékony mennyiség kifejezés alatt azt értjük, hogy a polipeptid megfelelõ szintjét tartalmazó, elegendõ vakcinakészítményt adunk be abból a célból, hogy immunválaszt kapjunk. Szakember számára világos, hogy ez a szint különbözõ lehet. Konzervatív aminosavhelyettesítés kifejezés alatt aminosav helyettesítését értjük másik, kémiailag hasonló aminosavcsoporttal. Konzervatív aminosavhelyettesítésre példák: hidrofób csoport (izoleucin, leucin, valin vagy metionin) helyettesítése másik hidrofób csoportra; poláros csoport helyettesítése másik, azonos töltésû poláros csoportra (például arginint lizinre; glutaminsavat aszparaginsavra). Az emlõs kifejezés alatt bármely emlõst értünk, emberi lényt is beleértve. 3

4 1 HU T2 2 VLP vagy VLP¹k jelentése vírusszerû részecske vagy részecskék. A szintetikus kifejezés alatt azt értjük, hogy a HPV58 L1 gént úgy állítottuk elõ, hogy nukleotidok olyan szekvenciáját tartalmazza, amely nem azonos az ismertetett, természetben elõforduló, vad típusú HPV58 L1 génben jelen levõ nukleotidok szekvenciájával (58 L1 wt, SEQ ID NO 3). Amint azt fentebb ismertettük, a találmány tárgyát képezik szintetikus molekulák, amelyek olyan kodonokat tartalmazó nukleotidok szekvenciáját tartalmazzák, amelyek elõnyösek élesztõsejtekben történõ expresszálódás céljára. A találmány szerinti szintetikus molekulák ugyanazt az aminosavszekvenciát kódolják, mint a vad típusú HPV58 L1 gén (SEQ ID NO 2) Az ábrák rövid ismertetése Az 1. ábra szekvencia-összerendezést ábrázol, amely a találmány szerinti, szintetikus HPV58 L1 génben (SEQ ID NO 1, jelölése 58 L1 R ) módosított nukleotidokat hasonlítja össze (lásd a 2. példát). A referenciaszekvencia az 58 L1 vad típusú szekvencia (SEQ ID NO 3, jelölése 58 L1 wt ; lásd az 1. példát). A módosított nukleotidokat a megfelelõ helyzetükben jelöltük. A nukleotid sorszámát zárójelbe tettük. Az 58 L1 átépített szekvenciában az azonos nukleotidokat pontokkal jelöltük. A 2. ábra átépített szintetikus HPV58 L1 kettõs szálú nukleinsav¹, valamint egybetûs kódú aminosavszekvenciáját ábrázolja. A 3. ábra HPV58 L1 wt és 58 L1 R transzkriptumok Northern-blot-vizsgálatát ábrázolja (lásd a 4. példát). A blotot DIG-reagenssel jelölt, azonos mennyiségû 58 L1 wt és 58 L1 R DNS-próbák elegyével próbáztuk. Feltüntettük a sávonként elektroforetizált összes RNS mennyiségét. A jobb oldalon levõ nyíl a teljes hosszúságú 58 L1 R transzkriptum várt méretét jelöli. A 4. ábra HPV58 L1 wt (58) és 58 L1 R (58R) proteinek Western-blot-vizsgálatát ábrázolja. A HPV16 L1 proteint referencia céljából vontuk be a vizsgálatba (16). Tíz, 5és2,5 g teljes proteinkivonatot denaturáltunk, és vittünk fel 10%¹os SDS-PA- GE gélre. A HPV58 L1 proteint élesztõvel kimerített, trpe-hpv31 L1 elleni, kecskében termelt, poliklonális antiszérummal detektáltuk, amely keresztreagál az 58 L1 és 16 L1 proteinekkel. A molekulatömeg-markereket kda egységekben jelöltük a bal oldalon. Az 5. ábra az összes élesztõprotein 1 mikrogrammjára vonatkoztatott, intakt HPV58 L1 VLP¹k mennyiségét mutatja (ng), amelyet ELISA-vizsgálattal befogtunk és detektáltunk (lásd a 7. példát). Két párhuzamossal végzett két vizsgálat eredményét mutatjuk. A HPV58 L1 wt protein (fekete és szürke oszlopok) VLP expressziója az összes élesztõprotein 1 gjára vonatkoztatva 36 ng volt. A HPV58 L1 R protein, azaz az átépített, élesztõre kodonoptimalizált 58 L1 VLP expressziója (fehér és vonalkázott oszlopok) 2 3-szor magasabb volt, mint a HPV58 L1 R expressziója, és a 2. vizsgálatban az összes élesztõprotein 1 gjára vonatkoztatva elérte a 95 ng értéket. A 6. ábra HPV58 L1 R protein-molekulákból összeálló HPV58 VLP¹k reprezentatív mintáját mutatja transzmissziós elektronmikroszkópos vizsgálattal (lásd a 8. példát). A feltüntetett szakasz hossza körülbelül 100 nm. A találmány részletes ismertetése A méhnyakrákok többsége humán eredetû papillomavírus (HPV) specifikus onkogén típusaival történt fertõzéssel függ össze. A találmány tárgyát képezik készítmények és eljárás onkogén HPV-típusok génjei által expresszált proteintermékeket tartalmazó vakcina elõállítása. Közelebbrõl, a találmány tárgyát képezik HPV58 L1 proteint kódoló polinukleotidok, ahol a polinukleotidokat kodonoptimalizáltuk élesztõben történõ, magas szintû expresszálódásra. A találmány tárgyát képezik továbbá HPV58 vírusszerû részecskék (VLP¹k), amelyeket élesztõben állítunk elõ. A találmány tárgyát képezik polinukleotidok, valamint azok révén elõállított VLP¹k alkalmazása vakcinák elõállítási eljárásában, HPV-vel összefüggõ rák megelõzésére és/vagy kezelésére. A vad típusú HPV58 L1 egyik szekvenciáját már ismertették [Genbank nyilvántartási száma: NC , lásd Kirii és mtsai.: Virology 185(1), (1991)]. A találmány tárgyát képezik HPV58 L1 proteint kódoló, szintetikus DNS-molekulák. A találmány szerinti, szintetikus molekulák kodonok szekvenciáját tartalmazzák, ahol a kodonok legalább egy részét módosítottuk, hogy olyan kodonokat alkalmazzunk, amelyek élesztõsejt számára magas szintû expresszáláshoz elõnyösek. A szintetikus molekulák kódolószekvenciaként alkalmazhatók HP58 L1 protein expresszálására, amely VLP¹vé önszervezõdhet. A fenti VLP¹k alkalmazhatók VLP-alapú vakcinákban abból a célból, hogy hatékony immunprofilaxist biztosítsanak neutralizáló ellenanyagok és sejt által közvetített immunitás révén. Az ilyen VLP-alapú vakcinák elõnyösek továbbá a már kialakult HPV-fertõzések kezelésére. HPV VLP¹k expresszáltatása élesztõben azokat az elõnyöket nyújtja, hogy költségkímélõ és könnyen adaptálható fermentorokban végzett ipari méretû elõállításhoz. Ezen túlmenõen, az élesztõ genomja könnyen módosítható abból a célból, hogy biztosítsuk fokozott szaporodást és expressziós potenciált mutató, rekombináns, transzformált élesztõk szelektálását. Azonban, számos HPV L1 protein, például a HPV58 L1 protein is, 4

5 1 HU T olyan szinten expresszálódik élesztõsejtekben, amely alacsonyabb, mint ami ipari méretekben történõ elõállításhoz elvárt. Ennek megfelelõen, a találmány tárgyát képezik HPV58 L1 génszekvenciák, amelyeket élesztõsejt környezetben való magas szintû expresszálódásra optimalizáltunk. Négy lehetséges nukleotid bázis tripla kodonja több, mint 60 variáns formában létezhet. Mivel ezek a kodonok mindössze 20 eltérõ aminosav számára határoznak meg üzenetet (valamint a transzkripció kezdéséhez és végzõdéséhez), néhány aminosavat több, mint egy kodon kódolhat, amely jelenség kodonredundancia néven ismert. Nem egészen megértett okokból, az alternatív kodonok nem egyformán vannak jelen különbözõ típusú sejtek endogén DNS-ében. Valójában úgy tûnik, hogy bizonyos típusú sejtekben, bizonyos kodonok tekintetében változó természetes hierarchia, vagy preferencia nyilvánul meg. Egy példaként, a leucin aminosavat hat DNS-kodon, a CTA, CTC, CTG, CTT, TTA és TTG kodonok bármelyike meghatározhatja. Mikroorganizmusok genomi kodonhasználatának a kimerítõ elemzése felfedte, hogy az E. coli endogén DNS¹e leggyakrabban a CTG leucint meghatározó kodont tartalmazza, míg az élesztõk és nyálkagombák DNS¹e leggyakrabban a TTA leucint meghatározó kodont alkalmazza. Ezen hierarchia fényében általánosságban úgy gondolják, hogy adott, leucinban gazdag polipeptid magas szintû expressziójának a valószínûsége E. coli gazdában bizonyos mértékig a kodonhasználat gyakoriságától függ. Valószínû például, hogy TTA kodonokban gazdag gén nehezen expresszálódik E. coliban, míg CTG kodonban gazdag gén valószínûleg erõsen expresszálódik ebben a gazdában. Hasonlóképpen, leucinban gazdag polipeptid expresszálására elõnyös kodon élesztõsejtek esetében a TTA kodon. A kodonpreferencia jelenségnek a rekombináns DNS-technológiára gyakorolt hatásai észrevehetõk, és a jelenség magyarázatul szolgálhat számos korábbi kudarcra, amikor exogén gének magas szintû expresszióját kívánták elérni sikeresen transzformált gazdaszervezetekben az inszertált génben egy kevésbé preferált kodon ismétlõdhet, és elõfordulhat, hogy a gazda expressziós sejtgépezete nem mûködik kellõ hatékonysággal. A fenti jelenség arra utal, hogy szintetikus úton elõállított gének, amelyeket úgy terveznek, hogy a célzott sejtek preferált kodonjait tartalmazzák, rekombináns proteinek expressziójának gyakorlati céljaira, idegen genetikai anyag optimális formáját nyújtják. Ennek megfelelõen, a találmány egyik szempontja szerint, a találmány tárgyát képezi HPV58 L1¹gén, amely élesztõsejtben magas szintû expresszió elérésére kodonoptimalizált. A találmány egyik elõnyös megvalósítási módja szerint azt találtuk, hogy ugyanazt a proteinszekvenciát kódoló alternatív kodonok alkalmazása feloldhatja élesztõsejtekben a HPV58 L1¹proteinek expressziójára ható korlátokat. A találmány szerint, HPV58 L1 génszegmenseket konvertáltunk olyan szekvenciákká, amelyek azonos transzlált szekvenciát eredményeztek, azonban alternatív kodonhasználat mellett, amint azt Sharp és Cowe ismertetik [ Synonymous Codon Usage in Saccharomyces cerevisiae, Yeast 7, (1991)]. Az eljárás általában tartalmazza olyan kodonok azonosítását vad típusú szekvenciákban, amelyek ritkán asszociálódnak erõsen expresszált élesztõgénekkel, és optimális kodonokra cserélésüket élesztõsejtekben való erõs expresszió céljából. Ezt követõen, az új génszekvenciát ellenõrizzük a kodonhelyettesítés által létrehozott, nem kívánt szekvenciákra nézve (például ATTTA szekvenciák, intron vágási felismerõ hely véletlen létrehozása, nem kívánt restrikciós enzim helyek, magas GC tartalom, transzkripciót leállító szignálok jelenléte, amelyeket az élesztõ felismer, és hasonlók). A nem kívánt szekvenciákat úgy távolítjuk el, hogy a már létezõ kodonokat azonos aminosavat kódoló, eltérõ kodonokkal helyettesítjük. Ezt követõen, a szintetikus génszegmenseket javított expresszióra nézve vizsgáljuk. A fent ismertetett eljárásokat alkalmaztuk HPV58 L1 szintetikus génszegmensek elõállítására, amelyek magas szintû expresszióra optimalizált gént eredményeztek. Bár a fenti eljárás összefoglalja HPVvakcinákban alkalmazható, kodonoptimalizált gének tervezésére irányuló módszertanunkat, szakember számára világos, hogy hasonlóan hatékony vakcina és/vagy gének fokozott expressziója elérhetõ az eljárás kismértékû változtatásával, vagy a szekvencia kismértékû változtatásával. A találmány tárgyát képezi szintetikus polinukleotid, amely a SEQ ID NO 2 azonosító számú szekvencia szerinti HPV58 L1 proteint kódolja, a fenti nukleinsavmolekula a SEQ ID NO 1 azonosító számú szekvencia szerinti nukleotidok szekvenciáját tartalmazza. A találmány tárgyát képezik továbbá mind prokarióta, mind eukarióta rekombináns vektorok és rekombináns gazdasejtek, amelyek a leírásban ismertetett nukleinsavmolekulákat tartalmazzák. A találmány elõnyös megvalósítási módja szerint, a gazdasejt élesztõ gazdasejt. A leírásban ismertetett eljárásokkal elõállított, szintetikus HPV58 DNS vagy annak fragmensei rekombináns eljárással expresszáltathatók oly módon, hogy azokat molekuláris eljárással, megfelelõ promotert és megfelelõ további transzkripciós elemeket tartalmazó expressziós vektorba klónozzuk, majd prokarióta vagy eukarióta gazdasejtekbe visszük át abból a célból, hogy rekombináns HPV58 L1 proteint állítsunk elõ. Ilyen manipulációkra alkalmas eljárásokat ismertetnek például Sambrook és mtsai. [Sambrook és mtsai.: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York (1989); Ausubel és mtsai.: Current protocols in Molecular Biology, Green Pub. Associates és Wiley-Interscience, New York (1988); Rose és mtsai.: Yeast Genetics: A Laboratory Course Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York (1990)]. A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás HPV58 L1 protein expresszálására rekombináns gazdasejtben, amely eljárás tartalmazza: (a) a SEQ ID NO 1 azonosító számú szekvencia szerinti nukleinsavat 5

6 1 HU T2 2 tartalmazó vektor bevitelét élesztõ gazdasejtbe; és (b) az élesztõ gazdasejt tenyésztését olyan körülmények mellett, amelyek lehetõvé teszik a fenti HPV58 L1 protein expresszálódását. A találmány szerinti, szintetikus gének expressziós kazettává állíthatók össze, amely olyan megtervezett szekvenciákat tartalmaz, amelyek biztosítják a HPV58 L1 protein hatékony expresszálódását a gazdasejtben. A kazetta elõnyösen tartalmazza a szintetikus gént a hozzá funkcionálisan kapcsolt, megfelelõ transzkripciós és transzlációs szabályozószekvenciákkal, például promotert és leállítószekvenciákat. Az egyik elõnyös megvalósítási mód szerint, a promoter a S. cerevisiae GAL1 promotere, bár szakember számára világos, hogy számos ismert, élesztõeredetû promoter, így például GAL10, GAL7, ADH1, TDH3 vagy PGK promoterek közül bármely alkalmazható, vagy alkalmazhatók más eukarióta génbõl származó promoterek. Elõnyös transzkripciót leállító szekvencia a S. cerevisiae ADH1 leállítószekvencia, bár más ismert transzkripciót leállító szekvenciák is alkalmazhatók. Különösen elõnyös a GAL1 promoter és ADH1 leállítószekvencia kombinációjának az alkalmazása. A találmány tárgyát képezik továbbá HPV58 vírusszerû részecske (VLP), amelyet HPV58 L1 vagy L1+L2 gének rekombináns eljárással történõ expresszáltatásával állítottunk elõ, valamint eljárások HPV58 VLP¹k elõállítására és eljárások HPV58 VLP¹k alkalmazására. A VLP¹k képesek önszervezõdéssel összeállni, amikor az L1 protein, a humán eredetû és állati eredetû papillomavírusok fõ kapszidproteinje élesztõben, rovarsejtben, emlõssejtben vagy baktériumokban expresszálódnak [összefoglalást lásd Schiller és Roden: Papillomavirus reviews: Current Research on Papillomaviruses szerk.: Lacey; Leeds, Egyesült Királyság, Leeds Medical Information (1996)]. Morfológiailag megkülönböztethetetlen HPV VLP¹k elõállíthatók L1 és L2 kapszidproteinek kombinációjának az expresszáltatásával is. A VLP¹k az L1 protein 72 pentamerébõl állnak, T=7 ikozaéder szerkezetben [Baker és mtsai.: Biophys. J. 60(6), (1991)]. A VLP¹k morfológiailag hasonlók az eredeti virionokhoz és állatnak beadva, neutralizáló ellenanyagok magas titerét képesek kiváltani. Kimutatták, hogy nyulak [Breitburd és mtsai.: J. Virol. 69(6), (1995)] és kutyák [Suzich és mtsai.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92(25), (1995)] VLP-kkel történõ immunizálása egyaránt indukál neutralizáló ellenanyagokat és véd kísérletes papillomavírus-fertõzés ellen. Azonban, mivel a VLP¹k nem tartalmazzák a potenciálisan onkogén vírusgenomot és egyetlen génbõl expresszáltatva képesek önszervezõdni, HPV-vakcinák fejlesztése során biztonságos alternatívát jelentenek az élõ vírusok alkalmazásával szemben [összefoglalást lásd Schiller és Hidesheim: J. Clin. Virol. 19, (2000)]. A leírásban a HPV58 rekombináns L1 proteinjét vagy rekombináns L1+L2 proteinjeit tartalmazó, vírusszerû részecskéket ismertetünk, ahol a rekombináns proteineket élesztõben expresszáltatjuk Amint azt fentebb ismertettük, a találmány egyik elõnyös megvalósítási módja szerint, a HPV58 VLP-ket élesztõben állítjuk elõ. A találmány egyik további elõnyös megvalósítási módja szerint, az élesztõ az alábbiak közül választott: Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces lactis és Schizosaccharomyces pombe. A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás HPV58 VLP¹k elõállítására, amely eljárás tartalmazza: (a) élesztõ transzformálását HPV58 L1 proteint vagy HPV58 L1+L2 proteineket kódoló rekombináns DNSmolekulával; (b) a transzformált élesztõ gazdasejt tenyésztését olyan körülmények mellett, amelyek lehetõvé teszik a rekombináns DNS-molekula expresszálódását, hogy rekombináns HPV58 L1 proteint állítsunk elõ; (c) a rekombináns HPV58 protein izolálását, hogy HPV58 VLP-ket állítsunk elõ; ahol a HPV58 L1 gén tartalmazza a SEQ ID NO 1 azonosító számú szekvencia szerinti nukleotidok szekvenciáját. Az elõállított HPV58 VLP¹k alkalmazhatók immunválasz állatban történõ indukálására szolgáló eljárásban, amely tartalmazza HPV58 vírusszerû részecskék állatba történõ beadását, közelebbrõl, alkalmazhatók HPV-vel összefüggõ méhnyakrák megelõzésére és/vagy kezelésére szolgáló eljárásban, amely tartalmazza HPV58 VLP-ket tartalmazó vakcina emlõsnek történõ beadását. A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás HPV58 vírusszerû részecskéket (VLP-ket) tartalmazó vakcina elõállítására. A találmány ezen szempontjának egyik alternatív megvalósítási módja szerint, a vakcina elõállítási eljárása tartalmazza továbbá legalább egy további HPV-típusba tartozó VLP¹k hozzáadását. Az egyik elõnyös megvalósítási mód szerint, a legalább egy további HPV-típus az alábbiak közül választott: HPV6, HPV11, HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, HPV51, HPV52, HPV55, HPV56, HPV59 és HPV68. A találmány szerinti eljárás elõnyös megvalósítási módja szerint, HPV16 VLP-ket adunk hozzá. Egy további elõnyös megvalósítási mód szerint, HPV16 VLP-ket és HPV18 VLP-ket adunk hozzá. A találmány egy még további elõnyös megvalósítási módja szerint, az eljárás tartalmazza továbbá HPV6 VLP¹k, HPV11 VLP¹k, HPV16 VLP¹k és HPV18 VLP¹k hozzáadását. A találmány szerinti vakcinakészítmények alkalmazhatók önmagukban, megfelelõ dózisban, amely lehetõvé teszi HPV58 fertõzés optimális gátlását, minimális lehetséges toxicitás nélkül. Ezen túlmenõen, kívánt lehet más ágensekkel együtt, vagy egymást követõen történõ beadásuk. A vírusszerû részecskék mennyisége, amelyet a vakcinázni kívánt alanynak be kell adni, az expresszált géntermék immonogenitásától függ. Általánosságban, az immunológiailag vagy profilaktikusan hatékony dózis körülbelül g, elõnyösen körülbelül g VLP, közvetlenül izomba injektálva. Mérle- 6

7 1 HU T2 2 gelni kell a szubkután, intradermális vagy bõrön át történõ beadás lehetõségét, valamint a beadás más módjait, például intraperitoneális, intravénás vagy inhalációs bejuttatás lehetõségét is. Mérlegelni kell továbbá emlékeztetõvakcina beadását. Elõnyös lehet továbbá adjuvánssal, például timsóval vagy Merck alumínium adjuvánssal történõ intravénás, intramuszkuláris, szubkután vagy más úton végzett beadás, a találmány szerinti vakcina beadásával egyidejûleg vagy azt követõen. Miután ismertettük a találmány elõnyös megvalósítási módjait, utalva a csatolt ábrákra, érthetõ, hogy a találmány nem korlátozódik a pontos megvalósítási módokra, és hogy szakember különbözõ változtatásokat és módosításokat végezhet. Az alábbi példák a korlátozás szándéka nélkül illusztrálják a találmányt. 1. példa Reprezentatív HPV58 L1 szekvencia meghatározása HPV58 L1 szekvenciát már korábban ismertettek (Genbank nyilvántartási száma: NC ). Nem ritka azonban, hogy klinikai izolátumokból származó DNS¹ek között kisebb szekvenciaeltéréseket találunk. Abból a célból, hogy reprezentatív HPV58 L1 vad típusú szekvenciát határozzunk meg, három olyan klinikai mintából izoláltunk DNS¹t, amelyekrõl korábban kimutatták, hogy HPV58 DNS¹t tartalmaznak. HPV58 L1 szekvenciát amplifikáltunk polimeráz-láncreakcióval ( polymerase chain reaction, PCR), Taq DNS-polimeráz és az alábbi láncindító oligonukleotidok alkalmazásával: HPV58 L1 F5 -ATGTCCGTGTGGCGGCCTATG¹3 (SEQ ID NO 4) és BgIII 5 ¹GAGATCTGTGTAAGTACCACAA- CAATTA¹3 (SEQ ID NO 5). Az amplifikált termékeket agarózgéleken elektroforetizáltuk és etídium-bromid festéssel tettük láthatóvá. A körülbelül 1500 bázispár (bp) méretû L1 csíkokat kivágtuk és a DNS¹t Geneclean Spin Kit (Q¹Bio Gene, Carlsbad, CA) reagenskészlettel tisztítottuk. Ezt követõen, a DNS¹t pcr2.1 TA klónozási vektorhoz (Invitrogen) ligáltuk. TOP10F E. coli-sejteket transzformáltunk a ligációs eleggyel és a sejteket LB agarlemezre szélesztettük, amelyet ampicillinnel, IPTG reagenssel és kék/fehér telepek szelektálásához X¹gal reagenssel egészítettünk ki. A lemezeket megfordítottuk és 16 órán át, 37 C¹on inkubáltuk. A fehér telepeket ampicillinnel kiegészített LB tápközegben tenyésztettük 16 órán át, 37 C¹on, rázatás mellett. Miniprep készítményeket állítottunk elõ abból a célból, hogy plazmid- DNS¹t vonjunk ki. Abból a célból, hogy a plazmidokban kimutassuk az L1 gént, restrikciós endonukleáz emésztést végeztünk. A restrikciós fragmenseket agarózgél-elektroforézissel és etídium-bromid festéssel tettük láthatóvá. DNSszekvenálást végeztünk mind a három klinikai izolátumból származó klónozott L1 inszertet tartalmazó plazmidokon. Abból a célból, hogy a késõbbi optimalizáláshoz referenciaszekvenciát állítsunk elõ, a klónok mindegyikébõl származó nukleotid- és transzlált aminosavszekvenciát összehasonlítottuk a szakirodalomban ismertetett HPV58 L1 szekvenciákkal. A három klinikai izolátum szekvenciavizsgálata azt mutatta, hogy egyetlen szekvencia sem volt azonos a Genbank szekvenciával. A pcr2.1 HPV58 L1 4¹es számú klónt választottuk reprezentatív 58 L1 szekvenciaként, és arra a leírásban egymással felcserélhetõen 58 L1 vad típusú szekvencia vagy 58 wt szekvencia elnevezéssel utalunk (SEQ ID NO 3, lásd az 1. ábrát). Az 58 L1 wt szekvencia öt pontmutációt tartalmazott: ebbõl kettõ aminosavak cseréjét eredményezte és három csendes mutáció volt. A Genbank HPV58 L1 szekvenciához képest aminosavcserét eredményezõ pontmutációk a 372¹es nukleotidnál (A T) és a 897¹es nukleotidnál (A G) fordultak elõ, rendre megváltoztatva a 124¹es aminosavat leucinról fenil-alaninra és a 299¹es aminosavat izoleucinról metioninra. A három csendes pontmutáció a 774¹es (A G), 792¹es (T C) és 999¹es (G A) pozícióban volt. Az 58 L1 vad típusú szekvenciát PCR-amplifikáltuk Taq polimeráz és az alábbi láncindító oligonukleotidok alkalmazásával, amelyek BamHI kiterjesztést adtak a szekvenciához: 5-58BamHI 5 ¹GGGATCCCACAAAACAAAAT- GTCCGTGTGGC¹3 (SEQ ID NO 6) és 3 -Bam58 5 ¹GGGATCCGTGTAAGTACCACAA- CAATTA¹3 (SEQ ID NO 7). A kapott PCR-termékeket agarózgél-elektroforézissel és etídium-bromid festéssel tettük láthatóvá. A körülbelül 1500 bp méretû csíkot kivágtuk, majd a DNS¹t Geneclean vizsgálókészlettel tisztítottuk. A PCR-terméket ezt követõen pcr2.1 plazmidhoz ligáltuk, majd a ligációs eleggyel TOP10F sejteket transzformáltunk. Fehér telepeket szelektáltunk és tenyésztettünk ampicillinnel kiegészített LB tápközegben 37 C¹on, 16 órán át, rázatás mellett. Miniprep készítményeket állítottunk elõ abból a célból, hogy plazmid-dns¹t vonjunk ki. Abból a célból, hogy a HPV58 L1 gént kiszabadítsuk a vektorszekvenciából, BamHI restrikciós endonukleáz emésztést végeztünk. Az emésztett DNS¹t agarózgélelektroforézisnek vetettük alá és etídium-bromid festéssel tettük láthatóvá. Az L1 csíkot Geneclean készlettel tisztítottuk, majd defoszforilezett, BamHI enzimmel emésztett pgal110 plazmidhoz ligáltuk. A ligációs eleggyel DH5 E. coli-sejteket transzformáltunk. Abból a célból, hogy helyes orientációjú HPV58 L1 inszertre szûrjünk, a telepekbõl származó plazmid-dns¹t PCRamplifikáltuk. DNS-szekvenálást végeztünk abból a célból, hogy ellenõrizzük az inszertek szekvenciáját és orientációját. Kiválasztottunk egyetlen klónt és elneveztük HPV 58L1 #10 klónnak. A kiválasztott klónból maxiprep DNS¹t állítottunk elõ. Saccharomyces cerevisiae sejteket tettünk kompetenssé szferoplasztok glusulázkezeléssel ( glusulase ) történõ elõállításával, majd transzformáltunk pgal110-hpv 58 #1 plazmiddal. Az élesztõ transzformációs elegyet Leu( ) szorbitol felsõ agar-rétegben Leu( ) szorbitol agarlemezekre öntöttük, majd lefordítva inkubáltuk 3 5 napon át, 30 C¹on. Telepeket emeltünk ki és szélesztettünk kló- 7

8 1 HU T2 2 nok izolálása céljából Leu( ) szorbitol agarlemezekre. Ezt követõen, izolált telepeket tenyésztettünk 1,6% glükózt és 4% galaktózt tartalmazó 5XLeu( ) Ade( ) szorbitol tápközeg 5 ml¹ében, görgõcsöves tenyészetben, 30 C¹on, hogy 58 L1 transzkripciót és proteinexpressziót indukáljunk. 2. példa Kodonok optimalizálása élesztõk számára Élesztõk számára elõnyös kodonokat már ismertettek [Sharp P. M. és Cowe E.: Synonymous Codon Usage in Saccharomyces cerevisiae, Yeast 7, (1991)]. A HPV58 L1 wt protein expressziója detektálható volt, azonban fokozott expresszió eléréséhez a HPV58 L1 gént elõnyös élesztõ-kodonok alkalmazásával átépítettük. Az átépített HPV58 L1 szekvencia, amely élesztõre optimalizált kodonszekvenciákat tartalmazott, az HPV58 L1 wt szekvenciához képest 404 nukleotidváltoztatást tartalmazott. Az így kapott szekvenciát a leírásban 58 L1 R (R= rebuilt, azaz átépített) szekvenciának neveztük (lásd az 1. ábrát). Az 58 L1 R transzlált aminosavszekvenciája változatlan maradt. A HPV58 L1 R nukleotidszekvenciáját (SEQ ID NO 1) és aminosavszekvenciáját (SEQ ID NO 2) a 2. ábra mutatja. A fenti átépített szekvencia a HPV58 L1 protein fokozott expresszióját biztosítja, amely a vad típus alkalmazásához képest jelentõs elõrehaladás vakcinák fejlesztésénél (lásd a 4. példát). Optimalizált gén elõállítása céljából alkalmazott stratégiánk az volt, hogy hosszú, átfedõ szensz és antiszensz oligomereket terveztünk, amelyek átfedték a gént, nukleotidokat élesztõ számára elõnyös kodonszekvenciákkal helyettesítenek, miközben megtartják az aminosavszekvenciát. Ezeket az oligonukleotidokat alkalmaztuk templát-dns helyett PCR-reakcióban, Pfu polimeráz jelenlétében. További amplifikációs láncindító oligonukleotidokat terveztünk és alkalmaztunk az átépített szekvenciák templát oligomerekbõl történõ amplifikálására. Az amplifikálás optimális körülményei specifikusak voltak az egyes szakaszokra nézve, azonban a leggyakrabban alkalmazott program az alábbihoz hasonlított: 95 C, 2 percen át (denaturálás), ezt követte 35 cikluson át 95 C, 1 percen át (denaturálás), 55 C, 1 percen át (temperálás), 72 C, 3,5 percen át (kiterjesztés), ezt követõen 72 C, 10 percen át (végsõ kiterjesztés) és 4 C tartása. A PCR-termékeket agarózgélelektroforézissel vizsgáltuk. A megfelelõ méretû csíkokat kivágtuk és a DNS¹t megtisztítottuk. Az amplifikált fragmenseket ezt követõen templátként alkalmaztuk az 1497 nt átépített HPV58 L1 gén összeállításához. Az átépítést követõen az 1497 nt csíkot gélen tisztítottuk, majd pcr-blunt vektorhoz (Invitrogen, Carlsbad, CA) ligáltuk. A ligálást követõen, TOP10 sejteket transzformáltunk a ligációs eleggyel. Telepeket növesztettünk kanamicint tartalmazó LB tápközegben, és a telepekbõl miniprep eljárásokkal plazmid-dns¹t vontunk ki. A plazmid-dns¹t szekvenáltuk, hogy ellenõrizzük a kívánt 58 L1 átépített változásokat. Abból a célból, hogy mindkét végéhez BamHl kiterjesztést adjunk hozzá, az 58 L1 R (átépített) polinukleotidot újra amplifikáltuk a pcr-blunt¹58 L1 R plazmidból, az alábbi láncindító oligonukleotidok alkalmazásával: 5 Bam 58 Rebuild 5 ¹GGATCCCACAAAA- CAAAATGTCTGTCTGGAGACC¹3 (SEQ ID NO 8) és 3 Bam 58 Rebuild 5 ¹GGATCCTTACTTCTT- GACCTTC¹3 (SEQ ID NO 9). Az amplifikált L1¹terméket gélen tisztítottuk Geneclean készlet alkalmazásával, majd pcr2.1 plazmidba (Invitrogen) klónoztuk. A pcr2.1 plazmiddal TOP10F sejteket transzformáltunk. Fehér telepeket szelektáltunk és tenyésztettünk ampicillint tartalmazó LB tápközegben, 37 C¹on, 16 órán át, rázatás mellett. A plazmid-dns¹t miniprep eljárással vontuk ki. Abból a célból, hogy a HPV58 L1 gént kiszabadítsuk a vektorszekvenciából, BamHl restrikciós endonukleáz emésztést végeztünk. Az emésztett DNS¹t agarózgél-elektroforézisnek vetettük alá és etídium-bromid festéssel tettük láthatóvá. Az L1 csíkot Geneclean készlettel tisztítottuk, majd defoszforilezett, BamHI enzimmel emésztett pgal110 plazmidhoz ligáltuk. A ligációs eleggyel DH5 E. coli-sejteket transzformáltunk. Az így kapott telepeket PCR-vizsgálattal szûrtük a helyes orientációjú HPV58 L1 inszert jelenlétére. Maxiprep DNS¹t állítottunk elõ. A szekvenciát és annak orientációját restrikciós emésztési profilokkal és DNSszekvenálással ellenõriztük. A kiválasztott klónt pgal110-hpv58l1r#17 klónnak neveztük el. Saccharomyces cerevisiae sejteket tettünk kompetenssé szferoplasztok elõállításával, majd transzformáltunk pgal110-hpv 58L1R #17 plazmiddal. Az élesztõ transzformációs elegyet Leu( ) szorbitol felsõ agarrétegben Leu( ) szorbitol agarlemezekre öntöttük, majd lefordítva inkubáltuk 3 5 napon át, 30 C¹on. Telepeket emeltünk ki és szélesztettünk klónok izolálása céljából Leu( ) szorbitol agarlemezekre. Ezt követõen, izolált telepeket tenyésztettünk 1,6% glükózt és 4% galaktózt tartalmazó 5XLeu( ) Ade( ) szorbitol tápközeg 5 ml¹ében, görgõcsöves tenyészetben, 30 C¹on, hogy L1 transzkripciót és proteinexpressziót indukáljunk. Negyvennyolc óra múlva, OD 600 =10 mennyiségû sejtnek megfelelõ tenyésztési térfogatot centrifugáltunk, a felülúszót eltávolítottuk, és az üledéket 70 C¹on tároltuk. 3. példa RNS elõállítása Galaktózzal HPV58 L1 vagy HPV58 L1 R expresszálására indukált, transzformált élesztõsejteket olvasztottunk jégen, 0,8 ml Trizol reagensben (Life Technologies, Gibco BRL) szuszpendáltuk és 5 percen át, szobahõmérsékleten inkubáltuk. A csõbe egyötöd térfogat kloroformot mértünk be. Ezt követõen, a csövet erõteljesen ráztuk, hogy tartalma jól elegyedjen, majd 3 percen át inkubáltuk szobahõmérsékleten. Öt percen át centrifugáltuk, percenként fordulatszám mellett, majd a felsõ fázist összegyûjtöttük és egy másik csõbe vittük át. Az elegyhez 0,4 ml izopropanolt adtunk és 10 percen át inkubáltuk szobahõmérsékleten. Abból a célból, hogy az RNS¹t tömörítsük, 10 percen át centri- 8

9 1 HU T2 2 fugáltuk, percenként fordulatszám mellett. A felülúszót leöntöttük, az RNS-üledéket 75%¹os etanollal mostuk és a centrifugálást megismételtük. A felülúszót leöntöttük és az RNS-üledéket 15 percen át hagytuk a levegõn száradni, majd RNáz-tól mentes vízben szuszpendáltuk. Az RNS koncentrációjának a meghatározásához spektrofotometriát alkalmaztunk, feltételezve, hogy A 260 =1 leolvasott érték 40 g RNS-nek felel meg abban az esetben, ha A 260/280 egyenlõ 1 7 2,0 értékkel példa Northern-blot-vizsgálat 1,1%¹os agaróz-formaldehid gélt öntöttünk. RNSbõl 5 és 10 g¹ot elegyítettünk denaturáló pufferrel (végsõ koncentrációja: 6% formaldehid, 50% formamid és 0,1 MOPS), majd 10 percen át 65 C¹ra hevítettük. Az elegyhez egytized térfogatrész mintapuffert adtunk, és a mintát gélre vittük fel. Az elektroforézist 75 V mellett végeztük, 1 MOPS pufferben, körülbelül 3 órán át. A gélt 60 percen át mostuk 10 SSC oldatban. Az RNS¹t kapilláris hatással Hybond¹N+ nejlonmembránra vittük (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ), 16 órán át, 10 SSC oldatban. Ezt követõen, az RNS¹t keresztkötésekkel a nejlonmembránhoz fixáltuk, Stratagene UV Stratalinker önkeresztkötõ funkciójának alkalmazásával (Stratagene, La Jolla, CA). A fixálást követõen, a nejlonmembránt hagytuk levegõn megszáradni. Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detecting Kit I (Hoffmann¹La Roche Ltd., Bázel, Svájc) készletet alkalmaztuk az 58 L1 wt és 58 L1 R DNS-szekvenciák DIG reagenssel történõ jelölésére, hogy azokat próbakoktélként alkalmazzuk 58 L1 wt és 58 L1 R transzkriptumok detektálására Northern-blot-vizsgálatokban. Az elõhibridizálást, hibridizálást és az immunológiai elõhívást a gyártó utasításai szerint végeztük. Röviden, a blotot 37 C¹on elõhibridizáltuk 30 percen át, kímélõ rázatás mellett. A próbakoktélt úgy denaturáltuk, hogy 5 percen át, 95 C¹ra hevítettük, majd jégen csillapítottuk. A próbakoktélt hozzáadtuk a hibridizáló oldathoz, majd 4 órán át 44,6 C¹on, kíméletes rázatás mellett érintkeztettük a membránnal. Ezt követõen, a hibridizáló oldatot eltávolítottuk és a blotot kétszer 5 percen át mostuk 0,1% SDS¹t tartalmazó, 2 SSC oldattal szobahõmérsékleten, amelyet egy további mosás követett 65 C¹on, 0,1% SDS¹t tartalmazó, 2 SSC oldattal. Ezt követõen, a blotot 30 percen át blokkoltuk, majd DIG elleni, alkalikus foszfatázzal konjugált ellenanyag 1:5000 léptékû hígításával érintkeztettük 30 percen át. A blotot mostuk és a próbához kötõdött RNS jelenlétét úgy mutattuk ki, hogy NBT/BCIP szubsztrát detektálásával láthatóvá tettük a kötõdött, alkalikus foszfatázzal konjugált, DIG elleni ellenanyagot. Az 58 L1 wt proteint expresszáló élesztõ kezdeti vizsgálata arra utalt, hogy a HPV58 L1 protein teljes hosszúságú transzkripciója és transzlációja funkcionálisan megtörtént; az expresszió azonban fokozható, ha a szekvenciát élesztõ számára elõnyös kodonszekvenciákkal átépítjük. Az átépített 58 L1 szekvenciát úgy alakítottuk át, hogy kihagytunk minden lehetséges, érés elõtti transzkripciós leállítószekvenciát, hogy biztosítsuk az erõteljes transzkripciót. Az 58 L1 R transzkriptum Northern-blot-vizsgálata azt mutatta, hogy az elõállított teljes hosszúságú transzkriptumok mennyisége fokozódott az 58 L1 wt protein eredményeivel összehasonlítva (3. ábra). 5. példa HPV58 L1 protein expressziója Galaktózzal indukált élesztõsejt-tenyészetek fagyasztott üledékét (OD 600 =10 mennyiségû sejtnek megfelelõ sejtet) olvasztottuk jégen és szuszpendáltunk 2 mmol/l PMSF reagenst tartalmazó PC¹puffer (100 mmol/l Na 2 HPO 4 és 0,5 mol/l NaCl, ph=7,0) 300 l-ében. Savval mosott, 0,5 mm átmérõjû üveggyöngyöket adtunk hozzá, körülbelül csövenként 0,5 g¹ot. A csöveket háromszor öt percen át vortexszeltük, egyperces szünetekkel. Az elegyhez 7,5 l 20%¹os TritonX 100 reagenst adtunk és a vortex lépést 5 percen át, 4 C¹on megismételtük. A felülúszót steril, kisméretû centrifugacsõbe vittük át, összes élesztõprotein jelölést tettünk rá, dátummal láttuk el és 70 C¹on tároltuk. 6. példa Western-blot-vizsgálat Minden egyes 58 L1 konstrukció esetében húsz izolált élesztõkolóniából származó teljes élesztõprotein-kivonatot vizsgáltunk Western-blot-vizsgálattal, hogy ellenõrizzük az 58 L1 protein expresszióját galaktózzal történõ indukciót követõen. Reprezentatív 58 L1 wt és 58 L1 R izolátumokból származó teljes proteinkivonatok 10, 5 és 2,5 g mennyiségét elegyítettük SDS-PAGE mintapufferrel és hevítettük 95 C¹ra 10 percen át. Pozitív kontrollként 16 L1 proteint alkalmaztunk, amelynek mérete körülbelül 55 kd, és negatív kontrollként HPV L1 proteintõl mentes teljes élesztõprotein-kivonatot (nem bemutatott adat) vittünk fel. A proteineket 10%¹os SDS-PAGE gélre vittük fel és Tris-glicin pufferben elektroforetizáltuk. A proteinek elválasztását követõen, a proteineket a gélrõl nitro-cellulózra vittük át, majd a blotot 1 hígítópufferben blokkoltuk (Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD), 1 órán át, szobahõmérsékleten, rázás mellett. A blotot háromszor mostuk, és szobahõmérsékleten, 16 órán át inkubáltuk élesztõvel kimerített, kecskében termelt, trpe-hpv31 L1 elleni szérummal, amely keresztreagál HPV16 és HPV58 L1 proteinekkel. Ezt követõen, a blotot háromszor mostuk, majd kecske elleni, HRPO enzimmel konjugált ellenanyag 1:2500 léptékû hígításával inkubáltuk 1 órán át. A blotot ismét háromszor mostuk, majd NBT/BCIP detektáló szubsztráttal (Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD) érintkeztettük. Az immunreaktív proteineket lila csíkok formájában detektáltuk a bloton. Az 58 L1 protein minden esetben különálló immunreaktív csík formájában volt detektálható a nitro-celluló- 9

10 1 HU T2 2 zon, körülbelül 55 kd¹nak megfelelõ pozícióban (lásd a 4. ábrát). Az 58 L1 csíkok intenzitása erõsebbnek tûnt, mint az 58 L1 wt csíkoké, ami arra utalt, hogy élesztõkodon-optimalizálást követõen, javított 58 L1 expressziót értünk el. 7. példa ELISA vizsgálat Abból a célból, hogy demonstráljuk az 58 L1 VLP expresszióját, az 58 L1 wt és 58 L1 R teljes élesztõkivonatok mintáját ELISA eljárással vizsgáltuk. A HPV58 L1 és HPV58 L1 R proteineket expresszáló élesztõsejteket számos eljárással szaporítottuk, beleértve görgõcsöves kultúrákat, rázólombikokat és fermentorokat. Az élesztõsejteket lizáltuk és proteinkivonatokat állítottunk elõ abból a célból, hogy meghatározzuk az elõállított HPV58 L1 vírusszerû részecskéknek (VLP-knek) a teljes protein egy mikrogrammjára vonatkoztatott mennyiségét. Abból a célból, hogy kimutassuk HPV58 L1 VLP¹k expresszióját, szendvics- ELISA vizsgálatot terveztünk. Protein¹G reagensen tisztított H582C3.F7 (F7) monoklonális ellenanyagot (mab) alkalmaztunk intakt 58 L1 VLP¹k teljes élesztõprotein-kivonatból történõ kötésére. Az F7 mab fajlagosan felismer egy HPV58 L1 VLP konformációs epitópot. A nem kötõdött proteineket kimostuk, majd egy másik, konformációra fajlagos mab¹ot, a H586E11.F4 (F4) mab¹ot alkalmaztuk detektáló ellenanyagként. Valódi, helyes konformációt mutató 58 L1 VLP¹k kötõdtek, és a detektálást HRPO enzimmel konjugált, egéreredetû IgG2b ellenanyag elleni ellenanyag és TMB szubsztrát alkalmazásával tettük lehetõvé. Közelebbrõl, F7 ellenanyagot alkalmaztunk Immulon 4 HBX 96 vályulatú lemezek bevonására éjszakán át, 4 C¹on. A lemezeket háromszor mostuk 0,05% Tween 20 reagenst tartalmazó PBS-pufferrel, majd blokkolóoldattal (PBS+0,05% Tween 20+1% BSA) blokkoltuk. A lemezeket háromszor mostuk és az A sorba antigéneket (teljes élesztõlizátum, blokkolópufferben 12,5 g/ml koncentrációra hígítva) mértünk be, két párhuzamossal. Tisztított HPV58 L1 VLP referencia standardokat mértünk be az A sor 3¹as és 4¹es oszlopába (206 ng/ml, 12,5 g/ml¹es teljes élesztõprotein-oldatban). A referencia- és vizsgálati mintákból az egyes oszlopokban felezõ tovafutó hígítást készítettünk. Három órán át, szobahõmérsékleten történõ inkubálást követõen, az antigénfelesleget leszívtuk és a lemezeket háromszor mostuk. Konformációra fajlagos F4 mab¹ot hígítottunk blokkolóoldatban, bemértük a vályulatokba és egy órán át inkubáltuk szobahõmérsékleten. A lemezeket mostuk, majd 5 perc idõtartamra TMB reagenst (Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL) mértünk a vályulatokba, hogy HRP enzimmel jelölt ellenanyagkomplexeket mutassunk ki. A detektálási reakciót 2 mol/l H2SO4-oldat hozzáadásával állítottuk le. A lemezeket 450 nm hullámhosszon olvastuk le, és a HPV58 L1 VLP koncentrációját a referenciastandardokkal összehasonlítva határoztuk meg, az összes protein egy g-jára vonatkoztatott ng VLP egységekben. Az 5. ábra HPV58 L1 wt és HPV58 L1 R proteineket expresszáló élesztõkbõl származó összes protein egy mikrogrammjára vonatkoztatott, két párhuzamos vizsgálatban detektált VLP¹k mennyiségét hasonlítja össze. A HPV58 L1 VLP expressziós szintje körülbelül két-háromszorosára emelkedett az élesztõ kodonoptimalizálása eredményeképpen. 8. példa Transzmissziós elektronmikroszkópia Abból a célból, hogy demonstráljuk: az 58 L1 protein tényleg önszervezõdik és pentamer L1¹kapszomereket képez, amelyek viszont vírusszerû részecskékké állnak össze önszervezõdéssel, részlegesen tisztított 58 L1 R protein kivonatot vetettünk alá transzmissziós elektronmikroszkópos (EM) vizsgálatnak. Élesztõt tenyésztettünk kisléptékû fermentálással és a sejteket tömörítettük. Az így kapott üledéket tisztításnak vetettük alá. Az üledéket és a tisztított élesztõkivonatokat immunblot-eljárással ellenõriztük, hogy kimutassuk az L1 protein expresszióját és a tisztítási folyamat során mutatott retencióját. A tisztított élesztõkivonatokat ezt követõen 45%¹os szacharózpárnán centrifugáltuk, és az így kapott üledéket pufferben szuszpendáltuk transzmissziós EM vizsgálat céljára. A 6. ábra a képzõdött 58 L1 VLP¹k reprezentatív képét mutatja. A szferikus részecskék átmérõje a nyers mintában nm, és néhány részecske kapszomerek rendezett sorát mutatja. Szekvencialista <110> Merck & Co., Inc. <120> OPTIMIZED EXPRESSION OF HPV 58 L1 In YEAST <130> PCT <150> 60/519,211 <151> <160> 10 <170> FastSEQ for Windows Version

11 HU T2 <210> 1 <211> 1497 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPV58 L1¹R <400> 1 atgtccgtct ggagaccatc cgaagctacc gtctacttgc caccagttcc agtctccaag 60 gtcgtctcca ctgacgaata cgtctctaga acctctatct actactacgc tggttcctct 120 agattgttgg ctgttggtaa cccatacttc tccatcaagt ctccaaacaa caacaagaag 180 gtcttggttc caaaggtctc tggtttgcaa tacagagtct tcagagtcag attgccagac 240 ccaaacaagt tcggtttccc agacacttcc ttctacaacc cagacactca aagattggtc 300 tgggcttgtg tcggtttgga aatcggtaga ggtcaaccat tgggtgttgg tgtctctggt 360 cacccatact tcaacaagtt cgacgacacc gaaacctcca acagataccc agctcaacca 420 ggttctgaca acagagaatg tttgtccatg gactacaagc aaacccaatt gtgtttgatc 480 ggttgtaagc caccaactgg tgaacactgg ggtaagggtg ttgcttgtaa caacaacgct 540 gctgctaccg actgtccacc attggaattg ttcaactcca tcatcgaaga cggtgacatg 600 gtcgacactg gtttcggttg tatggacttc ggtaccttgc aagctaacaa gtccgacgtt 660 ccaatcgaca tctgtaactc cacctgtaag tacccagact acttgaagat ggcttctgaa 720 ccatacggtg actccttgtt cttcttcttg agaagagaac aaatgttcgt cagacacttc 780 ttcaacagag ctggtaagtt gggtgaagct gttccagacg acttgtacat caagggttct 840 ggtaacaccg ctgtcatcca atcctctgct ttcttcccaa ctccatctgg ttccatggtc 900 acctctgaat ctcaattgtt caacaagcca tactggttgc aaagagctca aggtcacaac 960 aacggtatct gttggggtaa ccaattgttc gtcactgtcg tcgacaccac tagatccact 1020 aacatgacct tgtgtaccga agtcaccaag gaaggtacct acaagaacga caacttcaag 1080 gaatacgtca gacacgtcga ggaatacgac ttgcaattcg tcttccaatt gtgtaagatc 1140 accttgactg ctgaaatcat gacctacatc cacaccatgg actctaacat cttggaagac 1200 tggcaattcg gtttgactcc accaccatct gcttccttgc aagacaccta cagattcgtc 1260 acctctcaag ctatcacctg tcaaaagact gctccaccaa aggaaaagga agacccattg 1320 aacaagtaca ccttctggga agtcaacttg aaggaaaagt tctctgctga cttggaccaa 1380 ttcccattgg gtagaaagtt cttgttgcaa tctggtttga aggctaagcc aagattgaag 1440 agatctgctc caaccactag agctccatcc accaagagaa agaaggtcaa gaagtaa 1497 <210> 2 <211> 498 <212> PRT <213> Human Papillomavirus Type 58 <400> 2 Met Ser Val Trp Arg Pro Ser Glu Ala Thr Val Tyr Leu Pro Pro Val Pro Val Ser Lys Val Val Ser Thr Asp Glu Tyr Val Ser Arg Thr Ser Ile Tyr Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Arg Leu Leu Ala Val Gly Asn Pro Tyr Phe Ser Ile Lys Ser Pro Asn Asn Asn Lys Lys Val Leu Val Pro Lys Val Ser Gly Leu Gln Tyr Arg Val Phe Arg Val Arg Leu Pro Asp Pro Asn Lys Phe Gly Phe Pro Asp Thr Ser Phe Tyr Asn Pro Asp Thr

12 HU T2 Gln Arg Leu Val Trp Ala Cys Val Gly Leu Glu Ile Gly Arg Gly Gln Pro Leu Gly Val Gly Val Ser Gly His Pro Tyr Phe Asn Lys Phe Asp Asp Thr Glu Thr Ser Asn Arg Tyr Pro Ala Gln Pro Gly Ser Asp Asn Arg Glu Cys Leu Ser Met Asp Tyr Lys Gln Thr Gln Leu Cys Leu Ile Gly Cys Lys Pro Pro Thr Gly Glu His Trp Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Asn Asn Ala Ala Ala Thr Asp Cys Pro Pro Leu Glu Leu Phe Asn Ser Ile Ile Glu Asp Gly Asp Met Val Asp Thr Gly Phe Gly Cys Met Asp Phe Gly Thr Leu Gln Ala Asn Lys Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile Cys Asn Ser Thr Cys Lys Tyr Pro Asp Tyr Leu Lys Met Ala Ser Glu Pro Tyr Gly Asp Ser Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gln Met Phe Val Arg His Phe Phe Asn Arg Ala Gly Lys Leu Gly Glu Ala Val Pro Asp Asp Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gly Asn Thr Ala Val Ile Gln Ser Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Gly Ser Met Val Thr Ser Glu Ser Gln Leu Phe Asn Lys Pro Tyr Trp Leu Gln Arg Ala Gln Gly His Asn Asn Gly Ile Cys Trp Gly Asn Gln Leu Phe Val Thr Val Val Asp Thr Thr Arg Ser Thr Asn Met Thr Leu Cys Thr Glu Val Thr Lys Glu Gly Thr Tyr Lys Asn Asp Asn Phe Lys Glu Tyr Val Arg His Val Glu Glu Tyr Asp Leu Gln Phe Val Phe Gln Leu Cys Lys Ile Thr Leu Thr Ala Glu Ile Met Thr Tyr Ile His Thr Met Asp Ser Asn Ile Leu Glu Asp Trp Gln Phe Gly Leu Thr Pro Pro Pro Ser Ala Ser Leu Gln Asp Thr

13 HU T2 Tyr Arg Phe Val Thr Ser Gln Ala Ile Thr Cys Gln Lys Thr Ala Pro Pro Lys Glu Lys Glu Asp Pro Leu Asn Lys Tyr Thr Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro Leu Gly Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ser Gly Leu Lys Ala Lys Pro Arg Leu Lys Arg Ser Ala Pro Thr Thr Arg Ala Pro Ser Thr Lys Arg Lys Lys Val Lys Lys <210> 3 <211> 1497 <212> DNA <213> 58 Human Papillomavirus Type <400> 3 atgtccgtgt ggcggcctag tgaggccact gtgtacctgc ctcctgtgcc tgtgtctaag 60 gttgtaagca ctgatgaata tgtgtcacgc acaagcattt attattatgc tggcagttcc 120 agacttttgg ctgttggcaa tccatatttt tccatcaaaa gtcccaataa caataaaaaa 180 gtattagttc ccaaggtatc aggcttacag tatagggtct ttagggtgcg tttacctgat 240 cccaataaat ttggttttcc tgatacatct ttttataacc ctgatacaca acgtttggtc 300 tgggcatgtg taggccttga aataggtagg ggacagccat tgggtgttgg cgtaagtggt 360 catccttatt tcaataaatt tgatgacact gaaaccagta acagatatcc cgcacagcca 420 gggtctgata acagggaatg cttatctatg gattataaac aaacacaatt atgtttaatt 480 ggctgtaaac ctcccactgg tgagcattgg ggtaaaggtg ttgcctgtaa caataatgca 540 gctgctactg attgtcctcc attggaactt tttaattcta ttattgagga tggtgacatg 600 gtagatacag ggtttggatg catggacttt ggtacattgc aggctaataa aagtgatgtg 660 cctattgata tttgtaacag tacatgcaaa tatccagatt atttaaaaat ggccagtgaa 720 ccttatgggg atagtttgtt cttttttctt agacgtgagc agatgtttgt taggcacttt 780 tttaataggg ccggaaaact tggcgaggct gtcccggatg acctttatat taaagggtcc 840 ggtaatactg cagttatcca aagtagtgca ttttttccaa ctcctagtgg ctctatggtt 900 acctcagaat cacaattatt taataagcct tattggctac agcgtgcaca aggtcataac 960 aatggcattt gctggggcaa tcagttattt gttaccgtag ttgataccac tcgtagcact 1020 aatatgacat tatgcactga agtaactaag gaaggtacat ataaaaatga taattttaag 1080 gaatatgtac gtcatgttga agaatatgac ttacagtttg tttttcagct ttgcaaaatt 1140 acactaactg cagagataat gacatatata catactatgg attccaatat tttggaggac 1200 tggcaatttg gtttaacacc tcctccgtct gccagtttac aggacacata tagatttgtt 1260 acctcccagg ctattacttg ccaaaaaaca gcacccccta aagaaaagga agatccatta 1320 aataaatata ctttttggga ggttaactta aaggaaaagt tttctgcaga tctagatcag 1380 tttcctttgg gacgaaagtt tttattacaa tcaggcctta aagcaaagcc cagactaaaa 1440 cgttcggccc ctactacccg tgcaccatcc accaaacgca aaaaggttaa aaaataa 1497 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR láncindító 13

14 HU T2 <400> 4 21 atgtccgtgt ggcggcctag t <210> 5 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR láncindító <400> 5 28 gagatctgtg taagtaccac aacaatta <210> 6 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR láncindító <400> 6 31 gggatcccac aaaacaaaat gtccgtgtgg c <210> 7 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR láncindító <400> 7 28 gggatccgtg taagtaccac aacaatta <210> 8 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR láncindító <400> 8 ggatcccaca aaacaaaatg tctgtctgga gacc 34 <210> 9 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PCR láncindító 14

15 1 HU T2 2 <400> 9 ggatcccaca aaacaaaatg tctgtctgga gacc 34 <210> 10 <211> 1497 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antiszensz HPV 58 L1 <400> 10 tacaggcaga cctctggtag gcttcgatgg cagatgaacg gtggtcaagg tcagaggttc 60 cagcagaggt gactgcttat gcagagatct tggagataga tgatgatgcg accaaggaga 120 tctaacaacc gacaaccatt gggtatgaag aggtagttca gaggtttgtt gttgttcttc 180 cagaaccaag gtttccagag accaaacgtt atgtctcaga agtctcagtc taacggtctg 240 ggtttgttca agccaaaggg tctgtgaagg aagatgttgg gtctgtgagt ttctaaccag 300 acccgaacac agccaaacct ttagccatct ccagttggta acccacaacc acagagacca 360 gtgggtatga agttgttcaa gctgctgtgg ctttggaggt tgtctatggg tcgagttggt 420 ccaagactgt tgtctcttac aaacaggtac ctgatgttcg tttgggttaa cacaaactag 480 ccaacattcg gtggttgacc acttgtgacc ccattcccac aacgaacatt gttgttgcga 540 cgacgatggc tgacaggtgg taaccttaac aagttgaggt agtagcttct gccactgtac 600 cagctgtgac caaagccaac atacctgaag ccatggaacg ttcgattgtt caggctgcaa 660 ggttagctgt agacattgag gtggacattc atgggtctga tgaacttcta ccgaagactt 720 ggtatgccac tgaggaacaa gaagaagaac tcttctcttg tttacaagca gtctgtgaag 780 aagttgtctc gaccattcaa cccacttcga caaggtctgc tgaacatgta gttcccaaga 840 ccattgtggc gacagtaggt taggagacga aagaagggtt gaggtagacc aaggtaccag 900 tggagactta gagttaacaa gttgttcggt atgaccaacg tttctcgagt tccagtgttg 960 ttgccataga caaccccatt ggttaacaag cagtgacagc agctgtggtg atctaggtga 1020 ttgtactgga acacatggct tcagtggttc cttccatgga tgttcttgct gttgaagttc 1080 cttatgcagt ctgtgcagct ccttatgctg aacgttaagc agaaggttaa cacattctag 1140 tggaactgac gactttagta ctggatgtag gtgtggtacc tgagattgta gaaccttctg 1200 accgttaagc caaactgagg tggtggtaga cgaaggaacg ttctgtggat gtctaagcag 1260 tggagagttc gatagtggac agttttctga cgaggtggtt tccttttcct tctgggtaac 1320 ttgttcatgt ggaagaccct tcagttgaac ttccttttca agagacgact gaacctggtt 1380 aagggtaacc catctttcaa gaacaacgtt agaccaaact tccgattcgg ttctaacttc 1440 tctagacgag gttggtgatc tcgaggtagg tggttetctt tcttccagtt cttcatt 1497 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Nukleinsavmolekula, amely SEQ ID NO 2 azonosító számon bemutatott HPV58 L1 proteint kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz, ahol a nukleinsavszekvencia SEQ ID NO 1 azonosító számon bemutatott nukleotidszekvenciát tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti nukleinsavmolekulát tartalmazó vektor. 3. A 2. igénypont szerinti vektort tartalmazó gazdasejt. 4. A 3. igénypont szerinti gazdasejt, amely gazdasejt élesztõsejt. 5. A 4. igénypont szerinti gazdasejt, ahol az élesztõsejt az alábbiak közül választott: Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces lactis és Schizosaccharomyces pombe Az 5. igénypont szerinti gazdasejt, ahol a gazdasejt Saccharomyces cerevisiae. 7. Eljárás HPV58 L1 vírusszerû részecskék (VLP¹k) elõállítására, amely eljárás tartalmazza: (a) élesztõ transzformálását 1. igénypont szerinti nukleinsavmolekulával; (b) a transzformált élesztõ tenyésztését olyan körülmények mellett, amelyek lehetõvé teszik a kodonoptimalizált nukleinsavmolekula expresszióját, rekombináns papillomavírus-protein elõállítása céljából; és (c) rekombináns papillomavírus-protein izolálását HPV58 L1 VLP¹k elõállítása céljából. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, ahol az élesztõ az alábbiak közül választott: Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces lactis és Schizosaccharomyces pombe. 15

16 1 HU T A 8. igénypont szerinti eljárás, ahol az élesztõ Saccharomyces cerevisiae. 10. Eljárás HPV-fertõzések kezelésére vagy megelõzésére szolgáló vakcina elõállítására, amely eljárás tartalmazza HPV58 L1 VLP¹k elõállítását a 7 8. igénypontok bármelyike szerinti eljárással. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás, ahol a vakcina legalább egy további HPV-típus VLP¹it is tartalmazza. 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, ahol a legalább egy további HPV-típus az alábbiak közül választott: HPV6, HPV11, HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, 5 10 HPV35, HPV39, HPV45, HPV51, HPV52, HPV55, HPV56, HPV59 és HPV A 12. igénypont szerinti eljárás, ahol a legalább egy HPV-típus magában foglal HPV16¹ot. 14. A 13. igénypont szerinti eljárás, ahol a vakcina tartalmaz továbbá HPV18 VLP-ket. 15. A 14. igénypont szerinti eljárás, ahol a vakcina tartalmaz továbbá HPV6 VLP-ket és HPV11 VLP-ket. 16. A 14. vagy 15. igénypont szerinti eljárás, ahol a vakcina tartalmaz továbbá HPV31 VLP-ket. 17. A 16. igénypont szerinti eljárás, ahol a vakcina tartalmaz továbbá HPV45 VLP-ket. 16

17 HU T2 Int. Cl.: C12N 15/37 17

18 HU T2 Int. Cl.: C12N 15/37 18

19 HU T2 Int. Cl.: C12N 15/37 19

20 HU T2 Int. Cl.: C12N 15/37 20

(11) Lajstromszám: E 006 472 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 472 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006472T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 472 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 788982 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 257 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 257 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000827T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 27 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 727848 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 370 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 370 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008370T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 370 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 750224 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 532 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 532 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000832T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 32 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 783231 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 083 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 083 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008083T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 083 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 725933 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 949 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 949 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007949T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 949 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 835738 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 819 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 819 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006819T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 819 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 7669 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 563 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 563 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000463T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 63 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 749820 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 026 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 026 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004026T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 026 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 112946 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 263 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 263 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004263T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 263 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 70014 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 989 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 989 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007989T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 989 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 72699 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 398 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1a. ábra

(11) Lajstromszám: E 003 398 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1a. ábra !HU000003398T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 398 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 811249 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 147 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (54) Gaboxadol depresszió és más emocionális rendellenességek kezelésére

(11) Lajstromszám: E 008 147 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (54) Gaboxadol depresszió és más emocionális rendellenességek kezelésére !HU000008147T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 147 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 73896 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 419 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 419 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008419T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 419 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 799042 (22) A bejelentés

Részletesebben

Molekuláris terápiák

Molekuláris terápiák Molekuláris terápiák Aradi, János Balajthy, Zoltán Csősz, Éva Scholtz, Beáta Szatmári, István Tőzsér, József Varga, Tamás Szerkesztette Balajthy, Zoltán és Tőzsér, József, Debreceni Egyetem Molekuláris

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 866 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 866 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007866T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 866 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 73966 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan

A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan A basidiomycota élesztőgomba, a Filobasidium capsuligenum IFM 40078 törzse egy olyan fehérjét (FC-1 killer toxint) választ ki a tápközegbe, amely elpusztítja az opportunista patogén Cryptococcus neoformans-t.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 900 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 900 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006900T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 900 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 737113 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 952 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 952 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000792T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 92 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 73892 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 105 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A61F 2/16 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 006 105 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A61F 2/16 (2006.01) !HU000006105T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 105 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 108356 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 597 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 597 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004597T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 597 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 716248 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 815 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 815 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000781T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 81 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 024638 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 510 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 510 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000010T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 10 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 769233 (22) A bejelentés napja: 2004.

Részletesebben

BIOTECHNOLÓGIÁK EGYÉB IPARÁGAKBAN. Pókselyemfehérjék előállítása dohányban és burgonyában

BIOTECHNOLÓGIÁK EGYÉB IPARÁGAKBAN. Pókselyemfehérjék előállítása dohányban és burgonyában BIOTECHNOLÓGIÁK EGYÉB IPARÁGAKBAN Pókselyemfehérjék előállítása dohányban és burgonyában Tárgyszavak: selyemfehérje; transzgénikus növény; szintetikus pókselyem; selyemfehérjegén. A Nephila clavipes pók

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 418 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 418 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000005418T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 005 418 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 743779 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 702 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: G07D 11/00 (2006.01) 2. ábra

(11) Lajstromszám: E 003 702 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: G07D 11/00 (2006.01) 2. ábra !HU000003702T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 702 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 004986 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A replikáció mechanizmusa

A replikáció mechanizmusa Az öröklődés molekuláris alapjai A DNS megkettőződése, a replikáció Szerk.: Vizkievicz András A DNS-molekula az élőlények örökítő anyaga, kódolt formában tartalmazza mindazon információkat, amelyek a sejt,

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 115 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 115 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000011T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 11 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 21 (22) A bejelentés napja: 0. 06.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 509 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 509 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000009T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 09 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 774961 (22) A bejelentés napja: 2004.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 651 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 651 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008651T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 651 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 765355 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 022 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 022 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007022T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 022 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 733575 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 324 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 324 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007324T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 324 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 748539 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 879 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 879 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003879T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 879 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 290990 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 710 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 710 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000067T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 7 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 731277 (22) A bejelentés napja: 04.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 013 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 013 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007013T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 013 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 74139 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 491 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 491 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004491T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 491 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 713628 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 263 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 263 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007263T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 263 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 830025 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 506 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 506 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000806T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 06 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 82 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 334 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1. ábra

(11) Lajstromszám: E 005 334 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1. ábra !HU000005334T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 005 334 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 829382 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 397 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 397 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000397T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 397 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 81106 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 869 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 869 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007869T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 869 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 7464 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 985 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1. ábra

(11) Lajstromszám: E 003 985 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1. ábra !HU00000398T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 98 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 764184 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 141 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 141 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004141T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 141 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal (21) Magyar ügyszám: E 05 801577 (22) A bejelentés napja: 2005. 10. 20. (96) Az európai bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 691 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: E01C 13/08 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 006 691 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: E01C 13/08 (2006.01) !HU000006691T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 691 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 4291 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 802 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 802 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007802T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 802 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 79176 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 488 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 488 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004488T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 488 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 798717 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 537 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 537 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000637T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 37 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 708911 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 618 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 618 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008618T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 618 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 792205 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 672 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 672 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004672T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 672 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 761894 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 422 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1A. ábra

(11) Lajstromszám: E 005 422 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 1A. ábra !HU000005422T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 005 422 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 020041 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 582 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 582 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004582T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 582 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 803194 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 281 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 281 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006281T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 281 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 722791 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 464 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 464 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008464T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 464 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 787786 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 697 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 697 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003697T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 697 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 7987 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 017 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 017 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007017T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 017 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 7232 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 833 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 833 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004833T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 833 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 785102 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 463 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: B65D 1/16 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 005 463 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: B65D 1/16 (2006.01) !HU00000463T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 463 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 7064 (22) A bejelentés napja: 0.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 158 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 158 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008158T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 158 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 746205 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 474 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 474 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004474T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 474 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 799742 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 517 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A62B 18/04 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 007 517 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A62B 18/04 (2006.01) !HU000007517T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 517 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 022648 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 154 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 154 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000814T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 14 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 81727 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 121 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: H01B 1/00 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 007 121 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: H01B 1/00 (2006.01) !HU000007121T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 121 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 2 (22) A bejelentés napja: 06.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 749 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 749 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006749T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 749 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 818248 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 248 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 2b. ábra

(11) Lajstromszám: E 005 248 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. 2b. ábra !HU00000248T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 248 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 774803 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 829 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 829 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003829T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 829 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 82032 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 202 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 202 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006202T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 202 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 764089 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 579 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 579 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000779T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 79 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 790990 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 087 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 087 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000087T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 087 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 76909 (22) A bejelentés napja: 0.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 780 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 780 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003780T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 780 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 701 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 787 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 787 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000787T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 787 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 7421 (22) A bejelentés napja: 03.

Részletesebben

Bakteriofág és bakteriális represszor vizsgálata in vivo és in vitro módszerekkel

Bakteriofág és bakteriális represszor vizsgálata in vivo és in vitro módszerekkel SZENT ISTVÁN EGYETEM Bakteriofág és bakteriális represszor vizsgálata in vivo és in vitro módszerekkel Doktori értekezés tézisei Ferenczi Szilamér Imre Gödöllő 2008 A doktori iskola megnevezése: Biológia

Részletesebben

Kereskedelmi forgalomban lévő rekombináns gyógyszerkészítmények

Kereskedelmi forgalomban lévő rekombináns gyógyszerkészítmények Kereskedelmi forgalomban lévő rekombináns gyógyszerkészítmények Írta: Barta Zsolt Biomérnök hallgató 2007 Tartalomjegyzék 1 Rekombináns inzulin [1]... 3 2 A humán növekedési hormon rekombináns módon történő

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 409 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 005 409 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000009T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 00 9 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 791698 (22) A bejelentés napja: 03.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 195 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 195 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000819T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 19 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 727742 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 562 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 562 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000462T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 62 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 10202 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 488 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 488 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006488T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 488 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 7123 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 348 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (54) Szerkezet bõr alatti kötõszövet kezelésére, fõként masszírozására

(11) Lajstromszám: E 007 348 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (54) Szerkezet bõr alatti kötõszövet kezelésére, fõként masszírozására !HU000007348T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 348 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 803758 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

Biokatalízis, biokonverziók, biotranszformációk Rákhely, Gábor

Biokatalízis, biokonverziók, biotranszformációk Rákhely, Gábor Biokatalízis, biokonverziók, biotranszformációk Rákhely, Gábor Biokatalízis, biokonverziók, biotranszformációk Rákhely, Gábor Publication date 2012 Szerzői jog 2012 Szegedi Tudományegyetem TÁMOP-4.1.2.A/1-11/1

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 005 743 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A61F 2/06 (2006.01) 7. ábra

(11) Lajstromszám: E 005 743 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: A61F 2/06 (2006.01) 7. ábra !HU000005743T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 005 743 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 258083 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 871 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 871 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007871T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 871 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 806443 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 371 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: F16K 1/12 (2006.01)

(11) Lajstromszám: E 007 371 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (51) Int. Cl.: F16K 1/12 (2006.01) !HU000007371T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 371 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 07 117291 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 091 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (54) Modulrendszerû alapozás légvezetékoszlopok és tartóoszlopok számára

(11) Lajstromszám: E 004 091 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA. (54) Modulrendszerû alapozás légvezetékoszlopok és tartóoszlopok számára !HU000004091T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 091 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 813208 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 081 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 081 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU0000081T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 081 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 816664 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 096 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 096 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006096T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 096 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 706933 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 402 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 402 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008402T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 402 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 783960 (22) A bejelentés

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 549 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 549 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000649T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 49 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 76718 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 003 621 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 003 621 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000003621T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 003 621 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 717071 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

Vírusok Szerk.: Vizkievicz András

Vírusok Szerk.: Vizkievicz András Vírusok Szerk.: Vizkievicz András A vírusok az élő- és az élettelen világ határán állnak. Önmagukban semmilyen életjelenséget nem mutatnak, nincs anyagcseréjük, önálló szaporodásra képtelenek. Paraziták.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 100 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 100 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008100T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 100 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 846052 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

A géntechnológia genetikai alapjai (I./3.)

A géntechnológia genetikai alapjai (I./3.) Az I./2. rész (Gének és funkciójuk) rövid összefoglalója A gének a DNS információt hordozó szakaszai, melyekben a 4 betű (ATCG) néhány ezerszer, vagy százezerszer ismétlődik. A gének önálló programcsomagként

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 015 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 015 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008015T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 015 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 778847 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 335 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 335 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU00000433T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 33 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 012107 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 901 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 901 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004901T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 901 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 763266 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 809 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 809 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004809T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 809 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 06 742918 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 607 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 607 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004607T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 607 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 011519 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 006 687 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 006 687 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000006687T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 006 687 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 05 292408 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 008 405 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 008 405 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000008T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 008 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Szellemi Tulajdon Nemzeti Hivatala EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 03 77970 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 926 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 926 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007926T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 926 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 024336 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 004 708 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 004 708 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000004708T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 004 708 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 0 797 (22) A bejelentés napja: 0.

Részletesebben

(11) Lajstromszám: E 007 814 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA

(11) Lajstromszám: E 007 814 (13) T2 EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA !HU000007814T2! (19) HU (11) Lajstromszám: E 007 814 (13) T2 MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA (21) Magyar ügyszám: E 04 719993 (22) A bejelentés napja:

Részletesebben