Endogén antitest interferenciák III. Tld Toldy Erzsébet

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Endogén antitest interferenciák III. Tld Toldy Erzsébet"

Csenge Hegedüsné
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 1 A hypophysis daanatok biomarkereinek módszertani nehézséei Tld Toldy Erzsébet Vas Meye és Szombathely MJV Markusovszky Kórháza Központi Laboratórium, PTE ETK yakorlati Dianosztikai Tanszék, Szombathelyi Képzési Központ Szeed, Szakorvos továbbképzés 29. november A modern immunoassay módszerek érzékenysée. Néhány n/l mennyiséű molekulát felismer olyan környezetben, ahol az anyakoncentráció 1 11 n/l ARÁNYAZONOSSÁ A föld teljes (6 x 1 9 ) népessééből 1-et azonosítani Diamandos EP.: Clin Biochem, H/ és PRL fiziolóiás koncentráció viszonyai felnőttekben 3 2 1/ 1/2 1/2 Minimum 23,3 Maximum A módszerek mérési tartománya vées. Kontroll Acromealia aktív Acromeal remis. H-hiány n/ml ,9 n/ml x Az assay mérési tartománya 1,3 H PRL Szabad,2 Nyál- 1 Assay desin kiindulási pontja Totál Életkor: <3 év > év PAOLO MARZULLO P et al.: Usefulness of Different Biochemical Markers of the nsulin-like rowth Factor (F) Family in Dianosin rowth Hormone Excess and Deficiency in Adults, J. Clin Endocrin & Metab, 21; 86: 31-. Rendkívül maas hormonszint: "Hih Dose Hook" jelensé Endoén antitest interferenciák. Captures antitest 1. Antién Jelölt antitest Jel naysáa Szilárd fázis Tévesen leolvasott Valós maas alacsony koncentráció koncentráció Specifikus antitestek az analit ellen Heterophyl antitestek Reuma faktor Human anti-animal-antitestek Human-antihuman-antitestek (HAHA)?

Néhány n/l mennyiséű molekulát felismer olyan környezetben, ahol az anyakoncentráció 1 11 n/l ARÁNYAZONOSSÁ A föld teljes (6 x 1 9 ) népessééből 1-et azonosítani Diamandos EP.: Clin Biochem, 24. 37.

2 2 Állati antitestek ellen keletkező további antitestek Az állati antitestek ellen keletkező interakciók Állati antitest Human anti-izotípiás antibody Human anti- idiotípiás antitest Human anti-anti idiotípiás antitest Kricka: Clin. Chem Tévesen maas Tévesen alacsony ) Y Y Y * ) Y Y *Y Szilárd fázishoz kötött specifikus Ab Anti idiotípiás Ab *Jelet adó Ab Anti-anti idiotípiás Ab vay Anti izotípiás Ab Az analitika kivitelezése V.: alternatív jelölés, automatizáció Jelölési technika: alternatív v. izotóp? -fluoreszcens, kemilumineszcens módszerek jobban ki vannak téve a matrix effektusból adódó interakcióknak Kivitelezés: automata, vay manuális? - az extrakciós módszerek nem kompatibilisek az automatizációval - kinetikus jel-detektálás Hamis eredmény Analit specifikus interakciók : H Kémia: 191 aminosav (22 Kd) nem likált, két disulfid híd. Homoloia: PRL, Placentális fehérjék: pl. HPL, H-V Standardizáció: rhh (S 88/624; S 98/74) 22 Kd Hypophysis kivonat: S 8/-H izoformok keveréke Specificitás: módszerfüő antitestek Szenzitivitás: immunkémiai elv (RA, RMA) H-szintek az OT-teszt során három H módszerrel mérve: mindeyik az S 98/74 WHO preparátumra standardizált : normál Eészsées önkéntesek Acromeal-remissioban N=213 N=18 Acromeal-aktív Arafat A. M. et al: rowth Hormone Response durin Oral lucose Tolerance Test: The mpact of Assay Method on the Estimation of Reference Values in Patients with Acromealy and in Healthy Controls, and the Role of ender, Ae, and Body Mass ndex J Clin Endocrinol Metab, April 28, 93(4): N=28 Lealacsonyabb H szintek az OTT során, különböző módszerrel mérve durin Oral lucose Tolerance mation of Reference Values in ols, and the Role of ender, Ae, b, April 28, 93(4): Arafat A. M. et al: rowth Hormone Response Test: The mpact of Assay Method on the Estim Patients with Acromealy and in Healthy Contro and Body Mass ndex J Clin Endocrinol Metab H n/ml

Tévesen maas Tévesen alacsony ) Y Y Y * ) Y Y *Y Szilárd fázishoz kötött specifikus Ab Anti idiotípiás Ab *Jelet adó Ab Anti-anti idiotípiás Ab vay Anti izotípiás Ab Az analitika kivitelezése V.

3 3 Mátrix hatás és antitest specificitás Mátrix hatás Antitest specificitása a 22 KDa H detektálhatósá 2KDa H izoform iránt Analit specifikus interakciók: Korlátok: 22 KDa 2 KDa Várt H szintek n/ml Arafat A. M. et al: rowth Hormone Response durin Oral lucose Tolerance Test: The mpact of Assay Method on the Estimation of Reference Values in Patients with Acromealy and in Healthy Controls, and the Role of ender, Ae, and Body Mass ndex J Clin Endocrinol Metab, April 28, 93(4): Specificitás itá Transzport protein interakciók biolóiaila aktív frakció mérése? Lelet-értelmezés : in vivo interakciók Biokémia: -7aminosavból álló eyszálú polipeptid: 7, KDa Homolóia: - proinzulin: % -F-2: 7% - nsulin: 1 % - TSH, LH:,-,24 % Kötőfehérjék: - 6 izotípus, összes kerinő mennyisé >9%-a kötött, és a kötőfehérjék: : BP1-6 BP 1-2 BP 4-6 α-subunit α-subunit + + β-subunit β-subunit Az összes kerinő mennyiséének: < % szabad, szintje változik - a szérum proteolitikus enzim aktivitása változik, - ph viszonyok - farmakonok Ezért is a totál szintek a mebízhatóbbak! A totál mérés előtt a kötőfehérjékből az -et fel kell szabadítani MÓDSZEREK: 1.) Kromatoráfiás módszer: - aranystandard: Sephadex -7 savas élfiltráció 2.) Savas-etanolos extrakció: - ha követi a BP-ék precipitációja, akkor jól használható 3.) -et felszabadító disszociációs eljárás: eyéb szétkapcsoló reaensek yártó specifikusak. - túlsúlyban F-2-t adnak a mintához, aminek következtében az felszabadul a fehérjekötésből, mert az F-2-nek nayobb az affinitása. Szilárd fázishoz z kötött antitest + Kompetitív módszer: Jel : szint: A mintában lévő összes Jelölt

et al: rowth Hormone Response durin Oral lucose Tolerance Test: The mpact of Assay Method on the Estimation of Reference Values in Patients with Acromealy and in Healthy Controls, and the Role of

4 4 Telítő (szendvics) módszer: savas hidrolízis után totál -, előkezelés nélkül szabad szintek Szilárd fázishoz z kötött antitest Csekély vesztesé Szenzitívebb módszer, pontosabban mér az alacsony tartományban Holland tapasztalat: külső kontroll nmol/l Célérték mmulite 2 Advantae LMA RA+Eien RA Biosource + RA + Overi RMA Overi RMA DSL - Hazánkban ey labor sem használ külső kontrollt, mert nem elérhető! Eltérő módszerek, eltérő referencia tartományok: hiba a tankönyvi referencia értékek fiyelembevétele a módszer ismerete nélkül Referencia tartom mányok (n/ml) RA CLMA RMA ELSA Korcsoportok (év) Leletértelmezés: szinteket befolyásoló fiziolóiás faktorok Tápláltsá: protein, zsír maas szénhidrát bevitel pozitív korreláció az és a Ca, Fe, K, M, Niacin, P, Zn, Riboflavin (B 2 vit.) + thiamin (B 1 vit.) Malnutrició: hh Divatos foyókúrák! Obesitas: H - a pulsatilitás foka csökken, amely inverzül korrelál a zsírtömeel (BM). Alkalmazkodási mechanizmus (leptin). A H- axis meváltozása reverzibilis, ha testsúlycsökkenés van. Totál, szabad F-1 Menstruáció, terhessé, ösztroén: ösztroén hatásra hh placenta: somatotropin hatása szinteket befolyásoló afiziolóiás faktorok A prolactin frakciók :hypophysaer forma. Diabetes: -es típus: rosszul kezelt diabetesben -es típus normál: inverz kapcsolat lükóz szintek Máj: Se szint már 4 nap alkoholmevonás után 4 %-al nő. Krónikus vesebetesé: az biolóiai aktivitása (bioavailability) csökkent, annak ellenére, hoy normál v. emelkedett az szint. Pajzsmiriy és adrenális beteséek: Hypothyreosisban Hyperthyresisban norm. v. Nay dózisú lucocorticoid: Total, Biolóiaila aktív Cushin s.: H szupprimált, de az nem mindi alacsony Súlyos beteséek: immunrendszer aktiváció Férfiaknál kifejezettebb, mint nőknél. Prehormon: 26 KDa 199 aminosav három diszulfid-híd a monomer forma : free PRL -bioaktivitása a lenayobb -a kerinésben ez a domináns: 8% proteolysis postranslatiós 23 KDa lycosilatio (2%), S S S phosphorilatio További 14, 16, 22 Kda-os proteolizált formák a kerinésben

5 -os aránya PRL frakciók %- A cirkuláló PRL molekulaformák aránya meváltozik, SZNONMÁK Ábra a Kempinski előadásból 2 hyperprolactinaemia Analitikai probléma: a rutinban alkalmazott a rutinban alkalmazott immunoassay módszerek eltérő fokban mérik be a bbprl molekulát Monomer PRL szint: 27 mu/l Roche Elecsys 1.en Abbott mx ABBOTT AxSYM J & J Amerlite Bayer mmuno-1 Wallac DELFA DPC mmulite and 2 Roche Elecsys 2. en. J & J Vitros EC Roche Cobas Core Bayer (Chiron Centaur, ACS:18) Beckman Access Fahie-Wilson Clin. Chem. 2. PRL mu/l Macroprolactinaemia prevalenciája Normál populációban - Nők: ~2, % - Férfiak: ~,2 % (chihara 199 (Japán), Bjoro 199 (Skandinávia)) Hyperprolactinaemiában (reproduktív korú nők: 3%, sec. am. 1%) % (Fahie-Wilson, Leslie, Bjoro, Smith, Strachan ) % (Viera 1998, Hauche 22)- váloatott minták. Terhessében: 3-8 % (Pascoe-Lira, 21) k é b tá k b k é d t A bbprl eliminálásának módszerei: él diffúziós kromatoráfia referencia módszer, de nem rutin Protein A precipitációs módszer rutinban alkalmazható, 9%-os hatásfok Polyethylene lycol (PE) precipitáció rutinban jól alkalmazható, mefelelő cut-off mellett 1%-os hatásfok Ultrafiltrációs módszer rutinban jól alkalmazható, 1%-os hatásfok, dráa PE módszer korlátai : H 2 O PE S S S S S S S S S S S S H 2 O PE nem quantitatív nem specifikus precipitáció nem minden módszerhez használható csak az Ab-PRL komplexet csapja ki nem tudjuk pontosan, a monomer PRL szintek referencia értékét Nincs definiálva a PRL ref. tartománya a bbprl mehatározása után: 169 PE kezelt minta PRL lelete három módszerrel mérve L (%) Fequency of MPRL ECLMA- ECLMA- CLMA Distribution of cases % 1% 9% 8% 7% 6% % 4% 3% 2% 1% % normal MPRL thprl N=13 1 N= =71 N= N=42 N= EC MA- EC LMA- C LMA Nincs mehatározva a PE kezelt mintákból mért PRL referencia tartománya

en Abbott mx ABBOTT AxSYM J & J Amerlite Bayer mmuno-1 Wallac DELFA DPC mmulite and 2 Roche Elecsys 2. en.

6 6 Miként eliminálhatnánk az analitika korlátait? NEM LEHET, de..eyütt kell élni vele team munkában: - tudatosítani kell a klinikusokban az immunanalitikai módszerek korlátait, - klinikai összefüéseket ismertté kell tenni a labor felé. Köszönet a metisztelő fiyelemért! Jelenle nayon kevés döntési határérték van mebízhatóan meerősítve! OK: a szakmai irányelvek nem definiálják pontosan az analitikai módszerrel támasztott követelményeiket.

korlátait, - klinikai összefüéseket ismertté kell tenni a labor felé. Köszönet a metisztelő fiyelemért!

Hasonló dokumentumok

Az endokrin lelet interpretációja

Az endokrin lelet interpretációja Toldy Erzsébet Vas Megye és s Szombathely MJV Markusovszky KórhK rháza Központi Laboratórium, rium, PTE ETK DMI Gyakorlati Diagnosztikai Tanszék, Szombathelyi KépzK pzési