Rubella-IgG-ELISA PKS medac. Magyar 136-PKS-VPU/010512

Átírás

1 RubellaIgGELISA PKS medac Magyar PKSVPU/010512

2 GYÁRTÓ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Fehlandtstraße 3 D20354 Hamburg FORGALMAZÓ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstraße 6 D22880 Wedel Tel.: ++49/ 4103/ Fax: ++49/ 4103/ RENDELÉSI CÍM Tel.: ++49/ 4103/ Fax: ++49/ 4103/ PKSVPU/010512

3 RubellaIgGELISA PKS medac Enzim immunoassay Pipettázási Kontroll Rendszerrel, rubeola vírus elleni IgG antitestek kvantitatív kimutatására szérumból és liquorból (CSF) Katalógusszám: 136PKS KIZÁRÓLAG IN VITRO DIAGNOSZTIKAI HASZNÁLATRA BEVEZETÉS A rubeolát okozó patogén a rubeola vírus (németül measles), mely a Togaviridae családba és a Rubivirus nemzetségbe tartozik. A rubeola vírusnak egyszeres szálú RNS genomja van és egyetlen szerotípusa létezik. A rubeola leggyakrabban gyerekkorban jelentkezik és rendszerint enyhe lefolyású. A betegséget apró pontos exanthema jellemzi és lymphadenosis kíséri. A terhesség elsı trimeszterében a rubeola fetális fertızést okozhat, mely irreverzibilis embryofoetalis károsodást eredményezhet. Megfelelı vakcinával a rubeola vírus ellen megfelelı immunitás érhetı el. Immunizálással a beoltottak 95 %ában megfelelı védı immunitás érhetı el. Különbözı módszerek állnak rendelkezésre a vakcinálás sikerének, illetve az immunitás állapotának mérésére. A RubellaIgGELISA PKS medac kvantitatív teszttel a rubeola vírusspecifikus IgG antitestek gyorsan és könnyen kimutathatóak. A WHO standardokkal szemben kalibrált teszt kontrollokkal meghatározható a specifikus antirubeola vírus IgG titer. A hemagglutináció gátlással (HAI) kapott alacsony titerek ellenırizhetıek a specifikus IgG antitestek kvantitatív kimutatásával. A teszt szintén alkalmas a patogénspecifikus intrathecal antitest szintézis kimutatására a specifikus antitest index szérumcsf párra történı kiszámolásával. 136PKSVPU/

4 A TESZT ELVE A lemezt rubeola vírus antigénnel vonták be. A mintában levı rubeola vírusspecifikus antitestek szelektíven kötıdnek az antigénhez. A peroxidázzal konjugált antihumán IgG antitestek kötıdnek a rubeola virus specifikus antitestekhez (P = peroxidáz). Inkubáció a TMBszubsztráttal (*). A reakciót kénsavval állítjuk le. Az abszorbanciát fotométerrel olvassuk le. A teszt elınyei A Pipettázási Kontroll Rendszer színváltozással lehetıvé teszi az összes pipettázási lépés vizuális monitorozását. A törhetı csíkok lehetıvé teszik a teszt gazdaságos felhasználását. Alkalmas az automatizálásra nyílt rendszerő ELISA készülékeken. Egy pontos kvantifikáció, kalibrációs görbe nem szükséges. A liquor vizsgálathoz nem kell további kalibrációs görbe. Alkalmas az immun státusz és a patogénspecifikus antitest index párhuzamos kimutatására. 136PKSVPU/

5 A KIT TARTALMA Katalógusszám: 136PKS 1. MTP Mikrotiterlemez: 12 x 8 lyuk (jelölés: RUG, kerettel és szárítószerrel, vákuum zárású alumínium zacskóban), törhetı, U alakú, rubeola vírus antigénnel bevont, BSA és ph indikátor, felhasználásra kész. 2. CONTROL Negatív kontroll: 1 fiola, 1,5 ml, humán szérum, felhasználásra kész, BSAt, fenolt, ProClin TM 300at és gentamycin szulfátot tartalmaz. 3. CONTROL + Pozitív kontroll: 1 fiola, 1,5 ml, humán szérum, felhasználásra kész, BSAt, fenolt, ProClin TM 300at és gentamycin szulfátot tartalmaz. 4. CAL Kalibrátor: 1 fiola, 1,5 ml, humán szérum, felhasználásra kész, FCSt, BSAt, fenolt, ProClin TM 300at és gentamycin szulfátot tartalmaz. 5. WB Mosó puffer: 1 flakon, 100 ml, PBS/Tween (10x), ph 7,2 7,4, ProClin TM 300 tartalmú. 6. VIRDIL Mintahígító: 1 flakon, 110 ml, PBS/Tween/BSA, ph 7,2 7,4, felhasználásra kész, ProClin TM 300 tartalmú. 7. CON Konjugátum: 3 fiola, mindegyik 4,5 ml, kecske antihumán IgG, HRPvel konjugált, felhasználásra kész, zöld színő, BSAt, fenolt, ProClin TM 300at és gentamycin szulfátot tartalmaz. 8. TMB TMBszubsztrát: 1 flakon, 10 ml, felhasználásra kész. 9. STOP Leállító oldat: 2 flakon, mindegyik 11 ml, 0,5 M kénsav (H 2 SO 4 ), felhasználásra kész. 136PKSVPU/

6 1. TÁROLÁS ÉS STABILITÁS Anyag/Reagens Állapot Tárolás Stabilitás Teszt kit bontatlan C lejárati idı végéig Mikrotiterlemez bontott C zacskóban 6 hét szárítószerrel Kontrollok/ bontott C 6 hét kalibrátor Mosó puffer hígított C 6 hét Minta hígító bontott C 6 hét Konjugátum bontott C 6 hét TMBszubsztrát bontott C 6 hét Leállító oldat bontott C lejárati idı végéig Ne használjuk a reagenseket a lejárati idın túl. 2. SZÜKSÉGES DE A KITBEN NEM SZÁLLÍTOTT REAGENSEK ÉS ANYAGOK 2.1. Víz injekcióhoz (H 2 O újradesztillált). Ioncserélt víz zavarhatja a mérési eljárást Állítható mikropipetták Tiszta üveg, vagy mőanyag edények a mosópuffer és a minták hígításához Mikrotiterlemezek mosására alkalmas készülék (pl. többcsatornás pipetta, vagy ELISA mosó) Inkubátor, 37 C Mikrotiterlemez leolvasó 450 nm és nm szőrıkkel. 3. A REAGENSEK ELİKÉSZÍTÉSE A mérés megkezdése elıtt az összes komponenst szobahımérsékletőre kell hozni. Határozzuk meg a felhasználandó lyukak számát Mikrotiterlemez Az alumínium tasakot mindig szorosan zárjuk vissza a szárítószerrel együtt. A tárolási körülmények és a stabilitási adatok az 1. pont alatt találhatóak. 136PKSVPU/

7 Megjegyzés: A mikrotiter lemez lyukai halvány zöld színőek. A lyukakban idınként elıforduló zöldesbarna elszínezıdést a gyártási eljárás okozza, a teszt teljesítıképességét nem befolyásolja Mosó puffer Keverjünk össze egy térfogategység mosó puffert (10x) kilenc egység injekció minıségő vízzel (pl. 50 ml mosó puffert (10x) 450 ml vízzel). 10 ml hígított mosó puffer szükséges nyolc lyukhoz. A mosó pufferben (10x) elıforduló kristályokat fel kell oldani melegítéssel (max. 37 C) és/vagy szobahımérsékleten keveréssel. Soha ne keverjük a specifikus reagenseket (mikrotiterlemez, kontrollok, konjugátum, kalibrátor) a különbözı gyártási számú kitekben. Ezzel szemben a minta hígító, a mosó puffer, a TMBszubsztrát és a leállító oldat általában cserélhetı az összes medac virológiai ELISA kitben. Más gyártó reagensei nem használhatóak. Érvényes és reprodukálható eredmények csak a használati utasítás pontos betartása esetén nyerhetık. 4. MINTÁK 4.1. A teszt szérum és CSF minták vizsgálatára alkalmas (a CSF kimutatáshoz ld. a 8. pontot). A beteg minták 7 napig tárolhatóak 28 ºCon. Hosszabb tárolás 20 C alatt. Kerüljük az ismételt felolvasztást és fagyasztást A szérumok elıkezelése pl. inaktiválás, nem szükséges. A szérumok nem lehetnek mikroorganizmusokkal szennyezettek, illetve nem tartalmazhatnak vörös vérsejteket A szérum mintákat 1:200szorosra kell hígítani mintahígítóval. Kezdeti hígításnak 1:50 hígítást javaslunk (pl. 10 µl szérum µl mintahígító). A további 1:4 hígításokhoz készítsük elı a szükséges térfogatokat. A mérési tartományon kívül esı minták késıbb tovább hígíthatóak A szérumcsf pár diagnosztikai vizsgálata részletesen 8. pontban van leírva. 136PKSVPU/

8 5.A. AZ ELJÁRÁS MENETE 5.1. Vágjuk el az alumínium tasakot a simítózár felett és vegyük ki a szükséges számú lyukakat (ld. 3.1.). A lyukak felhasználásra készek, elımosás nem szükséges Az A1 lyukat hagyjuk üresen a háttérnek (ld. 6.A.). Adjunk 50 µl negatív, pozitív kontrollt, illetve hígított mintát egyegy lyukba és 50 µl kalibrátort két lyukba. A minták pipettázása után (semleges, vagy lúgos folyadék) a lyukak színe kékre változik. A színváltozás hiánya egy lyukban jelzi, hogy a minta, illetve kontroll hozzáadása nem történt meg. Ha szükséges, a mikrotiter lemezt nedves kamrában 60 percig 2 8 Con tarthatjuk felhasználás elıtt Inkubáljuk a lemezt 60 percig (± 5 perc) 37 o Con (± 1 C) nedves kamrában, vagy fóliával lezárva Az inkubáció után mossuk a lemezt háromszor 200 µl mosópufferrel lyukanként. Ügyeljünk, hogy minden lyuk töltve legyen. A mosás után csapkodjuk a lemezt szőrıpapírra. Ne engedjük a lyukakat kiszáradni! Azonnal használjuk fel! 5.5. Adjuk a konjugátumot (zöld színő) minden lyukba (kivétel A1). 50 µl konjugátumot pipettázzunk a lyukakba, ha manuálisan dolgozzuk fel. Kérjük figyeljen: Ha automata készülékkel dolgozunk, 60 µl konjugátumot pipettázzunk minden lyukba, a készülék inkubációs kamrájában elıforduló nagyobb párolgás miatt. A teszt automatán való alkalmazhatóságát a kiértékelés során megerısítették. Mindazonáltal javasoljuk, hogy a laborban mőködı automatával való kompatibilitást ellenırizzük Inkubáljuk újra 60 percig (± 5 perc) 37 o Con (± 1 C) nedves kamrában, vagy fóliával lezárva Az inkubáció után mossuk a lemezt újra (ld. 5.4.) Adjunk 50 µl TMBszubsztrát oldatot minden lyukba (A1be is) és inkubáljuk 30 percig (± 2 perc) 37 o Con (± 1 C) nedves kamrában, vagy fóliával lezárva, sötétben. A pozitív minták színe kékre változik Állítsuk le a reakciót 100 µl leállító oldattal minden lyukba (A1be is). A pozitív minták színe sárgára változik. 136PKSVPU/

9 A fotometrikus leolvasás elıtt tisztítsuk meg a mikrotiter lemez alját és ügyeljünk arra, hogy ne legyenek levegıbuborékok a lyukakban. A leolvasást a leállító reagens hozzáadása után 15 percen belül el kell végezni. 5.B. AZ ELJÁRÁS MENETE TÁBLÁZATOSAN Neg. kontroll Poz. kontroll Kalibrátor Minta Háttér (A1) Negatív kontroll 50 µl Pozitív kontroll 50 µl Kalibrátor 50 µl Minta 50 µl Inkubáljuk 60 percig 37 Con, majd mossuk 3 x 200 µl mosóoldattal Konjugátum 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) Inkubáljuk 60 percig 37 Con, majd mossuk 3 x 200 µl mosóoldattal TMBszubsztrát 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl Inkubáljuk 30 percig 37 Con sötétben Leállító oldat 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Fotometrikus leolvasás 450 nmen (ref nm) *) manuális/automatikus eljárás (ld. 5.5.) 6.A. AZ EREDMÉNYEK SZÁMOLÁSA (VALIDITÁS) Olvassuk le az OD értékeket 450 nmen (referencia hullámhossz nm). Vonjuk ki a háttér OD értékét (A1 lyuk) az összes OD értékbıl. Gyártási tétel specifikus adatok A kitben szállított gyártási tétel specifikus adatokat tartalmazó lap az alábbi információkat tartalmazza: gyártási tétel specifikus kalibrációs görbe a görbe a, b és c paraméterei a kalibrátor névleges OD értéke a kalibrátor alacsony OD értéke a pozitív kontroll névleges koncentráció tartománya (IU/ml) 136PKSVPU/

10 Érvényességi kritériumok A negatív kontroll átlagos OD értéke < legyen. A pozitív kontroll egységértékének a gyártási tétel specifikus lapon feltüntetett névleges tartományon belül kell lennie. A kalibrátor átlagos OD értékének a gyártási tétel specifikus lapon feltüntetett alacsony OD limit felett kell lennie. A szérumcsf párra vonatkozó további érvényességi kritériumok a 8. pontban találhatóak. Ismételje meg a futtatást, ha az eredmények nem felelnek meg a specifikációnak. Az eredmények korrigálása A pozitív kontroll és a minták mért OD értékeit korrigálni kell ez alábbiak szerint: Kalibrátor névleges OD értéke OD korr = x OD mért Kalibrátor mért OD értéke Az eredmények mennyiségi értékelése A korrigált OD értéknek megfelelı koncentrációk IU/mlben leolvashatóak a gyártási tétel specifikus kalibrációs görbérıl (ld. gyártási tétel specifikus lap). Alternatívaként, a koncentráció az alábbi képlettel számolható: a Koncentráció[IU/ml] = b/ 1 OD corrected C A legtöbb új ELISA leolvasónál lehetséges a képlet programozása, így lehetıvé válik az automatikus adatfeldolgozás. A mérési tartomány IU/mlig terjed. A tartomány alá esı mintákat < 5 IU/mlnek, a felettieket > 200 IU/mlnak értelmezzük. Ezeket az értékeket nem szabad extrapolálni. Az immunitás cutoff értéke 15 IU/ml. Szürke zóna = cutoff ± 20 % (= IU/ml) 136PKSVPU/

11 6.B. AZ EREDMÉNYEK ÉRTELMEZÉSE/A MÓDSZER KORLÁTAI A szürke zóna alá esı egységértékő mintákat NEGATÍVnak tekintjük immunitásra vonatkozóan. A szürke zónába esı egységértékő minták KÉTESnek tekintendık. Mivel a védı immunitás nem adható meg kétesnek, ezeket a mintákat újra kell vizsgálni 14 nappal késıbb friss mintával együtt, a titer változás meghatározása érdekében. A szürke zóna fölé esı egységértékő mintákat POZITÍVnak tekintjük immunitásra vonatkozóan. Az eredményeket mindig a klinikai adatokkal és további diagnosztikus paraméterekkel összhangban kell értelmezni. Nagyon nagy koncentrációjú lipidek a pozitív mintákban befolyásolhatják a mért antitest koncentrációkat. A hemoglobin, vagy bilirubin nagy koncentrációja nem befolyásolja az eredményeket. 7. TELJESÍTİKÉPESSÉG Az alábbi teljesítıképességi adatokat határoztuk meg a diagnosztikus kiértékelés során. 7.A. ÉRZÉKENYSÉG ÉS FAJLAGOSSÁG 350 szérumot vizsgáltak a RubellaIgGELISA PKS medac kittel, ebbıl 100 negatív volt rubeola hemagglutináció gátlás vizsgálattal és 250 pozitív volt a referencia ELISAval. Az eredményeket az alábbi táblázatban mutatjuk be. Referencia teszt negatív pozitív RubellaIgGELISA PKS negatív 99 0 medac pozitív 1* 250 * A minta kétesnek adódott. Érzékenység = 100 % Fajlagosság = 99,00 % Pozitív prediktív érték: 99,60 % Negatív prediktív érték: 100 % 136PKSVPU/

12 7.B. PONTOSSÁG Minta Teszten belüli szórás Minta Tesztek közötti szórás átlag SD CV (%) n átlag SD CV (%) n OD IU NC 0,029 0, PC 13,6 0, PC 0,338 0, N 2 17,9 1, Cal 0,952 0, N 3 90,4 11, N 1 1,764 0, N 4 145,5 18, NC = negatív kontroll; PC = pozitív kontroll; Cal = kalibrátor 8. CSF DIAGNOSZTIKAI VIZSGÁLATA A rubeolaspecifikus antitest szintézis kimutatása a központi idegrendszerben (CNS) a CSF diagnosztikai vizsgálata során az akut fertızés differenciál diagnosztikájának alapvetı része, úgymint a CNSt is magában foglaló krónikus körülmények során. A gombákon és baktériumokon kívül számos vírus felelıs a CNSt is magában foglaló fertızésekért. Továbbá, krónikus betegségekben, mint például szklerózis multiplexben a kanyaró, a rubeola és/vagy a varicellazoster antitestek nagy valószínőséggel fordultak elı az esetek 95 %ában. A rubeolaspecifikus intrathecal antitest szintézis meghatározása az antitest index (AI) számolásával történik, Reiber szerint (Reiber 1987, 1999). Az AI számolásához az alábbi feltételeknek kell teljesülniük: az albumin kvociens (Q alb ) becslése a véragy gát mőködésének megállapításához és a határérték számításához magas IgG arányú betegekben (Q tot > Q lim ) a totál IgG kvociens becslése (Q tot ) 8.1. MINTÁK A teszt alkalmas szérumcsf pár vizsgálatára A szérum és CSF minták elıkezelése pl. inaktiválás, nem szükséges. A minták nem lehetnek mikroorganizmusokkal szennyezettek, illetve nem tartalmazhatnak vörös vérsejteket Szérum A szerostátusz meghatározásához szükséges 1:200 hígításon felül a szérumot 1:1500ra hígítjuk mintahígítóval. Az AI kiszámolásához olyan hígítást kell választani, hogy az IU értéke a mérési tartomaányon belülre essen (ld. 6.A. és 8.2.). Ha mindkét hígítás IU értéke az IU mérési tartományba esik, az 1500as hígítás IU értékét válasszuk az AI számoláshoz. Ha mindkét hígítás IU értéke 200 felett van, a mintát tovább kell hígítani. 136PKSVPU/

13 CSF A CSF mintát standard hígításúra, 1:5 arányban hígítjuk mintahígítóval. Ha a mért antitest koncentráció kívül esik a mérési tartományon, a mintát tovább kell hígítani, illetve újravizsgálni kisebb hígításban (pl. 1:2). A szérum és CSF mintákat mindig párhuzamosan kell vizsgálni ugyanabban a teszt futamban (ugyanez érvényes az ismételt vizsgálatokra is)! 8.2. AZ ELJÁRÁS MENETE A rubeola IgG meghatározás szérumcsf párban az 5A pontban leírtak szerint történik A TOTÁL IgG ÉS AZ ALBUMIN KONCENTRÁCIÓ MEGHATÁROZÁSA A rubeolaspecifikus IgG meghatározáson felül minden minta párban a totál IgG és az albumin koncentrációt is meg kell határozni a szérumban és a CSFben AZ EREDMÉNYEK SZÁMOLÁSA (VALIDITÁS) Validitás A 6.A. pontban specifikált érvényességi kritériumokat kell alkalmazni. Ismételje meg a vizsgálatot, ha az eredmények nem felelnek meg a specifikációnak. Az alábbi pontok szintén alkalmazandóak CSF vizsgálathoz: Az 1:200as hígítású szérumban mért 5nél kisebb IU érték szeronegativitásnak tekintendı. Ezekben az esetekben az AI nem határozható meg. Nagyon ritka esetekben szeronegatív betegeknek lehetnek kimutatható intrathecal antitestjei, a rubeolával összefüggı encephalopathie miatt. A mérési tartomány CSFre IU. az olyan 1:5 hígítású CSF mintákat, melyek pozitív szerostástuszú betegekbıl származnak és a mérési tartomány alá esnek, újra kell vizsgálni kisebb hígításban (maximum 1:2). 136PKSVPU/

14 Kiértékelés Az IU értékek számolását ld. a 6.A. pontban. A patogénspecifikus IgG kvociens számolása (Q spec ). Q spec = IU CSF x CSF hígítása IU szérum x szérum hígítása Az antitest index számolása: A patogénspecifikus indexet az alábbi képlettel számoljuk: 1. AI = Q spec /Q tot (Q tot < Q lim esetén) 2. AI = Q spec /Q lim (Q tot > Q lim esetén) Q = 0,93 Q ,7 10 lim alb AZ EREDMÉNYEK ÉRTELMEZÉSE A 0,6 1,3 közé esı AI értékek a normál tartományban vannak.. Az AI > 1,3 és 1,5 értékek határértékek. A patológikus tartomány: AI > 1,5. Az AI < 0,6 értékek analitikai hibák és nem értelmezhetıek. A CSF diagnosztikus kritériumai akut aktív CNS betegségre vonatkozóan: emelkedett sejtszám és emelkedett albumin kvociens. Ezek a CSF áramlás akadályoztatására utalnak valamilyen gyulladás következtében. Az emelkedett antitest index nem megbízható bizonyítéka a fertızı CNS betegség akut fázisának, mert az antitestek, még az intratecálisak is, hosszú ideig perzisztálhatnak és mert polispecifikus CNSintrinsic antitest szintézis is elıfordulhat. Bizonyos esetekben javasolt, hogy az AI értékben szignifikáns változást keressünk egy második szérumcsf mintapár vizsgálatával. Ebbıl a célból további mintavétel szükséges a klinikai körülményeknek megfelelı idı után. 136PKSVPU/

15 ÁLTALÁNOS KEZELÉSI TANÁCSOK A keresztszennyezés elkerülése érdekében ne cseréljük fel a fiolákat és kupakjaikat. A reagenseket használat után azonnal zárjuk le a párolgás és a mikrobiológiai szennyezés elkerülése érdekében. Használat után a reagenseket az elıírt körülmények között kell tárolni az eltarthatóság garantálása érdekében. Használat után az összes komponenst az eredeti csomagolásban tároljuk a más kitekbıl, illetve gyártásból származó reagensekkel történı felcserélés elkerülése érdekében (ld. 3. pont alatt is). EGÉSZSÉGÜGYI ÉS BIZTONSÁGI INFORMÁCIÓK A helyi biztonsági és egészségügyi szabályokat be kell tartani. Az emberi eredető reagenseket megvizsgálták és negatívnak találták HBsAgra, HIV1/2 és HCV elleni antitestekre. Mindazonáltal erısen ajánlott, hogy ezeket, illetve az állati eredető reagenseket (ld. a kit tartalmánál) potenciálisan fertızıként kezeljük és az összes szükséges elıvigyázatossággal használjuk. MEGSEMMISÍTÉSI SZEMPONTOK A vegyi anyagok és preparátumok maradékai általánosságban veszélyes hulladéknak tekintendık. Az ilyen hulladékok megsemmisítése a nemzetközi és a helyi törvények és elıírások szerint szabályozottak. Vegyük fel a kapcsolatot a helyi hatóságokkal, illetve hulladékkezelı cégekkel, melyek segítséget tudnak nyújtani a veszélyes hulladékok megsemmisítésében. A kibocsátás dátuma: PKSVPU/

16 IRODALOM Enders, G.: Röteln. Fortschr. Klin. Virol. München, (1986). Hermann, K.L.: Available Rubella serological tests. Rev. Infect. Dis. 7, (1985). Reiber, H. and Felgenhauer, K.: Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation of the humoral immune response within the central nervous system., Clin Chim Acta, (1987). Reiber, H.: Liquordiagnostik, in: Klinische Neurologie, Berlit, P. (HRSG), Springer Verlag, Heidelberg, (1999). Pustowoit, B., Hofmann, J. und Trauer, H.: Rötelnvirus, in: Diagnostische Bibliothek, Bd. 1, Virusdiagnostik, Porstmann, T. (Hrsg.), Blackwell WissenschaftsVerlag, (1996). Selb, B.: Rötelnvirus, in: Medizinische Virusdiagnostik, Selb, B. (Hrsg.), Umschau Verlag, (1992). Wolinsky, J.: Rubella, in: Virology, 2. Edition, Field, B. N., Kipe, D. M. et al. (Eds.), Raven Press, Ltd., New York (1990). 136PKSVPU/