QUANTA Lite dsdna SC ELISA In vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA komplexitás: Magas

Átírás

1 QUANTA Lite dsdna SC ELISA In vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA komplexitás: Magas Javasolt alkalmazás Ez az assay a dupla láncú dezoxiribonukleinsav (dsdna) ellen a humán szérumban megjelenő specifikus IgG autoantitestek in-vitro meghatározására szolgál, a szisztémás lupus erythematosus diagnózisának felállításának elősegítése céljából, a többi klinikai megfigyeléssel együtt értékelve. A kit elegendő anyagot tartalmaz maximum 40 minta mérésére duplikátumban, vagy 88 mintához mintánként egy mérés esetén, kalibrációs görbe felvételével és egy pozitív, egy negatív és egy szimpla láncú DNS kontrollal. A teszt összegzése és magyarázata A DNS ellenes autoantibtestek vagy szimpla lácú (ss) vagy dupla láncú (ds) DNS formát ismerik fel. Az anti-ssdna autoantitestek nem betegség-specifikusak, mivel az autoimmun folyamatok széles skálájával kapcsolatban kimutathatók, többek között gyógyszer indukált szisztémás lupus erythematosus, kevert kötőszöveti betegség, rheumatoid arthritis, scleroderma és Sjögren szindróma. Ezzel szemben az anti-dsdna autoantitestek sokkal specifikusabban az SLE 1,2,3 -vel kapcsolatosak, ahol a keletkezett immunkomplexeknek jelentős szerepet tulajdonítanak a betegség pathogenesisében. Az immunkomplexek lerakódása a szövetekben gyulladáshoz vezet, és a betegségre jellemző vese és vasculáris tünetek kialakulását okozza 4. Az SLE betegség aktivitásának hirtelen fellobbanásait általában megelőzi az anti-dsdna szintjének növekedése, amit a betegség csúcspontján bekövetkező meredek esés követ 5. Ez a megfigyelés bizonyítja az anti-dsdna autoantitestek rendszeres monitorozásának szükségességét SLE betegekben. A módszer elve A mikrotiter lemez mélyedései borjú thymus dsdna antigénnel vannak bevonva. A kalibrátorokat, kontrollokat és a hígított betegmintákat a mélyedésekbe pipettázzuk. A dsdna antigént felismerő autoantitestek lekötődnek az első inkubáció során. Miután a nem kötődött fehérjéket mosással teljesen eltávolítottuk, tisztított peroxidázzal jelölt kecske anti-humán IgG konjugátumot csöppentünk a lyukakba. A konjugátum az előző fázisban rögzült humán autoantitestekhez kötődik, a konjugátum felesleget pedig egy újabb mosással eltávolítjuk. A megkötődött konjugátumot 3,3,5,5 tetramethylbenzidine (TMB) szubsztrát segítségével tesszük láthatóvá, ami kék reakcióterméket ad. A szín intenzitása arányos a mintában lévő autoantitest koncentrációjával. A reakció leállítása céljából minden lyukba kénsav adunk. Ez egy sárga színű végterméket eredményez, mely 450 nm-en fotometrálható. Reagensek 1. Polisztirol mikrotiter ELISA lemez borjú csecsemőmirigy dsdns antigénnel bevonva (12-1 x 8 cella) tartókerettel, deszikkánst tartalmazó fóliatasakba csomagolva. 2. ELISA negatív kontroll, 1 ampulla tartósítószert és humán szérumot tartalmazó puffer, dsdns-hez kötődő antitestek nélkül, előhígítva, 1,2 ml. 3. dsdns SC ELISA A kalibrátor, 1 ampulla tartósítószert, valamint dsdns-hez kötődő humán szérum 4. dsdns SC ELISA B kalibrátor, 1 ampulla tartósítószert, valamint dsdns-hez kötődő humán szérum 5. dsdns SC ELISA C kalibrátor, 1 ampulla tartósítószert, valamint dsdns-hez kötődő humán szérum 6. dsdns SC ELISA D kalibrátor, 1 ampulla tartósítószert, valamint dsdns-hez kötődő humán szérum 7. dsdns SC ELISA E kalibrátor, 1 ampulla tartósítószert, valamint dsdns-hez kötődő humán szérum 8. dsdns SC pozitív kontroll, 1 ampulla tartósítószert, valamint dsdns-hez kötődő humán szérum 9. III típusú mintahígító, 2 üveg sárga, tartalmaz: Tween 20-at, protein stabilizátorokat és tartósító anyagokat, 50 ml. 10. HRP mosó koncentrátum, 1 üveg 40x-es koncentrátum pirosra színezett, tartalma: konyhasó TRIS pufferrel és Tween 20, 25mL. A hígítási javaslatok a Módszer szakaszban találhatók. 11. dsdns SC egyszálas kontroll, 1 ampulla tartósítószert, valamint ssdns-hez kötődő humán szérum 12. HRP dsdns SC IgG konjugátum, anti-humán IgG, 1 üveg kékes színű, puffert, protein stabilizátorokat és tartósító anyagot tartalmaz, 10 ml. 13. TMB kromogén, 1 üveg, stabilizátorokat tartalmaz, 10 ml. 14. HRP stop oldat, 0,344 M kénsav, 1 üveg színtelen, 10 ml. Figyelmeztetések 1. FIGYELMEZTETÉS: Ez a termék olyan kémiai anyagot (0,02% kloramfenikol) tartalmaz, mintahígító a kontrollokban és a konjugátumban, amelyet Kalifornia államban rákkeltőként tartanak nyilván. A mintahígító Proclin 150-et tartalmaz. A sérülések megelőzése érdekében kerülje az anyag belélegzését, elfogyasztását, illetve a bőrre, szembe jutását. 1

2 2. Az összes humán eredetű anyagot, amelyeket a kontrollok előállítása során ehhez a termékhez felhasználtak, az FDA által jóváhagyott módszerekkel ellenőrizték és negatívnak találták HIV, HBsAg, és HCV ellenes antitestekre nézve. Egy tesztmódszer sem tud tökéletes bizonyosságot szolgáltatni afelől, hogy a termék mentes HIV, HBV,HCV vagy más fertőző ágensektől. Éppen ezért a dsdns SC pozitív kontroll, a dsdns SC egyszálas kontroll, a dsdns SC A E kalibrátorok potenciálisan fertőző anyagként kezelendő Az oldatok stabilizálására nátrium-azidot használtak. A nátrium-azid egy méreg, ami lenyelve, vagy szemen, bőrön keresztül felszívódva toxikus lehet. A nátrium-azid ólom- vagy réztartalmú vízvezeték csövekkel reakcióba léphet, robbanásveszélyes fém-azidokat képezve. Ha a reagensek maradványait a lefolyóba önti, az azid-képződés megakadályozása céljából öblítse le nagy mennyiségű vízzel. 4. A HRP konjugátum egy híg mérgező/korrozív vegyszert tartalmaz, ami nagy mennyiségben elfogyasztva toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 5. A TMB kromogén olyan irritáló anyagot tartalmaz, ami belélegezve, lenyelve, vagy a bőrön keresztül felszívódva veszélyes lehet. A sérülések megelőzése érdekében kerülje az anyag belélegzését, elfogyasztását, illetve a bőrre, szembe jutását. 6. A HRP stop oldat hígított kénsav oldatot tartalmaz. Ne tegye ki bázisok, fémek vagy más olyan anyagok hatásának, amelyek savakkal reakcióba léphetnek. A kénsav mérgező és maró anyag, lenyelve toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülések megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 7. A reagensekkel végzett műveletek során használjon megfelelő személyi védőeszközöket. 8. A kicseppenő reagenseket azonnal fel kell takarítani. A hulladékok eltávolításakor tartsa be az összes szövetségi, állami és helyi környezetvédelmi előírást. Óvintézkedések 1. Ez a termék in vitro diagnosztikai alkalmazásra készült. 2. Ez a termék kizárólag vizsgálati alkalmazásra készült. Ezen termék működési jellemzőit még nem határozták meg. 3. A terméket kizárólag megfelelően képzett személy használhatja. 4. Az előírások szigorú betartása javasolt. Az előírásoktól való bármely eltérés az assay működését és a kapott eredményeket hátrányosan befolyásolhatja. Figyeljen a jelen Használati Utasítás speciális Megjegyzéseire és figyelmeztetéseire. 5. A különböző gyártási számú kalibrátorok, kontrollok, konjugátumok és lemezek nem felcserélhetőek. Ezen összetevők az adott kittől eltérő gyártási számú termékekkel történő helyettesítése ellentmondásos és pontatlan eredményekhez vezethet. Minden egyes mikrotiter csíkot, amit egy adott vizsgálati sorozatban használnak fel, ugyanabból a fóliatasakból kell elővenni. 6. A reagensek beszennyeződésének elkerülése céljából kizárólag új, vagy tiszta műanyag,- illetve üvegedényeket használjon. Soha ne töltse vissza a megmaradt reagenseket az eredeti üvegekbe. 7. Ne hagyja a reagens-tartókat lezáratlanul; az emiatt fellépő párolgási veszteség, illetve szennyeződés téves eredményekhez vezethet. 8. A TMB szubsztrátot fénytől és nedvességtől óvni kell. 9. Mikrobiológiai szempontból szennyezett, hemolizált vagy lipémiás szérum, vagy csapadékot tartalmazó minta nem használható. 10. A pontatlan mintahígítást a teszt kivitelezése közben nem lehet ellenőrizni, mivel a kit kontrolljai felhasználásra kész oldatban kerülnek forgalomba. Kalibrált pipetták és alkalmas belső minőségi kontroll minták használata javasolt. 11. Automatizált tesztrendszerek, mintahígítók és más automatizált eszközök használata a manuális módszerrel összehasonlítva eltérő eredményekhez vezethet. Minden laboratórium saját felelőssége az általa használt rendszer teljes körű validálása, és annak biztosítása, hogy az eredmények a jelen útmutatóban foglalt határokon belül legyenek, és a csatolt Minőség-ellenőrzési bizonylatnak megfeleljenek. 12. Valamennyi alkalmazott készüléket a gyártó előírásainak megfelelően kell kalibrálni és karbantartani. Tárolási körülmények 1. A kit 2-8 C közötti hőmérsékleten tárolandó, lefagyasztani tilos. A nem megfelelő tárolási hőmérséklet az eredményeket befolyásolja. 2. A hígított mosópuffer 2-8 C között tartva 1 hétig stabil. 3. A kit lejárati dátuma a külső címkén van feltüntetve. A minta vétele és kezelése 1. A vérminta levétele vénapunkcióval történjen, a természetes alvadási folyamat után a szérumot el kell választani. 2. A szérum a vizsgálat elvégzése előtt 2-8 C között 7 napig tárolható 6, vagy hosszabb tárolás céljából kisebb részletekben lefagyasztható és -20 C-on, vagy ez alatti hőmérsékleten tárolható. 3. Az ismételt felolvasztást és lefagyasztást kerülni kell. 4. A szérummintákat nem szabad hővel inaktiválni, mivel ez téves pozitív eredményt adhat. A teszt kivitelezése Rendelkezésre álló anyagok Használati utasítás: Az assay részletes leírását tartalmazza. Minőség-ellenőrzési bizonylat: Adott gyártási sorozathoz tartozó kitek elvárható működési jellemzőit mutatja be. dsdns SC-sel bevont cellák: Borjú csecsemőmirigy dsdns antigénnel bevont 12 db, egyenként 8 mérőhelyet tartalmazó, bontható mikrotiter-lemez csík Minden lemez 2 deszikkáns betéttel ellátott, visszazárható fóliatasakba van csomagolva. 2

3 ELISA negatív kontroll: 1 üveg 1,2 ml hígított humán szérum. A várható érték a Minőség-ellenőrzési bizonylatban található. Azonnal felhasználható. dsdns SC kalibrátorok: 5 üveg, az egyes üvegek 1,2 ml hígított humán szérumot tartalmaznak, melyek antidsdns antitest koncentrációja a következő: 1000, 333, 111, 37, 12,3 NE/ml. Azonnal felhasználható. dsdns SC pozitív kontroll: 1 üveg 1,2 ml hígított humán szérum. A várható érték a Minőség-ellenőrzési bizonylatban található. Azonnal felhasználható. III típusú mintahígító: 2 db 50 ml-es a mintahígító puffert tartalmazó üveg, Sárga színű, azonnal felhasználható. HRP mosó koncentrátum (40-szeres töménységű): 1 db 25 ml-es üveg, ami 40-szeres töménységű puffert tartalmaz a cellák mosására. dsdns SC egyszálas kontroll: 1 üveg, 1,2 ml hígított humán szérum. A várható érték a Minőség-ellenőrzési bizonylatban található. Azonnal felhasználható. HRP dsdns SC IgG konjugátum: 1 üveg 10 ml tisztított, peroxidázzal jelölt humán IgG antitest, Kék színű. Azonnal felhasználható. TMB kromogén: 1 üveg 10 ml TMB kromogént tartalmaz. Azonnal felhasználható. HRP stop oldat: 1 üveg 10 ml 0,344 M kénsav oldatot tartalmaz. Azonnal felhasználható. További szükséges anyagok, melyeket a kit nem tartalmaz Automata mikrotiter-lemez mosó: Használata ajánlott, de a lemezek mosása manuálisan is elvégezhető. Mikrotiter-lemez leolvasó: Legyen képes 450nm-en az optikai denzitás meghatározására, levegőre nullázva. Desztillált vagy ioncserélt víz: Az elérhető legjobb minőségben. Kalibrált mikropipetták: 1000, 100, illetve 10 μl adagolásához. Többcsatornás pipetta: A 100 µl konjugátum, szubsztrát és a leállító oldat beméréséhez ajánlott. Üveg/műanyag csövek: Mintahígításhoz. Módszer Mielőtt hozzákezd: 1. A kit szobahőmérsékletűre melegítése A kitet szobahőmérsékleten való felhasználásra tervezték (20-24 C). Vegye elő a kitet a raktározás helyéről és hagyja szobahőn állni kb 60 percig. A mérőedénykéket nem szabad a fóliatasakból kivenni, amíg el nem érték a kívánt hőmérsékletet. Megjegyzés: A kitet egy hétig szobahőn is lehet tartani. 2. A kit összetevői Használat előtt mindegyik összetevőt óvatosan keverje meg. 3. A mosópuffer (40x-os koncentrátum) hígítása Hígítsa a HRP mosó koncentrátumot 1:40 arányban, úgy, hogy a HRP mosó koncentrátumos üveg tartalmát 975 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez adja. Ha nem kerül a teljes lemez egyszerre feldolgozásra, kisebb mennyiséget is lehet hígítani: minden 16 felhasználandó mérőhely számára adjon 2 ml koncentrátumot 78 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez. A hígított puffer egy hétig stabil 2 8 C között tartva. 4. A minták hígítása Hígítson minden egyes mintából 10μL-t 1000μL mintahígítóval (1:100) és jól keverje meg. Megjegyzés: A hígított mintákat 8 órán belül fel kell használni. 5. A csíkok és a keret kezelése Helyezze a szükséges számú mérőedénykét a keretbe. Az A1-es pozíciótól kiindulva töltse be az oszlopokat balról jobbra haladva a lemezen. A lemezzel végzett munka közben tartsa enyhe nyomással a hosszabb oldalakat, hogy a mérőedénykék ki ne potyogjanak. Megjegyzés: A fel nem használt mérőedényeket azonnal helyezze vissza a fóliatasakba, a szárítóbetétekkel együtt, és szorosan zárja le a tasakokat, hogy csak minimálisan legyenek kitéve nedvességnek. Vigyázzon, hogy a tasakot ne szúrja át vagy szakítsa el, az alábbi okok miatt. Figyelmeztetés: Ha a mérőedények nedvességnek vannak kitéve, porral vagy egyéb szilárd anyaggal szennyeződnek, ennek eredményeképpen az antigén tönkremegy, és a teszt reprodukálhatósága csökken, ami téves eredményekhez vezethet. Az teszt kivitelezése 1. A minták bemérése Pipettázzon 100μL kalibrátort, kontrollt és hígított (1:100) mintát a megfelelő mérőlyukakba. Megjegyzés: A mintákat a lehető legrövidebb idő alatt kell bemérni az eredmények torzulásának (drift) minimálisra csökkentése érdekében. A stoppert az utolsó minta bemérése után kell indítani. Inkubálja a lemezeket szobahőmérsékleten 30 percig. 2. Mosás A mosás kritikus része a vizsgálatnak, ezért különleges figyelmet igényel. A nem megfelelően mosott lemez pontatlan eredményt fog adni, gyenge reprodukálhatósággal és magas háttérrel. Az inkubáció után vegye ki a lemezt és mossa lyukanként μL mosópufferrel 3-szor. A mosás végezhető automatikus lemezmosó segítségével, vagy manuálisan, az alább részletezett módon. Az utolsó automatikus mosási ciklus után fordítsa a lemezt a nyílásokkal lefelé, helyezze egy nedvszívó papírra, és könnyedén ütögetve cseppmentesítse. A lemezek manuális mosása: a. Gyors mozdulattal rázza ki a lyukak tartalmát egy kiöntőbe, b. Cseppmentesítse a lemezt finoman ütögetve szűrőpapíron. c. Töltsön meg minden lyukat μL mosópufferrel, többcsatornás pipetta segítségével. d. Lapos felületen finoman rázogassa a lemezt. e. Ismételje a folyamatot a-tól d-ig kétszer. f. Ismételje meg az a és a b lépést. 3

4 3. A konjugátum felvitele Pipettázzon 100μL konjugátumot minden mérőlyukba, itassa fel az edénykék peremét egy alkalmas anyaggal, hogy az esetleg kifröccsent konjugátumot eltávolítsa. Megjegyzés: A szennyeződés megelőzése érdekében soha nem szabad a megmaradt konjugátumot az eredeti üvegbe visszatölteni. Inkubálja a lemezeket szobahőn 30 percig. 4. Mosás Ismételje a 2. pontban leírt lépéseket. 5. A szubsztrát (TMB) bemérése Pipettázzon 100μL TMB szubsztrátot minden egyes lyukba, itassa fel a lyukak szélét az esetlegesen kifröccsent szubsztrát eltávolítására.megjegyzés: A szennyeződés megelőzése érdekében kerülje a maradék TMB szubsztrát visszatöltését a reagensüvegbe. Inkubálja a lemezeket szobahőn, sötét helyen 30 percig. 6. A reakció leállítása Pipettázzon 100μL leállító oldatot minden lyukba. Ekkor a reakcióelegy színe kékről sárgára változik. 7. Az optikai denzitás mérése Olvassa le minden egyes lyuk tartalmának optikai denzitását (OD) 450nm-en alkalmas lemezleolvasóval, a reakció leállítása után 30 percen belül. Minőség-ellenőrzés 1. Minőségi kontroll Annak érdekében, hogy egy meghatározás érvényes legyen, a következő kritériumok mindegyikének teljesülése szükséges: Minden mérési sorozathoz kalibrátorokat, pozitív és negatív valamint szimpla láncú DNA kontrollt kell alkalmazni. Valamennyi kontroll mért értékének a QC bizonylatban megadott határokon belül kell lenni. A kalibrációs görbe alakja a QC bizonylatban bemutatott mintához hasonló kell legyen. Amennyiben a fenti kritériumok valamelyike nem teljesül, az assay nem értékelhető, a vizsgálatot meg kell ismételni. 2. Az Optikai Denzitások átlagainak kiszámítása: (Csak duplikátumban végzett meghatározások esetén) Minden egyes kalibrátor, kontroll és minta-pár esetén számítsa ki a párhuzamos mérések OD átlagát. A párhuzamosok %-os variációs koefficiense (% CV) 15%-nál kisebb kell legyen. 3. Készítse el a kalibrációs görbét A kalibrációs görbe készülhet automatikusan, vagy manuálisan a következő eljárással: ábrázolja minden egyes kalibrátorra vonatkozóan az anti-dsdna autoantitest koncentrációját logaritmikus skálán, a lineáris skálán jelölt OD értékkel szemben. Automatikus kiértékeléshez használjon megfelelően validált programot, és olyan görbeillesztési módszert, amelyik legjobban megfelel a mért adatoknak. Manuális eljárásnál - log/lin beosztású papíron, rajzoljon sima görbét, ami legjobban illeszkedik a pontokhoz (ne húzzon ferde vonalat a pontok közé, és ne alkalmazzon pontról-pontra szakaszos ábrázolást) 4. Az eltérő pontok kezelése Ha bármelyik pont nem illeszkedik a görbéhez, ki lehet hagyni. Ha azonban a kérdéses pont kihagyása következtében a görbe alakja a mintául adott kalibrációs görbétől eltér, vagy egynél több pont nem illeszkedik, az egész mérést meg kell ismételni. 5. A kontrollok és a hígított minták autoantitest értékeinek kiszámítása Olvassa le a kontrollok és a hígított minták anti-dsdna autoantitest koncentrációját közvetlenül a kalibrációs görbéről. A kontrollok értékeinek a QC bizonylatban feltüntetett határokon belül kell esniük. Megjegyzés: A kalibrátorok értéke egy 100-as faktorral van megadva a minták 1:100 arányú hígításának megfelelően. További korrekció nem szükséges. 6. Az assay kalibrálása Az assay-t NE/mL egységben a Wo80 7 WHO referens anyagra kalibrálták. A módszer korlátai 1. Ez a kit csak kiegészítő információt nyújt a diagnózis felállításához. A pozitív eredmény bizonyos betegségek fennállására utalhat, de ezt klinikai adatokkal és más szerológiai tesztekkel meg kell erősíteni. 2. Ezzel a módszerrel kapott eredmények nem tekinthetők a diagnosztikai bizonyítéknak valamely betegség meglétére vagy hiányára vonatkozóan. 3. Határérték körüli, kétes eredmény esetében a mérést meg kell ismételni, egy friss mintából, vagy egy későbbi időpontban. Fontos a betegek rendszeres laboratóriumi ellenőrzése a dsdna autoantitest szintjében bekövetkező változások monitorozása céljából. Várható értékek A referens tartományt 113 normál véradó szérumának felhasználásával határozták meg (10.2). A normál felső határát az átlag kocentráció + 5SD értékben határozták meg, ez 30 NE/mL lett 9,2 IU/mL átlag koncentráció és 4,4 IU/mL SD eredmények alapján számítva. Az itt közölt referens tartományok csak tájékoztatásra szolgálnak. Az ELISA módszerek nagyon érzékenyek, és képesek a minta-populációban jelen lévő igen kis különbségeket is kimutatni. Minden laboratóriumnak ajánlott a saját referencia tartomány meghatározása, ami a vizsgált populációt az alkalmazott módszerrel és eszközökkel jellemzi. INTERPRETÁCIÓ < 30 NE/mL Negatív eredmény NE/mL Kétes >75 NE/mL Pozitív eredmény 4

5 PONTOSSÁG Az intra- és inter-assay reprodukálhatóságot három olyan minta sorozatos vizsgálatával ellenőrizték, amelyeknek értékei a kalibrációs görbe értékhatárain belül voltak. Az egyes mintákra kapott átlagok és a C.V.% a következő táblázatokban láthatók:- INTRA-ASSAY REPRODUKÁLHATÓSÁG n=16 Koncentráció (NE/mL) % C.V. 1. minta 81 5,0 2. minta 283 3,7 3. minta 719 8,1 INTER-ASSAY REPRODUKÁLHATÓSÁG n=3 Koncentráció (NE/mL) % C.V. 1. minta 81 9,2 2. minta 283 9,5 3. minta 674 8,6 REFERENS (NORMÁL) TARTOMÁNY Anti-dsDNA autoantitest meghatározásokat végeztek 113 normál véradó szérumában; az eredményeket az alábbi grafikon mutatja. A 30 NE/mL-es negatív küszöbérték (cut-off) alapján a minták eredménye egyetlen esetben sem tekinthető pozitívnak vagy kétesnek. SPECIFICITÁS, SZENZITIVITÁS, ÖSSZEHASONLÍTHATÓSÁG A kit relatív specificitásának, szenzitivitásának és az eredmény egyezésének meghatározása céljából 69 minta eredményeit egy alternatív anti-dsdna EIA kit, valamint Crithidia luciliae szubsztráton kivitelezett immunfluorescens vizsgálat eredményeivel hasonlították össze. A Crithidia módszerrel való összehasonlítás alkalmával az ELISA kittel Kétes besorolású mintákat pozitívnak tekintették. EIA Alternatív EIA + Kétes - BINDAZYME Anti-dsDNA Kétes EIA Relatív szenzitivitás 97,8 % Relatív specificitás 95,7% Relatív egyezés 97,1% Crithidia luciliae Crithidia luciliae + - BINDAZYME Anti-dsDNA EIA Relatív szenzitivitás 95,7 % Relatív specificitás 91,3% Relatív egyezés 94,2% ANALITIKAI ÉRZÉKENYSÉG Az érzékenységet a mintahígítóból elvégzett 20 mérés átlaga + 2 SD értékben határozták meg. Ez 4,6 NE/mL. 5

6 INTERFERÁLÓ ANYAGOK Különböző szérum típusokat vizsgáltak a módszerrel az interferáló anyagok esetleges hatásának tesztelése céljából az Interference Check A plus (Kokusai Shiyaku, Japan) kittel. Anyag Bilirubin F (szabad) Bilirubin C (konjugált) Haemoglobin (haemolysis) Nyirok (lipaemia) Rheumatoid faktor Koncentráció 18,3mg/dL 19,0mg/dL 490mg/dL 1930 Units 50 NE/mL Nem észleltek zavaró hatást szabad vagy konjugált bilirubin, hemoglobin, lipid vagy rheumatoid faktor esetében. MÉRÉSI TARTOMÁNY Az assay mérési tartománya 12, NE/mL. A lemez beosztása A B C D E F G H Az eljárás összefoglalása 1. Adjon 100 µl-t az egyes kalibrátorból, kontrollból és az 1:100 arányban hígított mintából a lemez megfelelő celláiba. Inkubálja azokat 30 percig. Mosás. 2. Adjon minden egyes cellához 100 μl konjugátumot. Inkubálja azokat 30 percig. Mosás. 3. Adjon minden egyes cellához 100 μl szubsztrátot. Inkubálja azokat 30 percig. 4. Adjon minden egyes cellához 100 μl leállító oldatot. Mérje meg az abszorbanciát 450 nm-en. 6

7 Hivatkozások 1. Stollar B D. Antibodies to DNA. CRC Critical Review of Biochemistry, 1986; 20: Stollar B D. The specificity and applications of antibodies to helical nucleic acids. CRC Critical Review of Biochemistry, 1975; 3: Swaak AJ et al. Anti-dsDNA and complement profiles as prognostic guides in systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheumatism, 1979; 22: Koffler D et al. Systemic lupus erythematosis: Prototype of immune complex nephritis in man. J Exp Med, 1971; 134 (suppl): ter Borg EJ et al. Measurement of increases in anti-double stranded DNA antibody levels as a predictor of disease exacerbation on systemic lupus erythematosus, a long term, prospective study. Arthritis Rheumatism, 1990; 33: Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004 Ed A Milford Ward. J. Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield Feltkamp T E W. et al. The First International Standard for Antibodies to Double Stranded DNA. Annals of Rheumatic diseases, 1988; 47: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. QUANTA Lite és INOVA Diagnostics, Inc. bejegyzett védjegyei. Copyright 2011 Minden jog fenntartva 7

8 A terméket előállítja: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Forgalmazásra jogosult az EU területén: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: HUN Július 2011 Revision 2 8