Endokrin vizsgálatok pediátriai

Átírás

1 Endokrin vizsgálatok pediátriai mintákban Lányi Éva Pécs

2 Neonatalis szőrés (Crit Rev Clin Lab Sci ) -50 betegség g szőrése se beszárított vérbv rbıl módszerek: MS /MS, immunoassay, enzim-assay, elfo, HPLC, endokrin betegségek: gek: Congenitális Adrenális Hyperplasia 1: Congenitális Hypothyreosis 1: Magyarország: g: 2007/44 Eü.M. E Rendelet : kiterjesztett szőrés eddigi 4 mellett további 22 betegség g szőrése se

3 Congenitális Hypothyreoidismus 1. Dysgenesis 1: % sporadikus 2. Dyshormonogenesis 1: % 3. Hypothalamus-hypophysis 4. Transitorikus hypothyreoidismus - TBII transplacentáris ris transfer 1: Jód d expozíci ció - Koraszülöttek - Sick euthyroid syndrome 1: % autosom recesszív hypophysis 1: %

4 Érett újszülött szület letés s után n TSH peak (30 min, 80 mu /L) T4 és s T3 peak (24-36 h) okok: T4 maternalis-placentaris transfere megszőnik, hideg stressz? SZŐRÉS: S: 48 óra után! TSH cut off 20 mu/l T4 cut off 6.5 µg/dl

5 Kiszőrt újszülöttek Szőrés s hatékonys konysága 14% congenitális hypothyreosis 8% tranziens hypothyreosis 78% normális = fals pozitív Mit NEM diagnosztizál? 1. Centrális hypothyeroidismus 2. TBG deficiencia (X-kötött, tt, 1:5000, TSHn, T4,, ft4n) 3. Hypothyroxinemia a TSH késleltetett k eleváci ciójával

6 Koraszülöttek 1.Szület letést követk vetı TSH peak kisebb v. nincs T4 ( TBG ) T3 (periféri riás s konverzó ) 2. Abszolút értékben a TSH magasabb, azonban ennek fiziológi giás effektivitása alacsony (H-P P tengely) 3. Koraszülöttek leggyakoribb gyógyszerei gyszerei (glucocorticoidok, amidaron, propanolol, dopamin, dobutamin, furosemid) csökkentik a T4-T3 T3 konverziót

7 TSH referens értékei gyermekeknél Clin Biochem (Elecsys 2010 system Roche )

8 T3 és s T4 referens értékei gyermekeknél Clin Biochem ( Elecsys 2010 system Roche )

9 TSH és s thyroid hormonok covariánsai Clin Biochem (Elecsys 2010 system Roche ) 1. Életkor prediktor 2. Nem nem prediktor (kivéve ve év, T4 nıknél) 3. WBC nem prediktor 4. BMI - nem prediktor (populáci ció normál l súlys lyú!) DE! Obes TSH (BMI ~TSH), T4/ ft4 norm, ft3 norm, T3 n/ leptin: TRH neuronokat innervál T4 T3 átalakulást fokozza Obesitas szubklinikai hypothyreosis!

10 Congenitális Adrenális Hyperplasia (CAH)

11 CAH gyakoriság és s klinikai jellemzık

12 CAH klinikai és s laboratóriumi riumi jellemzık 1.Klasszikus forma- sóvesztı (75%) - csak virilizáló (25%) 1:15000 (homozygota gyakoriság g kaukázusi rasszban) 1: 60 (heterozygota gyakoriság g zárt z közössk sségben) 2.Non-klasszikus forma: prenatalisan nincs virilizáci ció 1:1000 heterozygota hordozó kaukázusi rasszban Laboratóriumi riumi jellemzık: Akut adrenális krízis Asymptomatikus Na,K,K,, (ok:aldosteron hiány) adrenalin (ok:cortisol ) Glucose,Metab.acid.(ok: kotrainzuláris ris faktorok ) 17-OH OH-Progesteron,

13 21-hydroxylase gén: g CYP21

14 CAH genotípus és s fenotípus összefüggése

15 CAH diagnosztika hagyományos ACTH stimuláci ciós s teszttel

16 Neonatalis szőrés 1. Beszárított vérminta:17v rminta:17- OH-Progesteron (Enzaplate ELISA, minimális keresztreakció egyéb endogén n steroidokkal?) alacsony cut off 4 ng/ml fals pozitív (koraszülöttek, kis súlys lyúak) 2. Beszárított vérminta:17v rminta:17- OH-Progesteron (J.Pharm.Biomed.Anal ) LC - ESI-MS/ MS

17 Neonatalis szőrés

18 Neonatalis szőrés 3. Nyálminta: 17- OH-Progesteron LC- ESI - MS/MS ( J. Chromat )

19 4. RATIO = Neonatalis szőrés (17-OH OH-Progesteron+Androstendion)/Cortisol (Pediatric Research ) 235) módszer: UPLC - ESI-MS/MS novum:- oszloptöltet ltet partikulum méretem rete 2.5µm elválaszt lasztás s ideje sec,, minısége - a gyengén n ionizálhat lható steroidokat új derivatizáci ciós s eljárással jól j l ionizálhat lhatóvá tenni cél: fals pozitivitás s csökkent kkentése (koraszülöttek, kis súlys lyúak, stress hatás)

20 Neonatalis szőrés

21 Growth Hormon Deficiencia (GHD) diagnosztikai problémái - Diagnosztika: klinikai, antropometriai, radiológiai, biokémiai - GH neurosecretoros dysfunkció GH teljes hiány (GH provokáci ciós s teszt norm./igf1,, IGFBP ) (GH,IGF1,IGF1,IGFBP ) - Gyerek :GHD MINDEN formája kezelendı! Felnıtt: csak súlyoss - Milyen nehézs zséget jelent a klinikus számára a GH assay értelmezése? 1. Spontán n GH mérés m s diagnosztikai értéke alacsony 2. Provokatív v tesztek cut off értékei függnek: f - protokoll (L-dopa, clonidin, arginin, glucagon, insulin, GHRH) - életkor, BMI, - metodika (analitika)

22 GH molekuláris és s biológiai tulajdonságai - GH-N N gén g n transcriptum 2 2 fajta mrna 2 termék k : 22kD és s 20 kd - Posttranszláci ciós s modifikáci ció: : (22kD) - proteolítikus tikus (fragmensek) - oligomerek (kovalens és s non-kovalens) - deamináci ció,, acyláci ció,, glycoziláci ció,, foszforiláci ció - Biológiai aktivitás: 22kD a legaktívabb DE! 20 kd is biológiailag aktív 22 kd modifikált formái i is lehetnek aktívak

23 GH Binding Proteinek (GHBP) és s receptorok GH Binding Proteinek: 1.High affinity: K d ~ nmol szekvencia homológia a GHR extracelluláris ris doménj njével 2.Low affinity: 2.Low affinity: K d ~ µmol mol α 2 - macroglobulin

24 GH isoformok periféri riás s vérbenv

25 GH assay standardizálása sa 1. Kalibrátor 1994 elıtt: hypophysis kivonat ( 2.6 U/mg ) 1994 után: hrgh 22 kd monomer (µg/l,( 3U/mg) 2. Antitestek 1994 elıtt: poliklonális lis 1994 után: monoklonális lis - csak a 22kD monomért ismeri fel - a BP-hez kötött k tt GH-t t nem ismeri fel 3. Mátrix M hatás- GHBP probléma ( BP maga a receptor!) Az új, automatizált assayk NEM teszik lehetıvé az equilibráci ciót!

26 GH assay standardizálása sa

27 GH assay standardizálása sa Probléma: ma:- GH NEM homogén n molekula - GHBP magas affinitású=receptor - Calibrátor= 22kD monomer Amit mérünk, m az NEM tükrözi a fiziológi giát! GH immunfunkciós s mérése: m immunoassay + biológiai aktivitás szilárd fázis: f GHR site2 jelölı: : rhghbp biotin - streptavidin-* Azokat a GH molekulákat kat mérjm rjük, melyeknek mindkét kötıhelyük k intakt.

28 IFA: Immunfunkcionális assay, MIA, RIA: kétlk tlépéses IRMA, két t monoklonális lis Ab, kalibrátor: pituitary (Horm Res ) 77)

29 GHRH-ARG teszt cut-off értéke :BMI 25 (felnıtt,kor átl tl=47, módszer: m rgh IRMA) Eur J. Endocrinol

30 GHRH-ARG teszt cut-off értéke : BMI = 25-30

31 GHRH-ARG teszt cut-off értéke : BMI 30

32 Journal of Pediatric Endocrinology and Metabolism Consensus guidelines In a child with clinical criteria for GHD, a peak GH concentration below 10 µg/l has traditionally been used to support the diagnosis. This value needs to be revised when using newer monoclonal-based assays and recombinant hgh reference preparations Consensus statement In a child with clinical criteria for GHD, a peak GH concentration below 10 ng /ml has traditionally been used to support the diagnosis. At the present time, a new GH reference standard is being introduced which may require a downward adjustment of the lower limit of normal. In addition, changes in assay methodology influence choice of cut-off values for the diagnosis of GHD. Eight years and nothing has changed.

33