Géntechnikák. Immunoassays. Ágnes

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Géntechnikák. Immunoassays. Ágnes"

Virág Fábiánné
7 évvel ezelőtt
Látták:

1 Géntechnikák Immunoassays Készítette: MészM száros Ágnes

2 Biokémiai tesztek melyekben az antigén antitest kölcsönhatásait használj lják k fel Antigén: n: kis szerves molekula, nagy szerves makromolekula (pl. fehérje), mikroorganizmus Antitestek: fehérj rjék, molekulatömeg megük fölött f van, Y alakúak ak Immunoassay

3 Immunoassayek csoportosítása sa Kompetitív: ha az egyik reagens (Ab vagy Ag) jelzett és s jelzetlen formája túlst lsúlyban lyban van a másik m reagenshez képest, k és s ezért a jelzett és s jelzetlen molekulák versenyeznek Nem kompetitív: szendvics módszerm Heterogén n módszerrm dszerről l beszélünk, ha szüks kség g van jelzett anyagok elválaszt lasztására; ellenkező esetben a módszer homogén

4 Nem kompetitív v immunoassay két t olyan antitest kell, amely a mérendm rendő makromolekula különbk nböző,, egymást stól l elég g távoli t részletéhez kötk az első antitestet egy műanyag m kémcsk mcső falához kötjük k kovalensen/ adszorpcióval (a variábilis régió maradjon szabad) a mintát t a kiszárított kémcsk mcsőbe töltjt ltjük k (csak annyi antigén, n, hogy az edény falán n lévől antitest ne telítődj djön), majd inkubáljuk a mintát t kiöntj ntjük és öblítés s után n a kémcsk mcsőbe töltjük k a második, m jelzéssel ellátott antitestet feleslegben az antigén n a kémcsk mcső falán n két k t különbk nböző antitest között kötve k helyezkedik el ( szendvics( szendvics ) a fölösleges f jelzett anyagot kiöntj ntjük és öblítés után n mérjm rjük k a kémcsk mcső falán n lévől antigénen nen kötött k tt jelzett antitest mennyiségét (jelzés s lehet radioaktív v atom RIA)

5 Mennyiségi mérés m s antitestekkel Az antigén-antitest antitest reakció egyes esetekben csapadékk kképződéshez vezet (pl. vércsoportv rcsoport- reakció) titrálásszer sszerűen en kell végezni, v mert a csapadék k oldhatósága megnő bármelyik reagens feleslege esetén csapadékk kképződési reakció sebességének mérése m az oldat zavarosságának mérése m révén r (fényelnyel nyelnyelés - turbidimetria vagy fényszf nyszórás - nefelometria) Ha az antigén n makromolekula, az antitesttel való összekapcsolódás s révén r n egy a kiindulási anyagoknál jóval nagyobb molekula jön j n létrel tre az antitestet a mérés s előtt egy fényvezetf nyvezető réteg felület letén n rögzr gzítik kovalensen, majd mérik m a felületi leti réteg r törésmutatóját t a teljes visszaverődésn snél l a fényvezetőből l kis távolst volságra kilépő fény révén r (evaneszcens hullám) A minta hozzáad adása után az antigén n megkötődik, a réteg r törésmutatt smutatója megváltozik és s ez jelváltoz ltozást okoz

6 Radioimmunoassay (RIA) Általában I 125 vagy I 131 izotópot használnak jelzésre, ekkor pl. az antigén egy aromás s gyűrűjébe visznek be radioaktív jódot. A mért m jelintenzitást - radioaktív v beütések száma percenként nt - ábrázolják k a jelzetlen antigén n koncentráci ciója logaritmusának - függvényében

7 ELISA (Enzyme - Linked ImmunoSorbent Assay) Kompetitív/nem kompetitív két antitestre van szükség az egyik antitest specifikus az antigénre nézve, míg a másik antitest az antigén antitest komplexhez kötődik, enzimmel jelölt antigén és antitest kimutatására is használható

8 1. Radioimmunoassay (RIA) 2. Immunradiometrikus assay (IRMA) 3. Enzimimmunoassay módszerek m (EIA, ELISA, EMIT) 4. Mikrorészecske szecske- enzimimmunoassay (MEIA) pl.: Abbott IMX 5. Fluoreszcenciapolarizáci ciós immunoassay (FPIA) pl. Abbott TDX 6. Abbott AXSYM 7. Fluoreszcencia enzimimmunoassay (FIA, DELFIA) 8. Gázkromatográfia 9. Nagynyomású folyadékkromatogr kkromatográfia (HPLC) 10. Fotometria, kémiai k reakció után 11. Fluorimetria, kémiai k reakció után 12. Affinitáskromatogr skromatográfia immunoassay (ACMIA) pl.: Dade ACA Mérési módszerekm 13. Radiális megoszlási si immunoassay (RPIA) pl. Dade STRATUS 14. CEDIA (Clone enzyme directed immunoassay) 15. Lumineszcencia, kemilumineszcencia immunoassay (LIA, SPALT) 16. Elektrokémiai lumineszcencia immunoassay pl.:elecsys 17. Lumineszcencia erõsített enzimimmunoassay (LEIA, LIEMA) pl.: IMMULITE 18. Többrétegû film (MF-FIA) FIA) pl.: OPUS 19. ELFA-technika (Enzyme Linked Fluorescence Assay), pl.: Biomeriéux VIDAS 20. Nefelometria, Turbidimetria 21. MTM (multilayer-tesztmodul), tesztmodul), ETM (ELISA-tesztmodul) pl.: Behring OPUS

9 Köszönöm m a figyelmet!

Hasonló dokumentumok

Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban

Immunológiai módszerek a klinikai kutatásban 8. előadás Immunszerológia, immunkémia Az immunoassay-k érzékenysége A fő szérumfehérje frakciók és az ahhoz tartozó fehérjék Az Ig valencia és aviditás viszonya