D vitamin laboratóriumi riumi vizsgálata

D vitamin laboratóriumi riumi vizsgálata Bekı Gabriella Semmelweis Egyetem, Központi K Laboratórium rium (Pest) 2007. október 5.

Háttér A legújabb irodalomban D-vitamin D helyett inkább D-hormonról írnak. - szteránv nvázas vegyület - a szervezet felnıtt korban kellı mennyiségben állítja elı - nem kofaktora semelyik enzimnek sem - a neurohumorális rendszerrel a mellékpajzsmirigy hormonján n keresztül l van kapcsolata

Hogyan jut a szervezet kellı D vitaminhoz? D2 vitamint (ergokalciferol( ergokalciferol) -a a növények n nyek termelik D3 vitamin (kolekalciferol( kolekalciferol) -7-dehidrokoleszterin biohasznosulása sa (bırben, UV hatására) -legfontosabb források: halolaj, halak, tojáss ssárgája, tejtermékek +Dvit+ Dvit., máj, számos más m s táplt plálék

D vitamin sorsa a szervezetben 1. 7-dehidroxikoleszterin fotolitikus átalakulása a bırben D3-previtaminná majd D3 vitaminná 2. 25-ös szénatom hidroxilálódik a májban létrejön a 25-(OH)-D3 (CYP27 hatására) Szérumszintje tökéletes jelzıje a D-vitamin háztartás állapotának 3. Bioaktiváció a vesében, létrejön az 1,25-(OH)2-D3 (CYP1hatására)

A D-vitamin D biológiai hatásai 1.Segíti a Ca felszívódását 2.Normalis se kalcium- és foszfát-homeosztázist a csont reszorpcióján keresztül is szabályozza 3. Gátolja a parathormon secrecióját (hiányában secunder paratyreosis alakul ki) 4. Vesékben növeli a Ca reabsorpciót, segíti a Ca transzportot a distalis tubulusokba.

Hiánybetegs nybetegség D vitaminhiány: ny: A gyermekekben angolkór r (deformálódott dott koponyacsontok, "tyúkmell"/ki kmell"/kiálló szegycsont, púpossp posság, görbe vagy X lábak, l duzzadt ízületek). A felnıttekben csontlágyul gyulás (csontfájdalmak, puha csontok, spontán n csonttörések, sek, gerinctörés).

A D-vitamin D metabolizmus szerzett, vagy veleszületett letett zavarai a. Szerzett - Krónikus urémia - Tumor indukálta osteomalacia - Felszívódási si zavar b. Veleszületett letett - D vitamin dependens rachitis (I., II. típus) t - Hypophosphatemiás,, gyakran nemhez kötötten tten öröklıdı,, X kromoszómához kötött k tt D-vitamin rezisztens rachitis - Felszívódási si zavar

A D vitamin biológiai hatásai idıs s emberek osteoporosisa esetén n a csonttörések sek száma jelentısen csökkenthet kkenthetı D-vitamin-terápiával D-vitamin-kezeléskor a csont ásványianyagtartalma nem nı számottevıen, a törések száma mégis 30 70%-kal redukálódik. Ez a tény részben a D-vitamin-kezeléssel járó izomerı-fokozódásnak tulajdonítható, részben pedig a csont minıségében bekövetkezı változásoknak

D-vitamin biológiai hatásai 2. Haematopoeticus szövetekben -antiproliferáció és -differenciáció serkentése A D-vitamin potenciális gyógyszerként szerepelhet a leukaemiák és más myeloproliferativ kórképek kezelésében.

D-vitamin biológiai hatásai 3 A D-vitamin szerepet játszhat az ischaemiás szívbetegség kivédésében D-vitamin-hiányban hozzávetıleg 20 30%-kal gyakoribbak az ischaemiás jellegő cardiovascularis események.

D-vitamin biológiai hatásai 4 Hasnyálmirigyben az inzulinszintézis/ zis/-szekréció serkentése D-vitamin-hiányos területeken a 2-es típusú diabetes mellitus, a glükózintolerancia és a metabolikus X-szindróma gyakrabban fordul elı.

D-vitamin biológiai hatásai 5 Veseelégtelens gtelenségben gben számos ureamiás szövıdm dmény okának az emelkedett PTH-t tekintik A D-vitamin D terápia a krónikus vesebetegek gyógyszeres gyszeres kezelésének fontos eleme

D-vitamin biológiai hatásai 6 Daganatok melanoma, leukaemia, osteo-, fibrosarcoma, adenoma, neuroblastoma, pancreas adenocarcinoma,, hólyagh lyag-,, emlı-, cervix-, prostata-,, colon- és medullaris pajzsmirigy-carcinoma antiproliferatív,, a differenciáci ció serkentése A D-vitamin sejtproliferációt gátló és sejtdifferenciálódást indukáló szerepét egyre nagyobb figyelem kíséri.

D-vitamin biológiai hatásai 7 Immunrendszer ( monocyta és macrophag, lymphocyta) antivirális lis/-bakteriális és tumorellenes hatás és s a védekezv dekezés s serkentése immunszuppresszió gátolja a B-B és s T-sejtek T proliferáci cióját, így hatásos autoimmun betegségekben gekben

D vitamin terápia daganatos megbetegedésben A Kanadai Rákellenes R TársasT rsaság g szerint elegendı bizonyíték áll rendelkezésre arra nézve, n hogy ajánlhat nlható legyen a D-vitamin D mint hatékony ellenszer a vastag- és s végbv gbélrák, az emlırák és s a prosztatarák k kialakulásával szemben. Az ajánl nlás s egybehangzó a nebraskai Creighton Egyetem kutatói által a témakt makörben végzett v szélesk leskörő kutatás s eredmény nyével, melyet az American Journal of Clinical Nutrition szakfolyóirat tett közzk zzé.. A négy éven át t folytatott vizsgálatot 1180 vidéken élı,, 55 évnél idısebb nın bevonásával val végeztv gezték. Eredményei kimutatják, k, hogy azoknál l a vizsgálati alanyoknál, l, akik kálciumot és s D-vitamint D szedtek, egy év v múlva m 77%-kal csökkent a rák r k kockázata azokhoz képest, akik a kálcium mellé csak placebot kaptak. Forrás : http://www.radio-canada.ca/nouvelles/science-sante/2007/06/07/004-vitamined-cancer-lutte.shtml

D vitamin és s a daganatos megbetegedések A Kalifornia Egyetem (San Diego) ) kutatócsoportja azt vizsgálta, hogy a vér v D-vitamin (25-hidroxivitamin D 3 ) koncentráci ciója milyen összefüggést mutat a vastagbélr lrák- és s az emlırák kockázat zatával, pontosabban: milyen mértm rtékő D-vitamin koncentráci ció véd d a rák r k ellen. D-vitamin a napfény hatására a bırünkben képzıdik. Az egyenlítıtıl távolodva, az északibb országokban és fıként a téli idıszakban a D-vitamin hiányban szenvedık száma megnı. Fordított az összefüggés a D-vitamin szint és a vastagbél-, illetve az emlırák gyakorisága között: minél magasabb a D-vitamin szint, annál ritkább a rák elıfordulása. Megállapították, hogy ha 24-32 ng/ml a vér D-vitamin értéke, már akkor is sok daganatos betegséget meg lehet elızni. De az optimális D-vitaminszint 55ng/ml. Forrás:The American Journal of Clinical Nutrition 2007;85:1586-91

Páciensek osztályoz lyozása D vitamin szintjük k alapján Súlyos D vitamin hiány ny: < 5 ng/ml /< < 12.5 nmol/l D vitamin hiány: 5 10 ng/ml /12.5-25 nmol/l Enyhe D vitamin hiány: 10 24 ng/ml 25 60 nmol/l Megfelelı D vitamin szint: 24 80ng/ml/ 60 to 200 nmol/l D vitamin toxicítás: > 200 ng/ml > 500 nmol/l

25-(OH) (OH)-D 3 vitamin mérés m s lehetıségei LC MS-MS HPLC RIA, ELISA Automatán n mérhetm rhetı immunológiai tesztek: - DiaSorin Liaison - Roche Elecsys,, E170 Modular, Cobas e (Vitamin D 3 (25-OH) Elecsys, cobas e)

Vitamin D 3 (25-OH), Elecsys,, cobas e Competitive Assay alapelve A D vitamin kötık fehérje inaktiválása a kulcsa a korrekt D vitamin mérésnekm 25-OH-Vit D Bi D Bi Buffer D sample (35 µl) 9 min A D vitamin kötı fehérje inaktiválódik az inkubáció alatt SA-Microparticle 9 min D Bi Ru Detection Ru PAK<VitD>S-IgG Ru Bi: Biotin Ru: Ruthenium SA: Strepavidin

Vitamin D 3 (25-OH), Elecsys, cobas e Teljesítm tményjellemzık Precizitás: E170: CV% 3,7 7,8 Mérési tartomány: 4-1004 ng/ml (10-250 nmol/l) Az eljárás s korlátai: Komponens 1,25 (OH) 2 Vitamin D 3 24,25 (OH) 2 Vitamin D 3 25 (OH) Vitamin D 2 Cholecalciferol Ergocalciferol Vizsgált max. koncentráci ció n.a 1000 ng/ml 5000 ng/ml 5000 ng/ml 5000 ng/ml keresztreakció 100 % < 10% < 2 % < 0.1% < 0.1%

Vitamin D 3 (25-OH) Elecsys, cobas e E 170Modular-on on mért m intraassay 25OH-D 3 -vitamin (ng/ml) 30 Mintaszám Átlag SD 25 20 15 10 5 0 Varáci ciós koefficiens alacsony tart. 10 11,96 0,607 5,05 magasabb tart. 10 28,73 1,066 3,71

Vitamin D 3 (25-OH), Elecsys,, cobas e A meghatároz rozás s referens metodikája az LC-MS MS-MS (Folyadék k kromatográfia+tandem tömegspektrometria)

Vitamin D 3 (25-OH), Elecsys, cobas e Összehasonlítás a referens metodikával : LC-MS-MS 4 referens laboratóriumban 100,00 MV all Centren official result reference standardization n = 777 / HD=300 / DD=168 / AF=115 / Lyon=194 90,00 E170/e601 80,00 70,00 60,00 50,00 40,00 Heidelberg Düsseldorf Amersfoort Lyon Y=X BaPa Slope: 1.002 Intercept: 0.274 Correl.: 0.903 30,00 20,00 10,00 0,00 0,0 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 60,0 70,0 80,0 90,0 100,0 LCTMS

Referencia és standardizáci ció kérdése HPLC (BIORAD) Visszavezethetıség: A kalibrátor értékeket tiszta anyagokhoz hozzáadott mennyiségekkel végzett v elemzésre lehet visszavezetni DiaSorin Liaison Visszavezethetıség: RIA-val való összemérést st említi

Vitamin D 3 (25-OH) Elecsys, cobas immunteszt összehasonlítása sa DiaSorin RIA teszttel 100 100 90 90 80 80 Elecsys Vitamin D3 (25-OH) new standardization [ng/ml] e601 (MP-Lot 11070600) 70 60 50 40 30 20 10 P/B Regression Y = 1.11 * X - 1.614 md(95) = 6.587 N = 160 r = 0.899 Elecsys Vitamin D3 (25-OH) new standardization [ng/ml] E170 (MP-Lot 11070600) 70 60 50 40 30 20 10 P/B Regression Y = 0.972 * X + 0.547 md(95) = 8.023 N = 67 r = 0.823 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 D ias orin 25-H ydroxyvitam in D 125I R IA-K it [ng/ml] RIA 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 DiaSorin 25-Hydroxyvitamin D 125I RIA-Kit [ng/ml] RIA Az összehasonlított tesztek esetén n igen jój korreláci ciót t találtak ltak by Lukács Júlia (Roche)

Liaison (ng/ml) 25(OH)-D-vitamin eredmények korreláci ciója E 170 Modular-on on és Liaison-on mérve 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 y = 0,5624x + 10,171 R 2 = 0,6070 0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 E170 (ng/ ml) E170(ng/ml) Lineáris (E170(ng/ml)) R = 0,7791 n = 96

Vitamin D 3 (25-OH) Elecsys,, cobas e Metodika összehasonlítás E170 Modular és HPLC készülékeken 100 90 100 90 dialysis patients only 80 80 Elecsys Vitamin D3 (25-OH) new standardization [ng/ml] E170 (MP-Lot 11070600) 70 60 50 40 30 20 10 P/B Regression Y = 1.026 * X + 2.693 md(95) = 8.14 N = 291 r = 0.936 Elecsys Vitamin D3 (25-OH) new standardization [ng/ml] E170 (E1) (MP-Lot 11070600) 70 60 50 40 30 20 10 P/B Regression Y = 0.859 * X + 3.917 md(95) = 7.585 N = 123 r = 0.866 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 HPLC (home brewed) [ng/ml] 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Chromsystems 25-OH-Vitamin D3 [ng/ml] HPLC

25(OH)-D-vitamin eredmények korreláci ciója E 170 Moduláron és HPLC-n mérve HPLC (ng/ml) 100,0 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 y = 1,2073x + 3,4546 R 2 = 0,5207 R = 0,7216 n = 96 0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 HPLC (ng/ml) Lineáris (HPLC (ng/ml)) E170 (ng/ml)

25(OH)-D-vitamin eredmények korreláci ciója Liaison-on és HPLC-n mérve 100,0 H P LC (n g/m l) 80,0 60,0 40,0 20,0 y = 0,8332x + 10,42 R 2 = 0,5211 R = 0,7218 n = 96 0,0 0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 Liaison (ng/ml) HPLC (ng/ml) Lineáris (HPLC (ng/ml))

25(OH)-D 3 -vitamin mérési m eredmények összehasonlítása sa BioRad HPLC, DiaSorin Liaison, Roche E-170 Modular készülékekkel 2 5 (O H )-D 3 -v ita m in (n g /m l) 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 81 86 91 minta száma Liaison1(ng/ml) E170-1(ng/ml) HPLC (ng/ml) n = 96

25(OH) D 3 vitamin (Elecsys, cobas e) A teszt elınyei A 2 automata D-vitaminD vitamin-kit közül k l az egyik (a másik: m Liaison DiaSorin) Az egyetlen teszt, amelyik konszolidált, lt, integrált rendszeren mőködik Az egyetlen teszt, amelyet a várhatv rható referenciamódszerhez (LC-MS MS-MS) MS) mértek m be Széles mérési m tartomány kevés s hígítás h s szüks kséges Jó precizitás s (többnyire < 5%) A legteljesebb csontmarker és hormon-teszt teszt-paletta

Roche csontmarker és s hormonteszt paletta Elecsys Tipus Kezelés formája Kezeléssel elérendı Mérési gyakoriság β Crosslaps Csontfelszívódási marker Antireszorptiv min. 35% csökkenés Alap (baseline) érték, majd a kezelés 3. hónapja, ezt követıen 6 havonta Total P1NP Csontképzıdési marker Antireszorptiv Anabolikus min. 40% csökkenés min. 40% növekedés Alap (baseline) érték, majd a kezelés 6. hónapja, ezt követıen 6 havonta Alap (baseline) érték, majd a kezelés 3. hónapja, ezt követıen 6 havonta N-Mid Osteocalcin Csont-turnover marker Antireszorptiv min. 20% csökkenés Alap (baseline) érték, majd a kezelés 3. hónapja, ezt követıen 6 havonta PTH 25(OH)-D-vitamin Csontmineralizáció elısegítıje D 3 vitamin terápia 75 nmol/l koncentráció Alap (baseline) érték, majd a kezelés 3. hónapja, ezt követıen 6 havonta

Köszönet Olajos Ferencnek Szalay Albertnénak nak Kovács Ferencnének nek

Köszönet Köszönöm a figyelmet!