Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-1 IECORIS SELLI OLEUM B Csukamájolaj (B típus) 01/2009:1193 DEFINÍCIÓ vadon élő tőkehal Gadus morhua L. és más Gadus-fajok friss májából nyert, tisztított zsíros olaj, amelyből a szilárd anyagokat hűtéssel és szűréssel eltávolították. lkalmas antioxidánst tartalmazhat. Tartalom: grammonként 6002500 NE (180750 g) -vitamin és grammonként 60250 NE (1,56,25 g) D 3 -vitamin. SJÁTSÁGOK Küllem: tiszta, sárgás színű folyadék. Oldékonyság: vízben gyakorlatilag nem oldódik; alkoholban kevéssé oldódik; petroléterrel elegyedik. ZONOSÍTÁS Első azonosítás:, B, C. Második azonosítás: C, D.. z -vitamin -módszer szerinti tartalmi meghatározásában a vizsgálati oldat 3252 nm-nél abszorpciós maximumot (2.2.25) mutat. z -vitamin B-módszer szerinti tartalmi meghatározásában a vizsgálati oldat kromatogramján legyen látható az összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő all-transz-retinol csúcsának megfelelő csúcs. B. D 3 -vitamin tartalmi meghatározása során az a) vizsgálati oldat kromatogramján is megjelenik a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő, a kolekalciferolnak megfelelő csúcs. C. z anyag feleljen meg a Zsírsavösszetétel vizsgálatban (lásd Vizsgálatok ) előírt követelménynek. D. 0,1 g anyagot 0,5 ml R diklórmetánnal és 1 ml R antimon(iii)- kloridoldattal elegyítünk. z elegy kb. 10 másodpercen belül sötétkékre színeződjék.
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-2 VIZSGÁLTOK Szín. z olaj színe nem lehet erősebb, mint a következő összehasonlító oldaté: 3,0 ml piros törzsoldathoz 25,0 ml sárga törzsoldatot elegyítünk, és az elegyet R tömény sósav 10 g/l töménységű oldatával 50,0 ml-re hígítjuk (2.2.2, II. módszer). Relatív sűrűség (2.2.5): 0,9170,930. Törésmutató (2.2.6): 1,4771,484. Savszám (2.5.1): legfeljebb 2,0. Jódszám (2.5.4, B módszer): 150180. R2 keményítőoldatot használunk. Peroxidszám (2.5.5, B módszer): legfeljebb 10,0. El nem szappanosítható rész (2.5.7): legfeljebb 1,5%. vizsgálathoz 2,0 g anyagot 3 50 ml R peroxidmentes éterrel extrahálunk. Sztearin. Legalább 10 ml anyagot 60 90 C-ra felmelegítünk, majd az anyagot jeges vízben vagy termosztált vízfürdőben, 0 ± 0,5 C-on 3 órán át hűtjük; amennyiben az oldhatatlan anyagok eltávolítása érdekében szükséges, a melegítés után megszűrjük a mintát. minta tiszta maradjon. Zsírsavösszetétel. Gázkromatográfia (2.2.28).
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-3 zsírsav triviális neve Nevezéktan Csúcsterület alsó határa (%) Csúcsterület felső határa (%) Telített zsírsavak: Mirisztinsav 14:0 2,0 6,0 Palmitinsav 16:0 7,0 14,0 Sztearinsav 18:0 1,0 4,0 Egyszeresen telítetlen zsírsavak: Palmitoleinsav 16:1 n-7 4,5 11,5 cisz-vakcénsav 18:1 n-7 2,0 7,0 Olajsav 18:1 n-9 12,0 21,0 Gadoleinsav 20:1 n-11 1,0 5,5 Ejkozénsav 20:1 n-9 5,0 17,0 Erukasav 22:1 n-9 0 1,5 Cetoleinsav (22:1 n-11) 22:1 n-11+13 5,0 12,0 Többszörösen telítetlen zsírsavak: Linolsav 18:2 n-6 0,5 3,0 α-linolénsav 18:3 n-3 0 2,0 Sztearidonsav 18:4 n-3 0,5 4,5 Ejkozapentaénsav (EP) 20:5 n-3 7,0 16,0 Dokozahexénsav (DH) 22:6 n-3 6,0 18,0 Vizsgálati oldat. vizsgálandó anyag kb. 0,45 g-ját 10 ml-es mérőlombikba mérjük és literenként 50 mg R butil-hidroxitoluolt tartalmazó R hexánnal 10,0 ml-re oldjuk. z oldat 2,0 ml-ét kvarc kémcsőbe pipettázzuk és az oldószert R nitrogén enyhe áramoltatásával elpárologtatjuk. maradékhoz R nátriumhidroxid R metanollal készült, 20 g/l töménységű oldatának 1,5 ml-ét adjuk, a folyadék feletti légteret R nitrogénnel töltjük, majd a kémcsövet teflonborítású kupakkal szorosan lezárjuk. Tartalmát megkeverjük és vízfürdőben 7 percig melegítjük, majd lehűtjük. 2 ml R metanolos bór-trikloridoldat hozzáadása után újból R nitrogént rétegzünk az oldat fölé, majd szorosan lezárjuk, megkeverjük és vízfürdőben 30 percig melegítjük; ezután 4050 C-ra hűtjük, 1 ml R trimetilpentánt adunk hozzá, lezárjuk és legalább 30 másodpercig vortex-keverőn kevertetjük vagy erőteljesen rázzuk. Rögtön ezután 5 ml R telített nátrium-kloridoldatot adunk a folyadékhoz, légterét R nitrogénnel telítjük, a kémcsövet lezárjuk és legalább 15 másodpercig vortex-keverőn kevertetjük vagy erőteljesen rázzuk. felső réteget, feltisztulása után, kis válsztótölcsérbe visszük át. metanolos réteget 1 ml R trimetilpentánnal még egyszer kirázzuk és a trimetilpentános kivonatokat egyesítjük. z egyesített
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-4 kivonatokat 21 ml R vízzel mossuk, majd R vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. Mintánként 2 oldatot készítünk. Oszlop: anyaga: kvarcüveg, méretei: l = 30 m, Ø = 0,25 mm, állófázis: R makrogol 20 000 (filmvastagság 0,25 µm). Vivőgáz: R kromatográfiás célra szánt hidrogén vagy R kromatográfiás célra szánt hélium; az oxigén eltávolítására előtétként megfelelő mosópalackot kapcsolunk. Mintaáram-elosztási arány: 1:200. Hőmérséklet: Idő (perc) Hőmérséklet ( o C) Oszlop 0 55 170 225 55 75 225 Injektor 250 Detektor 280 Detektálás: lángionizáció. Injektálás: 1 µl, kétszer. Rendszeralkalmasság: a vizsgálandó 15 zsírsav a jellemző kromatogramból (1193.-1. ábra) megfelelő mértékben azonosítható legyen, R metil-palmitát, R metil-sztearát, R metil-arachinát és R metil-behenát azonos mennyiségét tartalmazó elegy injektálása után a zsírsavmetilészterek százalékos területe sorrendben 24,4, 24,8, 25,2 és 25,6 ( 0,5%) legyen, csúcsfelbontás: legalább 1,3, a metil-oleát és a metil-cisz-vakcenát között; a metil-gadoleát és a metil-ejkozenát közti csúcsfelbontás mind az azonosítás, mind a területmérés céljára elegendő legyen.
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-5 1193.-1. ábra. csukamájolaj (B típus) kromatogramja a zsírsav-összetétel vizsgálatához z egyes zsírsav-metilészterek százalékos területét az alábbi képletből számítjuk: x t 100 ahol x = az x-edik zsírsav csúcsterülete, t = a csúcsterületek összege (C22:6 n-3-ig bezárólag). számítás csak abban az esetben érvényes, ha a csúcsok összterületét kizárólag az egyes zsírsav-metilésztereknek megfelelő csúcsok alapján számoljuk, az összterület 0,05%-át meghaladó zsírsav-metilészter-csúcsok száma legalább 24, a 24 legnagyobb metilésztercsúcs területösszege meghaladja az összterület 90%-át. (Ezek a szokásos elúciós sorrend esetén a következők: 14:0, 15:0, 16:0, 16:1 n-7, 16:4 n-1, 18:0, 18:1 n-9, 18:1 n-7, 18:2 n-6, 18:3 n-3, 18:4 n-3, 20:1 n-11, 20:1 n-9, 20:1 n-7, 20:2 n-6, 20:4 n-6, 20:3 n-3, 20:4 n-3, 20:5 n-3, 22:1 n-11, 22:1 n-9, 21:5 n-3, 22:5 n-3, 22:6 n-3.) TRTLMI MEGHTÁROZÁS
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-6 -vitamin. tartalmi meghatározást a lehető leggyorsabban végezzük, elkerülve a bomlást előidéző fény és levegő, oxidáló anyagok és oxidációs katalizátorok (pl. réz és vas), valamint savak behatását. z -módszert alkalmazzuk. Ha az -módszer alkalmatlannak bizonyul, a B- módszert alkalmazzuk. -MÓDSZER Ultraibolya abszorpciós spektrofotometria (2.2.25). Vizsgálati oldat. Gömblombikba mért 1,00 g anyaghoz R kálium-hidroxid frissen készített 50 %m/m-os oldatának 3 ml-ét és R etanol 30 ml-ét adjuk. folyadékot, visszafolyóhűtő alkalmazásával, R nitrogén áramoltatása közben 30 percig forraljuk, majd gyorsan lehűtjük, 30 ml R vizet adunk hozzá, végül 50 ml R éterrel kirázzuk. kirázást háromszor megismételjük; a fázisok teljes szétválása után az alsó réteget elöntjük. z egyesített felső fázisokat 450 ml R vízzel mossuk, majd 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, lassú R nitrogén áramban szárazra párologtatjuk. bepárologtatást rotációs bepárlókészülékkel, 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, csökkentett nyomáson (vízlégszivattyú) is végezhetjük. maradékot annyi R1 2-propanolban oldjuk, hogy az oldat várható -vitamin koncentrációja 1015 NE/ml legyen. z oldat abszorbanciáját 300, 310, 325 és 334 nm-en, valamint az abszorpciós maximum hullámhosszán mérjük; alkalmas spektrofotométert és 1 cm-es küvettát használunk. Kompenzációs folyadékként R1 2-propanolt alkalmazunk. z all-transz-retinolban kifejezett, NE/g-ban megadott -vitamin-tartalmat az alábbi képlet segítségével számítjuk ki: ahol 325 = 325 a 325 nm-en mért abszorbancia, 1821 V 100m m = a vizsgálandó anyag tömege, g-ban, V = a ml-enként 1015 NE -vitamint tartalmazó oldat össztérfogata, 1821 = faktor az all-transz-retinol fajlagos abszorpciós koefficiensének Nemzetközi Egységre való átszámításához. fenti képlet csak abban az esetben alkalmazható, ha 325 értéke nem nagyobb az 325,corr /0,970 tört értékénél, ahol 325,corr a 325 nm-nél mért korrigált abszorbancia, amely az alábbi egyenlettel számítható: 325,corr = 6,815 325 2,555 310 4,260 334 az alsó indexben jelzett hullámhosszra vonatkozó abszorbanciát jelenti.
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-7 Ha 325 értéke nagyobb az 325,corr /0,970 tört értékénél, úgy az -vitamintartalmat az alábbi képlettel számítjuk: 1821 325, corr V 100 m tartalmi meghatározás csak abban az esetben értékelhető, ha az abszorpciós maximum 323 nm és 327 nm között jelenik meg, a 300 nm-nél mért és a 325 nm-nél mért abszorbanciák aránya legfeljebb 0,73. B-MÓDSZER Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. mintából két párhuzamos mérést végzünk. Gömblombikba mért 2,00 g anyaghoz R aszkorbinsav frissen készített 100 g/l töménységű oldatának 5 ml-ét, R kálium-hidroxid frissen készített 800 g/l töménységű oldatának 10 ml-ét, valamint R etanol 100 ml-ét adjuk. folyadékot, visszafolyóhűtő alkalmazásával, 15 percig vízfürdőn forraljuk, majd R nátriumklorid 10 g/l töménységű oldatának 100 ml-ével elegyítjük és lehűtjük. z oldatot 500 ml-es választótölcsérbe visszük át, és a gömblombikot R nátriumklorid 10 g/l töménységű oldatának kb. 75 ml-ével, majd R1 petroléter és R éter egyenlő térfogatarányú elegyének 150 ml-ével átöblítjük. 1 percig tartó rázást követően, a rétegek teljes szétválása után, az alsó fázist elöntjük. felső fázist előbb R kálium-hidroxid R etanol 10 %V/V-os oldatával készült, 30 g/l töménységű oldatának 50 ml-ével, majd R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának 350 ml-ével mossuk. z átmosott felső fázist gyors szűrőpapírra rétegzett 5 g R vízmentes nátrium-szulfáton keresztül rotációs bepárlókészülékhez csatlakoztatható 250 ml-es lombikba szűrjük. tölcsért a kivonóelegy újabb 10 ml-ével mossuk, és az elegyet megszűrjük; a szerves fázisokat egyesítjük, majd csökkentett nyomáson (víz-légszivattyú), 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten ledesztilláljuk. teljes elpárologtatást követően a maradék fölé R nitrogént rétegzünk. z oldószert 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, lassú R nitrogénárammal is elpárologtathatjuk. maradékot R 2-propanolban oldjuk, az oldatot 25 ml-es mérőlombikba visszük át és R 2-propanollal jelig töltjük. Enyhe melegítés pl. ultrahangos vízfürdőben szükséges lehet. ( fehér maradék nagy hányada koleszterin, amely a csukamájolaj el nem szappanosítható részének mintegy 50%-át teszi ki.) Összehasonlító oldat (a). CRS retinol-acetátból R1 2-propanollal olyan oldatot készítünk, amely milliliterenként kb. 1000 NE all-transz-retinolt tartalmaz. z a) összehasonlító oldat pontos koncentrációját ultraibolya abszorpciós spektrofotometriás módszerrel határozzuk meg (2.2.25). z a) összehasonlító oldatot R1 2-propanollal olyan mértékben hígítjuk, hogy feltételezett
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-8 koncentrációja 1015 NE/ml legyen. 326 nm-en, 1 cm-es küvettában, R1 2- propanol kompenzációs folyadékkal szemben megmérjük az oldat abszorbanciáját. z a) összehasonlító oldat NE/ml-ben kifejezett -vitamin-tartalmát a következő a CRS retinol-acetát megadott tartalmát figyelembe vevő képlet felhasználásával számítjuk: ahol 326 1900 V2 100 V 326 = a 326 nm-en mért abszorbancia, V 1 = a felhasznált a) összehasonlító oldat térfogata, V 2 = a hígított oldat térfogata, 1900 = faktor a CRS retinol-acetát fajlagos abszorpciós koefficiensének Nemzetközi Egységekre való átszámításához. Összehasonlító oldat (b). vizsgálati oldatnál előírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a vizsgálandó anyag helyett 2,00 ml a) összehasonlító oldatot használunk. b) összehasonlító oldat pontos koncentrációját ultraibolya abszorpciós spektrofotometriás módszerrel határozzuk meg (2.2.25). b) összehasonlító oldatot R1 2-propanollal olyan mértékben hígítjuk, hogy feltételezett alltransz-retinol koncentrációja 1015 NE/ml legyen. 325 nm-en, 1 cm-es küvettában, R1 2-propanol kompenzációs folyadékkal szemben megmérjük az oldat abszorbanciáját. b) összehasonlító oldat NE/ml-ben kifejezett all-transz-retinol-tartalmát a következő képlet felhasználásával számítjuk ki: ahol 1 1821V 3 325, 100V4 325 = a 325 nm-en mért abszorbancia, V 3 = a hígított oldat térfogata, V 4 = a felhasznált b) összehasonlító oldat térfogata, 1821 = faktor az all-transz-retinol fajlagos abszorpciós koefficiensének Nemzetközi Egységre való átszámításához. Oszlop: méretei: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm,
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-9 állófázis: R kromatográfiás célra szánt oktadecilszililezett szilikagél (5-10 µm). Mozgófázis: R víz R metanol (3+97 V/V). Áramlási sebesség: 1 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 325 nm-en. Injektálás: 10 µl; a vizsgálati oldatot is és a b) összehasonlító oldatot is háromszor injektáljuk. Retenciós idő: all-transz-retinol 5 1 perc. Rendszeralkalmasság: a vizsgálati oldat kromatogramján jelenjen meg a b) összehasonlító oldat kromatogramján az all-transz-retinol csúcsának megfelelő csúcs, a vizsgálati oldat esetében a két párhuzamosra kapott eredmény legfeljebb 5%-kal térhet el egymástól, direkt abszorpciós spektrofotometriás módszerrel mérve, a b) összehasonlító oldat all-transz-retinol-tartalmának visszanyerése legalább 95%. z -vitamin-tartalmat a következő képlet felhasználásával számítjuk ki: ahol 1 C V 1 = az all-transz-retinol csúcsterülete a vizsgálati oldat kromatogramján, 2 = az all-transz-retinol csúcsterülete a b) összehasonlító oldat kromatogramján, C = a CRS retinol-acetát koncentrációja az a) összehasonlító oldatban, elszappanosítás előtt meghatározva, NE/ml-ben (= 1000 NE/ml), V = a felhasznált a) összehasonlító oldat térfogata (2,00 ml), m = a vizsgálandó anyag tömege a vizsgálati oldatban (2,00 g). D 3 -vitamin. Folyadékkromatográfia (2.2.29). tartalmi meghatározást a lehető leggyorsabban végezzük, elkerülve a bomlást előidéző fény és levegő behatását. Belső standard oldat. 0,50 mg CRS ergokalciferolt 100 ml R etanolban oldunk. Vizsgálati oldat (a). Gömblombikba mért 4,00 g anyaghoz R aszkorbinsav frissen készített 100 g/l töménységű oldatának 5 ml-ét és R kálium-hidroxid frissen készített 800 g/l töménységű oldatának 10 ml-ét, valamint R etanol 100 ml-ét adjuk. folyadékot, visszafolyóhűtő alkalmazásával, 30 percig vízfürdőn 2 1 m
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-10 forraljuk, majd R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának 100 ml-ével elegyítjük és szobahőmérsékletűre hűtjük. z oldatot 500 ml-es választótölcsérbe visszük, és a gömblombikot R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának kb. 75 ml-ével, majd R1 petroléter és R éter egyenlő térfogatarányú elegyének 150 ml-ével átöblítjük. 1 percig tartó rázást követően, a rétegek teljes szétválása után, az alsó fázist elvetjük. felső fázist előbb R kálium-hidroxid R etanol 10 %V/V-os oldatával készült, 30 g/l töménységű oldatának 50 ml-ével, majd R nátrium-klorid 10 g/l töménységű oldatának 350 ml-ével mossuk. felső fázist gyors szűrőpapírra rétegzett 5 g R vízmentes nátrium-szulfáton át rotációs bepárlókészülékhez csatlakoztatható 250 ml-es lombikba szűrjük. tölcsért a kivonóelegy újabb 10 ml-ével mossuk. szerves fázisokat ezután szűrjük és egyesítjük, majd csökkentett nyomáson (víz-légszivattyú), 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten ledesztilláljuk. teljes elpárologtatást követően a maradék fölé R nitrogént rétegezünk. z oldószert 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, lassú R nitrogén árammal is elpárologtathatjuk. maradékot a Tisztítás részben leírt mozgófázis 1,5 ml-ében oldjuk. Enyhe melegítés pl. ultrahangos vízfürdőben szükséges lehet. ( fehér maradék nagy hányada koleszterin, amely a csukamájolaj el nem szappanosítható részének mintegy 50 %m/m-át teszi ki.) Vizsgálati oldat (b). Két párhuzamos mérést végzünk. 4,00 g anyaghoz 2,0 ml belső standard oldatot adunk és a továbbiakban az a) vizsgálati oldatra leírtak szerint járunk el. Összehasonlító oldat (a). 0,50 mg CRS kolekalciferolt 100,0 ml R etanolban oldunk. Összehasonlító oldat (b). Egy gömblombikba 2,0 ml a) összehasonlító oldatot és 2,0 ml belső standard oldatot pipettázunk, és a továbbiakban az a) vizsgálati oldatra leírtak szerint járunk el. TISZTÍTÁS Oszlop: méretei: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm, állófázis: R kromatográfiás célra szánt cianopropilszililezett szilikagél (filmvastagság 10 µm). Mozgófázis: R izopentil-alkohol-r hexán (1,6+98,4 V/V). Áramlási sebesség: 1,1 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 265 nm-en. b) összehasonlító oldat 350 µl-ét injektáljuk. z eluátumot olyan időszakaszban, amely a kolekalciferol retenciós idejét megelőző 2 perctől a retenciós időt követő 2 percig tart, olyan csiszolt dugós kémcsőbe gyűjtjük, amely R butil-hidroxitoluol R hexánnal készült 1 g/l töménységű oldatának 1 ml-ét tartalmazza. műveletet elvégezzük az a) és a b) vizsgálati oldattal is. b) összehasonlító oldatból, valamint az a) és a b) vizsgálati oldatból nyert
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-11 eluátumokat, külön-külön, 30 C-ot meg nem haladó hőmérsékleten, enyhe R nitrogén áramban, szárazra párologtatjuk. z egyes maradékokat 1,51,5 ml R acetonitrilben oldjuk. MEGHTÁROZÁS Oszlop: méretei: l = 0,15 m, Ø = 4,6 mm, állófázis: R kromatográfiás célra szánt oktadecilszililezett szilikagél (filmvastagság 5 µm). Mozgófázis: R tömény foszforsav R acetonitril 96 %V/V-os oldata (0,2+99,8 V/V). Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 265 nm-en. Injektálás: a Tisztítás részben előállított három oldat mindegyikéből kétszer, 200 l-t meg nem haladó mennyiséget injektálunk. Rendszeralkalmasság: csúcsfelbontás: legalább 1,4, a b) összehasonlító oldat kromatogramján az ergokalciferol és a kolekalciferol között, a b) vizsgálati oldat esetében a két párhuzamosra kapott eredmény legfeljebb 5%-kal térhet el egymástól. NE/g-ban kifejezett D 3 -vitamin-tartalmat a CRS kolekalciferol megadott tartalmát figyelembe véve a következő képlet felhasználásával számítjuk: ahol m V 2 3 2 2 6 5 1 1 4 m V 2 1 m 1 = a minta tömege a b) vizsgálati oldatban, grammban, m 2 = a CRS kolekalciferolnak az a) összehasonlító oldat készítésére felhasznált össztömege, mikrogrammban (500 µg), 1 = a kolekalciferol csúcs területe (vagy magassága) az a) vizsgálati oldat kromatogramján, 2 = a kolekalciferol csúcs területe (vagy magassága) a b) vizsgálati oldat kromatogramján, 3 = az ergokalciferol csúcs területe (vagy magassága) a b) összehasonlító oldat kromatogramján, 4 = az ergokalciferol csúcs területe (vagy magassága) a b) vizsgálati oldat kromatogramján, 40
Iecoris aselli oleum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-12 5 = az olyan lehetséges csúcs területe (vagy magassága) az a) vizsgálati oldat kromatogramján, amelynek retenciós ideje az ergokalciferoléval megegyezik és a b) vizsgálati oldatban az ergokalciferollal együtt eluálódik, 6 = a kolekalciferol csúcs területe (vagy magassága) a b) összehasonlító oldat kromatogramján, V 1 = az a) összehasonlító oldat össztérfogata (100 ml), V 2 = a b) összehasonlító oldat készítéséhez felhasznált a) összehasonlító oldat térfogata (2,0 ml). ELTRTÁS Színültig töltött, légmentesen záró tartályban, fénytől védve; ha az anyag antioxidáns adalékot nem tartalmaz, inert gáz alatt kell tárolni. felnyitott tartály tartalmát a lehető leggyorsabban fel kell használni. z azonnal fel nem használt anyagot inert gáz alkalmazásával védjük. FELIRT feliraton fel kell tüntetni: az -vitamin-tartalmat, Nemzetközi Egység/grammban kifejezve, a D 3 -vitamin-tartalmat, Nemzetközi Egység/grammban kifejezve.