Ciclosporinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.0-1 CICLOSPORINUM 01/2005:0994 javított Ciklosporin C 62 H 111 N 11 O 12 M r 1203 DEFINÍCIÓ A ciklosporin szárított anyagra vonatkoztatott ciklo[[(2s,3r,4r,6e)-3-hidroxi-4- metil-2-(metilamino)okt-6-enoil]-l-2-aminobutanoil-n-metilglicil-n-metil-l- leucil-l-valil-n-metil-l-leucil-l-alanil-d-alanil-n-metil-l-leucil-n-metil-l-leucil- N-metil-L-valil]-tartalma 98,5 101,5 %. A ciklosporin a Beauveria nivea (Tolypocladium inflatum Gams) által termelt anyag, de más úton is előállítható. SAJÁTSÁGOK Fehér vagy csaknem fehér por. Vízben gyakorlatilag nem oldódik; etanolban és diklórmetánban bőségesen oldódik. AZONOSÍTÁS A. Infravörös abszorpciós spektrofotometriás vizsgálatot végzünk (2.2.24). Az anyag spektrumát a CRS ciklosporinéval hasonlítjuk össze.
Ciclosporinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.0-2 B. A Tartalmi meghatározás során nyert kromatogramokat értékeljük. A vizsgálati oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs retenciós ideje egyezzék meg az a) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs retenciós idejével. VIZSGÁLATOK Az oldat külleme. 1,5 g anyagot R etanollal 15 ml-re oldunk. Az oldat tiszta legyen (2.2.1). Színe nem lehet erősebb, mint az S 5, BS 5 vagy a P 7 színmértékoldaté (2.2.2, II. módszer). Fajlagos optikai forgatóképesség (2.2.7): -185 és -193 között. A vizsgálathoz 0,125 g anyagot R metanollal 25,0 ml-re oldunk, és az eredményt a szárított anyagra vonatkoztatjuk. Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfiás vizsgálatot végzünk (2.2.29) a Tartalmi meghatározás pontban leírtak szerint. A vizsgálati oldatból és a b) összehasonlító oldatból külön-külön injektálunk. A kromatografálást a főcsúcs retenciós idejének 1,7-szereséig folytatjuk. A vizsgálati oldat kromatogramján: a főcsúcs kivételével egy csúcs területe sem lehet nagyobb, mint a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének 0,7-szerese (0,7 %); a főcsúcs kivételével a csúcsterületek összege nem lehet nagyobb, mint a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének 1,5-szerese (1,5 %). Az oldószernek megfelelő csúcsokat, és azokat a csúcsokat, melyek területe kisebb, mint a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének a 0,05-szorosa, nem vesszük figyelembe. Nehézfémek (2.4.8/C): legfeljebb 20 ppm. A Szárítási veszteség vizsgálatban nyert maradékot vizsgáljuk. Az összehasonlító oldatot 2 ml R ólom mértékoldattal (10 ppm Pb) készítjük. Szárítási veszteség (2.2.32): legfeljebb 2,0 %. 1,000 g anyagot 60 C-on, 15 Pa-t meg nem haladó nyomáson, 3 órán keresztül szárítunk. Bakteriális endotoxinok (2.6.14): kevesebb, mint 0,84 NE/mg. A parenterális gyógyszerkészítmények előállítására szánt anyag abban az esetben, ha a készítmény előállítása során nem alkalmaznak a bakteriális endotoxinok eltávolítására alkalmas eljárást feleljen meg e vizsgálat követelményének is. A
Ciclosporinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.0-3 vizsgálathoz 50 mg vizsgálandó anyagot 280 mg R alkohol és 650 mg R polietoxilezett ricinusolaj elegyében oldunk, majd az oldatot BET-vízzel a szükséges töménységűre hígítjuk. TARTALMI MEGHATÁROZÁS Folyadékkromatográfiás vizsgálatot végzünk (2.2.29). Vizsgálati oldat. 30,0 mg vizsgálandó anyagot egyenlő térfogatarányban R acetonitrilt és R vizet tartalmazó eleggyel 25,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (a). 30,0 mg CRS ciklosporint egyenlő térfogatarányban R acetonitrilt és R vizet tartalmazó eleggyel 25,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (b). Az a) összehasonlító oldat 2,0 ml-ét egyenlő térfogatarányban R acetonitrilt és R vizet tartalmazó eleggyel 200,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). CRS rendszeralkalmassági vizsgálatra szánt ciklosporint tartalmazó injekciós üveg tartalmát a mozgófázis 5,0 ml-ében oldjuk. A kromatográfiás vizsgálat javasolt körülményei: 0,25 m hosszúságú, 4 mm belső átmérőjű, R kromatográfiás célra szánt oktadecilszililezett szilikagéllel (3 5 µm) töltött rozsdamentes acél oszlop; az oszlop az injektálás helyéhez egy kb. 1 m hosszú és 0,25 mm belső átmérőjű acél kapillárissal csatlakozik, a mozgófázis 1 térfogatrész R tömény foszforsav, 50 térfogatrész R terc-butilmetil-éter, 430 térfogatrész R acetonitril és 520 térfogatrész R víz elegye, az áramlási sebesség kb. 1,5 ml/perc, detektor: 210 nm-en regisztráló spektrofotométer, 20 µl-es hurok-injektor. Az oszlop és az acél kapilláris hőmérsékletét 80 C-on tartjuk.
Ciclosporinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.0-4 A c) összehasonlító oldatból injektálunk. A vizsgálat csak abban az esetben értékelhető, ha a hegy völgy arány legalább 1,4, ahol H p = a ciklosporin U csúcs alapvonaltól mért magassága, és H v = e csúcsot a ciklosporin csúcsától elválasztó görbeszakasz minimumának alapvonaltól mért magassága. Szükség esetén a tercbutil-metil-éter:acetonitril arányt módosítjuk. A vizsgálat csak abban az esetben értékelhető, ha a főcsúcs retenciós ideje 25 és 30 perc közé esik. Szükség esetén az acetonitril:víz arányt módosítjuk. Az a) összehasonlító oldatból hatszor injektálunk. A vizsgálat csak abban az esetben értékelhető, ha a főcsúcs területének relatív szórása legfeljebb 1,0 %. A vizsgálati oldatból és az a) összehasonlító oldatból felváltva injektálunk. Kiszámítjuk a ciklosporin százalékos mennyiségét. ELTARTÁS Légmentesen záró tartályban, fénytől védve. Ha az anyag steril, légmentesen záró, garanciazáras, steril tartályban. FELIRAT A feliraton adott esetben fel kell tüntetni, hogy az anyag bakteriális endotoxinoktól mentes. SZENNYEZŐK A. különböző ciklosporinok [eltérések a ciklosporintól (R = CH 3 : ciklosporin A)]; ciklosporin B [7-L-Ala]; ciklosporin C [7-L-Thr]; ciklosporin D [7-L- Val]; ciklosporin E [5-L-Val]; ciklosporin G [7-(L-2-aminopentanoil)];
Ciclosporinum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.0-5 ciklosporin H [5-D-MeVal]; ciklosporin L [R = H]; ciklosporin T [4-L-Leu]; ciklosporin U [11-L-Leu]; ciklosporin V [1-L-Abu], B. [6-[(2S,3R,4R)-3-hidroxi-4-metil-2-(metilamino)oktánsav]]ciklosporin A, C. izociklosporin A.