A Flowcytometriás keresztpróba jelentısége élıdonoros veseátültet ltetést megelızıen. en. Sinkovichné Bak Erzsébet, Schmidt Lászlóné
Mikor végezhetv gezhetı el a veseátültet ltetés? Veseátültetés s akkor végezhetv gezhetı, ha a donor és s a recipiens között az ún. HLA-keresztpr keresztpróba negatív, azaz a donor HLA- antigénjeivel njeivel szemben specifikus antitestek nem mutathatók k ki a recipiens szérum mintájában. Az Európai Immungenetikai Társaság g elıírása (EFI standard) szerint cadaver veseátültet ltetést megelızıen en kötelezk telezı a CDC technikával kivitelezett keresztpróba. Élıdonoros átültetés s elıtt szüks kséges egy érzékenyebb technikával kivitelezett keresztpróba is, ugyanis az alacsonyabb titerő citotoxikus ellenanyag nem mutatható ki biztonságosan a CDC módszerrel. m Érzékenyebb módszer m a flowcytometriás keresztpróba.
Röviden a Flowcytometriáról A flowcytometria különálló sejtek rendkivül gyors, multiparaméteres teres vizsgálat latára alkalmas laboratóriumi riumi eljárás. Felhasználásával lehetıvé válik sejtpopuláci ciók k elkülönítése és s szétv tválasztása sa az immunfenotipus vagy a funkcionális állapot alapján. Nagyon fontos a minta elıkész szítés, s, a sejt szuszpenzió elıáll llítása. A szövetek szétv tválasztásánál l törekedni t kell az egyes sejtek életképességének megmaradására, ra, mert a vizsgálat elvégz gzésének, értékelhetıségének feltétele tele az ép p sejtek jelenléte.
A flowcytométer ter mőködési elve Az analizálni lni kívánt k sejtek morfológiai tulajdonságaik alapján n törtt rténı megkülönb nböztetésére, funkcionális állapotuk jellemzésére fluoreszkáló festékkel törtt rténı jelöléseket alkalmaznak. A jelölt lt sejteket lézer l sugár r világítja meg. A készk szülék k a lézer l indukálta optikai jeleket detektálja, és s dolgozza fel.
Mi a keresztpróba? Laboratóriumunkban riumunkban 1 éve kezdtük k el alkalmazni a flowcytometriás keresztpróbát t a CDC ( complement dependens citotoxicitás) ) keresztpróbával párhuzamosan, p az élıdonoros átültetések elıtt. A keresztpróba olyan eljárás, amikor a beteg savójához adjuk a donor sejtjét, t, inkubáljuk szobahın 30 percig, majd complement hozzá adása után n ismét inkubáljuk 1 óráig. Ezután n festjük, és s végül v l formalinnal leáll llítjuk a festési si reakciót t majd értékeljük k a keresztpróbát. t.
Három eset ismertetése se CDC technikával végzett v keresztpróba negatív v lett, szemben a flowcytometriás keresztpróba pozitív v eredményt adott. Két t esetben a donor a férj f volt. Az alloimmunizáci ciót a terhességek válthattv lthatták k ki. Az ELISA technikával végzett v ellenanyagszőrés s során igazolódott, hogy a betegek szérummint rummintájában, a férj f idegen HLA-antig antigénjével szemben mutatható ki az antitest.
Két t esetben pozitív v keresztpróba
Harmadik eset bemutatása A harmadik esetben potenciális donorként nt a testvér r szerepelt. Az ellenanyagszőrés s olyan specificitást st mutatott (anti-hla HLA-A2), A2), ami a testvér r idegen HLA-antig antigénjenje ellen irányult.
A harmadik eset diagrammja
Az eredmények értékelése A donor sejt+beteg szérum csövekben mért m Geo-Mean értékeket osszuk el a negatív v kontrollban mért m Geo-Mean értékekkel. Külön K n a T és s B sejt populáci ciókban. Ha a hányados h nagyobb mint 1.5, a keresztpróba POZITÍV. Ez azt jelenti, hogy a vizsgált keresztreakcióban az anti- humán IgG jelölıdés s több t mint másfm sfélszerese a negatív kontrollénak. nak. Gyenge aspecifikus kötıdés s szinte minden mintában láthatl tható (jobb alsó kvadráns) ez azonban nem zavarja a T ill. B sejteken megjelenı pozitivitás értékelését.
Egy különleges k eset Kétféle keresztpróba CDC-módszerrel erısen pozitív, flowcytométerrel terrel negatív Egy hónap h múlva m ismételt keresztpróba, csak CDC- módszerrel. Az eredmény negatív
A flowcytometria jelentısége Csak a humán n sejteket érzékeli a mérés m során, más m s eredető anyagok nem tudják megzavarni a pontos mérést. m A bemutatott esetek azt igazolják, hogy szüks kség g van olyan érzékeny módszer m alkalmazására, amely az alacsony titerő,, de a beültetett szervre káros k citotoxikus ellenanyagot is biztonságosan kimutatja.
Köszönöm m megtisztelı figyelmüket!