AMPHOTERICINUM B. Amfotericin B

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 1 AMPHOTERICINUM B Amfotericin B 01/2009:1292 javított 6.6 C 47 H 73 NO 17 M r 924 [1397-89-3] DEFINÍCIÓ Streptomyces nodosus meghatározott törzseinek tenyészeteiből nyert vagy más módon előállított, gombaellenes poliénszármazékok keveréke. Főleg amfotericin B-ből áll, amely (1R,3S,5R,6R,9R,11R,15S,16R,17R,18S,19E,21E,23E,25E,27E,29E,31E,33R,3 5S,36R,37S)-33-[(3-amino-3,6-didezoxi-β-D-mannopiranozil)oxi]- 1,3,5,6,9,11,17,37-oktahidroxi-15,16,18-trimetil-13-oxo-14,39- dioxabiciklo[33.3.1]nonatriakonta-19,21,23,25,27,29,31-heptaén-36- karbonsav. Tartalom: legalább 750 NE/mg (szárított anyagra). SAJÁTSÁGOK

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 2 Küllem: sárga vagy narancssárga színű, nedvszívó por. Oldékonyság: vízben gyakorlatilag nem oldódik; dimetil-szulfoxidban és propilénglikolban oldódik; dimetilformamidban kevéssé oldódik; metanolban alig oldódik; etanolban (96%) gyakorlatilag nem oldódik. Híg oldatai fényre érzékenyek. AZONOSÍTÁS Első azonosítás: B, D. Második azonosítás: A, C. A. Ultraibolya és látható abszorpciós spektrofotometria (2.2.25). Vizsgálati oldat. 25 mg anyagot 5 ml R dimetil-szulfoxidban oldunk, és az oldatot R metanollal 50 ml-re hígítjuk. Az oldat 2 ml-ét R metanollal 200 ml-re hígítjuk. Hullámhossztartomány: 300 450 nm. Abszorpciós maximumok: 362, 381 és 405 nm-en. Abszorbancia-arányok: A 362 /A 381 = 0,57 0,61; A 381 /A 405 = 0,87 0,93. B. Infravörös abszorpciós spektrofotometria (2.2.24). Összehasonlítás:CRS amfotericin B-vel. Amennyiben a kapott spektrumok eltérőek, a vizsgálandó anyagot és a referenciaanyagot 1 órán át 60 C-on 0,7 kpa-t meg nem haladó nyomáson szárítjuk, majd új spektrumokat veszünk fel. C. Az anyag R dimetil-szulfoxiddal készült, 0,5 g/l töménységű oldatának 1 ml-e alá kerülve a két folyadék keveredését 5 ml R tömény foszforsavat rétegezünk. A két réteg érintkezésénél azonnal kék gyűrű keletkezik. A folyadékokat összekeverve intenzív kék színeződés észlelhető. Ha az elegyet 15 ml R vízzel összerázzuk, az oldat színe halvány sárgára változik. D. A "Rokon vegyületek" vizsgálat során nyert kromatogramokat értékeljük. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramjának főcsúcsa 383 nm-en detektálva retenciós idejét tekintve egyezzék meg az a) összehasonlító oldat kromatogramjának főcsúcsával. VIZSGÁLATOK

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 3 Rokon vegyületek. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Az oldatokat fénytől védve tartjuk, és a készítéstől számított 24 órán belül felhasználjuk; kivételt képez a c) összehasonlító oldat, amit készítése után azonnal injektálni kell. Oldószerelegy. R ammónium-acetát 10 g/l töménységű oldata R N- metilpirrolidon R metanol (1+1+2 V/V). Vizsgálati oldat. 20,0 mg vizsgálandó anyagot 15 ml R N-metilpirrolidonban oldunk, és az oldatot az oldószereleggyel 2 órán belül 50,0 ml-re hígítjuk. Az utóbbi oldat 5,0 ml-ét az oldószereleggyel 25,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (a). 20,0 mg CRS amfotericin B-t 15 ml R N- metilpirrolidonban oldunk, és az oldatot az oldószereleggyel 2 órán belül 50,0 ml-re hígítjuk. Az utóbbi oldat 5,0 ml-ét az oldószereleggyel 25,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (b). 1,0 ml a) összehasonlító oldatot az oldószereleggyel 100,0 ml-re hígítunk. Összehasonlító oldat (c). 20,0 mg CRS nisztatint 15 ml R N-metilpirrolidonban oldunk, és az oldatot az oldószereleggyel 2 órán belül 50,0 ml-re hígítjuk. Ezen oldat 5,0 ml-ét az a) összehasonlító oldattal 25,0 ml-re hígítjuk. Az utóbbi oldat 2,0 ml-ét az oldószereleggyel 100,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (d). A B- és a C-szennyező készítése céljából 10 mg vizsgálandó anyagot 5 ml R N-metilpirrolidonban oldunk, és az oldathoz 2 órán belül R metanol R vízmentes etanol (1+4 V/V) elegyének 35 ml-ét elegyítjük. Az elegyet 0,10 ml R hígított sósav hozzáadása után összekeverjük, majd 2,5 órán át 25 C-on tartjuk; ezután R ammónium-acetát 10 g/l töménységű oldatának 10 ml-ével elegyítjük. Összehasonlító oldat (e). 4 mg CRS csúcsazonosításra szánt amfotericin B-t (amely A- és B-szennyezőt tartalmaz) 5 ml R N-metilpirrolidonban oldunk, és az oldatot az oldószereleggyel 2 órán belül 50 ml-re hígítjuk. Üres oldat. Az oldószerelegy. Oszlop: méretei: l = 0,15 m, = 4,6 mm; állófázis: R kromatográfiás célra szánt, dezaktivált, utókezelt, oktadecilszililezett szilikagél (3 μm); hőmérséklet: 20 C. Mozgófázis: A-mozgófázis: R metanol (1 térfogatrész), R acetonitril (3 térfogatrész) és R citromsav-monohidrát 4,2 g/l töménységű, előzetesen R tömény ammónia oldattal ph 4,7-re beállított oldatának (6 térfogatrész) elegye;

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 4 B-mozgófázis: R metanol (12 térfogatrész), R citromsav-monohidrát 4,2 g/l töménységű, előzetesen R tömény ammónia oldattal ph 3,9-re beállított oldatának (20 térfogatrész) és R acetonitril (68 térfogatrész) elegye; Idő (perc) A-mozgófázis (%V/V) B-mozgófázis (%V/V) 0 3 100 0 3 23 100 70 0 30 23 33 70 0 30 100 33 40 0 100 Áramlási sebesség: 0,8 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel: 303 nm-en: tetraének detektálása; 383 nm-en: heptaaének detektálása. Injektálás: 20 μl; vizsgálati oldat, valamint b), c), d) és e) összehasonlító oldat. Szennyezők azonosítása: az A- és a B-szennyező azonosításához a CRS csúcsazonosításra szánt amfotericin B-hez mellékelt kromatogramot és az e) összehasonlító oldat kromatogramját használjuk. Relatív retenciók az amfotericin B-re (retenciós ideje kb. 16 perc) vonatkoztatva: B-szennyező kb. 0,75; A-szennyező kb. 0,8; nisztatin kb. 0,85. Rendszeralkalmasság 383 nm-en: d) összehasonlító oldat: csúcsfelbontás: legalább 1,5, a kb. 0,7 relatív retencióval rendelkező, két csúcs között. Követelmények: A-szennyező 303 nm-en: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének 2,5- szerese (5,0%); ha az anyagot parenterális gyógyszerkészítmények előállítására szánják: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területe (2,0%); egyéb szennyezők 303 nm-en: csúcsterületük egyenként nem lehet nagyobb, mint a c) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének fele (1,0%); B-szennyező 383 nm-en: csúcsterülete nem lehet nagyobb, mint a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének négyszerese (4,0%); egyéb szennyezők 383 nm-en: csúcsterületük egyenként nem lehet nagyobb, mint a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének kétszerese (2,0%); összes szennyező 303 és 383 nm-en: legfeljebb 15,0%;

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 5 elhanyagolási határ 303 nm-en: a c) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének 0,05-szorosa (0,1%); elhanyagolási határ 383 nm-en: a b) összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs területének tizedrésze (0,1%). Szárítási veszteség (2.2.32): legfeljebb 5,0%. Az anyag 1,000 g-ját szárítószekrényben 60 C-on 0,7 kpa-t meg nem haladó nyomáson szárítjuk. Szulfáthamu (2.4.14): legfeljebb 3,0%. Az anyag 1,0 g-ját vizsgáljuk. Parenterális gyógyszerkészítmények előállítására szánt anyag esetében legfeljebb 0,5%. Bakteriális endotoxinok (2.6.14): kevesebb, mint 1,0 NE/mg. A parenterális gyógyszerkészítmények előállítására szánt anyag abban az esetben, ha a készítmény előállítása során nem alkalmaznak a bakteriális endotoxinok eltávolítására megfelelő eljárást feleljen meg e vizsgálat követelményének is. TARTALMI MEGHATÁROZÁS A meghatározás során az oldatokat fénytől védjük. Az anyag 25,0 mg-ját R dimetil-szulfoxiddal, rázogatás közben, 25,0 ml-re oldjuk. Ezen alapoldatot, állandó keverés közben, R dimetil-szulfoxiddal úgy hígítjuk, hogy megfelelő koncentrációjú oldatokat kapjunk (a következő koncentrációk alkalmasnak bizonyultak: 44,4; 66,7 és 100 NE/ml). A végső oldatok elkészítéséhez az oldatokat 0,2 M foszfát tompítóoldattal (ph 10,5) 1:20 arányban hígítjuk, hogy ilymódon valamennyi oldat dimetil-szulfoxidra nézve 5 %V/V-os legyen. Az összehasonlító oldatot és a vizsgálati oldatokat egyidejűleg készítjük. A meghatározást az Antibiotikumok mikrobiológiai értékmeghatározása (2.7.2) fejezetben leírtak szerint végezzük. ELTARTÁS Légmentesen záró tartályban, fénytől védve, 2 8 C-on. Ha az anyag steril, akkor steril, garanciazáras tartályban tartjuk. FELIRAT A feliraton adott esetben fel kell tüntetni, hogy az anyag felhasználható parenterális gyógyszerkészítmények előállítására. SZENNYEZŐK Egyedi határértékhez kötött (specifikált) szennyezők: A, B.

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 6 Egyéb kimutatható szennyezők (a következő szennyezők a cikkely valamelyik vizsgálatával kimutathatók, ha bizonyos határon felüli mennyiségben vannak jelen. Határértéküket az egyéb/egyedi határértékhez nem kötött (nemspecifikált) szennyezőkre vonatkozó általános követelmény és/vagy a Gyógyszeranyagok (2034)) című általános cikkely előírásai határozzák meg. Ezért ezeket a szennyezőket nem szükséges a megfelelés bizonyítása céljából azonosítani. Lásd még a Gyógyszeranyagok szennyezésvizsgálata (5.10) című általános fejezetet): C. A. amfotericin A (28,29-dihidro-amfotericin B),

Amphotericinum B Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.6. - 7 B. amfotericin X1 (13-O-metil-amfotericin B), C. amfotericin X2 (13-O-etil-amfotericin B).