04/2016:2777 PREGABALINUM Pregabalin C8H17NO2 Mr 159,2 [148553-50-8] DEFINÍCIÓ (3S)-3-(Aminometil)-5-metilhexánsav. Tartalom: 98,0 102,0% (vízmentes anyagra). SAJÁTSÁGOK Küllem: fehér vagy csaknem fehér por. Oldékonyság: vízben mérsékelten oldódik; acetonitrilben és metanolban alig oldódik; heptánban gyakorlatilag nem oldódik. AZONOSÍTÁS A. Infravörös abszorpciós spektrofotometria (2.2.24). Összehasonlítás: CRS pregabalinnal. B. Az Enantiomer tisztaság vizsgálat során kapott kromatogramokat értékeljük. Értékelés: A vizsgálati oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs retenciós ideje egyezzék meg az összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő főcsúcs retenciós idejével. VIZSGÁLATOK Enantiomer tisztaság. Folyadékkromatográfia (2.2.29): a normalizációs eljárást alkalmazzuk. Vizsgálati oldat. 20 mg vizsgálandó anyagot R vízzel 10,0 ml-re oldunk. Az oldatot a Származékkészítés bekezdés előírásai szerint kezeljük. Összehasonlító oldat. 2 mg CRS pregabalin-b-szennyezőt R vízzel 20,0 ml-re oldunk. Az oldat 1,0 mlét R vízzel 10,0 ml-re hígítjuk. 20 mg CRS pregabalinhoz 1,0 ml-t adunk ebből az oldatból, és a keveréket R vízzel 10,0 ml-re hígítjuk. Az így kapott oldatot a Származékkészítés bekezdés előírásai szerint kezeljük. Származékképzés. Az oldat 500 µl-ét abba az üvegcsébe mérjük, melyben lejátszódik a reakció. R 1- fluor-2,4-dinitrofenil-5-l-alaninamid R acetonitrillel készült 5 g/l-es oldatából 500 µl-t, majd R nátrium-hidrogén-karbonát 84 g/l-es oldatából 50 µl-t adunk hozzá. Az üvegcsét lezárjuk, majd a származékképzést az üvegcsét fűthető mágnesen keverőre helyezve 1 órán át 40 C-on végezzük. A
reakció leállítására R tömény sósav 103 g/l-es oldatából 50 µl-t adunk az oldathoz. Gondos elegyítés után az oldat 200 µl-éhez 800 µl mozgófázist adunk. állófázis: R kromatográfiás célra szánt, dezaktivált, utókezelt, oktadecilszililezett szilikagél (5 µm); Mozgófázis: R acetonitril R trietil-amin R tömény foszforsavval ph 3,0-ra beállított, 1% V/V-os oldata (38+62 V/V). Áramlási sebesség. 2,0 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 340 nm-en. Injektálás: 20 µl. Kromatografálási idő: a pregabalin-származék retenciós idejének 2,5-szerese. Relatív retenció a pregabalin-származékra (retenciós ideje kb. 10 perc) vonatkoztatva: a B-szennyező származéka: kb. 1,3. Rendszeralkalmasság: összehasonlító oldat: csúcsfelbontás: legalább 4,4, a pregabalin-származék és a B-szennyező származéka között. Követelmény: B-szennyező: legfeljebb 0,15%. Rokon vegyületek. A. A pregabalin előtt eluálódó poláros szennyezők. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. 0,100 g vizsgálandó anyagot a mozgófázissal 10,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (a). 0,100 g CRS pregabalint a mozgófázissal 10,0 ml-re oldunk. Összehasonlító oldat (b). A vizsgálati oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Ezen oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 10,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (c). 5 mg R mandulasavat (C-szennyező) a mozgófázissal 100,0 ml-re oldunk. Az oldat 0,5 ml-ét a vizsgálati oldattal 5,0 ml-re hígítjuk. állófázis: R kromatográfiás célra szánt, vizes mozgófázisokkal 100%-ban kompatibilis, utókezelt, oktadecilszililezett szilikagél (5 µm); Mozgófázis: R2 metanol R kálium-dihidrogén-foszfát R tömény ammónia oldattal ph 6,3-ra beállított, 3,40 g/l-es oldata (15+85 V/V). Áramlási sebesség. 1,0 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 210 nm-en. Injektálás: 20 µl; vizsgálati oldat, valamint b) és c) összehasonlító oldat. Kromatografálási idő: a pregabalin retenciós idejének 1,3-szerese.
Relatív retenció a pregabalinra (retenciós ideje kb. 10 perc) vonatkoztatva: C-szennyező: kb. 0,6. Rendszeralkalmasság: c) összehasonlító oldat: csúcsfelbontás: legalább 5,0, a C-szennyező és a pregabalin között. Százalékos mennyiségek kiszámítása: az egyes szennyezők mennyiségét a b) összehasonlító oldat pregabalin- koncentrációjára vonatkoztatjuk. Követelmények: a pregabalin előtt eluálódó, egyesi határértékhez nem kötött (nem specifikált) szennyezők: egyenként legfeljebb 0,10%; jelentési határérték: 0,05%. B. A pregabalin után eluálódó, nem poláros szennyezők. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. 0,100 g vizsgálandó anyagot a mozgófázissal 10,0 ml -re oldunk. Összehasonlító oldat (a). A vizsgálati oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 100,0 ml-re hígítjuk. Ezen oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 10,0 ml-re hígítjuk. Összehasonlító oldat (b). 2,5 mg CRS pregabalin-a-szennyezőt és 2,5 mg CRS pregabalin-dszennyezőt a mozgófázissal 10,0 ml-re oldunk. Az oldat 1,0 ml-ét a mozgófázissal 50,0 ml-re hígítjuk. állófázis: R kromatográfiás célra szánt, 100 %-ban kompatibilis vizes mozgófázisokkal, utókezelt, oktadecilszililezett szilikagél (5 µm); Mozgófázis: R kálium-dihidrogén-foszfát R tömény ammónia oldattal ph 6,3-ra beállított, 3,40 g/les oldata R2 metanol (45+55 V/V). Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 210 nm-en. Injektálás: 20 µl. Kromatografálási idő: a pregabalin retenciós idejének 4-szerese. Szennyezők azonosítása: az A- és a D-szennyező azonosításához a b) összehasonlító oldat kromatogramját használjuk. Relatív retenciók a pregabalinra (retenciós ideje kb. 4 perc) vonatkoztatva: A-szennyező: kb. 2,4; D-szennyező kb. 3,0. Rendszeralkalmasság: b) összehasonlító oldat: csúcsfelbontás: legalább 3,5, az A- és a D-szennyező között. Százalékos mennyiségek kiszámítása: az A- és a D- szennyező mennyiségét a b) összehasonlító oldatban lévő A-, illetve D- szennyező koncentrációjára vonatkoztatjuk;
a többi szennyező mennyiségét az a) összehasonlító oldat pregabalin-koncentrációjára vonatkoztatjuk. Követelmények: A-szennyező: legfeljebb 0,15%; a pregabalin után eluálódó, egyedi határértékhez nem kötött (nem specifikált) szennyezők: egyenként legfeljebb 0,10%; jelentési határérték: 0,05%. Követelmény: összes szennyező az A- és a B-vizsgálatban: legfeljebb 0,5%. Víztartalom (2.5.12): legfeljebb 0,5%. Az anyag 0,130 g-ját vizsgáljuk. Szulfáthamu (2.4.14): legfeljebb 0,1%. 1,0 g anyagot vizsgálunk. TARTALMI MEGHATÁROZÁS Folyadékkromatográfia (2.2.29) a Rokon vegyületek vizsgálat A. pontjában előírtak szerint a következő módosítással. Injektálás: vizsgálati oldat és a) összehasonlító oldat. A százalékos C 8H 17NO 2-tartalmat a CRS pregabalin deklarált tartalmának figyelembevételével számoljuk ki. SZENNYEZŐK Rokon vegyületek, A. pont szerinti vizsgálat: C. Rokon vegyületek, B. pont szerinti vizsgálat: A, D. Egyedi határértékhez kötött (specifikált) szennyezők: A, B. Egyéb kimutatható szennyezők: (a következő szennyezők a cikkely valamelyik vízsgálatával kimutathatók, ha bizonyos határon felüli mennyiségben vannak jelen. Határértéküket az egyéb/egyedi határértékhez nem kötött (nem specifikált) szennyezőkre vonatkozó általános követelmény és/vagy a Gyógyszeranyagok (2034) című általános cikkely előírásai határozzák meg. Ezért ezeket a szennyezőket nem szükséges a megfelelés bizonyítása céljából azonosítani. Lásd még a Gyógyszeranyagok szennyezésvizsgálata (5.10) című általános fejezetet): C, D. A. (4S)-4-(2-metilpropil)pirrolidin-2-on, B. (3R)-3-(aminometil)-5-metilhexánsav (a pregabalin enentiomerje),
és enantiomere C. (2RS)-2-hidroxi-2-fenilecetsav (mandulasav), és enantiomere D. 1-metiletil-[(2RS)-2-hidroxi-2-fenilacetát].