A szteroid receptorok és tirozinkinázok kimutatásának patológiai vonatkozásai. Tímár József Semmelweis Egyetem 2.sz. Patológiai Intézete, Budapest

Átírás

1 A szteroid receptorok és tirozinkinázok kimutatásának patológiai vonatkozásai Tímár József Semmelweis Egyetem 2.sz. Patológiai Intézete, Budapest

2 Tirozinkinázok genetikája emberi daganatokban HER2 mutáció amplifikáció DIC EC-delp95 + gyomorrák + Ovariális rák + Endometriális rák +

3 HER2 expressziója emlőrákban 3+ CB11 Amp HER2/CEP17

4 EGFR2/HER2 jelátviteli pálya (fiziológiás körülmények között) Herceptin

5 HER2 státusz és Herceptin érzékenység Svéd ajánlás közgazdasági elemzés alapján: IHC2+/3+ emlőrákokon költséghatékony elvégezni a FISH-t a Herceptin kezelésre történő szelekció érdekében NSABP,B31 újra-elemzése: A HER2 státusz újra-elemzése sok Her2- beteg bevonására vetett fényt Herceptin RR nem tért el a Her2+ és Her2- (de Herceptin kezelt betegeken) Magyarázatok 1./ chr17 polysomia (alacsony) 2./ HER2 amp heterogenitása (un. minor populáció!!!!)

6 HER2+/ER+ emlőrák ER/PgR expresszió HER2 expresszió percyto MAPK Anti-E terápia Anti-HER2 terápia HER2 expresszió nő ER expresszió nő (ER-.ER+) Következtetés: Antiösztrogén/Herceptin kezelés után progrediált betegek esetében a HER2 és ER/PgR státusz újradefineálása kívánatos volna CK Orsborne, GSK sym, ASCO2007

7 HER2 rezisztencia okai 1./ PTEN szuppresszor gén vesztés (lsd KRAS/EGFR) 2./ p95her2 (nincsen extracelluláris szakasz) 30-50% HERCEPTIN? 3./ HER2-TK mutáció (ritka) Herceptin és esetleges TK gátló rezisztencia HER2 aktivitás markere: pher3 IHC C. Artega, GSK Sym, ASCO2007

8 Az invazív ductalis carcinoma genetikai altípusai Normál emlő-szerű Luminális (A/B) ER+ Bazális típus ER-/PgR-/HER2- Triple negatív DE EGFR+ Her2+ (amplifikált) emlőrák EGFR+

9 Tirozinkinázok genetikája emberi daganatokban EGFR mutáció amplifikáció GBM viii/ec-del + AC-tüdő TKex HNSC EC-del + CRC EC-del + melanóma EC-del +(NM)

10 AKT EGFR(1)

11 Laphámrák EGFR EGFR ampl

12 NSCLC: adenokarcinóma Bronchoalveoláris adenocarcinoma EGFR

13 Receptor L domén Furin-like domén Receptor L domén EGF EGFR Extracelluláris domén EXON18 CTTGTGGAGCCTCTTACACCCAGTGGAGAAGCTCCCAACCAAGCTCTCTTGAGGATCTTG 123bp AAGGAAACTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGGGCTCCGGTGCGTTCGGCACGGTGTAT AAG G719C EXON19 GGACTCTGGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGA 99bp GAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCGAT del EXON20 GAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGC 186bp CTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCACGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTAT GTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCAGTACCTGCTCAACTGGTGTGTGCAGATC GCAAAG EXON21 GGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTA 156bp CTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGT GCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAA L858R L861Q EXON22 GTGCCTATCAAGTGGATGGCATTGGAATCAATTTTACACAGAATCTATACCCACCAGAGT 76bp GATGTCTGGAGCTACG EXON23 GGGTGACTGTTTGGGAGTTGATGACCTTTGGATCCAAGCCATATGACGGAATCCCTGCCA 147bp GCGAGATCTCCTCCATCCTGGAGAAAGGAGAACGCCTCCCTCAGCCACCCATATGTACCA TCGATGTCTACATGATCATGGTCAAGT PRIMER-PÁR1 PRIMER-PÁR2 Transzmembrán régió Intracelluláris domén Katalitikus kináz domén Tirozin foszforilációs hely (Y1068) G719C dele746-a750 del747-t751inss del747-p753inss L858R L861Q 790M e19 e20 e21 STAT3 MAPK AKT

14 AC/BAC outcome treated with Gefitinib/erlotinib Riely, G. J. et al. Clin Cancer Res 2006;12: Copyright 2006 American Association for Cancer Research

15 EGFR aktiváció adenokarcinómában: p1173 preferencia p1173 p1068/1086 negatív

16 EGFR-elleni terápia problémái NSCLC-ben EGFR rezisztencia mutáció 790M K-RAS mutáció C-MET amplifikáció EGFR negativitás (fehérje szinten?)

17 EGFR expresszió vastagbélrák májáttéteiben EGFR: 1+/2+, 30% EGFR: 1+<10% Pozitiv kontroll

18 Anti-EGFR antitestterápia prediktív patológiájának problémái 1% daganatsejtpozitivitás az indikáció immunhisztokémia segítségével EGFR pozitivitás mértéke nem függ össze a klinikai hatékonysággal EGFR gén kópiaszáma jobb korellációt mutat EGFR protein negatív daganatok esetében is hatékony a kezelés

19 A RAS onkogén mutációjának gyakorisága emberi daganatokban Ras típus Daganat % K-RAS Pancreasrák Vastagbélrák Húgyhólyagrák ACLC Prosztatarák >70 >40 20 >30 >10 N-Ras Emlőrák <10 melanóma <30

20

21 Genomikai sajátosságokon alapuló felosztás (Ogino, Goel, AJP2007) CIN: kromoszóma instabilitás, DNS-PLOIDIA MSI: mikroszatellita instabilitás (MSS): DNS repair (MSH2/MLH1) CIMP: CpG sziget metiláció (epigenetika) MSI-low/MSS-CIMP0-CIN+ 40% KRAS/BRAFwt, distalis colon (CRC6) MSS---CIMPlow-----CIN- 35% Ffi, KRAS mutáns (CRC5) MSI-high CIMP-high CIN- 10% nő, proximális, BRAFm, MLH1- MSI-high CIMP-low/0 CIN- 5% (HNPCC-Lynch is) proximális, nyáktermelő, TIL+, KRASm MSI-low/MSS CIMP-high CIN- 5% idős nő, jobb colon, signet-ring, BRAFm MSI-low CIMP-low 5% KRASm, MGMT-

22 KRAS mutáció prediktív szerepe 1. KRAS mutáns daganat kissé rezisztensebb a kemoterápiára 2. KRAS mutáns daganat rezisztens EGFR-TKI terápiára Pao et al. PLOS Med 2005 Gumerlock et al. JCO2005 Han et al. Clin Cancer Res 2006

23 Az EGFR jelátviteli aktivitása kinázmutáció esetében Extracelluláris domén Ligand-kötő domén-1 CRD Ligand-kötő domén-2 CRD plazmamembrán SRC- T845 AP T974 MAPK/ERK-PKC-PLCg---- T992 Intracelluláris domén Tirozin-kináz domén Autofoszforilációs domén T1045-Cbl---- proteoszomális degradáció T1068-Grb2---RAS-MAPK-ERK T1086-Gab1--PI3K-AKT T1101-SRC T1148-SHC---RAS-MAPK/ERK T1173-SHP1--PLCg-PKC-MAPK/ERK

24 EGFR-RAS paradoxon vadegfr vadras amplifikált) CRC, NSCLC, HNSC (EGFR lehet vadegfr mutánsras (EGFR lehet amplifikált) CRC, NSCLC, pancreasrák mutánsegfr vadras (EGFR lehet amplifikált) NSCLC mutánsegfr----mutánsras igen ritka konstelláció

25 Molekuláris genetikai szelekció: adenocarcinoma K-RAS mutáció + - relatív rezisztencia (EGFRwt) génamplifikáció + - (Fokozott érzékenység) EGFR-TKI rez (gyakoriság?) EGFR-790 mutáció rezisztencia rezisztencia EGFR exon19/21 mutáció + - Fokozott érzékenység Nem-e19 mutációk Jelentősége? Tímár et al. LAM,2007

26

27 B-RAF aktiváló mutáció (V600E) emberi daganatokban Cután melanóma 70% Pajzsmirigyrák (pap) 50% Ováriumrák (low grade, serosus) 30% Vastag-végbélrák 5-10% Nincs Hepatocelluláris rák Gyomorrák endometriumrák

28 RAS- BRAF paradoxon K-RAS- B-RAF mutáció kizárja egymást (NSCLC, CRC) N-RAS- B-RAF mutáció kizárja egymást (kután melanóma)

29 Tirozinkinázok genetikája emberi daganatokban KIT mutáció amplifikáció GIST jm, TK - nonuv melanoma TK - PDGFR GIST EC-del, TK - DFSP fúziós gén (coll) - ABL CML fúziós gén (BCR) -

30

31 Gastrointestinalis Stromalis Tumor (GIST) Gleevec CD117/KIT

32 C-KIT mutációk GIST-ben Exon 11 (juxtamembrán): EC domén deléció EC TK-domén Citoplazmatikus KIT-IHC Cod557,558: ROSSZ PROGNÓZIS!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Exon 9, 13,17 mutációk ritkábbak (9-EC, 13,17 TK) Ex 17-mut: GLEEVEC RES KLASSZIKUS MORFOLÓGIA::::::::::::::::::::::::::::::::: NINCS GÉNAMPLIFIKÁCIÓ (FISH nem szükséges) Tabone et al BBA 1741:165,2005

33

34 A PDGF receptor mutációk GISTben Exon 12 (deléció vagy missense) EC domén vesztő Exon 18 (deléció vagy missense) GLEEVEC-RES Exon 14 pontmutáció) EC domén Kizárja a párhuzamos c-kit mutációt!!!!!!!! Morfológia: pleiomorf, óriássejtes Lokalizáció: gyomor (ex14/cod2125) epitheloid PDGFR: citoplazmatikus (dot) Lasota et al. Lab Invest 86:94,2006 Martin et al. JCO 23:6190,2005

35 KIT/PDGFR mutációk KIT-mut, gyenge vagy nincs PDGFR protein PDGFR-mut, gyenge vagy negatív a KIT protein Ez elsősorban az EC-domén-vesztő génhibák esetében jellemző

36 KIT-ex 17/ PDGFR-ex18 mutációs Gleevec rezisztens GIST Más TK gátlóra van szükség.. Pl.: SUTENT

37