Tóth Erika Sebészeti és Molekuláris Patológia Osztály Országos Onkológiai Intézet. Frank Diagnosztika Szimpózium, DAKO Workshop 2012.

Átírás

1 Tóth Erika Sebészeti és Molekuláris Patológia Osztály Országos Onkológiai Intézet Frank Diagnosztika Szimpózium, DAKO Workshop 2012.december 7

2 1. Sporadikus és örökletes pajzsmirigy daganatokban eddig megismert genetikai eltérések áttekintése 2. Molekuláris patológiai vizsgálatok technikai feltételeinek elemzése 3. Molekuláris markerek diagnosztikai és prognosztikai jelentőségének áttekintése

3 Diagnostic Histopathology 2010, 17:3

4 Follicularis hámsejt (95%) C-sejt (5%) Papillaris ca (85%) BRAF~45% RET/PTC~20% RAS~10-15% BRAF RET/PTC RAS Β-catenin PIK3CA P53 Rosszul differenciált ca Anaplasticus ca (1%) RAS PAX8/PPARγ Follicularis adenoma RAS~20-40% PAX8/PPARγ~2-10% Follicularis carcinoma (14%) RAS~40-50% PAX8/PPARγ~30-40% RET mutáció Medullaris ca RET mutáció Sporadikus~50% Familiaris ~85-100%

5 MAPK szignálút Mitogén aktivált protein kináz

6 Genetikai predispositio MEN2A, MEN2B, FMTC: medullaris ca FAP:papillaris ca Cowden betegség: Follicularis adenoma és ca RET csírasejtes mutáció APC csírasejtes mutáció (5q21) PTEN csírasejtes mutáció (10q23.3) Külső röntgen vagy γ-sugárzás: Papillaris ca Follicularis ca RET/PTC3 inverzió PPARγ/PAX8

7 Lokalizáció Daganat típus Rák kialakulás kockázata Duodenum Adenocarcinoma 4-12% Gyomor Adenocarcinoma 0,5% Pancreas Adenocarcinoma 2% Pajzsmirigy Papillaris ca Cribriform-morular variáns Központi idegrendszer Medulloblastoma 1% alatt Máj Hepatoblastoma 1,6% Epeutak Adenocarcinoma 1% alatt 2%

8 Benignus pm nodulus (adenoma, hyperplasticus göb) BRAF V600E mutáció előfordulása 0% Follicularis ca 0% Papillaris ca 44% Klasszikus 60% Follicularis variáns 12% Tall cell variáns 77% Rosszul differenciált és anaplasticus ca 18% Xing M Endocr Relat Cancer 2005,12:245

9 A papillaris carcinomák 20-30%-ában RET EC TM TK Klonális átrendeződése PTC-re specifikus Fiatalabb életkor Klasszikus szövettani típus Gyakran multifokális micropapillaris Gyakran sugárhatásnak kitett betegekben Nyirokcsomó metasztázis ritka Általában alacsonyabb stádium (RET/PTC1) Progresszió, rosszul diff ca kialakulása ritka RET/PTC1 RET/PTC3 Életkor Felnőtt 20% Gyerek sporadikus PTC Gyerek sugárhatásra PTC CCDC6 TK 65% NcoA4 TK 30% RET/PTC mut gyakorisága 40-50% 50-80%

10 NRAS, HRAS, KRAS Forró pontok: 12, 13 és 61 codon NRAS 61 codon és HRAS 61 codon mutáció a leggyakoribb pm tumorokban Nodularis hyperplasia 5% Follicularis adenoma 34% Follicularis carcinoma 45% Papillaris carcinoma 15% Rosszul diff ca 30% RAS mutáció gyakorisága RAS mutáció papillaris carcinomában: Szinte mindig folliculáris variáns Gyakrabban encapsulált tumorok Nyirokcsomó metasztázis ritka Y Nikiforov, Meta-analysis of literature

11

12 γ PAX8 (2q13) és a PPARγ (3p25) fúziója Kimérikus fehérje overexpressziója Nodularis hyperplasia 0% Follicularis adenoma 7% Follicularis carcinoma 30% Papillaris carcinoma 2% Rosszul diff ca 0% PAX8/PPARγ mutáció gyakorisága Y Nikiforov, Meta-analysis of literature

13 Molekuláris vizsgálatra alkalmas: mélyfagyasztott minta-dns, RNS formalin fixált, paraffinba ágyazott minta- DNS, FISH cytologiai preparátumok: friss sejtek-dns, RNS fixált sejtek- DNS sejtblokk- DNS, FISH

14 BRAF, RAS pont mutációk kimutatása: DNS alapú vizsgálatok fagyasztott fixált szövet, cytologia PCR alapú technikák RET/PTC, PAX8-PPARγ átrendeződés: kimutatásuk nehezebb RNS- fagyasztott mintából RT-PCR fixált anyagon FISH, immunhisztokémia PPARγ Am J Surg Pathol 26(8): , 2002

15 PAX8-PPARγ átrendeződés, számos splice variáns PAX8 PPARγ Exon 6 Exon 7 Exon 8 Exon 9 Exon 1 F7 R bp F8 R bp F9 R1 69bp

16 Mutáció analízis FNA mintákon (Nikiforov et al. JCEM(2009): Prospektív vizsgálat pajzsmirigy nodulus Mutáció kimutatható volt 32 esetben Mutáns esetek Carcinoma a végső szövettani diagnózis BRAF mutáció 18 eset 100% RAS mutáció 8 eset 87% RET/PTC transzlokáció 5eset 100% PAX8-PPARγ transzlokáció 1eset 100%

17 Mutáció analízis FNA mintákon (Nikiforov et al. JCEM(2009)): Cytologia Mutáció Carcinoma valószínűsége Pozitív Pozitív 100% Indeterminált 40,4% Indeterminált Pozitív 100% Indeterminált Negatív 16,2% Negatív 2,1% Negatív Negatív 0,9% Revised management guidelines for patients with thyroid nodules differentiated thyroid cancer (American Thyroid Association 2009): The use of molecular markers (e.g. BRAF,RAS, RET/PTC, PAX8-PPARγ or galectin-3) may be considered for patients with indeterminate cytology on FNA to help guide management. Recommendation rating C

18 Mutáció típusa Specificitás malignitás szempontjából BRAF Magas, közel 100% PTC RET/PTC Magas, clonalis átrendeződés közel 100% RAS Alacsony, 20-30%-ban follicularis adenomákban FTC PAX8-PPARγ Magas, de 2-10%-ban folliculáris adenomákban

19 Papilláris pajzsmirigy carcinoma BRAF V600E mutációval (Xing M. Endocr Relat Cancer 2005; 12:245): Gyakran tall cell morfológia Gyakori extrathyroidalis terjedés Gyakoribb nyirokcsomó metasztázis Gyakrabban III-IV-es stádiumú betegség Gyakoribb a dedifferenciáció Kevésbé veszik fel a jód izotópot

20 A jól differenciált pajzsmirigydaganatok 75%-ában detektálhatók jelenleg ismert mutációk. Ezen mutációk kimutathatók cytologiai és sebészeti mintákból Cytológiai mintákban BRAF, RET/PTC és PAX8-PPARγ mutáció jelenléte 100%-os pozitív prediktív értékű rák szempontjából Cytológiai mintákban RAS mutáció jelenléte 85%-os pozitív prediktív értékű rák szempontjából BRAF a papilláris carcinomák agresszivitását jelző molekuláris markernek tekinthető, de sokkal több BRAF mutáns PTC, mint amennyi a kedvezőtlen kórlefolyású PTC.

21 Köszönöm a figyelmet!