Kérdések és megoldások Immunhisztokémiai eljárások. Az eredmények interpretálása.

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Kérdések és megoldások Immunhisztokémiai eljárások. Az eredmények interpretálása."

Enikő Katona
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Kérdések és megoldások Immunhisztokémiai eljárások. Az eredmények interpretálása. Kerekasztal moderátor Péter Ilona Dako Workshop A Frank Diagnosztika Kft. és az Országos Onkológiai Intézet szervezésében Budapest december 6.

Kerekasztal moderátor Péter Ilona Dako Workshop A Frank

2 Immunhisztokémia / Immuncitokémia módszer a szövetekben vagy sejtekben fellelhető antigének kimutatása specifikus antigén-antitest felismerés útján

3 Immunhisztokémia indikációk a mindennapi daganat diagnosztikában eredet meghatározása fenotípus biológiai viselkedés proliferációs készség jellemzése terápiás célpont kimutatása kórokozók kimutatása

biológiai viselkedés proliferációs készség

4 Immunhisztokémiai eljárások A bemutatásra kerülő esetek feldolgozása Módszerek: Rutin szövettani feldolgozás /Hematoxilin-Eosin festés/ Immunhisztokémia: Indirekt envision detektáló rendszer (Dako A/S) Ventana Immunhisztokémiai festő automata készülék Vizsgált antigének: calcitonin, CD10, CD20, CD56, CD99 chromogranin, E-cadherin, estrogén receptor (ER) HER2(c-erbB-2/neu), Helicobacter pylori, Ki67 (MIB1), MDM2, Melan-A, p53 protein, progesteron receptor (PR), S100

Immunhisztokémiai festő automata készülék Vizsgált antigének: calcitonin, CD10, CD20, CD56, CD99 chromogranin,

5 Immunhisztokémiai reagensek elvárások a mindennapi gyakorlatban Antitestek specificitása 100% szenzitivitása 100 % Lehetőségek / Korlátok

6 Eredet meghatározása Szövetspecifikus antigén kimutatása Elsődleges daganat TTF-1 pajzsmirigy szövet tüdő szövet egyes endokrin daganatok Thyreoglobulin, Prostata specifikus antigén Áttét? TG TTF-1 MIB-1 Pajzsmirigy, hyalinizáló trabeculáris tumor

endokrin daganatok Thyreoglobulin, Prostata specifikus

7 TPO TTF1 TG Csontvelő, pajzsmirigyrák áttéte

8 Bőr, soliter neurofibroma (Meissner test) S100 CD68

9 Nyelvgyök, invaziv laphámrák és nyirokcsomóba adott áttéte CK/AE1/AE3

10 Nyirokcsomóban melanoma malignum áttéte MelanA

11 Fenotípus Daganat differenciáldiagnosztika Immunpanel értelme Algoritmusok helye a diagnosztikában Áttéti / Ismeretlen eredetű daganatok (CK; S100; LCA; Vimentin) (CK7-CK20)

12 CD10 expresszió jelentősége CD kda transzmembrán protein Expresszálódik ép nyiroktüszőben (centrocyta) az éretlen T és B precursor sejtekben (eltűnik a sejtek érési folyamata során) a precursor B sejt eredetű acut lymphoblastos leukémiában (ALL) T sejtes ALL ban is megjelenhet érett B sejtes leukémiában, beleértve myeloma multiplexben is lymphomákban vese glomerulus és tubulus sejtjeiben fibroblastokban epe canaliculusokban endometrialis stroma sejtjeiben CD10 Ép nyiroktüsző Világossejtes veserák CD10

sejtes ALL ban is megjelenhet érett B sejtes leukémiában, beleértve myeloma multiplexben is lymphomákban vese glomerulus és

13 CD10 pozitív endometrialis cystadenofibroma borderline komponenssel CD10 ER Ki67 endometriumban pozitív: stromalis sejt endometrialis cystadenofibromában pozitív: stroma sejt és morula hámsejt Toki T és mtsai: CD10 is a marker for normal and neoplastic endometrial stromal cells. Int J Gynecol Pathol. 2002; 21:41-47.

pozitív: stroma sejt és morula hámsejt Toki T és mtsai: CD10 is a marker for

14 Biológiai viselkedés p53 oncoprotein (DO7 klón) A vad és a mutáns típusú p53 proteinnel reagál pozitív sejtek aránya / reakció intenzitása: clonalis expresszió malignitás fokális, szórványos expresszió regeneráció p53 p53 TTF1 Bőr, basalioma Pajzsmirigy, follicularis carcinoma

intenzitása: clonalis expresszió malignitás fokális, szórványos

15 Proliferációs készség Mitózis szám / Ki67 / DNS tartalom Ki67 (MIB-1) A Ki67 antigén nagy nuclearis protein (345, 395 kda) a sejt ciklus aktív fázisaiban (G1, S, G2 és M fázisban) expresszálódik, a nyugvó sejtekben (G0 fázisban) nem mutatható ki. A szövettani diagnosztikában és a sejtbiológiai vizsgálatokban a normál és daganatos sejtek növekedési frakciói monitorozhatók.

expresszálódik, a nyugvó sejtekben (G0 fázisban) nem mutatható ki.

16 Proliferációs készség Mitózis szám / Ki67 / DNS tartalom nuclearis expresszió > proliferációs aktivitás jele Ép nyiroktüsző Ki67 (MIB-1) membránhoz kötött reakció > pajzsmirigy, hyalinizáló trabecularis tumor Ki67 (MIB-1) Ranjbari N és mtsa: The Ki-67/MIB-1 index level and recurrence of papillary thyroid carcinoma. Med Hypothesis 2013; 80: Hirokawa M, Carney JA: Cell membrane and cytoplasmic staining for MIB-1 in hyalinizing trabecular adenoma of the thyroid gland. Am J Surg Pathol 2000; 24:

Ki-67/MIB-1 index level and recurrence of papillary thyroid carcinoma. Med Hypothesis 2013; 80: 311-314.

17 CD56 (123C3 klón) expresszió jellemzői Kimutatható a természetes ölő sejtekben (NK) a perifériás vérben keringő CD4+ és CD8+ T sejtekben neuroblastoma, kis sejtes tüdőrák, pajzsmirigy normál folliculus hám, adenoma, follicularis rák sejtjeiben, Pajzsmirigy, follicularis rák CD56 CD56 Vékonybél, plexus, glia sejtek A szokásos papillaris rákban általában nem expresszálódik Demellawy DE és mtsai: Application of CD56, p63, CK19 in immunohistochemistry in the diagnosis of papillary carcinoma of the thyroid. Diagn Pathol. 2008;3:5-17.

follicularis rák CD56 CD56 Vékonybél, plexus, glia sejtek A szokásos papillaris rákban általában nem expresszálódik Demellawy DE és

18 Terápiás célpont kimutatása Emlő tumorokban A jelenleg elérhető célzott terápiás kezelések célpontjai hormonreceptorok: ER, PR EGFR/HER 2 ER PR HER-2 Mihály Zs és mtsa: HER2-pozitív emlőtumorok célzott terápiájában alkalmazott szerek és a terápiás válasz előrejelzése. Magyar Onkológia; 2013; 57: Dank M és mtsa: Monoklonális antitest-terápia emlőrákban. Magyar Onkológia2013;

emlőtumorok célzott terápiájában alkalmazott szerek és a terápiás válasz előrejelzése.

19 ER/PR % meghatározása Quick vagy Allred pontrendszer pozitivitás szemiquantitatív meghatározásához pozitív daganatsejtek aránya / pontszám reakció intenzitása pontszám 0 % 0 Negatív reakció 0 <1 % 1 Enyhe reakció % 2 Közepes intenzitású reakció % 3 Kifejezett intenzitású reakció % % 5 az együttes pontszám 0 és 8 közötti lehet, 3 alatt negatívnak lehet tartani a daganatokat (emlő) klinikai jelentősége: prognosztikai és prediktív (hormonkezelés) faktor Allred DC, Harvey JM és mtsai: Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis. Mod Pathol 1998; 11: Yamashita, H., Ando Y, és mtsai: Immunohistochemical evaluation of hormone receptor status for predicting response to endocrine therapy in metastatic breast cancer. Breast Cancer 2006;13:74-83.

daganatokat (emlő) klinikai jelentősége: prognosztikai és prediktív (hormonkezelés) faktor Allred DC, Harvey JM és mtsai: Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical

20 E-Cadherin ER PR Emlő, invaziv ductalis carcinoma

21 Immunhisztokémiai HER2 expresszió értékelése pozitív sejtek aránya (%) / reakció intenzitása (+/0) cut-off érték klinikai jelentősége: prediktív (target terápia) Emlő, invaziv ductalis carcinoma HER-2

22 HER2 immunhisztokémiai vizsgálatának értékelése 3+ komplett erős intenzitású membránfestődés a sejtek >30 %-ában 2+ komplett közepes intenzitású membránfestődés a sejtek>10%-ában, illetve komplett erős membránfestődés a sejtek >10%-ában, de kevesebb, mint 30 %-ában 1+ komplett gyenge membránfestődés a sejtek >10 %-ában 0 <10%-ban észlelt pozitívitás, inkomplett festődés, vagy a festődés hiánya Az emlőrák patológiai diagnosztikája, feldolgozása és kórszövettani leletezése (2009) Cserni Gábor és mtsai II. Emlőrák Konszenzus; 2009, Kecskemét

23 Immunhisztokémiai HER2 expresszió értékelése pozitív sejtek aránya (%) / reakció intenzitása (+/0) cut-off érték klinikai jelentősége: prediktív (target terápia) Emlő, invaziv ductalis carcinoma HER-2

24 pozitív vagy negatív reakció * qualitativ értékelés * becsült vagy mérésen alapuló %-os arány meghatározása (guideline, nyomvezető segítségével) Immunhisztokémia eredmények értékelése specifikus vagy nem specifikus reakció

25 Hibalehetőségek keresése Immunhisztokémia Nem specifikus pozitív festődés és háttérfestődés Ajánlás: Csökkenteni kell az elsődleges és /vagy másodlagos antitest koncentrációját Malignus kis kereksejtes tumor, core biopszia CD99

26 Nincs jel Antitest szintjén Antitest kompatibilitás: Szövetek fixálása: Túlfixált a preparatum! Elégtelen fixáláskor: a preparatum szélén éles sötét csík jelenik meg, a közepe nem festődik. Nem megfelelő permeabilitási körülmények! Immunhisztokémia Hibalehetőségek keresése Ajánlás Koncentráció növelése; Elsődleges és / vagy másodlagos antitest inkubációs idő növelése; Ellenőrizni kell, hogy az elsődleges és a másodlagos antitestek kompatibilisek-e. 0,5-1,0% Triton detergens a pufferben oldva segítheti az antitest szövetbe jutását.

27 Emlő, invaziv ductalis carcinoma ER ER excisio core biopszia

28 Emlő, invaziv ductalis carcinoma ER, hamis negatív ER, ismételt reakció ER + kontroll

29 Rhabdomyosarcoma/dedifferenciált liposarcoma, core biopszia CD99 MDM2

30 CT Pajzsmirigy, medulláris carcinoma CT CT Natív Chr-A Oxálsav, más néven: sóskasav, etán-disav. Képlete: HOOC-COOH

31 HP Gyomor biopszia, Helicobacter pylori kimutatása, immunhisztokémiai módszerrel HP HP

Összefoglalás Az immunhisztokémiai reakciók eredményének értékelése és interpretálása: mi volt az eredeti kérdésfeltevés a reakció elvégzése előtt; a várható pozitív vagy negatív eredményt kaptuk-e;

32 Összefoglalás Az immunhisztokémiai reakciók eredményének értékelése és interpretálása: mi volt az eredeti kérdésfeltevés a reakció elvégzése előtt; a várható pozitív vagy negatív eredményt kaptuk-e; az immunhisztokémiai reakció minősége az elvártaknak megfelel-e, ha nem, meg kell keresni a hiba forrását; A hamis pozitív és hamis negatív reakciók kiszűrése az immunhisztokémiai laboratóriumban minden reakciónál: pozitív és negatív kontrollok, belső szöveti kontrollok biztosítása és külső intézetekkel kontroll lehetőség kialakítása.

33 Összefoglalás, folytatás Az immunhisztokémiai reakciók értékelésekor a szokásostól eltérő eredmény interpretálásohoz, ha technikai hiba nem áll fenn a szakirodalom további gondos átnézése indokolt, a még nem ismert újabb adatok felkutatása, a helyes diagnózis felállítása céljából.

34 Köszönöm a figyelmet!

Hasonló dokumentumok

Tóth Erika Sebészeti és Molekuláris Patológia Osztály Országos Onkológiai Intézet. Frank Diagnosztika Szimpózium, DAKO workshop 2012.

Tóth Erika Sebészeti és Molekuláris Patológia Osztály Országos Onkológiai Intézet Frank Diagnosztika Szimpózium, DAKO workshop 2012.december 7 Follicularis hám eredetű daganatok Jól differenciált tumorok