QUANTA Lite ACA IgA III In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas

Átírás

1 QUANTA Lite ACA IgA III In Vitro diagnosztikai alkalmazásra CLIA Bonyolultság: magas Javasolt alkalmazás QUANTA Lite TM ACA IgA III egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA) az IgA cardiolipin antitestek szemi-kvantitatív kimutatására humán szérumban. A cardiolipin antitestek jelenléte felhasználható a klinikai adatokkal és más laboratóriumi vizsgálatok eredményével együtt a thrombosis kockázatának megítélésére szisztémás lupus erythematosusban (SLE) vagy más lupus-szerű betegségben szenvedő páciensekben. A teszt összegzése és magyarázata Anticardiolipin antitestek (ACA) jelenléte erősen összefüggésbe hozható a vénás és arteriás thrombosisokkal. 1 Ezt először a szisztémás lupus erythematosus (SLE) tanulmányozása kapcsán figyelték meg, amelyik betegség számos tünete között gyakran fordul elő thrombosis. Az SLE-ben megtalálható nagy számú autoantitestből kettő irányul foszfolipidek, például cardiolipin ellen. 2 Bár az anticardiolipin antitestekkel kapcsolatos közlemények többsége az IgG és/vagy IgM osztályba tartozó antitestekre koncentrál 3,4 néhány újabb tanulmány arra utal, hogy az IgA osztályhoz tartozó anticardiolipin antitestek ugyancsak gyakran kimutathatók SLE-ben vagy ahhoz hasonló betegségben szenvedő páciensekben. 5,6,7,8 Ezekben a tanulmányokban olyan betegekben mértek magasabb IgA szinteket, akiknél vascularis szövődményeket és thrombocytopeniát is találtak. 7 A módszer elve Tisztított cardiolipin antigént rögzítettek polisztirén mikrotiter lemez mérőedénykéinek falához, olyan körülmények között, ami az antigén natív állapotát képes megőrizni. Az előhígított kontrollokat és a hígított beteg-mintákat az egyes különálló mélyedésekbe töltjük, ahol a mintában esetleg jelen lévő anti-cardiolipin antitestek kikötődnek az edény falához rögzített antigénhez. A nem kötődött mintát mosással eltávolítjuk, és minden egyes mélyedésbe enzimmel kapcsolt anti-humán IgA konjugátumot adunk. A második inkubáció lehetővé teszi az enzimmel jelzett anti-humán IgA számára, hogy a vizsgált mintából származó, az első inkubáció során lekötött antitesthez kapcsolódjon, ha volt ilyen. Miután az enzimmel jelölt anti-humán IgA felesleget mosással eltávolítottuk, a rögzítve maradt enzim aktivitását kromogén szubsztrát hozzáadásával és a kialakult szín intenzitásának mérésével határozzuk meg. A színes termék képződésének leállítása után a minta optikai denzitását egy ötpontos kalibrációs görbe hasonló adataival vetjük össze, és így megállapítjuk, hogy a mintában anticardiolipin antitest kimutatható, vagy nem mutatható ki. Az eredményt szemi-kvantitatív módon, standard IgA anti-cardiolipin (APL) egységben fejezzük ki. Reagensek 1. Polisztirén mikrotiter ELISA lemez, tisztított cardiolipin antigénnel, és bovin β 2 GPI-gyel (12-1 x 8 mérőhely) bevonva, tartókerettel, szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba csomagolva 2. ACA Negatív Kontroll, 1 üveg puffer, tartósító anyagokat és humán szérumot tartalmaz, amelyben nincsenek humán anti-cardiolipin antitestek, előhígítva, 1.2mL 3. ACA IgA III Kontroll, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum cardiolipin 4. ACA IgA III Kalibrátor A, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum cardiolipin 5. ACA IgA III Kalibrátor B, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum cardiolipin 6. ACA IgA III Kalibrátor C, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum cardiolipin 7. ACA IgA III Kalibrátor D, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum cardiolipin 8. ACA IgA III Kalibrátor E, 1 üveg puffer, benne tartósító anyagok és humán szérum cardiolipin 1

2 9. ACA III Minta Diluens, 1 üveg rózsaszínű tartalma: PBS konyhasó foszfát pufferrel, protein stabilizátorok és tartósító anyagok, 50mL 10. ACA III PBS Koncentrátum, 1 üveg 20x-os koncentrátum pirosra színezett, tartalma: PBS - konyhasó foszfát pufferrel, 50mL. A hígítási javaslatok a Módszer szakaszban találhatók. 11. HRP IgA Konjugátum, (kecske), anti-humán IgA, 1 üveg szalmasárgára színezett, puffert, protein stabilizátorokat és tartósító anyagokat tartalmaz, 10mL 12. TMB Kromogén, 1 üveg stabilizátorokat tartalmaz, 10mL 13. HRP Stop (leállító) Oldat, 0.344M kénsav, 1 üveg színtelen, 10mL Veszélyforrások 1. FIGYELEM: Ez a termék olyan kémiai anyagot (0.02% chloramphenicol) tartalmaz a konjugátumban, amelyet California államban rákkeltőként tartanak nyilván. 2. Az összes humán eredetű anyagot, amelyeket a kontrollok előállítása során felhasználtak ehhez a termékhez, ellenőrizték és negatívnak találták HIV, HBsAg, és HCV ellenes antitestekre nézve az FDA által jóváhagyott módszerekkel. Semmilyen teszt módszer nem tud azonban tökéletes biztonságot nyújtani arra nézve, hogy a termék mentes HIV, HBV, HCV vírusoktól, vagy más fertőző ágensektől. Éppen ezért, az ACA IgA III Kontroll, ACA IgA III Kalibrátor A- tól E-ig és az ACA Negatív Kontroll potenciálisan fertőző anyagként kezelendő Nátrium azidot alkalmaztak az oldatok stabilizálására. A nátrium azid méreg, és lenyelve, vagy szemen, bőrön keresztül felszívódva toxikus lehet. A nátrium azid ezen kívül ólom vagy réztartalmú vízvezeték csövekkel reakcióba léphet, robbanásveszélyes fém-azid komplexet képezve. Ha a reagensek maradványait a vízvezeték rendszeren keresztül távolítja el, öblítse a medencét nagy mennyiségű vízzel az azid lerakódás megakadályozása céljából. 4. A HRP konjugátum egy híg mérgező/korrozív vegyszert tartalmaz, ami nagy mennyiségben elfogyasztva toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 5. A TMB Kromogén irritáló anyagot tartalmaz, ami belélegezve, lenyelve, vagy a bőrön keresztül felszívódva veszélyes lehet. A sérülések megelőzése érdekében kerülje az anyag belélegzését, elfogyasztását illetve a bőrre, szembe jutását. 6. A HRP Stop oldat hígított kénsav oldat. Ne tegye ki bázisok, fémek vagy más olyan anyagok hatásának, amelyek savakkal reakcióba lépnek. A kénsav mérgező és maró anyag, lenyelve toxikus lehet. Az esetleges vegyi égési sérülés megelőzése érdekében vigyázzon, hogy az anyag bőrre, szembe ne kerülhessen. 7. Használjon megfelelő személyi védőeszközöket a kitben található reagensekkel végzett műveletek során. 8. A kicsöppenő reagenseket azonnal fel kell takarítani. A hulladékok eltávolítása folyamán tartsa be az összes szövetségi, állami és helyi környezetvédelmi előírást. Az analitikai hibák megelőzését célzó figyelmeztetések 1. Ez a termék in vitro diagnosztikai alkalmazásra készült. 2. A rendszer egyes elemeinek helyettesítése más termékekkel az eredményeket meghamisíthatja. 3. Nem tökéletes vagy hatástalan mosás, és a folyadék elégtelen eltávolítása az ELISA csíkok edénykéiből nem megfelelő reprodukálhatóságot és/vagy magas hátteret okozhat. 4. Ennek a tesztnek az adaptációja automatikus mintakezelési rendszerek és más folyadék-kezelő eszközök használatához, teljes egészében vagy részleteiben, a teszt eredményeinek eltérését okozhatja attól, amit manuális módszerrel nyertek. Minden laboratóriumnak a saját felelőssége az általa alkalmazott automatizált rendszer validálása annak érdekében, hogy az eredmények elfogadható tartományon belül legyenek. 5. A teszt működését változatos tényezők befolyásolhatják. Ilyenek lehetnek a reagensek induló hőmérséklete, a környezeti hőmérséklet, a pipettázási technika pontossága és reprodukálhatósága, a mosás és a folyadék-maradványoknak az ELISA lemez edénykéiből történő eltávolításának az alapossága, az eredmények mérésére használt fotométer, és az assay kivitelezése során alkalmazott inkubációs idők tartama. Nagy gondot kell fordítani a következetességre annak érdekében, hogy a kapott eredmények megbízhatóak és reprodukálhatóak legyenek. 6. Javasoljuk, hogy a vizsgálat kivitelezése során szigorúan kövesse a protokollt. 2

3 7. A mikrotiter csíkokat és a szárító betéteket tartalmazó visszazárható tasakok tökéletlen lezárása az antigén degradációját és a teszt precizitásának romlását okozza. 8. A HRP konjugátumnak bizonyos idő-intervallumban két vagy több alkalommal történő használata ugyanabból az üvegből, elfogadhatatlanul alacsony abszorbancia értékeket eredményezhet. Fontos a HRP konjugátum kezelésére vonatkozó előírások pontos betartása az ilyen problémák megelőzése érdekében. 9. A HRP konjugátum kémiai szennyeződése következhet be az eszközök és műszerek nem megfelelő tisztítása miatt. Általánosan használt laboratóriumi vegyszerek, mint például a formalin, fehérítő szerek, alkohol vagy detergensek maradványai a HRP konjugátum lebomlását okozzák bizonyos idő után. Kémiai tisztítószerek vagy fertőtlenítő szerek használata után a készülékeket és eszközöket alaposan le kell öblíteni. Tárolási körülmények 1. A kit valamennyi reagensét tárolja 2-8 C között. Nem szabad fagyasztani a terméket. A reagensek az előírásoknak megfelelően kezelve és tárolva a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. 2. A fel nem használt, antigénnel bevont mikrotiter csíkokat a szárítóbetéttel együtt biztonságosan vissza kell zárni a fóliatasakba, és 2-8 C között kell tárolni. 3. A hígított mosópuffer 2-8 C között tartva 1 napig használható. A minta vétele és kezelése Ez az eljárás szérum minták vizsgálatára alkalmas. A vizsgálandó mintákhoz azidot vagy más tartósító anyagokat adni nem ajánlott, mert ezek torzíthatják az eredményeket. Mikrobiológiai szempontból szennyezett, hőkezelt, vagy látható csapadékot, szilárd részecskéket tartalmazó minta nem használható. Kerülje az erősen hemolizált vagy lipémiás minták használatát. Levétel után a szérumot az alvadéktól el kell választani. Az CLSI (NCCLS) Document H18-A3 a minták tárolására a következő körülményeket javasolja: 1) Ne tartsa a mintákat 8 óránál hosszabb ideig szobahőmérsékleten. 2) Ha a vizsgálat nem végezhető el 8 órán belül, tartsa a mintákat hűtve, 2-8 C között. 3) Ha a teszt nem végezhető el 48 órán belül, vagy a minták szállítására van szükség, fagyassza és tárolja a mintákat -20 C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten. A fagyasztott mintákat a kiolvasztás után és vizsgálat előtt alaposan fel kell keverni. A teszt kivitelezése A kitben rendelkezésre álló anyagok 1 Cardiolipin ELISA mikrotiter lemez, (12-1 x 8 mérőhely), tartókerettel 1 1.2mL ACA Negatív Kontroll, előhígítva 1 1.2mL ACA IgA III Kontroll előhígítva 1 1.2mL ACA IgA III Kalibrátor A előhígítva 1 1.2mL ACA IgA III Kalibrátor B előhígítva 1 1.2mL ACA IgA III Kalibrátor C előhígítva 1 1.2mL ACA IgA III Kalibrátor D előhígítva 1 1.2mL ACA IgA III Kalibrátor E előhígítva 1 50mL ACA III Minta Diluens 1 50mL ACA III PBS Koncentrátum, 20x os koncentráció 1 10mL HRP IgA Konjugátum, (kecske), anti-humán IgA 1 10mL TMB Kromogén 1 10mL HRP Stop Oldat, 0.344M Kénsav További szükséges anyagok a kiten kívül Mikropipetták 5, 100, , és 500µL beméréséhez Egyszer használatos mikropipetta-hegyek Tesztcsövek a betegek mintáinak hígításához, 4mL térfogattal Desztillált vagy ionmentesített víz 1L-es edény az ACA III PBS koncentrátum hígításához Mikrotiter lemez leolvasó, ami képes az OD mérésére 450nm-en (és 620nm-en a két hullámhosszon történő leolvasáshoz) 3

4 Módszer, Mielőtt hozzákezd 1. FONTOS: Várjon, míg a minták és a reagensek elérik a szobahőmérsékletet (20-26 o C) és mindegyiket jól keverje meg. 2. Hígítsa az ACA III PBS koncentrátumot 1:20 arányban, úgy, hogy az ACA III PBS koncentrátumos üveg tartalmát 950mL desztillált vagy ionmentesített vízhez adja. Ha nem kerül a teljes lemez egyszerre feldolgozásra, kisebb mennyiséget is lehet hígítani: minden 16 felhasználandó mérőhely számára adjon 4 ml koncentrátumot 76 ml desztillált vagy ionmentesített vízhez. Az ACA III PBS Puffer naponta frissen hígítandó. A fel nem használt puffer-maradványt a nap végén ki kell önteni. 3. Készítsen minden egyes beteg-mintából 1:101 arányú hígítást a következő módon: adjon 5µL mintát 500µL ACA III minta diluenshez. A hígított mintákat 8 órán belül fel kell használni. NE HÍGÍTSA az ACA IgA III Kalibrátorokat A-tól E-ig, az ACA IgA III Kontrollt és az ACA Negatív Kontrollt 1:101 arányban. 4. A cardiolipin antitestek jelenlétének vagy hiányának tapasztalati egységekben történő meghatározása céljából használjon minden egyes kalibrátor és kontroll teszteléséhez két-két mérőhelyet, és a betegek mintának lemérésére egy vagy két mérőhelyet. Javasoljuk a betegek mintáiból is a párhuzamos (duplikált) meghatározásokat. 5. A standard görbe készítése: Az 5 pontos standard görbe pontjainak meghatározásához A-tól E-ig, használja az ELŐHÍGÍTOTT ACA IgA III Kalibrátorokat A-tól E-ig közvetlenül a reagens-üvegből. Az öt pontos standard görbe értékei a következők: Pont Foszfolipid Egységek (APL) A Előhígított ACA IgA III Kalibrátor A B Előhígított ACA IgA III Kalibrátor B 75.0 C Előhígított ACA IgA III Kalibrátor C 37.5 D Előhígított ACA IgA III Kalibrátor D 18.8 vagy E Előhígított ACA IgA III Kalibrátor E 9.4 vagy A módszer kivitelezése 1. VALAMENNYI REAGENSNEK EL KELL ÉRNIE A SZOBA HŐMÉRSÉKLETÉT (20-26 C) A VIZSGÁLAT MEGKEZDÉSE ELŐTT. Helyezze a szükséges számú mérőedénykét/csíkot a keretbe. A fel nem használt csíkokat haladéktalanul tegye vissza a szárítóbetétet tartalmazó fóliatasakba, és zárja vissza a tasakot biztonságosan, hogy a mérőhelyek minimális ideig legyenek kitéve a párásodás veszélyének. 2. Pipettázzon 100µL-t mind az öt kalibrátorból, a hígított beteg-mintákból, az ACA Negatív Kontrollból és az ACA IgA III Kontrollból a mérőedénykékbe. MEGJEGYZÉS: Az ACA IgA III Kontroll és ACA Negatív Kontroll is előre meg van hígítva, és használatra kész. Az értékek és az ACA IgA III Kontroll elfogadható tartománya az üveg címkéjén nyomtatott formában található. Ha a kontroll eredménye a címkén megadott elfogadási tartományon kívül esik, ismételje meg az analízist. Ha a kontroll értéke az ismételt mérés után is a megadott tartományon kívül van, kérjen segítséget az INOVA technikai szervíztől. Minden mintából ajánlott párhuzamos meghatározásokat végezni. 3. Fedje be a lemezeket, és inkubálja 30 percig szobahőmérsékleten, sima vízszintes felületen. Az inkubációs idő az utolsó minta bemérése után kezdődik. 4. Mosás: Gondosan szívja le minden egyes mérőedényke tartalmát. Adjon µL hígított ACA III PBS puffert minden egyes mérőhelyhez, majd ezt is szivassa ki. Ismételje az eljárást még kétszer, így végezzen el összesen három mosást. Fordítsa a lemezt nyílásokkal lefelé, és egy nedvszívó felületen finoman ütögetve távolítsa el tökéletesen az utolsó mosás után visszamaradt nedvesség nyomait az edénykékből. Nagyon fontos, hogy az edénykék minden egyes mosási lépés után tökéletesen ki legyenek ürítve. A leszíváskor tartsa be a minta felvitelekor alkalmazott sorrendet. 5. Adjon 100μL HRP IgA Konjugátumot minden egyes mérőhelyhez. A konjugátumot az eredeti reagens üvegből aszeptikus körülmények között és a helyes laboratóriumi eljárásnak megfelelően kell kivenni. Csak annyi konjugátumot vegyen ki az üvegből, amennyire a teszt kivitelezéséhez szüksége van. A POTENCIÁLIS MIKROBIOLÓGIAI ÉS/VAGY KÉMIAI SZENNYEZŐDÉS ELKERÜLÉSE ÉRDEKÉBEN SOHA NE TÖLTSE VISSZA A FEL NEM HASZNÁLT KONJUGÁTUMOT AZ ÜVEGBE. Inkubálja a lemezt 30 percig, mint a 3-ik lépésben. 6. Mosás: Ismételje a 4 lépést. 4

5 7. Adjon 100µL TMB kromogént minden egyes edénykébe, és inkubálja sötét helyen 30 percig szobahőmérsékleten. 8. Adjon 100µL HRP Stop oldatot minden mérőhelyre. Tartsa be a HRP Stop oldat adagolása alkalmával ugyanazt a tempót és sorrendet, amit a TMB kromogén bemérésekor használt. Óvatosan ütögesse meg ujjával a lemez oldalát, az edénykék tartalmának alapos összekeverése céljából. 9. Olvassa le minden egyes mérőhely abszorbancia (OD) értékét a reakció leállítását követő egy órán belül, 450 nm-en. Ha bikromatikus leolvasást igényel, referencia hullámhossznak a 620nm használható. Minőség-ellenőrzés 1. Az ACA IgA III Kontroll, az ACA IgA III Kalibrátorok és az ACA Negatív Kontroll minden egyes betegminta sorozattal együtt kell fusson, hogy ellenőrizhető legyen, hogy az összes reagens és az eljárás végrehajtása is kifogástalan volt a teszt kivitelezése folyamán. 2. Ne feledje, hogy mivel az ACA IgA III Kontroll, az ACA IgA III Kalibrátorok és az ACA Negatív Kontroll előhígítva kerülnek forgalomba, ezek nem kontrollálják a minta hígításával kapcsolatos előkészítési folyamatot. 3. Kiegészítő kontrollok vizsgálata is végezhető a helyi, állami és/vagy szövetségi rendelkezések, vagy az akkreditációs testületek ajánlásainak vagy elvárásainak megfelelően. Alkalmas kiegészítő kontroll szérum készíthető kevert humán szérum minták szétosztásával, és < -20 C-on történő tárolásával. 4. Annak érdekében, hogy a teszt eredményeit érvényesnek tekinthessük, valamennyi, alább felsorolt kritériumnak teljesülnie kell. Ha ezek közül bármelyik nem teljesül, a tesztet érvénytelennek kell tekinteni, és az eljárást meg kell ismételni. a. Az előhígított ACA IgA III Kalibrátor A abszorbanciája nagyobb kell, hogy legyen, mint az előhígított ACA IgA III Kontroll abszorbanciája, és ez nagyobb kell legyen, mint az előhígított ACA Negatív Kontroll abszorbanciája. b. Az előhígított ACA IgA III Kalibrátor A abszorbanciája 1.0-nél nagyobb kell legyen, míg az előhígított ACA Negatív Kontroll abszorbanciája nem lehet nagyobb 0.2-nél. c. Az ACA IgA III Kontroll abszorbanciája több, mint kétszerese kell legyen az ACA Negatív Kontroll abszorbanciájának, vagy legyen nagyobb, mint d. Az ACA IgA III Kontroll koncentráció értéke a címkén megadott tartományon belül kell legyen. e. A megfelelő QC eljárásokra vonatkozó további információkat az CLSI (NCCLS) Document C24-A2 tartalmazza, ennek tanulmányozása ajánlott. Az eredmények kiszámítása 1. Határozza meg a párhuzamos minták OD értékeinek átlagát. 2. Ábrázolja az átlagos abszorbancia értékeket az ACA IgA assay kalibrációs görbéjén a megfelelő koncentrációk logaritmusával szemben. Használjon a pontoknak leginkább megfelelő illesztési módszert a görbe megrajzolásához. Alternatív eljárásként a log/log ábrázolás is alkalmazható. A kalibrátorokhoz rendelt APL egységek az egyes kalibrátor üvegek címkéin megtalálhatók. 3. Határozza meg az ismeretlen minták ACA APL koncentrációját az "X" tengelyen, úgy, hogy hozzárendeli az "Y" tengelyen a megfelelő abszorbancia értékhez. Az eredmények értelmezése Az ELISA assay a kivitelezési technikára nagyon érzékeny módszer, és képes a beteg-populációk között lévő igen kis különbségek érzékelésére. Minden laboratóriumban meg kell határozni a saját referencia tartományokat, az aktuálisan használt technikával, kontrollokkal, eszközökkel, és a vizsgált beteg populációra jellemző módon, a helyi eljárási szabályoknak megfelelően. 1. A pozitív eredmény arra utal, hogy a mintában cardiolipin IgA antitestek vannak, és más szerológiai tesztekkel és klinikai adatokkal együtt értékelve segíti a thrombosis kockázatának becslését szisztémás lupus erythematosus (SLE) vagy más lupus-szerű betegség fennállása esetén. 5

6 2. Az eredményeket APL egységekben kell megadni. 486 normál minta és 139 cardiolipin IgG, IgM és/vagy IgA pozitív minta vizsgálata alapján a javasolt küszöb (cutoff) érték 12 APL egység. Javasoljuk minden laboratóriumnak saját referencia taromány megállapítását. Még a kalibrációs görbe használata mellett is adódhatnak az alacsony értékek körül eltérések, amelyek a téves pozitív eredmények gyakori előfordulásáért felelősek. 9 Emiatt javasoljuk, hogy a 12 és 20 APL egységet felölelő eredményeket tekintsék kétesnek, és csak a >20 APL egységet tartalmazó mintákat értékeljék pozitívnak. Harris és Pierangeli javasolt egy alternatív szemi-kvantitatív eljárást az eredmények megadására. 9 Mi azt tanácsoljuk, hogy a APL egység közötti értékeket alacsonyközepes pozitívnak, a 80 APL egység fölöttieket pedig erősen pozitívnak értékeljék. 3. A negatív eredmény arra utal, hogy a betegnek nincs cardiolipin IgA antitestje, vagy annak koncentrációja nem éri el a teszt kimutathatósági küszöbét. 4. Javasoljuk, hogy a laboratórium által kiadott értékelés tartalmazza az alábbi meállapítást: Az itt következő eredmény az INOVA QUANTA Lite ACA IgA III ELISA használatával keletkezett. Más gyártók tesztjével kapott Cardiolipin IgA értékek ettől eltérőek lehetnek, váltakozva nem használhatók. A közölt IgA érték nagyságrendje nem vethető össze egy végpont-titer értékkel. A módszer korlátai 1. Az ACA klinikai jelentősége az SLE-től eltérő más betegségekben még vizsgálatok tárgya. 2. Ha negatív ACA eredményt kapunk klinikai tünetek fennállása mellett, lupus anticoaguláns vagy más kiegészítő vizsgálatok végzése, mint például anti-β 2 GPI meghatározása indokolt lehet. 3. Diagnózis nem állítható fel kizárólag az ACA vizsgálat eredménye alapján. Ezeket az eredményeket más orvosi vizsgálatok eredményével együtt kell értékelni. 4. Nem szabad kezelést indítani kizárólag egy pozitív ACA eredmény alapján. További megerősítő klinikai indikációk együttes jelenléte szükséges a kezeléshez. 5. A bizonyítottan aktív vagy szeropozitív syphilises betegek nagy százalékában pozitív lesz az ACA vizsgálat eredménye. Megerősítő vizsgálatokat kell alkalmazni a syphilis kizárására. 6. ACA megjelenhet átmenetileg is, különböző fertőzések esetén. Az ACA pozitív betegeknél megfelelő várakozási idő után a tesztet ismételten el kell végezni. 7. Ha az ACA PBS koncentrátum nem érte el a szoba hőmérsékletét, és nem keverték össze használat előtt, az eredmények megbízhatatlanok lehetnek. Várható értékek Referencia tartomány 486 random normál donor mintát teszteltek ACA IgA-ra. Nem találtak közöttük olyan mintát, amelyik a kétes, APL tartományba esett volna. Mind a 486 normál minta (100%) eredménye kisebb, vagy egyenlő volt 10 APL egységgel. ACA IgA normál mintákban Normál minták %-a % 0.0% 7.2% 2.5% 0.2% 0.0% 0.0% APL egység 6

7 Relatív szenzitivitás és specificitás Korreláció az INOVA Diagnostics második generációs ACA IgA tesztjével Összesen 625 mintát vizsgáltak paralell a második generációs ACA IgA teszttel és a harmadik generációs ACA IgA teszttel. A minták között volt a referencia tartomány meghatározásánál említett 486 normál minta, és 139 beteg mintája, amelyek igazoltan cardiolipin IgG, IgM és/vagy IgA pozitívak voltak. Az eredmények összegzése látható az alábbi táblázatban. QUANTA Lite ACA IgA III (harmadik generáció) - k Relatív Szenzitivitás 90.9% ACA IgA ELISA k* Relatív Specificitás 99.5% második generáció Relatív Hatékonyság 99.3% *kétes Precizitás és reprodukálhatóság A teszt sorozatok közötti (between run) precizitásának és reprodukálhatóságának vizsgálata egy erősen pozitív és egy negatív minta két-két párhuzamos mérésével történt, négy elkülönített analitikai sorozatban, négy egymást követő napon. A sorozaton belüli (within run) precizitás és reprodukálhatóság meghatározásához tizenhat ismételt mérést végeztek egy erősen pozitív és egy gyengén pozitív mintából, egyetlen analízis alkalmával. Az átlag, standard deviáció és a variációs koefficiens minden egyes mintára vonatkozóan az alábbi táblázatban látható. Erősen Pozitív Negatív APL átlag SD %CV APL átlag SD %CV Összesített % % Sorozaton belül % % Sorozatok között % % QUANTA Lite és INOVA Diagnostics, Inc. bejegyzett védjegyei. Copyright 2011 Minden jog fenntartva 7

8 Hivatkozások 1. Lancet i, (1985). 2. Clinics in Rheumatic Diseases 8, , Harris EN: A reassessment of the antiphopholipid syndrome. J Rheumatol 17:733, McNeil HP, Chersterman CN, Krilis SA: Immunology and clinical importance of antiphospholipid antibodies. Advances in Immunol 49: 193, Gharavi AE, Harris EN, Asherson RA, Hughes GRV: Anticardiolipin Antibodies: Isotype distribution and phospholipid specificity. Ann Rheum Dis 46: 1, Mahmood T, Racis SP, Krey PR: IgA anti-cardiolipin antibody (acla) in systemic lupus erythematosus(sle). Arthritis and Rheum 33: R45, Kalunian DC, Peter JB, Middlekauff HR, Sayre J, Ando DG, Mangotich M, Hahn BH: Clinical significance of a single test for anti-cardiolipin antibodies in patients with systemic lupus erythematosus. The Am J Med 85: 602, Weidmann CE, Wallace DJ, Peter JB, Knight PJ, Bear MB, Klinenberg JR:Studies of IgG, IgM and IgA antiphospholipid antibody isotypes in systemic lupus erythematosus. J Rheumatol 15: 74, The VII th International Symposium on Antiphospholipid Antibodies, October 9-13, 1996, Louisiana State University Medical Center. 10. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, A terméket előállítja: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Forgalmazásra jogosult az EU területén: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: HUN Július 2011 Revision 3 8