GEN-LAB Hírlevél 2014 I. szám
Grdiens djusztálás (I.) (RP-HPLC) Grdiens módszer A mozgó fázis ármlás során. összetétele változik grdiens A grdiens ármlás lehet csökkenő vgy növekvő. A grdiens elúció előnye, hogy felgyorsíthtjuk z elválsztást, mivel gyorsbbn eluálódó komponensek eltérő körülmények között eluálódnk z oszlopról, mint melyeknek ngyobb vissztrtás kolonnán. Az oldószer összetétel megváltozttásávl z elválsztndó komponensek szelektíven jobbn, vgy kevésbé köthetőek mozgó fázishoz. A k* értéke folymtosn változik (grdiensnél: 2<k*<10), hogyn mint áthld z oszlopon: z elválsztás elején k* értéke ngy és B (%) szerves összetétel lcsony, mjd szerves oldószer összetétel növekedésével, k* értéke kezd csökkenni z lábbi képlet lpján: k*=[(tgxf)/(δ%bxvmxs)] hol tg grdiens idő (perc), F z ármlási sebesség (ml/perc), Δ%B grdiens trtomány (5-95%=0,9), VM kolonn térfogt, S grdiens meredekség: S=0,25x(MW)0,5 hol MW molekul tömeg Péld: Kolonn: - hossz: 150 mm - átmérő: 4,6 mm - szemcseméret: 5 um - ármlási sebesség: 2 ml/perc, - grdiens trtomány: 5-100 %B (Δ%B =0,95) Kolonn térfogt: VM =5x10-4xLdc2=1,6cm3 Ahol L kolonn hossz, dc kolonn átmérője Grdiens idő: (h k*=2): tg=[(2x5x1,6x0,95)/2]=7,5perc Grdiens djusztálás Gyógyszerkönyvi módszer (USP, EP) esetén, hogy egy dott módszer lklms-e (megfelel-e rendszerlklmssági kritériumoknk) vizsgált gyógyszer htónyg, segédnyg, illetve gyógyszerkészítmény vizsgáltár, módszer vlidálás során tudjuk ellenőrizni. Amennyiben módszer nem megfelelő, úgy változttni szükséges kolonn prmétereit (oszlop hossz, belső átmérő, szemcseméret, kolonn hőmérséklet) illetve módszerben megdott egyéb HPLC körülményeket (ármlási sebesség, injektált térfogt, eluens összetétel, eluens puffer ph, eluens puffer koncentráció, detektálási hullámhossz). H változttás gyógyszerkönyvben megdott kritériumokt nem lépi túl, kkor nem szükséges módszer újrvlidálás. Nem gyógyszerkönyvi módszer esetén ugynezek szbályok érvényesek. H változttás z dott gyár áltl előírt SOP-bn megdott kritériumokt nem lépi túl, kkor nem szükséges újrvlidálni módszert. Akkor is szükséges módszer újrvlidálás, h gyártástechnológi változttásánk következtében mint mátrix is megváltozott. Ilyenkor vizsgált tétel z eredeti módszer szerint OOS-ként (out of specifiction) minősíthető. Amennyiben változnk z oszlop prméterei, vlmint z oszlop állófázis, úgy módszerben megdott grdienst, illetve HPLC körülményeket djusztálni szükséges. 2
Grdiens djusztálás (II.) (RP-HPLC) Grdiens idő, ármlási sebesség, injektált térfogt, nyomás, illetve htékonyság meghtározás z oszlop prmétereinek változttásánk htásár Grdiens idő (perc): (L2/L1)xtG1= tg2 hol L1 z eredeti, míg L2 z új kolonn hossz, tg1 z eredeti, míg tg2 z új kolonn grdiens ideje Ármlási sebesség (ml/perc): (d1)2]xf1=f2 [(d 2)2/ hol d1 z eredeti, míg d2 z új kolonn átmérője, F1 z eredeti, míg F2 z új kolonnán lklmzott ármlási sebesség Injektált térfogt (ml): (r12xl1)]=v2 V1x[(r22xL2)/ hol r1 z eredeti, r2 z új kolonn sugr, L1 z eredeti, L2 z új kolonn hossz, V1 z eredeti, V2 z új kolonnán lklmzott injektált térfogt Egy hosszbb, ngyobb átmérőjű és szemcseméretű oszlopról áttérve egy rövidebb, kisebb átmérőjű és szemcseméretű oszlopr, csökken grdiens idő, z ármlási sebesség és z injektált térfogt is, vgyis kevesebb eluens oldószer fogy. Ez módszer újrvlidálását jelenti. Várhtó nyomás P2=P1x[(d1/d2)2x(L2/L1)2x(F2/F1)] (br): hol d1 z eredeti, míg d2 z új kolonn átmérője, F1 z eredeti, míg F2 z új kolonnán lklmzott ármlási sebesség, L1 z eredeti, míg L2 z új kolonn hossz Htékonyság: N2=N1x[(d2/d1)x(L2/L1)] hol d1 z eredeti, míg d2 z új kolonn átmérője, N1 z eredeti, míg N2 z új kolonn htékonyság, L1 z eredeti, míg L2 z új kolonn hossz AK CI Ó A legfontosbb prméter grdiens idő. Holttérfogt (dwell volume) Amennyiben egy dott típusú (pl: Agilent 1100) HPLC készülékről krunk módszert trnszferálni egy másik lborbn lévő, eltérő típusú HPLC készülékre (pl: Shimdzu LC20), kkor készülékek kpillárisink, keverő pumpájánk különbözősége mitt holttérfogt lkulht ki rendszerben, így két készüléken eltérő retenciós időket, felbontásokt, rendszerlklmssági prmétereket tpsztlhtunk. Ilyen esetben szükséges lehet grdiens djusztálás. A holttérfogtot ki kell számolnunk (ml-ben) egy dott HPLC készülék típusr és módszerben grdiens megdásánál fel kell tüntetni, hogy milyen típusú és holttérfogtú HPLC készülékre vontkozik. Módszertrnszfereknél ez külön odfigyelést igényel. 3
Grdiens djusztálás (III.) (RP-HPLC) Europen Phrmcopei (EP) grdiens módszer követelmények United Sttes Phrmcopei (USP) grdiens módszer követelmények 1. Oldószer összetétel z eluensben és grdiensben: A végső grdiens összetétel nem lehet gyengébb, mint kiindulási eluens összetétel 1. Oldószer (reltív) 2. Holttérfogt: Két eltérő típusú HPLC készülék közötti módszer trnszfernél vn jelentősége 3. Mobil fázis engedélyezett ph: ennek változttás nem 4. Eluens puffer só koncentráció: ennek változttás nem engedélyezett 5. Állófázis: C18 nem cserélhető ki C8-r, csk eltérő gyártótól szármzó C18-r 6. Részecskeméret: engedélyezett ennek változttás nem 7. Kolonn hossz: ± 70% 8. Kolonn belső átmérő: ± 25% 9. Ármlási sebesség: djusztálni szükséges, mennyiben változik kolonn prmétere 10. Kolonn hőmérséklet: ± 5 C 11. Detektálási hullámhossz: ennek változttás nem engedélyezett 12. Injektált térfogt: djusztálni szükséges, mennyiben változik kolonn prmétere 4 összetétel z eluensben: ± 30% 2. Holttérfogt: Két eltérő típusú HPLC készülék közötti módszer trnszfernél vn jelentősége 3. Mobil fázis ph: ± 0,2 4. Eluens puffer só koncentráció: ± 10% 5. Állófázis: C18 nem cserélhető ki C8-r, csk eltérő gyártótól szármzó C18-r 6. Részecskeméret: csökkenthető: ± 50%-kl, de nem növelhető 7. Kolonn hossz: ± 70% 8. Kolonn belső átmérő: változtthtó 9. Ármlási sebesség: ± 50% 10. Kolonn hőmérséklet: ± 10 C 11. Detektálási hullámhossz: ennek változttás nem engedélyezett 12. Injektált térfogt: djusztálni szükséges, mennyiben változik kolonn prmétere
FILTERSYS eluensszűrő rendszerek Npjinkbn z UHPLC készülékek és z egyre kisebb szemcseméretű oszlopok elterjedésével egyidejűleg fokozott odfigyelést igényelnek z élettrtmot befolyásoló előkészületek és védelmi funkciót ellátó kiegészítők (mind készülék, mind kolonn tekintetében). Az egyik ilyen egyszerű, de nnál fontosbb lépés z eluens szűrése. HPLC/UHPLC minőségű előszűrt oldószerek hsznált esetén, h nem lklmzunk puffert, (és feltételezhetjük z oldószer megbízhtóságát), kkor szűréstől eltekinthetünk. Viszont puffer hsznált esetében mindenképp jánlott z eluens szűrése! Oszloptöltettől függően 3µm szemcseméret fölött elegendő 0,45µm-es membránnl, viszont 3µm vgy kisebb pórusméretű töltetnél szemcsék közötti tér már 0,45µm lá csökken, így hogy minden szennyezést biztosn kiszűrjünk, 0,2µm-es membránszűrőt kell válsztnunk. Grduted funnel Aluminum clmp Fontos még membrán és z oldószer komptibilitás. Ezzel kpcsoltbn mindig kérjünk tájékozttást gyártó/forglmzó cégtől. Legegyszerűbb, h olyn membránt válsztunk, mi áltlánosn hsználhtó HPLC-s mérésekhez, mint például regenerált cellulóz, vgy hidrofil teflon. Fritted support bse sá r lá s em br á nd ék m j á B s árm es zűr el et őb yik én e r k *. en om de p zé let s t m eg vá 20 0d b AK CI Ó n A Phenomenex Filtersys eluensszűrő rendszerek ~64Hgmm végvákuumig hsználhtók biztonságosn. Ktlógusszám Megnevezés (komplett berendezés) Ár (HUF) +Áf AH0-1566 1l-es szívóplck, 300ml-es tölcsérrel 118 685.- AH0-3314 2l-es szívóplck, 500ml-es tölcsérrel 147 735.- AH0-3315 4l-es szívóplck, 1l-es tölcsérrel 152 575.- Filter flsk *Az kció érvényes 2014. december 31-ig Az elérhető membránokról érdeklődjön kollégáinknál vgy e-milben z info@gen-lb.hu címen 5
Finomíts 8270D EPA módszerét! Zebron ZB-SemiVoltiles kolonnán A 8270D EPA módszer egy ngyon komplikált metódus, mely rengeteg mérendő komponenst fogll mgábn. Legkevesebb 80, de kár 200 vegyülettel is számolnunk kell klibrációs görbéink során. Ilyen ngy számok mellett z oszlop kiválsztás és módszer kidolgozás igencsk ngy kihívást jelent. A ZB-SemiVoltiles kolonn: Az Arilén Mátrix Technológiánk köszönhetően egy ngyon robosztus és lcsony vérzéssel rendelkező GC oszlop. Kiemelkedő elválsztást biztosít poliromás szénhidrogénekre. Kimondottn lklms GC/MS mérésekhez. Az lklmzhtó hőmérséklet-trtomány -60 C-tól 325/350 C-fokig terjed. Integrált előtétkolonnávl is rendelhető. Új, Enviro-Inert TM Technológi Az oszlop lcsony ktivitás mitt kilkult ngyfokú inertség okán mgs sv/bázis érzékenységet érhetünk el. Robosztusság hosszú élettrtmot és kiemelkedő reprodukálhtóságot tesz lehetővé. Ngyobb felbontást nyújt kulcsfontosságú elválsztásoknál, vlmint szebb csúcslkot biztosít svk, minok és PAH-ok esetében. A módszer továbbfejlesztésének lehetőségét z oszlop lábbi tuljdonsági tették lehetővé: Gyors futási idő mellett benzo[b]fluorntén és benzo[k]fluorntén csúcs felbontás megmrd. Kiváló csúcslk tipikusn nehezen mérhető fenolok és minok esetében. További lklmzások: A kolonn kifejezetten jól lklmzhtó félillékony komponensek, poliromások, svk és minok meghtározásához. Az EPA 525, 610, 625 és 8100 módszerek méréseinek elvégzéséhez is ngyszerű megoldást nyújtht. Oszlop Grnci: A fázis kiváló lterntívát jelent vlmennyi 5% fenil 95% dimetil-polisziloxán összetételű állófázis esetében, tehát nem tpsztlhtunk retenciós idő eltolódást zokhoz képest. Kolonn: Zebron ZB-SemiVoltiles GC Kpilláris oszlop Fázis: 5% fenil 95% dimetil-polisziloxán (Arilén Mátrix Technológi) Dimenziók: 30 m x 0,25 mm x 0,25 μm Kt. szám: 7HG-G027-11 Termosztát progrm: 40 C 0,5 percig; 280 C-r 40 C/perc-cel; 295 C-r 6 C/perc-cel, mjd 25 C/perc-cel 325 C-r; 2 percig 325 C Vivőgáz: Hélium, 1,4 ml/perc Injektálás: split 10:1; 1 μl (280 C) Detektálás: MS (340 C) 1. 4-Dioxne-d8, 2 1,4-Dioxne 3 N-Nitrosodimethylmine 4 Pyridine 5 2-Picoline 6 N-Nitrosomethylethylmine 7 Methyl methnesulfonte 8 2-Fluorophenol 9 N-Nitrosodiethylmine 10 Ethyl methnesulfonte 11 Phenol-d5 12 Phenol 13 Aniline 14 bis(2chloroethyl)ether 15 2-Chlorophenol 16 1,3-Dichlorobenzene 17 1,4-Dichlorobenzene-D4 18 1,4-Dichlorobenzene 19 Benzyl lcohol 20 1,2-Dichlorobenzene 21 2-Methylphenol 22 bis(2-chloro-1-methylethyl)ether 23 3-Methylphenol 24 4-Methylphenol 25 N-Nitrosopyrrolidine 26 N-Nitrosodi-n-propylmine 27 Acetophenone 28 N-Nitrosomorpholine 29 o-toluidine 30 Hexchloroethne 31Nitrobenzene-d5 32 Nitrobenzene 33 N-Nitrosopiperidine 34 Isophorone 35 2-Nitrophenol 36 2,4-Dimethylphenol 37 Benzoic cid 38 O,O,O-Triethylphosphorothiote 39 bis(2-chloroethoxy)methne 40 2,4Dichlorophenol 41 lph,lph-dimethylphenethylmine 42 1,2,4-Trichlorobenzene 43 Nphthlene-d8 44 Nphthlene45 4-Chloroniline 46 2,6-Dichlorophenol 47 Hexchloropropene 48 Hexchlorobutdiene 49NNitrosodi-n-butylmine 50 p-phenylenedimine 51 4-Chloro-3-methylphenol 52 Isosfrole 53 2-Methylnphthlene 54 1-Methylnphthlene 55 Hexchlorocyclopentdiene 56 1,2,4,5-Tetrchlorobenzene 57 2,4,6Trichlorophenol 58 2,4,5-Trichlorophenol 59 2-Fluorobiphenyl 60 Sfrole 61 2-Chloronphthlene 62 2-Nitroniline 63 1,4-Nphthoquinone 64 Dimethyl phthlte 65 1,3-Dinitrobenzene 66 2,6-Dinitrotoluene 67 Acenphthylene 68 3-Nitroniline 69Acenphthene-d10 70 2,4-Dinitrophenol 71 Acenphthene 72 4-Nitrophenol 73 Pentchlorobenzene 74 2,4-Dinitrotoluene 75 Dibenzofurn 76 1-Nphthylmine 77 2,3,4,6Tetrchlorophenol 78 2-Nphthylmine 79 Diethyl phthlte 80 Thionzin 81 4-Chlorodiphenyl ether 82 Fluorene 83 4-Nitroniline 84 2-Methyl-4,6-dinitrophenol 85 Diphenylmine 86 Azobenzene 87 2,4,6Tribromophenol 88 1,3,5-Trinitrobenzene 89 Di-llte 90 Phorte 91 Phencetin 92 4-Bromophenyl phenyl ether 93 Hexchlorobenzene 94 Dimethote 95 4-Aminobiphenyl 96 Pentchloronitrobenzene 97 Pentchlorophenol 98 Pronmide 99 Dinoseb 100 Disulfoton101 Phennthrene-d10 102 Phennthrene 103 Anthrcene 104 Methyl prthion 105 Di-n-butyl phthlte 106 Prthion 07 4-Nitroquinoline-1-oxide 108 Methpyrilene 109 Isodrin 110 Fluornthene 111 Benzidine 112 Pyrene-d10 113 Pyrene 114 Armite115 p-terphenyl-d14 116 p-dimethylminozobenzene 117 Chlorobenzilte 118 o-tolidine 119 Butyl benzyl phthlte 120 Kepone 121 2-Acetylminofluorene 122 3,3'-Dichlorobenzidine 123 Benz[]nthrcene 124 Chrysene-d12 125 Chrysene 126 bis(2-ethylhexyl)phthlte 127 Dioctyl phthlte 128 Benzo[b]fluornthene 129 Benzo[k]fluornthene 130 Benzo[]pyrene 131 Perylene-d12 132 3-Methylcholnthrene 133 Indeno[1,2,3-cd]pyrene 134 Dibenz[,h]nthrcene 135 Benzo[g,h,i]perylene 6
A hónp HPLC lklmzási Ft-soluble vitmins on Synergi Hydro-RP Elúció típus: Izokrtikus A eluens: Acetonitril B: Metnol Grdiens profil: Lépés. Idő (perc) 1 0 A 75 B 25 Ármlási sebesség: 2 ml/perc Termosztát: szobhőmérséklet Detektálás: UV - 280 nm (22 C) 1 Vitmin A impurity 2 Vitmin A 3 Vitmin A cette 4 Vitmin K2 5 Vitmin D2 6 Vitmin D3 7 Vitmin E 8 Vitmin E cette Wter-soluble Vitmins on Kinetex 2.6u, C18, 75x4.6 by HPLC Elúció típus: Grdiens A eluens: 3g N 1-hexánszulfonát monohidrát/0.4ml Trietil-min/15mLEcetsv, 1985ml vízben B eluens: Metnol Grdiens profil: Lépés. Idő (perc) A B 1 0 95 5 2 6 53 47 3 6.1 2 98 4 7.5 2 98 5 7.51 95 5 6 11 95 5 Ármlási sebesség: 0.5 ml/perc Termosztát: 25 C Detektálás: UV - 270 nm (22 C) 1 Ascorbic cid 2 Pyridoxl 5'-phosphte 3 Nicotinic cid 4 4-Pyridoxic cid 5 Nicotinmide 6 Riboflvin 5'-phosphte 7 Pyridoxl 8 Pyridoxine 9 Coblmine 10 Folic cid 11 Pyridoxmine 12 Riboflvin 13 Thimine 7
A hónp GC lklmzási Cognc Stndrd on ZB-WAXplus Kolonn: Zebron ZB-WAXplus, GC Cp. kolonn 30 m x 0.25 mm x 0.25 µm Kt. szám: 7HG-G013-11 Fázis: Polyethylene Glycol (PEG) Dimenziók: 30 m x 0.25 mm x 0.25 µm Termosztát progrm: 35 C 6 percig; 60 C-r 5 C/perc-cel; 60 C 2 percig; 210 C-r 10 C/perc-cel Vivőgáz: Hidrogén, 1 ml/min Injektálás: Split 25:1 1 µl @ 210 C Detektálás: FID (230 C) Mint: 200 ppm metilén-klorid oldtbn 1 Acetldehyde 2 Isobutnl 3 Ethyl formte 4 Acrolein 5 Ethyl cette 6 Acetl 7 Methnol 8 Methylene chloride 9 Ethnol ethnol 10 Isobutyl cette 11 2-Butnol 12 Ethyl butyrte 13 1-Propnol 14 Isobutnol 15 Allyl lcohol 16 Isomyl cette 17 1-Butnol 18 4-Methyl-2-pentnol 19 Methyl-2-butnol 20 Methyl-3-butnol 21 Ethyl cprote 22 Ethyl heptnote 23 Ethyl lctte 24 Hexnol 25 cis-3-hexenol 26 Ethyl cprylte 27 Furfurl 28 Benzldehyde 29 Linlool 30 Linlyl cette 31 Ethyl cprte 32 Diethyl succinte 33 Ethyl lurte 34 2-Phenylethnol Itlin Wines using ZB-WAX nd FID Kolonn: Zebron ZB-WAXplus, GC Cp. Column 30 m x 0.32 mm x 0.25 µm, E Kt. szám: 7HM-G013-11 Fázis: Polyethylene Glycol (PEG) Dimenziók: 30 meters x 0.32 mm x 0.25 µm Termosztát progrm: 40 C 5 percig; 150 C-r 5 C/perc-cel; 150 C 5 percig; 220 C-r 20 C/perc-cel; 220 C 2 percig Vivőgáz: Hélium, 2.3 ml/perc Injektálás: Split 10:1 0.2 µl @ 150 C Detektálás: FID (280 C) Megjegyzés: mintát 0,2µm RC membránszűrés után direkt injektáltuk 1 Acetldehyde 2 Ethyl cette 3 Methnol 4 Ethnol ethnol 5 Propnol 6 Isobutnol 7 3-Methyl-1-butnol 8
Fotópályázt újr 2014-ben Kedves Olvsóink! Szeretnénk hideg téli npokb egy kis játékot csempészni, természetesen kizárólg kromtográfiávl kpcsoltbn. Sokn Önök közül már megismerhették konferenciák, kiállítások tombolái lklmávl Phenomenex plüss álltit is, és tlán már rendelkeznek is egyikükkel. Ezzel kpcsoltbn várjuk olyn kromtográfiához kpcsolódó fotóikt, melyek főszereplői Phenomenex plüssálltok Fontos!! H Ön még nem rendelkezik ilyen plüssel és részt szeretne venni pályáztunkon, z info@gen-lb.hu emil címen jelezze részvételi szándékát és mi küldünk Önnek egyet Phenomenex plüssei közül. Az elkészült fotókt elektronikus formátumbn z info@gen-lb.hu emil címre várjuk. Engedjenek meg egy kis vissztekintést korábbi beküldött fotókból.. A legjobb, legviccesebb műveket természetesen díjzzuk A jelentkezés mellé kérjük dják meg, hogy milyen címre küldhetjük plüssöket. Legutóbbi negtív tpsztltink mitt plüssöket jánlott levélként djuk fel Önöknek, hogy véletlenül se keveredjenek el posti kézbesítés lklmávl. Plüsseink korlátozott számbn elérhetőek, ezért kérjük Önöket, hogy minél előbb jelezzék részvételi szándékukt. 9
Horgászverseny 2013 Idén, hrmdik lklomml is megrendeztük már hgyományosnk nevezhető kromtográfiás horgászversenyt. Most is Préri horgásztó dott otthont z eseménynek. Csodáltos nyár végi időnk volt, tlán ennek is köszönhető, hogy 37 lelkes horgász, és 11 cspt mérte össze tudását. A két fordulós versenyben összesen 134kg hl került horogr. A fordulók közti szünetben pedig egy finom mrhpörkölt csillpított z izglmk mitt is megéhezett sportolókt. Természetes, hogy minden versenyen vnnk szerencsésebbek, mint z bszolút győztes Auricoop cspt, kik z egyéni, és cspt versenyt is megnyerték, illetve legngyobb hl díj is ide került, igz, nyertes csk egyéniben indult. És z idén is előfordult, többekkel hogy hlt nem, csk botot fogott. Csládi esemény lévén gyermekek is megtlálták számításukt, szomszédos tvon tudtk versenyen kívül horgászni. A ngy sikerre vló tekintettel jövőre gyermek ktegóriát is indítunk! Őt sem ette meg senki, visszkerült tób! Regisztráció Csendélet tvon A legngyobb hl és horgász Mi úgy gondoljuk, hogy ez egy jól sikerült np volt, reméljük, ki eljött hsonlón vélekedik. Itt is szeretnénk megköszönni részvételt, természetesen grtulálunk nyerteseknek, és reményeink szerint tlálkozunk jövőre is! A képeket köszönjük Káti Gbi kollégánknk! A teljes képgléri elérhető www.gen-lb.hu/hirek honlpon! Eredmények: Egyéni verseny: Sirok Dávid, Auricoop (30,23kg) Dr. Bjor Zoltán, Auricoop (18,08kg) Emri Zsófi (13,82kg) Cspt verseny: Auricoop (61,59kg) SERVIER I. (19,51kg) SOTE (9,35kg) Legngyobb Hl: Emri Zsófi (5,67kg) Legkisebb hl: Abrnkó László (140g) 10