Sejtterápia
Sejtfeldolgozás Felhasználás Fagyasztva tárolás Sejtmosás Alap sejtszelekció Komplex sejtszelekció Ex vivo sejtszaporítás Sejtaktiválás Immunizálás Génmodifikálás Köldökzsinórvér bank Limfocita génterápiás termék Plazma eltávolitás Reagens eltávolítás (pl. citokin, antitest, médium) Incompatibilis vvt eltávolítása Mononuklearis sejtek dúsítása CD14 + monociták dúsítása CD34 + csontvelői-, vér őssejtek dúsítása CD8 + limfocita depléció Felnőtt őssejtek szaporításon alapuló szelekciója Gén-manipulált limfociták Antigénnel feltöltött dendritikus sejtek Gén-manipulált őssejtek Limfocita-alapú immunterápia NK sejt-alapú immunterápia Dendritikus sejt-alapú immunterápia Génpótlás Szuicid gének bevitele
Őssejtterápia
Az őssejtek terápiás felhasználásának lehetőségei Csontvelő átültetés Szövetek pótlása: + máj, porc, csont, vese
Az őssejt transzplantáció chronológiája Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) 1957-első csontvelő átültetés; Edward Donall Thomas és mtsai; Nobel díj 1990-ben 1973-első magyar őssejt átültetés; Dr. Kelemen Endre 1984-első magyar csontvelő transzplantáció; Dr. Kelemen Endre és Dr. Hollán Zsuzsa 1989-köldökzsinórvér transzplantáció; Broxmeyer és Gluckmann 1998-PBMC transzplantáció; Reiffers és Gorin
Őssejt transzplantációs lehetőségek Allogén: testvér, rokon, idegen Autológ: saját Szingén: egypetéjű ikrek
Az őssejtek gyűjtése 1. embrió (tiltott) 2. csontvelő (aspiráció) 3. perifériás vér (G-CSF, majd aferezis) 4. köldökzsinórvér 5. zsírszövet (kísérleti)
1.
Blastocyta
2. Csontvelővétel
3. Leukaferezis
Sejtszeparáló készülékek GAMBRO COBE 2991 ELUTRA
Sejtszeparáló készülékek FRESENIUS AS 104
4. Köldökzsinórvér tárolása születés után
CliniMACS sejtszeparáló készülék
A sejtek jelölése szelekcióhoz
A CliniMACS készülék mágnescsapdája
A CliniMACS készülék működése
Minőségellenőrzés Biztonság Tisztaság/identifikálás Hatékonyság Stabilitás Sterilitás Endotoxin Mycoplasma Fertőző ágensek Sejtszám Életképesség (Tripán kék, akridin orange, propidium jodid, 7-ADD) Sejttipizálás (morfológia, immunfenotípus-flow cytometria) Maradék anyagok visszamérése Klonális szaporodási készség Citotoxicitás Antigén prezentáció Metabolikus-, szintetizáló képesség Rövid és hosszú idejű tárolást követő funkcionális aktivitás
MINŐSÉGELLENŐRZÉS ŐSSEJT Sejtszám Fenotípus vizsgálat (CD34 + ) Életképesség Endotoxin (LAL) Sterilitás (Ph.Hg.VIII. és Ph. Eur. 4.) Funkcionális tesztek: kolónia képzés, migráció
Csontvelő-transzplantációs szoba
Az allogén őssejttranszplantáció indikációi Veleszületett Immundeficiencia Vérképzőszervi betegségek anemia neutropenia trombocitopenia Anyagcserezavarok Szerzett Aplasztikus anémia Szerzett immunhiány szindróma Tiszta vörösvérsejt aplázia Tiszta megakariocita hiány Langerhans histiocitózis
Őssejttranszplantáció hematológiai betegségekben Autológ Malignus limfómák Mielóma multiplex Szolid tumorok Allogén Akut leukémiák Krónikus mieloid leukémia Mielodiszpláziás szindróma Mieloproliferatív betegségek
A sejtregeneráció kinetikája őssejt transzplantáció után 1. Phagocyták (polymorphonucleáris és mononucleáris) 2-3 hét 2. NK sejtek (CD3 - CD16 + CD56 + sejtek) 1 hó 3. T lymphocyták (CD3 + sejtek) 3-6 hó CD8 + CD4 + CD45RO + (memória) gyors CD45RA + (naiv) lassú, évek alatt 4. B sejtek (évek alatt) IgM IgG IgA (oligo/monoklonális ea)
A donor T sejtek szerepe 1. A transzplantált allogén donor őssejtek rejectiójának gátlása 2. Reziduális malignus sejtek elpusztítása (ismételt donor T sejt infúzió) 3. GVHD allogén transzplantáció esetén (T és NK sejtek mediálják)
Dendritikus sejt-alapú tumor vaccina
A dendritikus sejtek physiologiája
Dendritikus sejtek előállítása in vitro
MINŐSÉGELLENŐRZÉS DENDRITIKUS SEJT Sejtszám Fenotípus vizsgálat (CD86 +, CD1a, CD-SIGN) Életképesség Endotoxin (LAL) Sterilitás (Ph.Hg.VIII. és Ph. Eur. 4.) Funkcionális tesztek: IL-12 termelés, migráció, T sejt osztódás indukciója, IFNγ termelés indukció.
NaCl NaCl
2h 48h
SZÁMÍTÓGÉPES MONITOROZÓ RENDSZER
Primum nil nocere Először is ne árts