Kreatin kináz-mb folyékony Rendelési információk Olyan analizátor(ok), amely(ek)en a készlet(ek) alkalmazható(k)

Átírás

1 Rendelési információk Olyan analizátor(ok), amely(ek)en a készlet(ek) alkalmazható(k) Creatine Kinase MB liquid ([1] 6 x 20 ml, [2] 6 x 5 ml) Roche/Hitachi MODULAR P Creatine Kinase MB liquid ([1] 6 x 66 ml, [2] 6 x 16 ml) Roche/Hitachi MODULAR P Creatine Kinase MB liquid ([1] 12 x 22 ml, [2] 6 x 10 ml) Roche/Hitachi C.f.a.s. CK MB (3 x 1 ml) Kód: Precinorm CK MB (4 x 3 ml) Kód: Precipath CK MB (4 x 3 ml) Kód: PreciControl ClinChem Multi 1 (20 x 5 ml) Kód: PreciControl ClinChem Multi 1 (4 x 5 ml) Kód: PreciControl ClinChem Multi 2 (20 x 5 ml) Kód: PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml) Kód: 392 Egyes feltüntetett analizátorokhoz és készletekhez nem feltétlenül lehet minden országban hozzáférni. További rendszeralkalmazásokról a helyi Roche Diagnostics képviselet adhat információt. Magyar Rendszerinformáció Roche/Hitachi MODULAR P analizátorok esetén: ACN 060. Alkalmazás Immun-inhibíciós vizsgálati eljárás a kreatin-kináz MB izoenzimjének in vitro mennyiségi meghatározására humán szérumból és plazmából Roche automata klinikai kémiai analizátorokon. Összegzés 1,2,3,4,5,6 A kreatin-kináz (CK) egy dimer enzim, mely négy különböző alakban fordul elő: egy mitokondriális és három citoszol (a CK MM - harántcsíkolt izom eredetű -, a CK BB - agyi eredetű - és a CK MB - szívizom eredetű) izoenzim formájában. A CK MB meghatározása (pl. akut miokardiális infarktus vagy szívizom gyulladás esetén) fontos eleme a miokardiális iszkémia diagnózisának. A CK MB-t először a kardiális tünetek fellépése után kb. 3 8 órával lehet a vérben kimutatni, és ezután még hosszú időn keresztül kimutatható marad. A CK MB más klinikai körülmények között (pl. rabdomiolízis és szélütés (sztrók) esetén) is megjelenhet. A laboratóriumi diagnosztikai eljárások közül az össz-ck, a myoglobin és a troponin-t meghatározása tudhat segítséget nyújtani ahhoz, hogy ezeket a klinikai képeket el lehessen egymástól különíteni. A CK MB meghatározás szenzitivitása függ attól, hogy milyen időpontban történt a mintavétel. Emiatt fontos lehet a vizsgálatot többször megismételni. Az eljárás alapelve 6 Immunkémiai UV vizsgálat Minta és R1 hozzáadása R2 hozzáadása és a reakció elindulása: A humán CK MB két alegységből (CK M és CK B) áll, amelyek egy-egy aktív résszel rendelkeznek. A specifikusan CK M elleni antitestek úgy gátolják a CK M alegységek katalitikus aktivitásának 99.6 %-át, hogy az nem érinti a CK B alegységeket. A megmaradó CK B aktivitást - amely a CK MB aktivitás felének felel meg - a készülék - az össz-ck eljáráshoz hasonlóan - a CK NAC eljárással határozza meg. Mivel szérumban a CK BB izoenzim csak ritkán jelenik meg, ezért a CK M és a CK B alegységek katalitikus aktivitása alig különbözik, így a CK MB izoenzim katalitikus aktivitását a mért CK B aktivitás 2-vel történő megszorzásával lehet kiszámítani. Reagensek - munkaoldatok R1 Imidazol puffer: 123 mmol/l, ph 6.5 (37 C); EDTA: 2.46 mmol/l; Mg 2+ : 12.3 mmol/l; ADP: 2.46 mmol/l; AMP: 6.14 mmol/l; diadenozin-pentafoszfát: 19 µmol/l; NADP (élesztő): 2.46 mmol/l; N acetil-cisztein: 24.6 mmol/l; HK (élesztő): 36.7 µkat/l (25 C); G6P DH (E. coli): 23.4 µkat/l (25 C); tartósítószer; stabilizálószer; adalékanyag. R2 CAPSO a) puffer: 20 mmol/l, ph 8.8 (37 C); glükóz: 120 mmol/l; Mg 2+ : 11 mmol/l; EDTA: 2.46 mmol/l; kreatin-foszfát: 184 mmol/l; 4 CK M elleni monoklonális antitest (egér), gátló-kapacitás: > 99.6 % legfeljebb 66.8 µkat/l (4000 U/L) (37 C) CK M alegység; tartósítószer; stabilizálószer; adalékanyag. a) CAPSO: 3 [ciklohexil-amino] 2 hidroxi 1 propán-szulfonsav Óvintézkedések és figyelmeztetések In vitro diagnosztikai felhasználásra. A laboratóriumi reagensek kezelésénél szükséges normál óvintézkedéseket kell foganatosítani. A keletkező hulladékanyagokat a helyi előírásoknak megfelelően kell kezelni. A biztonsági adatlapot a szakmai felhasználóknak kérésükre megküldjük. A készlet olyan összetevőket tartalmaz, amelyek az 1272/2008 (EK) rendelet szerint az alábbi minősítésűek: Veszély H360D Megelőzés: P201 P202 P281 Ellenintézkedés: P308 + P313 Tárolás: P405 Károsíthatja a születendő gyermeket. Használat előtt ismerje meg az anyagra vonatkozó különleges utasításokat. Ne használja addig, amíg az összes biztonsági óvintézkedést el nem olvasta és meg nem értette. Az előírt egyéni védőfelszerelés használata kötelező. Expozíció vagy annak gyanúja esetén: Orvosi ellátást kell kérni. Elzárva tárolandó. Elhelyezés hulladékként: P501 Az edényt / tartalmát hulladékként egy tanúsított hulladékkezelő telepen kell elhelyezni. A termékbiztontonsági feliratozás főként az EU GHS irányelveket követi. Nemzetközi ügyfélkapcsolati telefonszám: / 5

2 A reagensek kezelése R1: Felhasználásra kész. R2: Felhasználásra kész. Tárolás és eltarthatóság A felnyitatlan készlet összetevői: 2 8 C-on a lejárati dátumig. Ne fagyasszák le. R1: Felnyitva és hűtve az analizátoron: 4 hét R2: Felnyitva és hűtve az analizátoron: 4 hét Mintagyűjtés és -előkészítés Mintagyűjtéshez és -előkészítéshez csak a megfelelő csöveket ill. gyűjtőedényeket szabad alkalmazni. Csak az alábbi mintatípusokat vizsgáltuk meg és találtuk megfelelőnek. Szérum Plazma: Heparinos (Li-, NH 4+ -) vagy EDTA-s (K 2 -, K 3 -) plazma. A felsorolt mintatípusokat a vizsgálat idején kereskedelmi forgalomban elérhető mintavételi csövek egy kiválasztott csoportjával vizsgáltuk, vagyis nem az összes gyártó összes beszerezhető csövét teszteltük. Az egyes gyártók mintavételi rendszerei ezektől eltérő anyagokat tartalmazhatnak, amelyek esetenként hatással lehetnek a teszteredményekre is. A primer csövekből (mintavételi rendszerek) történő mintafeldolgozás során a cső gyártójának az előírásai szerint kell eljárni. A kicsapódásokat tartalmazó mintákat a mérés elvégzése előtt le kell centrifugálni. Eltarthatóság: 7 Szérum Heparinos plazma Eltarthatóság: C-on 8 óra C-on 8 óra 2 8 C-on 8 nap 2 8 C-on 5 nap -20 C-on 4 hét -20 C-on 8 nap EDTA-s plazma C-on 2 nap 4 8 C-on 7 nap -20 C-on 1 év A CK MB vizsgálat végrehajtása előtt meg kell határozni a CK NAC eljárással az össz CK aktivitást,. Az alkalmazott antitestek 66.8 µkat/l (4000 U/L) koncentrációig képesek (37 C-on) a CK M alegység aktivitását gátolni. Ezért a (37 C-on) 66.8 µkat/l (4000 U/L) feletti össz CK aktivitású mintákat meghígítva vagy csökkentett mintatérfogattal újra le kell mérni, mivel egyébként az antitestek nem tudnak teljes gátlást biztosítani. Roche/Hitachi analizátorok újramérés (rerun) szolgáltatással: Ha a mért össz CK aktivitás meghaladja a 66.8 µkat/l (4000 U/L) szintet, akkor a CK MB meghatározást csökkentett mintamennyiséggel kell elvégezni. Roche/Hitachi készülékek újramérés szolgáltatás nélkül: Ha a mért össz CK aktivitás meghaladja a 66.8 µkat/l (4000 U/L) szintet, akkor a CK MB vizsgálat végrehajtása előtt 0.9 %-os NaCl oldattal vagy desztillált/ionmentes vízzel (pl arányban) meg kell a mintát manuálisan hígítani. A mért eredményt meg kell szorozni az alkalmazott hígítási tényezővel (a fenti esetben ez 5). A gyártó által biztosított anyagok A reagenseket lásd a "Reagensek - munkaoldatok" c. részben. További szükséges (de a csomagban nem található) anyagok Lásd a "Rendelési információk" c. részt 0.9 %-os NaCl oldat Általános laboratóriumi felszerelés A vizsgálat elvégzése Az optimális vizsgálati teljesítmény elérése érdekében a jelen dokumentumnak az érintett analizátorra vonatkozó előírásai szerint kell eljárni. A vizsgálatra vonatkozó analizátor specifikus előírásokat a megfelelő felhasználói kézikönyv tartalmazza. Az általa nem validált alkalmazások teljesítményét a Roche nem garantálja, azt a felhasználónak kell megállapítania. Kalibráció Visszavezethetőség: Ezt az eljárást az IFCC által javasolt eredeti anyaggal és eljárással 9 szemben, inhibitáló antitest hozzáadásával, kalibrált pipetták valamint egy abszolút értékeket szolgáltató és szubsztrát specifikus abszorptivitású (ε) manuális fotométer segítségével hitelesítették. S1: 0.9 %-os NaCl oldat S2: C.f.a.s. CK MB Kalibráció gyakorisága: 2 pontos kalibrációt javaslunk reagenslot-váltás után ha a minőség-ellenőrzési eljárások után szükséges Minőség-ellenőrzés Minőség-ellenőrzésre a "Rendelési információk" c. részben felsorolt kontrollanyagok alkalmazhatók. Ezeken kívül más megfelelő kontrollanyagok is alkalmazhatók. A kontrollmérések gyakoriságát és a kontrollmérési határértékeket az adott laboratórium egyedi igényeinek megfelelően kell megállapítani. A mért értékeknek a megadott értékhatárokon belülre kell esniük. Minden laboratóriumnak javító intézkedéseket kell meghatároznia arra az esetre, ha a mért értékek kívül esnek a megadott tartományon. A vonatkozó központi és helyi minőség-ellenőrzési előírásokat és irányelveket kell alkalmazni. Számítás Az analizátor minden mintában automatikusan kiszámolja az analitaktivitást. Átváltási tényező: U/L x = µkat/l Korlátozások - interferencia Kritérium: Reprodukálhatóság az eredeti érték ± 10 %-on belül. Ikterusz: 10 Konjugált bilirubin esetén 60-as, nem-konjugált bilirubin esetén 20-as I-indexig (konjugált bilirubin koncentráció: kb µmol/l ill. 60 mg/dl; nem-konjugált bilirubin koncentráció: kb. 342 µmol/l ill. 20 mg/dl) nincs jelentősebb interferencia. Hemolízis: as H-indexig (hemoglobin-koncentráció kb.: 12.4 µmol/l ill. 20 mg/dl) nincs jelentősebb interferencia. Lipémia (Intralipid): as L-indexig nincs jelentősebb interferencia. Az L- index (amely a turbiditásnak felel meg) és a triglicerid-koncentráció között gyenge a korreláció. Előfordulhat, hogy az össz-ck értékéhez képest valószínűtlenül magas CK MB értékek mérhetők az olyan betegeknél, akiknél makro CK formák fordulnak elő, mivel a makro-formák főleg CK B alegységeket tartalmaznak. Mivel ezek a betegek általában nem estek át miokardiális infarktuson, ezért náluk további diagnosztikai intézkedésekre van szükség. 11 A Cyanokit (hidroxocobalamin) terápiás koncentrációkban interferál az eredménnyel. Gyógyszerek: Elterjedten alkalmazott gyógyszerekből álló panelek vizsgálata során terápiás koncentrációknál nem tapasztaltunk interferenciát. 12,13 A szulfalazin vagy a szulfapiridin fiziológiai plazmakoncentrációi téves eredményeket okozhatnak. Rendkívül ritkán a gammopátia - különösen az IgM típusú (Waldenström makroglobulinémia) - megbízhatatlan eredményeket okozhat. 14 Diagnosztikai célokra az eredményeket mindig a beteg kórtörténetével, klinikai vizsgálataival és egyéb leleteivel együtt kell értelmezni. SZÜKSÉGES TEVÉKENYSÉG Speciális átmosás programozása: Ha Roche/Hitachi analizátorokon bizonyos vizsgálatok követik egymást, akkor speciális átmosási lépéseket kell közéjük iktatni. Bővebb információ ezekről az átszennyezés-elkerülési listák (Carry over evasion list) legújabb verziójában olvasható. A beálítással kapcsolatos teendőket a felhasználói kézikönyv ismerteti. Szükség esetén a speciális átmosást/átszennyezés elkerülést még a jelen vizsgálat eredményeinek kiadása elé be kell programozni. Határértékek és tartományok Mérési tartomány Roche/Hitachi 902 analizátor µkat/l ( U/L) 2 / 5

3 Újramérési szolgáltatással nem rendelkező készülékeken a mintát manuálisan kell 0.9 %-os NaCl oldattal vagy desztillált/ionmentes vízzel (pl arányban) meghígítani. A mért eredményt meg kell szorozni az alkalmazott hígítási tényezővel (a fenti esetben ez 3). Roche/Hitachi MODULAR P analizátorok µkat/l ( U/L) A magasabb koncentrációjú mintákat az újramérési (rerun) szolgáltatás segítségével kell meghatározni. Az újramérési (rerun) szolgáltatás a mintákat 1:3 arányban hígítja meg. Az újramérési szolgáltatás által meghígított mintákon mért eredményeket a rendszer automatikusan megszorozza az alkalmazott hígítási tényezővel (ami itt 3). A mérés alsó határértékei Blankhatár (Limit of Blank - LoB), észlelési határ (Limit of Detection - LoD) és mennyiségi meghatározási határ (Limit of Quantitation - LoQ) LoB LoD LoQ = 0.05 µkat/l (3 U/L) = 0.10 µkat/l (6 U/L) = 0.12 µkat/l (7 U/L) A blankhatár és az alsó észlelési határ értékét a CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) EP17 A követelményeivel összhangban határoztuk meg. A LoB az analitmentes minták több független mérési sorozatának n 60 meghatározásából számított 95. percentilis érték. A blankhatár annak a koncentrációnak felel meg, amely alatt 95 %-os valószínűséggel analitmentes minták találhatók. Az észlelési határt a blankhatárból és az alacsony koncentrációjú minták szórásából (SD) lehet meghatározni. Az észlelési határ a legalacsonyabb mérhető analit koncentrációnak felel meg (95 %-os valószínűséggel a blankhatár feletti érték). A mennyiségi meghatározási határ alatti (< 0.12 µkat/l (< 7 U/L)) értékeket a készülék nem látja el hibajelzéssel. A mennyiségi meghatározási határ az a legkisebb analit koncentráció, amely 20 %-os mérési sorozatok közötti variációs együttható mellett reprodukálhatóan mérhető. Ezt az értéket alacsony kreatin-kináz koncentrációjú minták segítségével határoztuk meg. Referencia-értéktartomány A referencia időközök hossza erősen függ a betegcsoporttól és az egyedi klinikai viszonyoktól. Egészséges személyekre, Klein és munkatársai szerint: 15, µkat/l (7 25 U/L) Miokardiális infarktus diagnózisához a CK és a CK MB (aktivitás) együttes alkalmazása. Hosszútávú tapasztalatokon alapuló CK konszenzus érték: 16, 17 µkat/l U/L 1 CK férfiak > 3.17 > 190 CK nők > 2.78 > CK MB > 0.40 > 24 3 A CK MB aktivitás az össz CK aktivitás 6 25 % át teszi ki. Miokardiális infarktus gyanúja esetén általában az európai és amerikai kardiológusok konszenzusos dokumentumában megfogalmazott diagnosztikai stratégiai javaslatokat célszerű követni. 18 Ha a miokardiális infarktus gyanúja ellenére a mért értékek a kóros értékhatár alatt maradnak, akkor előfordulhat, hogy friss infarktusról van szó. Ilyenkor a meghatározást 4 óra elteltével meg kell ismételni. Minden laboratóriumnak meg kell vizsgálnia a megadott várható normál értékek adaptálhatóságát a saját betegcsoportjában, és ha szükséges, meg kell határoznia a laboratórium saját referencia értékeit. Jellemző teljesítményadatok Az alábbiakban ismertetjük az analizátorokon mért jellemző teljesítményadatokat. Az egyes laboratóriumokban kapott értékek ezektől eltérőek is lehetnek. Precizitás A precizitást egy belső protokoll (ismételhetőség - n = 21 - és köztes precizitás - mérési sorozatonként 3 adag, naponta 1 mérési sorozat, 21 napig) szerint, humán minták és kontrollok segítségével határoztuk meg. Az alábbi eredményeket kaptuk: Minta Ismételhetőség Átlag SD CV µkat/l U/L µkat/l U/L % Humán szérum I Kontrollszérum I Kontrollszérum II Minta Köztes precizitás Átlag SD CV µkat/l U/L µkat/l U/L % Humán szérum I Kontrollszérum I Kontrollszérum II Eljárások összehasonlítása A Roche CK MB liquid vizsgálati eljárás b) (y) összehasonlítása a Specord 200 spektrofotométeren végrehajtott CK NAK IFCC (37 C) + antitestek eljárással (x) az alábbi korrelációt mutatta (U/L): Passing/Bablok 19 Lineáris regresszió y = 1.03x y = 1.03x τ = r = Mért minták száma: 100 A mintaaktivitások és 4.24 µkat/l (1.6 és 254 U/L) közé estek. b) A CK NAC IFCC eljárással szemben (37 C-on) hitelesítve, antitestek hozzáadásával, manuálisan végrehajtva, és az ε moláris abszorptivitással kiszámítva. Irodalomjegyzék 1 Rozenman Y, Gotsman MS. The earliest diagnosis of acute myocardial infarction. Annu Rev Med 1994;45: Adams JE, Abendschein DR, Jaffe AS. Biochemical markers of myocardial injury: Is MB Creatine kinase the choice for the 1990s? Circulation 1993;88(2): Apple FS. Diagnostic markers for detection of acute myocardial infarction and reperfusion. Laboratory Medicine 1992;23: Jockers-Wretou E, Pfleiderer G. Quantitation of creatine kinase isoenzymes in human tissues and sera by an immunological method. Clin Chim Acta 1975;58: Neumeier D, Prellwitz W, Würzburg U, et al. Determination of creatine kinase isoenzyme MB activity in serum using immunological inhibition of creatine kinase M subunit activity - Activity kinetics and diagnostic significance in myocardial infarction. Clin Chim Acta 1976;73: Würzburg U, Hennrich N, Lang H, et al. Determination of creatine kinase-mb in serum using inhibiting antibodies. Klin Wschr 1976;54(8): Braun S, Röschenthaler F, Jarausch J, et al. Analyte Stability of Activity and ctnt in ICU Patient Serum and Heparin Plasma. Poster presented at Medica 2004, Düsseldorf. (Roche Diagnostics GmbH No ). 8 WHO Publication: Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations, WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2:Jan Schumann G, Bonora R, Ceriotti F, et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 C Part 2. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of Creatine Kinase. Clin Chem Lab Med 2002;40(6): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: / 5

4 11 Remaley AT, Wilding P. Macroenzymes: Biochemical Characterization, Clinical Significance, and Laboratory Detection. Clin Chem 1989;35: Breuer J. Report on the Symposium Drug effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9): Klein G, Berger A, Bertholf R, et al. Abstract: Multicenter Evaluation of Liquid Reagents for CK, and LDH with Determination of Reference Intervals on Hitachi Systems. Clin Chem 2001;47:Suppl. A Thomas L, Müller M, Schumann G, et al. Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum. J Lab Med 2005;29(5): Stein W. Strategie der klinischen-chemischen Diagnostik des frischen Myokardinfarktes. Med Welt 1985;36: Myocardial Infarction Redefined - A Consensus Document of the Joint European Society of Cardiology/ American College of Cardiology Committee for the Redefinition of Myocardial Infarction. Eur Heart J 2000;21: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Készülék-beállítások Roche/Hitachi MODULAR analizátor-felhasználók: Az alkalmazásparamétereket a vonalkódos lapról kell beolvasni. Roche/Hitachi 902 analizátor No. <Chemistry> 1 Test Name CK MB 2 Assay Code (Mthd) RATE A 3 Assay Code (2. Test) 0 4 Reaction Time 10 5 Assay Point Assay Point Assay Point Assay Point Wavelength (SUB) Wavelength (MAIN) Sample Volume R1 Volume R1 Pos R1 Bottle Size Small 15 R2 Volume 0 16 R2 Pos R2 Bottle Size Small 18 R3 Volume R3 Pos R3 Bottle Size Small 21 Calib. Type (Type) Linear 22 Calib. Type (Wght) 0 23 Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos S1 ABS 0 36 K Factor K2 Factor K3 Factor K4 Factor K5 Factor A Factor 0 42 B Factor 0 43 C Factor 0 44 SD Limit Duplicate Limit Sens. Limit S1 Abs. Limit (L) S1 Abs. Limit (H) Abs. Limit Abs. Limit (D/I) Increase 51 Prozone Limit 0 52 Proz. Limit (Upp/Low) Lower 53 Prozone (Endpoint) Expect. Value (L) Expect. Value (H) Instr. Fact. (a) 1 57 Instr. Fact. (b) 0 58 Key setting A felhasználó által beírt érték További információk az érintett analizátor felhasználói kézikönyvében, a vonatkozó alkalmazásleírásokban és az egyes szükséges összetevők módszerleírásában találhatók. Ebben az eljárásleírásban a decimális számértékek egész- és törtrésze közötti határ jelölésére decimális szeparátorként mindig tizedespontot (és nem tizedesvesszőt) használunk. A számjegyeket nem választjuk el hármasával. Szimbólumok Az ISO szabványban említetteken kívül a Roche Diagnostics az alábbi szimbólumokat és jelöléseket alkalmazza. GTIN A csomag tartalma Reagens Kalibrátor A jelentősebb változásokat a lap szélén függőleges vonalak jelölik. Elkészítés ill. keverés utáni térfogat Globális kereskedelmi áruazonosító szám 4 / 5

5 2014, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 5 / 5