Kinetikus UV teszt karbamid/karbamid nitrogén meghatározására Olyan Roche/Hitachi analizátor, amelyen a készlet(ek) alkalmazható(k)

Átírás

1 V16 Olyan Roche/Hitachi analizátor, amelyen a készlet(ek) alkalmazható(k) Kat. Sz. Flakon Tartalom 90 MODULAR Magyar REAGENT6 x 66 ml REAGENT6 x 43 ml REAGENT6 x 186 ml REAGENT6 x 118 ml REAGENT4 x 470 ml REAGENT4 x 93 ml REAGENT6 x 40 ml REAGENT3 x 49 ml A feltüntetett analizátorok és reagens készletek nem minden országban hozzáférhetőek. További rendszeralkalmazásokról a helyi Roche Diagnostics képviselet adhat információt. Rendszerinformáció Roche/Hitachi MODULAR P/MODULAR D analizátorok esetén: Urea ACN 418, ACN 419; BUN ACN 41, ACN 47. Alkalmazás Enzimatikus in vitro vizsgálat a karbamid/karbamid nitrogén mennyiségi meghatározására humán szérumban, plazmában és vizeletben Roche klinikai kémiai automata analizátorokon. Összegzés 1,,3,4,5,6,7,8,9 A karbamid meghatározás a legelterjedtebb teszt a vesefunkció értékelésére. Gyakran használják a kreatinin meghatározással együtt a prerenális hiperurémia (kardiális dekompenzáció, vízvesztés, emelkedett fehérje lebontás), a renális hiperurémia (glomerulonefritisz, krónikus nefritisz, policisztás vese, nefro-szklerózis, tubuláris nekrózis) és posztrenális hiperurémia (a vizeletelvezető rendszer elzáródása) differenciál diagnózisában. A karbamid a fehérjék és aminosavak anyagcseréjének végső lebontási terméke. A fehérjék katabolizmusuk során aminosavakra bomlanak és deaminálódnak. A képződött ammóniából karbamid keletkezik a májban. Ez a legfontosabb lebontási folyamat, amely eltávolítja a felesleges nitrogént az emberi szervezetből ban Marshall vezetett be egy eljárást, amellyel ureázzal vérből karbamid határozható meg. A karbamidból ureáz katalízis hatására felszabaduló ammóniát titrimetriásan mérték. Azóta számos más módszert is alkalmaznak a képződött ammónia mérésére. Ezek közé tartozik a Berthelot indofenol teszt és az ammónia reakciója Nessler reagenssel. Részleges módosításokat közölt Fawcett és Scott, vala-mint Chaney és Marbach ben Talke és Schubert írt le egy teljesen enzimatikus karbamid meghatározást, amely ureáz/glutamát dehidrogenáz (GLDH) enzimrendszert használt. A Roche karbamid/karbamid nitrogén teszt Talke és Schubert módszerén alapul; optimalizálták a kinetikus (fixált idő) mérést lehetővé tevő analizátorokra. Ez nagyobb linearitást és reagens stabilitást biztosít. A módszer alapelve Kinetikus UV teszt és R1 hozzáadása: R hozzáadása és a reakció elindulása: Az ureáz hidrolizálja a karbamidot; amiből CO 3 - és ammónia keletkezik. karbamid + ureáz NH 4+ + CO - 3 H O A képződött ammónia ezután GLDH jelenlétében reagál α-ketoglutaráttal és NADH-val; glutamát és NAD + keletkezik. α-ketoglutarát + NH 4+ + NADH GLDH L-glutamát + NAD + + H O Az NADH fogyással arányos abszorpciócsökkenés mérhető kinetikusan. Reagensek - munkaoldatok R1 CAPSO a puffer: 5 mmol/l, ph 9.65; NADH (élesztő) 0.3 mmol/l; tartósítószer R BICIN b puffer: 1000 mmol/l, ph 7.6; ureáz (szárnyasbab) 10 µkat/l; GLDH (marhamáj) 15.0 µkat/l; α-ketoglutarát 8.3 mmol/l; tartósítószer a) CAPSO = 3-[ciklo-hexil-amino]--hidroxi-1-propán-szulfonsav b) BICIN = N,N-b(-hidroxi-etil)-glicin Óvintézkedések és figyelmeztetések In vitro diagnosztikai felhasználásra. A laboratóriumi reagensek kezelésénél szükséges normál óvintézkedéseket kell foganatosítani. A biztonsági adatlapot a szakmai felhasználóknak kérésükre megküldjük. A keletkező hulladékanyagokat a helyi előírásoknak megfelelően kell kezelni. A reagensek kezelése R1: Felhasználásra kész R: Felhasználásra kész Tárolás és eltarthatóság A felnyitatlan készlet összetevői: 8 C-on a lejárati dátumig R1: Felnyitva és hűtve az analizátoron: 4 hét R: Felnyitva és hűtve az analizátoron: 4 hét gyűjtés és -előkészítés gyűjtéshez és -előkészítéshez csak a megfelelő csöveket ill. gyűjtőedényeket szabad alkalmazni. Csak az alábbi mintatípusokat vizsgáltuk meg, és találtuk megfelelőnek. Plazma: Li-heparinos, Na-heparinos vagy K-EDTÁs plazma. Ne használjanak ammónium-heparint. Eltarthatóság: 10 P 15 5 C-on 7 nap 8 C-on 7 nap (-15) (-5) C-on 1 év : Tartósítószer nélküli vizeletet kell használni. Eltarthatóság: C-on nap 8 C-on 7 nap (-15) (-5) C-on 4 hét Roche/Hitachi MODULAR analizátorok: A vizeletmintákat a készülék automatikusan arányban higítja 0.9 %-os NaCl oldattal vagy desztillált/ionmentes vizzel. A hígítást a készülék az eredmények kiszámításánál figyelembe veszi. Automatikus mintahígítás nélküli Roche/Hitachi analizátorok: A vizeletmintákat manuálisan kell 0.9 %-os NaCl oldattal vagy desztillált/ionmentes vízzel (pl arányban) meghígítani. A mért eredményt meg kell szorozni az alkalmazott hígítási tényezővel (a fenti esetben ez 11). A fenti mintatípusokat a vizsgálat időpontjában a kereskedelemben beszerezhető mintavételi csövek egy kiválasztott csoportjával, vagyis nem az összes gyártó összes csövével vizsgáltuk. Az egyes gyártók 01-07, V 16 Magyar 1 / 5 Roche/Hitachi D

2 mintavételi rendszerei ezektől eltérő anyagokat is tartalmazhatnak, amelyek esetenként a teszteredményekre is hatással lehetnek. Ha a minták feldolgozása primer csövekből történik (mintavételi rendszerek), akkor a cső gyártójának előírásai szerint kell eljárni. A csapadékokat tartalmazó mintákat a mérés elvégzése előtt le kell centrifugálni. A gyártó által biztosított anyagok A reagenseket lásd a "Reagensek - munkaoldatok" c. részben. További szükséges (de a csomagban nem található) anyagok Kalibrátor: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems), Kat. sz.: Kontrollok: Precinorm U, pl. Kat. sz.: vagy Precinorm U plus, Kat. sz.: ; Precipath U, Kat. sz.: vagy Precipath U plus, Kat. sz.: , PreciControl ClinChem Multi 1, Kat. sz.: , PreciControl ClinChem Multi, Kat. sz.: Kémények, Kat. sz.: %-os NaCl oldat Általános laboratóriumi felszerelés A vizsgálat elvégzése Az optimális hatékonyság érdekében a jelen dokumentumnak az érintett analizátorra vonatkozó előírásait kell követni. Az analizátor-specifikus vizsgálati előírásokat az adott analizátor felhasználói kézikönyve tartalmazza. A Roche nem vizsgálja ill. garantálja az általa nem validált alkalmazások hatékonyságát, arról a felhasználónak magának kell gondoskodnia. Kalibráció Visszavezethetőség: A módszert az SRM c 909b referencia anyaggal szemben standardizálták. /vizelet A kit használata ezért megkivánja a szín-kódolt "kémények" használatát. Ezek ugyanis csökkentik a NH 3 abszorpcióját. A kéményeket közvetlenül a megfelelő reagensfiolákba kell helyezni: fehér = R1. A kéményeket a készlet más reagensfioláihoz újra fel lehet használni. A kémények az összes rendszeren felhasználhatók. S1: 0.9 %-os NaCl oldat S: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems) Kalibráció gyakorisága -pontos kalibrációt javasolunk: 4 naponta reagens-lotváltást követően ha a minőség-ellenőrzési eljárások után szükséges c) SRM = Standard Reference Material Minőség-ellenőrzés /vizelet Minőségellenőrzésre a "Szükséges anyagok" c. részben felsorolt kontrollanyagokat kell hígítás nélkül használni. Ezeken felül más megfelelő kontrollanyagok is alkalmazhatók. A kontroll-intervallumokat és a határértékeket az adott laboratórium egyedi igényeinek megfelelően kell megállapítani. A mért értékeknek a megadott értékhatárokon belülre kell esniük. Minden laboratóriumnak meg kell határoznia, hogy milyen javító intézkedéseket kell foganatosítani, ha a mért értékek a megadott tartományon kívülre esnek. A minőségellenőrzésre vonatkozó helyi és kormányzati előírásokat kell alkalmazni. Számítás Az analizátor mindegyik mintában automatikusan kiszámítja az analit-koncentrációt. Átváltási tényezők: mg/dl karbamid x = mmol/l karbamid mmol/l karbamid x = mg/dl karbamid mg/dl karbamid nitrogén x = mmol/l karbamid mg/dl karbamid x = mg/dl karbamid nitrogén 4 órás vizeletminta esetén úgy lehet az eredményt g/4 óra ill. mmol/4 óra mértékegységben megkapni, hogy a mért értéket megszorozzák a 4 óra alatt gyűjtött vizelet térfogatával. Korlátozások interferencia Kritérium: Reprodukálhatóság az eredeti érték ± 10 %-on belül. Ikterusz: as I-indexig (konjugált és nem-konjugált bilirubin koncentráció kb.: 60 mg/dl ill. 106 µmol/l) nincs jelentősebb interferencia. Hemolízis: es H-indexig (hemoglobin-koncentráció kb.: 1000 mg/dl ill. 61 µmol/l) nincs jelentősebb interferencia. Lipémia (Intralipid): es L-indexig nincs jelentősebb interferencia. Az L-index (amely a turbiditásnak felel meg) és a triglicerid-koncentráció között csak alig van korreláció. A küvettában a GLDH-val történő meghatározás során keletkező ammónia interferál a karbamid/bun teszttel. Ezért ne installáljuk a karbamid/bun reagenst együtt a GLDH teszt reagensével. A vizeletben az endogén ammónium ionok interferálnak a karbamid/bun meghatározással. Emelkedett koncentrációk fordulhatnak elő savas állapotokban (pl. acidózis). Nagyon ügyeljen, hogy a minták és a kalibrátorok ne szennyeződjenek ammóniával. Igen ritkán a - különösen az IgM tipusú (Waldenstrom s makroglobulinémia) - gammopátia megbizhatatlan eredményeket okozhat. A diagnózis megállapítása során az eredményeket mindig a beteg klinikai vizsgálataival, kórtörténetével és egyéb leleteivel együtt kell értelmezni. SZÜKSÉGES TEVÉKENYSÉG Speciális átmosás programozása: Ha Roche/Hitachi analizátorokon bizonyos vizsgálatok követik egymást, akkor speciális átmosási lépéseket kell közéjük iktatni. Bővebb információ erről az Átszennyezés elkerülési listák (Carry-over evasion lists) és a felhasználói kézikönyv legújabb verziójában olvasható. Az USA felhasználók a speciális átmosási előírásokat a Special Wash Programming c. dokumentumban (a MyLabOnline honlapján) és a felhasználói kézikönyvben találhatják meg. Szükség esetén az eredmény-kiadási lépés elé speciális átmosást/átszennyezés elkerülést kell az érintett vizsgálatoknál beprogramozni. Határértékek és tartományok Mérési tartomány /plazma mmol/l (5 400 mg/dl karbamid ill. 186 mg/dl karbamid-nitrogén) Roche/Hitachi MODULAR P/MODULAR D analizátorok: A magasabb koncentrációjú mintákat az újramérési (rerun) szolgáltatás segítségével kell meghatározni. Az újramérési (rerun) szolgáltatás a mintákat 1:1.5 arányban meghígítja. Az újramérési szolgáltatás által meghígított mintákon mért eredményeket a rendszer automatikusan megszorozza az alkalmazott hígítási tényezővel (ami itt 1.5). Újramérési szolgáltatással nem rendelkező készülékeknél a mintát manuálisan kell 0.9 %-os NaCl oldattal vagy desztillált/ionmentes vízzel (pl arányban) meghígítani. A mért eredményt meg kell szorozni az alkalmazott hígítási tényezővel (a fenti esetben ez ). Roche/Hitachi 90 analizátor: mmol/l ( mg/dl karbamid ill mg/dl karbamid-nitrogén) A magasabb koncentrációjú mintákat a meghatározás előtt 0.9 %-os NaCl oldattal, vagy desztillált/ionmentes vízzel kell manuálisan meghígítani (pl. 1 + arányban). A mért eredményt meg kell szorozni az alkalmazott hígítási tényezővel (a fenti esetben ez 3). A 66.6 mmol/l (400 mg/dl karbamid ill. 186 mg/dl karbamid-nitrogén) műszaki határ alatti koncentrációjú mintákat hígítatlanul kell meghatározni. Rochel/Hitachi MODULAR P analizátor: mmol/l ( mg/dl karbamid ill mg/dl karbamid-nitrogén) A magasabb koncentrációjú mintákat az újramérési (rerun) szolgáltatás segítségével kell meghatározni. A mintákat az újramérési szolgáltatás 1:1.5 arányban meghígítja. Az újramérési szolgáltatás által meghígított mintákon mért eredményeket a rendszer automatikusan megszorozza az alkalmazott hígítási tényezővel (ami itt 1.5). A 66.6 mmol/l (400 mg/dl karbamid vagy 186 mg/dl karbamid-nitrogén) műszaki határ alatti koncentrációjú mintákat az újramérés szolgáltatás segítségével kell meghatározni. A mintákat hígítatlanul kell mérni. Roche/Hitachi / , V 16 Magyar

3 V16 A mérés alsó határértékei A vizsgálat alsó észlelési határa /plazma Alsó észlelési határ: 0.83 mmol/l (5 mg/dl karbamid ill. mg/dl karbamid-nitrogén) Alsó észlelési határ: 1.0 mmol/l (6 mg/dl karbamid ill..8 mg/dl karbamid-nitrogén). Az alsó észlelési határ az a legalacsonyabb mérhető analitszint, amely még megkülönböztethető a nullától. Ezt a legalacsonyabb standard fölött 3 tapasztalati szórásnyival fekvő értékként lehet meghatározni (1. standard + 3 SD, ismételhetőség, n = 1). Referenciatartomány (karbamid) /plazma mmol/l ( mg/dl) 4 órás gyűjtött vizelet mmol/4 h ( g/4 h), mmol/l ( g/dl) koncentrációnak felel meg L/4 h átlagos vizeletmennyiséggel számolva. Referenciatartomány (karbamid nitrogén) /plazma Felnőtt (18 60 éves): mmol/l (6-0 mg/dl) Felnőtt (60-90 éves): mmol/l (8-3 mg/dl) Csecsemő (< 1 éves): mmol/l (4-19 mg/dl) Csecsemő/gyermek: mmol/l (5-18 mg/dl) 4 órás gyűjtött vizelet: mmol/4 h (1 0 g/4 h), mmol/l ( mg/dl) koncentrációnak felel meg d Minden laboratóriumnak meg kell vizsgálnia, hogy a megadott normál értékek mennyiben alkalmazhatók a saját betegcsoportjára, és ha szükséges, akkor saját referenciaértékeket kell meghatároznia. d) L/4 h átlagos vizeletmennyiséggel számolva Tipikus hatékonysági jellemzők Az alábbiakban ismertetjük az analizátorok reprezentatív mérési jellemzőit. Az egyes laboratóriumokban kapott eredmények ettől eltérőek is lehetnek. Precizitás Karbamid A precizitást egy belső protokoll (ismételhetőség* - n = 1 - és köztes precizitás** - mérési sorozatonként 3 adag, naponta 1 mérési sorozat, 1 napig) szerint, humán minták és kontrollok segítségével határoztuk meg. Az alábbi eredményeket kaptuk: Humán szérum Precinorm U Precipath U kontrollok segítségével határoztuk meg. (n = 1), köztes precizitás** (mérési sorozatonként 3 adag, naponta 1 mérési sorozat, 1 napig). Az alábbi eredményeket kaptuk: Humán vizelet Humán vizelet Humán vizelet Karbamid-N kontrollok segítségével határoztuk meg. (n = 1), köztes precizitás** (mérési sorozatonként 3 adag, naponta 1 mérési sorozat, 1 napig). Az alábbi eredményeket kaptuk: Humán szérum Precitrol-N Precitrol-A kontrollok segítségével határoztuk meg. (n = 1), köztes precizitás** (mérési sorozatonként adag, naponta 1 mérési sorozat, 10 napig). Az alábbi eredményeket kaptuk: Humán vizelet kontroll kontroll * Ismételhetőség = sorozaton belüli precizitás ** köztes precizitás = teljes / sorozatok közötti / napok közötti precizitás Módszerek összehasonlítása Karbamid Roche/Hitachi 717 analizátorral Roche folyékony karbamid reagenst használva az új hullámhossz kombinációt (700/340 nm - y) a régivel (405/340 nm - x) összehasonlítva az alábbi korrelációt kaptuk (mg/dl karbamid): y = 1.01x y = 1.0x 1.4 r = 1.00 Mért minták száma: 85 A mintakoncentrációk 4.84 és 57.3 mmol/l (9 és 343 mg/dl) karbamid közé estek. Roche/Hitachi 911 analizátorral Roche folyékony karbamid reagensek segítségével összehasonlítottuk az új hullámhossz-párost (700/340 nm - y) a régivel (376/340 nm - x), és az alábbi korrelációt kaptuk (mg/dl karbamid): y = 0.99x y = 1.00x r = Mért minták száma: 53 A mintakoncentrációk 15.4 és 71 mmol/l (9 és 165 mg/dl) karbamid közé estek. Karbamid-N A Roche Diagnostics Germany folyékony karbamid reagenssel és Roche Diagnostics Corporation urea-n reagenssel Roche/Hitachi 917 analizátoron végzett karbamid nitrogén meghatározások összehasonlítása a következő korrelációt adta (mg/dl karbamid nitrogén): y = 0.99x y = 0.98x r = 1.00 Mért minták száma: 51 A mintakoncentrációk 3.1 és 51.4 mmol/l (9 és 144 mg/dl) közé estek , V 16 Magyar 3 / 5 Roche/Hitachi

4 A Roche Diagnostics Germany folyékony karbamid reagenssel és Roche Diagnostics Corporation urea-n reagenssel Roche/Hitachi 917 analizátoron végzett karbamid nitrogén meghatározások összehasonlítása a következő korrelációt adta (mg/dl karbamid nitrogén): y = 0.975x y = 0.958x r = Mért minták száma: 30 A mintakoncentrációk 35.0 és 451 mmol/l (98 és 16 mg/dl) közé estek. Irodalomjegyzék 1. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry. Philadelphia, PA: WB Saunders Co, 1976:991.. Marshall EK Jr. A new method for the determination of urea in blood. J Biol Chem 1913;15: Berthelot MPE. Repert Chim Appl 1859;8. 4. Gentzkow CJ. An accurate method for the determination of blood urea nitrogen by direct Nesslerization. J Biol Chem 194;143: Fawcett JK, Scott JE. A rapid and precise method for the determination of urea. J Clin Path 1960;13: Chaney AL, Marbach EP. Modified reagents for determination of urea and ammonia. Clin Chem 196;8: Talke H, Schubert GE. Enzymatische Harnstoffbestimmung im Blut und Serum im optischen Test nach Warburg. Klin Wschr 1965;43: Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3 rd edition. Philadelphia, PA: WB Saunders, 1995: Neumann U, Ziegenhorn J. Scand J Clin Lab Invest 1977;37, Supplement 147: Abstract Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.. Jan Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986; 3: Löhr B, El-Samalouti V, Junge W et al. Reference Range Study for Various Parameters on Roche Clinical Chemistry Analyzers. Clin Lab 009;55: Wu AHB, Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th ed., St. Louis (MO), WB Saunders Company, 006. p Passing H, Bablok W, Bender R, et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;6(11): Készülék-beállítások USA felhasználóknak: További működtetési információ az alkalmazásleírásban és a Special Wash Programing (speciális átmosás programozása) c. dokumentumban (a MyLabOnline honlapon) olvasható. Roche/Hitachi MODULAR analizátor-felhasználók: Az alkalmazás-paramétereket a vonalkódos lapról kell beolvasni. Roche/Hitachi 90 analyzer No. <Chemistry> 1 Test Name UREA Assay Code (Mthd) Point Kin. 3 Assay Code (. Test) 0 4 Reaction Time 5 5 Assay Point Assay Point 15 7 Assay Point Assay Point Wavelength (SUB) Wavelength (MAIN) Sample Volume R1 Volume R1 Pos R1 Bottle Size Large 15 R Volume R Pos R Bottle Size Large 18 R3 Volume 0 19 R3 Pos. 0 0 R3 Bottle Size Small 1 Calib. Type (Type) Linear Calib. Type (Wght) 0 3 Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos S1 ABS 0 36 K Factor K Factor K3 Factor K4 Factor K5 Factor A Factor 0 4 B Factor 0 43 C Factor 0 44 SD Limit Duplicate Limit Sens. Limit S1 Abs. Limit (L) S1 Abs. Limit (H) Abs. Limit Abs. Limit (D/I) Decrease 51 Prozone Limit 0 5 Proz. Limit (Upp/Low) Lower 53 Prozone (Endpoint) Expect. Value (L) Expect. Value (H) Instr. Fact. (a) 1 57 Instr. Fact. (b) 0 58 Key setting A kezelő által beírt érték Roche/Hitachi 4 / , V 16 Magyar

5 V16 További információk az érintett analizátor felhasználói kézikönyvében, a vonatkozó alkalmazásleírásokban és a szükséges összetevők használati leírásában olvashatók. Ebben a módszerleírásban a decimális számértékek egész- és törtrésze közötti határ jelölésére decimális szeparátorként mindig tizedespontot (és nem tizedesvesszőt) alkalmazunk. A számjegyeket nem választjuk el hármasával. A jelentősebb változásokat a lap szélén függőleges vonalak jelölik. 01, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim , V 16 Magyar 5 / 5 Roche/Hitachi