UA2. Húgysav ver.2 Rendelési információk. Szubsztrátok

Átírás

1 Rendelési információk REF CONTENT Uric Acid ver.2 (400 teszt) System-ID Calibrator f.a.s. (12 3 ml) System-ID Calibrator f.a.s. (12 3 ml, USA) System-ID Precinorm U plus (10 3 ml) System-ID Precinorm U plus (10 3 ml, USA) System-ID Precipath U plus (10 3 ml) System-ID Precipath U plus (10 3 ml, USA) System-ID Precinorm U (20 5 ml) System-ID Precinorm U (4 5 ml) System-ID Precipath U (20 5 ml) System-ID Precipath U (4 5 ml) System-ID PreciControl ClinChem Multi 1 (20 5 ml) System-ID PreciControl ClinChem Multi 1 (4 5 ml) System-ID PreciControl ClinChem Multi 1 (4 x 5 ml, USA) System-ID PreciControl ClinChem Multi 2 (20 5 ml) System-ID PreciControl ClinChem Multi 2 (4 5 ml) System-ID PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml, USA) System-ID Analizátor(ok), amely(ek)en a cobas c csomag(ok) használható(k) COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Magyar Rendszerinformáció Test, test ID (szérum, plazma); test UAU2, test ID (vizelet) Alkalmazás In vitro teszt a húgysav koncentrációjának mennyiségi meghatározására szérumból, plazmából és vizeletből COBAS INTEGRA rendszereken. Összegzés 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 A húgysav az emberi szervezet purin-anyagcseréjének a végterméke. A húgysav-mérést számos vese-és anyagcsere-rendellenesség (pl. veseelégtelenség, köszvény, leukémia, pszoriázis, kiéhezettség vagy más legyengült állapot) és a citotoxikus szereket szedő betegek diagnózisa és kezelése során használják. Ennek a purin metabolitnak a kvantitatív meghatározása a húgysav oxidációján alapul. Kétféle megközelítést alkalmaznak. Az egyik a foszfovolfrámsav alkalikus oldatban - fotometriásan mérhető intenzitású - volfrámkékké történő redukciója. Ez az eljárás azonban több gyógyszerrel és számos redukáló anyaggal interferál. A másik - Praetorius és Poulson által leírt - eljárás a húgysav oxidálására az urikáz enzimet használja, és kiküszöböli a kémiai oxidációból adódó belső interferenciákat. Az urikázt vagy olyan eljárásokban lehet alkalmazni, amelyek a húgysav felhasználást UV méréssel határozzák meg, vagy pedig más enzimekkel együtt alkalmazzák, hogy kolorimetriás eljárással lehessen mérni. Egy másik kolorimetriás eljárást Town és munkatársai fejlesztettek ki. A mintát itt először egy aszkorbát-oxidázt és egy tisztító rendszert tartalmazó reagens-keverékkel inkubálják. Ebben a rendszerben az a fontos, hogy a mintában esetleg található aszkorbinsav az előreakcióban eliminálódik, és így nem interferálhat az ezt követő POD indikátor reakcióval. Az indító reagens hozzáadásával elkezdődik a húgysav urikáz általi oxidációja. Az itt ismertetett Roche vizsgálati eljárás a fent leírt kolorimetriás eljárás kissé átalakított változata. Ebben a reakcióban a peroxid peroxidáz (POD) jelenlétében reagál a TOOS-sal és a 4 aminofenazonnal, és kinonimin festék képződik. A képződő vörös szín intenzitása - amely fotometriásan mérhető - egyenesen arányos a húgysav-koncentrációval. A módszer alapelve Enzimatikus kolorimetriás teszt Az urikáz a húgysavat allantoinná és hidrogén-peroxiddá hasítja. Húgysav + 2 H 2 O + O 2 urikáz 2 H 2 O 2 + H + + TOOS a) + 4 aminofenazon allantoin + CO 2 + H 2 O 2 peroxidáz kinon diimin festék + 4 H 2 O a) N etil-n-(2-hidroxi-3-szulfopropil)-3-metil-anilin A keletkezett kinon diimin színintenzitása - amely az abszorbancia növekedés 552 nm-en történő mérésével határozható meg - egyenesen arányos a húgysav koncentrációval. Reagensek - munkaoldatok R1 SR Foszfát puffer: 0.05 mol/l, ph 7.8; TOOS: 7 mmol/l; zsíralkohol poliglikol-éter: 4.8 %; aszkorbát-oxidáz (EC ; cukkíni) 83.5 µkat/l (25 C); stabilizálószerek Foszfát puffer: 0.1 mol/l; ph 7.8; kálium-hexacianoferrát (II): 0.3 mmol/l; 4 aminofen-azon 3 mmol/l; urikáz (EC ; Arthrobacter protophormiae) 83.4 µkat/l (25 C); peroxidáz (POD) (EC ; torma) 50 µkat/l (25 C); stabilizálószerek Az R1 reagens a B, az SR reagens a C pozíción van. Óvintézkedések és figyelmeztetések Ügyeljenek az Eljárás kézikönyv 1. részében (Bevezetés) ismertetett óvintézkedések és figyelmeztetések betartására. A készlet olyan összetevőket tartalmaz, amelyek az 2008/1272 (EK) rendelet szerint az alábbi minősítésűek: Veszélyes összetevők: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27 nonaoxán-nátriakontán-1-ol Izodekanol, etoxilált Veszély H318 Súlyos szemkárosodást okoz. 1 / 5

2 Megelőzés P280 Elhárító intézkedés P305 + P351 + P338 P310 Védőkesztyű/védőruha/szemvédő/arcvédő használata kötelező. SZEMBE KERÜLÉS esetén: Több percig tartó óvatos öblítés vízzel. Adott esetben a kontaktlencsék eltávolítása, ha könnyen megoldható. Az öblítés folytatása. Azonnal forduljon TOXIKOLÓGIAI KÖZPONTHOZ vagy orvoshoz. Ügyfélszolgálati telefonszám: nemzetközi: , USA: A reagensek kezelése Felhasználásra kész Tárolás és eltarthatóság Felnyitatlanul 2 8 C-on COBAS INTEGRA 400 plus rendszer A készüléken, C-on COBAS INTEGRA 800 rendszer A készüléken, 8 C-on Lásd a lejárati dátumot a cobas c csomagcímkén 12 hét 8 hét Mintagyűjtés és -előkészítés Mintagyűjtéshez és -előkészítéshez csak a megfelelő csöveket ill. gyűjtőedényeket szabad alkalmazni. Csak az alábbi mintatípusokat vizsgáltuk meg, és találtuk megfelelőnek. Szérum Plazma: Heparinos (Li, Na, NH 4+ ) vagy EDTA-s (K 2, K 3 ) plazma Az EDTA-s plazmaérték kb. 8 %-kal alacsonyabb, mint a szérumérték. A felsorolt mintatípusokat a vizsgálat idején kereskedelmi forgalomban elérhető mintavételi csövek egy kiválasztott csoportjával vizsgáltuk, vagyis nem az összes gyártó összes beszerezhető csövét teszteltük. Az egyes gyártók mintavételi rendszerei ezektől eltérő anyagokat tartalmazhatnak, amelyek esetenként hatással lehetnek a teszteredményekre is. A primer csövekből (mintavételi rendszerek) történő mintafeldolgozás során a cső gyártójának az előírásai szerint kell eljárni. : A vizelet húgysav-mérését minél előbb el kell végezni. A mintákat nem szabad lehűteni. Az ureát kicsapódásának megakadályozása érdekében nátrium-hidroxidot kell a gyűjtőedény tartalmához hozzáadni, hogy megmaradjon a vizelet lúgos (ph > 8.0) kémhatása. A húgysav megadott eltarthatósága úgy érhető el, ha mintagyűjtés előtt NaOH-ot tesznek az edénybe. A vizeletmintákat a készülék automatikusan előhígítja vízzel, 1:11 (1 + 10) arányban. A kicsapódásokat tartalmazó mintákat a mérés elvégzése előtt le kell centrifugálni. Eltarthatóság szérumban / plazmában: 15 Eltarthatóság vizeletben 16 (NaOH hozzáadásával): A gyártó által biztosított anyagok Lásd a "Reagensek, munkaoldatok" részt. 2 8 C-on 5 nap (-15) (-25) C-on 6 hónap C-on 4 nap A vizsgálat elvégzése Akkor lesz csak optimális a vizsgálat teljesítménye, ha követik a jelen dokumentumnak az adott analizátorra vonatkozó előírásait. A vizsgálatot érintő analizátor specifikus előírásokat az adott analizátor felhasználói kézikönyve tartalmazza. és vizelet alkalmazás COBAS INTEGRA 400 plus teszt-definíció Measuring mode Absorbance Abs. calculation mode Reaction direction Wavelength A/B Endpoint Increase Calc. first/last 33/39 Unit Predilution factor 11 Pipetting parameters 552/659 nm µmol/l R1 S SR D R1 S SR, vizelet Diluent (H 2 O) R1 72 µl Sample 3 µl 45 µl SR 14 µl Total volume 134 µl COBAS INTEGRA 800 teszt-definició Measuring mode Abs. calculation mode Reaction direction Wavelength A/B Absorbance Endpoint Increase Calc. first/last 44/55 Unit Predilution factor 11 Pipetting parameters 552/659 nm µmol/l R1 S SR D R1 S SR, vizelet Diluent (H 2 O) R1 72 µl Sample 3 µl 45 µl SR 14 µl Total volume 134 µl Kalibráció Kalibrátor Kalibráció módja Kalibráció ismétlése Kalibráció gyakorisága Calibrator f.a.s. Vak-kalibrátorként ionmentes vizet kell használni. Ismétlés javasolt COBAS INTEGRA 400 plus rendszer: Minden cobas c csomagnál, 6 hetente és ha a minőség-ellenőrzési eljárások után szükséges COBAS INTEGRA 800 rendszer: Minden új lot-számú reagensnél, és amennyiben az alábbi minőségellenőrzési eljárás szükségessé teszi. Visszavezethetőség: Az eljárást az ID MS (Izotóp Hígítás - Tömegspektrometria) eljárással szemben hitelesítették. 2 / 5

3 Minőség-ellenőrzés Minőség-ellenőrzés - szérum, plazma Minőség-ellenőrzés - A kontrollmérések gyakorisága A kontrollok sorrendje Kalibráció utáni kontroll Precinorm U, Precinorm U plus vagy PreciControl ClinChem Multi 1 Precipath U, Precipath U plus vagy PreciControl ClinChem Multi 2 Rutin minőség-ellenőrzésre kvantitatív vizeletkontrollok alkalmazását javasoljuk. Ajánlott időköz: 24 óra A felhasználó határozza meg Ajánlott Minőség ellenőrzésre a Rendelési információk c. részben felsorolt kontrollanyagokat kell használni. Ezeken kívül más megfelelő kontrollanyagok is alkalmazhatók. A kontrollintervallumokat és -értékhatárokat az egyes laboratóriumok egyedi követelményeihez kell igazítani. A kapott értékeknek a meghatározott határértékeken belülre kell esniük. Minden laboratóriumnak meg kell határoznia az olyankor alkalmazandó javító intézkedéseket, ha a mért értékek kívül esnek a megadott tartományon. A vonatkozó helyi és központi minőség ellenőrzési előírásokat kell alkalmazni. Számítás A COBAS INTEGRA analizátorok automatikusan kiszámolják mindegyik minta analit-koncentrációját. További részletek erről a beépített súgó Adatelemzés című részében (COBAS INTEGRA 400 plus/800 analizátorok) találhatók. Átváltási tényező: µmol/l = mg/dl Korlátozások - interferencia Kritérium: Reprodukálhatóság az eredeti érték ± 10 %-on belül. Ikterusz: 17 Konjugált bilirubin esetén 39-es, nem-konjugált bilirubin esetén 33-as I-indexig (konjugált bilirubin koncentráció kb.: 667 µmol/l ill. 39 mg/dl; nem-konjugált bilirubin koncentráció kb.: 564 µmol/l ill. 33 mg/dl) nincs jelentősebb interferencia. Hemolízis: es H-indexig (hemoglobin-koncentráció kb.: 621 µmol/l ill mg/dl) nincs jelentősebb interferencia. Lipémia (Intralipid): es L-indexig nincs jelentősebb interferencia. Az L-index (amely a turbiditásnak felel meg) és a triglicerid-koncentráció között gyenge a korreláció. Aszkorbinsav: 1.7 mmol/l (30 mg/dl) aszkorbinsav szintig nincs jelentősebb interferencia. Gyógyszerek: Elterjedten alkalmazott gyógyszerekből álló panelek vizsgálata során terápiás koncentrációknál nem tapasztaltunk interferenciát. 18,19 Kivételek: Terápiás koncentrációknál a kálcium dobezilát (pl. Dexium) interferenciát (téves túl alacsony húgysav szint) okoz. Terápiás koncentrációknál a Dicynone (etamszilát) téves alacsony eredményeket okozhat. Az urikáz kifejezetten a húgysavval lép reakcióba. Egyéb purinszármazékok gátolhatják a húgysav reakciót. Rendkívül ritkán a gammopátia - különösen az IgM típusú (Waldenström makroglobulinémia) - megbízhatatlan eredményeket okozhat. 20 Aszkorbinsav: 1.7 mmol/l (30 mg/dl) aszkorbinsav szintig nincs jelentősebb interferencia. Gyógyszerek: Elterjedten alkalmazott gyógyszerekből álló panelek vizsgálata során a terápiás koncentrációknál nem tapasztaltunk interferenciát. 19 Kivételek: A levodopa és a metildopa terápiás koncentrációknál interferenciát (téves túl alacsony húgysavszinteket) okoz. Terápiás koncentrációknál a Dicynone (etamszilát) téves alacsony eredményeket okozhat. Magas homogentizinsav koncentrációk téves eredményeket okoznak. Diagnosztikai célokra az eredményeket mindig a beteg kórtörténetével, klinikai vizsgálataival és egyéb leleteivel együtt kell értelmezni. SZÜKSÉGES TEVÉKENYSÉG Speciális átmosás programozása: Ha COBAS INTEGRA analizátorokon bizonyos vizsgálatok követik egymást, akkor speciális átmosási lépéseket kell alkalmazni. További tudnivalók az Eljárás kézikönyv Bevezetés, Extra átmosási ciklusok c. fejezetében olvashatók. A szükséges esetekben a speciális átmosást/átszennyezés elkerülést még az érintett vizsgálatok eredményének kiadása elé be kell programozni. Határértékek és tartományok Mérési tartomány Szérum/plazma µmol/l ( mg/dl) A magasabb koncentrációjú mintákat az újramérési (rerun) szolgáltatás segítségével kell meghatározni. Az újramérési szolgáltatás a mintákat 1:10 arányban hígítja meg. Az újramérési szolgáltatás segítségével meghígított mintákon mért eredményeket a készülék automatikusan megszorozza az alkalmazott hígítási tényezővel (ami itt 10) µmol/l ( mg/dl) A magasabb koncentrációjú mintákat az újramérési (rerun) szolgáltatás segítségével kell meghatározni. Az újramérési szolgáltatás a mintákat 1:10 arányban hígítja meg. Az újramérési szolgáltatás segítségével meghígított mintákon mért eredményeket a készülék automatikusan megszorozza az alkalmazott hígítási tényezővel (ami itt 10). A mérés alsó határértékei Szérum/plazma A vizsgálat alsó észlelési határa: 11.9 µmol/l (0.20 mg/dl) Az alsó észlelési határ az a legalacsonyabb mérhető analitszint, amely még megkülönböztethető a nullától. Kiszámítása: egy nullás minta értéke fölött 3 szórásnyival (nullás minta + 3 SD, ismételhetőség, n = 21). A vizsgálat alsó észlelési határa: 131 µmol/l (2.20 mg/dl) Az alsó észlelési határ az a legalacsonyabb mérhető analitszint, amely még megkülönböztethető a nullától. Kiszámítása: egy nullás minta értéke fölött 3 szórásnyival (nullás minta + 3 SD, ismételhetőség, n = 21). Referencia-értéktartomány 21 Férfi Nő µmol/l µmol/l (referencia értéktartomány Krieg és Colombo szerint) Első reggeli vizelet órás gyűjtött vizelet 23 melynek megfelel b) 1.5 L/24 h vizeletmennyiséggel számolva µmol/l µmol/nap µmol/l b) (referencia értéktartomány Tietz szerint) 15 os étrend Purin-szegény étrend Férfi Nő Purin-gazdag étrend mg/24 h < 480 mg/24 h < 400 mg/24 h < 1000 mg/24 h ( mg/dl) ( mg/dl) (37 92 mg/dl) ( mg/nap) (13 67 mg/dl) Minden laboratóriumnak meg kell vizsgálnia a megadott várható normál értékek adaptálhatóságát a saját betegcsoportjában, és ha szükséges, meg kell határoznia a laboratórium saját referencia értékeit. Jellemző teljesítményadatok Az alábbiakban ismertetjük az analizátorokon mért jellemző teljesítményadatokat. Az egyes laboratóriumokban kapott értékek ezektől eltérőek is lehetnek. Precizitás A precizitást egy belső protokoll (ismételhetőség - n = 21 - és köztes precizitás- mérési sorozatonként 1 adag, naponta 1 mérési sorozat, 3 / 5

4 21 napig) szerint, humán minták és kontrollok segítségével határoztuk meg. Az alábbi eredményeket kaptuk: Ismételhetőség Level 1 Level µmol/l (4.32 mg/dl) 634 µmol/l (10.7 mg/dl) CV 1.1 % 1.0 % Köztes precizitás Level 1 Level µmol/l (4.35 mg/dl) 658 µmol/l (11.1 mg/dl) CV 1.8 % 1.9 % Ismételhetőség Level 1 Level µmol/l (13.6 mg/dl) 1506 µmol/l (25.3 mg/dl) CV 1.0 % 0.9 % Köztes precizitás Level 1 Level µmol/l (12.2 mg/dl) 1381 µmol/l (23.2 mg/dl) Köztes precizitási CV 1.7 % 1.6 % Módszerek összehasonlítása COBAS INTEGRA 700 analizátoron COBAS INTEGRA Uric Acid ver.2 () reagenssel humán szérum-, plazma- és vizeletmintákon mért húgysav értékeket (y) összehasonlítottuk a megfelelő reagenssel Roche/Hitachi 917 analizátoron (x) és a korábbi (UA) reagenssel COBAS INTEGRA 700 analizátoron mértekkel (x). Roche/Hitachi 917 analizátor Mintaszám (n) = 55 y = 0.978x µmol/l τ = r = 1.00 SD (md 95) = 20.5 Sy.x = 8.32 y = 0.962x µmol/l A mintakoncentrációk 57 és 1548 µmol/l (0.958 és 26.0 mg/dl) közé estek. COBAS INTEGRA 700 analizátor Mintaszám (n) = 43 y = 0.998x µmol/l τ = r = 1.00 SD (md 95) = 6.14 Sy.x = 3.83 y = 0.989x µmol/l A mintakoncentrációk 56 és 875 µmol/l (0.941 és 14.7 mg/dl) közé estek. Roche/Hitachi 917 analizátor Mintaszám (n) = 89 y = 0.960x µmol/l τ = r = SD (md 95) = Sy.x = 46.9 y = 0.959x µmol/l A mintakoncentrációk 45 és 3978 µmol/l (0.756 és 66.8 mg/dl) közé estek. COBAS INTEGRA 700 analizátor Mintaszám (n) = 54 y = 0.979x µmol/l y = 0.977x µmol/l τ = r = 1.00 SD (md 95) = 34.9 Sy.x = 20.8 A mintakoncentrációk 91 és 3802 µmol/l (1.53 és 63.9 mg/dl) közé estek. Irodalomjegyzék 1 Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag Rice EW, Gorgan BS. Clin Chem 1962;8: Kageyama N. A direct colorimetric determination of uric acid in serum and urine with uricase-catalase system Clin Chim Acta 1971;31: DiGiorgio J, Henry RJ, et al. eds. Clinical Chemistry: Principles and Technics. 2nd ed. New York, NY: Harper and Row 1974: Kaiser E, et al. Wiener Klin Wschr 1972;84: Kim EK, Waddel LD, Sunderland MLE, et al. Observations on Diagnostic Kits for the Determination of Uric Acid. Clin Biochem 1971;4: Elking SM, Kabat HF. Am Soc Hosp Pharm 1969;25: Young DS, Thomas DW, Friedman RB, et al. Effects of drugs on clinical laboratory tests. Clin Chem 1972;18: Kueffer H. Therap Umschau 1971;28: Haug HG. Diagnostik 1972;5: Sing HP, Hebert MA, Gault MH. Effect of some drugs on clinical laboratory values as determined by the Technicon SMA. Clin Chem 1972;18: Praetorius E, Poulsen H. Enzymatic determination of uric acid; with detailed directions. Scand J Clin Lab Invest 1953;5(3): Town MH, Gehm S, Hammer B, et al. A sensitive colorimetric method for the enzymatic determination of uric acid. J Clin Chem Clin Biochem 1985;23: Wu AHB, ed. Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th edition. St. Louis (MO): Saunders Elsevier 2006; Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev. 2. Jan Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Breuer J. Report on the Symposium Drug effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9): Thefeld W, Hoffmeister H, Busch EW, et al. Normalwerte der Serumharnsäure in Abhängigkeit von Alter und Geschlecht mit einem neuen enzymatischen Harnsäurefarbtest. Dtsch Med Wschr 1973;98: Krieg M, Gunsser KJ, Steinhagen-Thiessen E, et al. Vergleichende quantitative Analytik klinisch-chemischer Kenngrößen im 24-Stunden- Urin und Morgenurin. J Clin Chem Clin Biochem 1986 Nov;24(11): Colombo JP, ed. Klinisch-chemische Urindiagnostik. Rotkreuz: LABOLIFE-Verlagsgemeinschaft 1994: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Ebben az eljárásleírásban a számértékek egész- és törtrésze közötti határ jelölésére decimális szeparátorként mindig tizedes pontot (és nem tizedes vesszőt) alkalmazunk. A számjegyeket nem választjuk el hármasával. 4 / 5

5 Szimbólumok Az ISO szabványban említetteken kívül a Roche Diagnostics az alábbi szimbólumokat és jelöléseket alkalmazza. CONTENT A csomag tartalma Elkészítés ill. keverés utáni térfogat A jelentősebb változásokat a lap szélén függőleges vonalak jelölik. 2013, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Forgalmazó az USA területén: Roche Diagnostics, Indianapolis, IN USA műszaki ügyfélszolgálat: / 5