A laboratóriumi haematológiai vizsgálatok lehetőségei, algoritmusai, szinergizmusa a pathológiai és radiológiai leképező diagnosztikával Synlab továbbképzés oktatási anyag készítette: Dr.Magyarlaki Tamás PTE ÁOK LMI 2011
Haematológiai betegségek 1. Klinikai tünetek diagnosztikája 2. Laboratóriumi vizsgálatok 3. Pathológia - csontvelő aspirátum vagy biopszia - nyirokcsomó FTAB vagy rezekció 4. Képalkotó eljárások (Rtg, UH, CT, PET&SPECT CT)
Pathologia Acut leukaemia típusok (FAB) AML ALL M 0 differenciálatlan L 1 kis, egyforma blastok, nagy sejtmag : M 1 érés jelei nélkül citoplazma arány M 2 granulocyta irányú érés jelei L 2 nagyobb, heterogénebb blastok, M 3 akut promyelocytás kisebb sejtmag : citoplazma arány M 4 granulocyta és monocyta L 3 a blastok citoplazmája vakuolizált, irányú M 5 monoblastos vagy monocytás M 6 erythroleukaemia M 7 megakaryoblastos basophil (rendszerint B-ALL) Megjegyzés: A c-all, pre-all, null-all, és L 1 és L 2 képét és hagyományos (May-Grünwald-Giemsa) morfológia alapján nem különíthetők el egymástól I. táblázat. Az acut leukaemiák FAB osztályozása {12}
Pathologia Chronicus myeloproliferatív syndroma (CMPD) típusok 1/ Policythaemia rubra vera 2/ Essentialis thrombocythaemia CMPD, PV CMPD, ET erythroid proliferáció thrombocyta szaporulat 3/ Chronicus Granulocytás leukaemia 4/ Chronicus granulocytás megakariocytás myelosis CGL CMGL Általában a Ph+ chronicus granulocytás leukaemia Myelofibrosissal, thrombocythaemiával járó CML # 1-3 típusoknál : chronicus fázis (1% alatti blast)- acceleráció (1-5%) - blastos crisis (5% feletti blast) # # 4. Típusnál : általában myelofibrosis alakul ki a terminális fázisban
Pathologia. Hodgkin's disease in the WHO Classifications Classical Hodgkin's disease o o o o Nodular sclerosis Mixed cellularity Lymphocyte depletion Lymphocyte-rich Lymphocyte predominance Hodgkin's disease
Lymphopoiesis Pathologia Non-Hodgin lymphomák B-sejtes differenciálódás és leukaemiák (B) Lymphatic T stem cell B-immunoblast Lymphoplasmacytoid cell NK cells Stem cell AG Plasma cell B 1 -lymphocyte Lymphatic B-stem cell Centroblast Centrocyte B 2 -lymphozyte
Lymphopoiesis Pathologia AG Lymphatic T stem cell T 1 -lymphocyte T-immunoblast T 2- lymphocyte Stem cell NK cells Non-Hodgin lymphomák és leukaemiák (T) Lymphatic B-stem cell
Labor+Pathologia Myeloma multiplex M komponens SPEP képe és serum IFIX + csontvelő IHC monoclonalitás
Radiologia MDR(+) tumor(a) Choroid plexus epithelial expression of MDR1 P- glycoprotein and MRP contribute to the blood-cerebrospinal-fluid drug-permeability barrier Proc Natl Acad Sci, USA 1999; 96:3900-5 MDR(-) tumor(b) F-18 FDG PET Fluorine-18 Fluorodeoxyglucose PET-CT (Positron EmissionTomography) Clin Cancer Res 2007;13:427-433. DOI:10.1158/1078-0432.CCR-06-1357
Laboratóriumi vizsgálatok a haematologiai diagnosztikában - Vérkép (1 db EDTA cső) - Vérkenet - Vörösvérsejt süllyedés, CRP, PCT - Serum protein elfo, Ig-ok, Immunfixáció - B12, Fólsav, Haptoglobin - Tumor markerek: LDH, béta-2- MG - Véralvadási vizsgálatok - Áramlási cytometria (FCM) - Genetika: kromoszóma (metafázis) FISH (interfázis) molekuláris biológia (PCR)
Vérkép automaták (5part diff)
RBC és PLT paraméterek mérése Impedance PLT/RBC counting with hydrodynamic focussing. MICRO - MACRO DC
RBC cytogram és hisztogram Fsc Macro RBC Volume (fl) Micro 120fL 60fL 28g/dL 41g/dL 0 60 120 200 fl RBC Volume (V) 0 28 41 50 g/dl Hgb Concentration (HC) Hypo Hyper Hgb Concentration (g/dl) Ssc 0 100 pg Hgb Content (CH)
Thalassaemia (Hgb-pathia) XE result : Order CBC Thalassaemia α (3.7 & 4.2 & del) β-major,intermedia,minor,minima Céltáblasejtek Mentzer index MCV/RBC <11 HUN:β minor és minima Capillaris zona electrophoresis 14
Reticulocyta (acridine orange,oxazin750) PLT optikai mérés (Fragments) SYSMEX Low angle scatter (2º to 3 º) RBC Ghosts Debris Large Platelets Microcytes Platelets RBC Fragments High angle scatter (5º to 15 º) kenet: Brillant-cresyl-kék ADVIA (CD4000/Saphire)
Hematológiai automaták mérési elvek 1. Elektromos impedancia változás Coulter elv (WBC=3part diff csak Coulter!, RBC, Thr) 2. Optikai mérés sejtek fényszórása alapján (WBC, RBC, Thr) 3. Peroxidáz festés WBC 4. Fluoreszcens festés után fényszórás alapján WBC 5. Basophil/mag lobularitás - WBC
Vérkép direkt optikai mérési elv (488 nm Argon laser) WBC/Baso channel 2. ábra. Fényszórási paraméterek {15} 0 o : Egyenes szögű fényszórás (1 o 3 o ): a sejtek nagyságának mérésére szolgál. 10 o : Kis szögű szórás (7 o 11 o ): a sejt szerkezetének és felépítésének relatív indikátora. 90 o : Derékszögű fényszórás (70 o 110 o ): elsődlegesen a sejtek belső granuláltságát és lebenyezettségét méri. 90 DEP: 90 fokos depolarizált fényszórás (70 o 110 o ): az eosinophiloknak a neutrophiloktól és a többi sejttől való CellDyn, elkülönítését teszi lehetővé, az eosinophil sejtek azon egyedülálló tulajdonsága alapján, hogy azok granulumai az eredetileg derékszögben polarizált lézer fényét depolarizálják. Coulter +CONDUCTIVITÁS
eo
Fehérvérsejt peroxidase analysis High angle detector (5 o - 15 o ) Tungsten- Halogen Lamp Absorbance Peroxidase 5 2 1 ADVIA 4 3
Fehérvérsejkép basophiliával DNA fluorescent dye (polymethine) FLUORESCENCE BASO SYSMEX
Basophil / Nuclear Lobularity Flow Cytometric Analysis 670 nm Laser Diode High angle detector (5 o - 15 o ) Low angle detector (2 o -3 o ) ADVIA és SYSMEX STROMATOLYSER OLDATTAL
DIFF- Channel channel Balratoltság vérképben Imm gran! Left shift! 4
Variáns lymphocyta szaporulat DIFF channel Atypical lymph Abnorm. lymph / L-blast
Lymphoid LEUKAEMIÁK
ESETBEMUTATÁS 22 éves fiatalember: asthma, 2008 dec: splenomegalia, preb-all(ph - ), chemoth. Hoelzer: indukció, halasztott konszolidációs kezelés,infectio, PTX, pneumonia (2009.03-05) Aplasia(2009.07),Sepsis - Th megszakítás,obs. MLDT Kongresszus 2010.
Kenetfestés 2010.05. RELAPSUS (perif=5%, cs.v.=91%) Sepsis, légzési elégtelenség, pitvarfibrilláció, cardioverzió(4x) 2010.06.19 Exitus letalis MLDT Kongresszus 2010.
Áramlási cytometria CD19+ CD10+ preb-sejt calla+ leukemia CD34 őssejt CD13 myeloid Normál Gran-Ly-Mo arány
B- és T-CLL PLL FL MCL és MZL NK/T-sejtes ML 10. sz. ábra: CLL 11. sz. ábra: Perifériás vérkenet CLL-ben
FWBC (fragilis fvs-ek) KWOK (kineticus optikai fvs szám) Gumprecht rögök CLL-ben cell count time (sec) cell count time (sec)
Acut myeloid leukaemia
diff.dg.: CML
THM take home message FONTOS! - rutin laboratóriumok szintjén szűrés, vérkép, gyanús esetben kenet - kis vérkép, 3 part diff helyett nagy vérkép, 5 part diff - normál sejtszám esetén is találkozhatunk gyanús felhőképekkel (dot plot) minden esetben kenetfestés - laboratórium konzultatív szakma, fontos a klinikussal való kapcsolatfelvétel és az eset megbeszélése gyanús esetben,,,van amit csak a laboros lát,, - betegség súlyosságának megítélésére esteleges követésére alkalmas más rutin paraméterek mérése pl. LDH labor feladat