Élelmiszerek mikroszennyezőinek inek nyomában DR. EKE ZSUZSANNA Elválasztástechnikai Kutató és ktató Laboratórium ALKÍMIA MA 2009. november 5.
Kémiai veszélyt lytényezők Természetesen előforduló mérgek Környezetszennyezésből eredő veszélyek Növényvédőszer-maradékok Állatgyógyászati szermaradékok Véletlen szennyeződések Technológiához köthető szennyezések Technológia során keletkező anyagok Technológia során szándékosan hozzáadott anyagok Technológiai hiba miatt keletkező anyagok Tisztességtelen előnyszerzés érdekében felhasznált anyagok
Aflatoxinok Termelő fajok: Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus Előfordulás: Gabonafélék Diófélék Fűszerek Szárított gyümölcsök.
Aflatoxinok Aflatoxin B1 Aflatoxin G2 Me Me Aflatoxin M1 H Me Aflatoxin B2 Aflatoxin G1 Me Me
17/1999 (VI. 16) EüM E M rendelet Földimogyoró, dió, mogyoró, mandula, gesztenye, szárított gyümölcs (közvetlen emberi fogyasztásra) Dió, mogyoró, mandula, gesztenye, szárított gyümölcs(ha fogyasztás előtt válogatással tisztítják) és fűszerek Gabonafélék, gabonaőrlemények Édesipari termékek Aflatoxin B1 Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2) Aflatoxin B1 Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2) Aflatoxin B1 Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2) Aflatoxin B1 Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2) 2µg/kg 4µg/kg 5µg/kg 10 µg/kg 2µg/kg 4µg/kg 1µg/kg 1µg/kg Tej és tejtermékek Aflatoxin M1 0,05 µg/kg
Fluoreszcencia magasabb energiájú, gerjesztett állapotok elnyelt gerjesztő fény kibocsátott fluoreszcens fény alapállapot triplett állapotok foszforeszcencia
Kalibráci ció Jelintenzitás / önkényes egység Koncentráció / (µg/ml)
Elválaszt lasztástechnikastechnika Elválasztástechnika GC Kromatográfia HPLC PLC TLC Dialízis Elektroforetikus módszerek Extrakciós módszerek Szűrés Centrifugálás Liofilizálás Szitálás
Kromatográfia lyan módszerek, ill. folyamatok gyűjtőneve, melyekben a komponenseknek egy álló fázis és egy azon keresztül áramló mozgó fázis közötti megoszlása következtében megy végbe a komponensek térbeli elkülönülése (szétválása). Mozgó fázis Állófázis
Kromatográfia lyan módszerek, ill. folyamatok gyűjtőneve, melyekben a komponenseknek egy álló fázis és egy azon keresztül áramló mozgó fázis közötti megoszlása következtében megy végbe a komponensek térbeli elkülönülése (szétválása). Mozgó fázis áramlás Állófázis
Kromatográfia A B C D
A kezdet 1903 Varsói Természettudományi Társaság Biológiai Közleményei M. S. Cvet (1872-1919)
Vékonyréteg-kromatográfia Térbeli elválasztás
HPLC - Nagyhatékonys konyságú folyadékkromatogr kkromatográfia oldószer tároló oldószer szűrő pumpa oldószer szűrő előtét szűrő mintabeviteli szelep előtét oszlop oszlop nyomás szabályozó hulladék oldószer tároló detektor adatgyűjtő
HPLC - Nagyhatékonys konyságú folyadékkromatogr kkromatográfia oldószer tároló oldószer szűrő pumpa oldószer szűrő előtét szűrő mintabeviteli szelep előtét oszlop oszlop nyomás szabályozó hulladék oldószer tároló detektor adatgyűjtő
Aflatoxin kromatogram
Aflatoxin kromatogram Készülék: Agilent 1100, 1200 HPLC fluoreszcens detektálással szlop: Supelcosil C18 (250 mm x 4.6 mm x 5 µm) Eluens: desztillált víz / acetonitril / metanol (68:16:16), izokratikus Áramlási sebesség: 1,2 cm 3 /perc Detektálás: gerjesztési hullámhossz: 365 nm emissziós hullámhossz: 450 nm Analízis idő: 25 perc szlop termosztát: 25 C Injektált térfogat: 100 µl
Mintaelőkész szítés?????
Mintaelőkész szítés 1. Aprítás, homogenizálás 2. Extrakció 3. Szűrés Rázógéppel Ultrahanggal segítve Nagy teljesítményű turmixgéppel 25 g minta, 5 g NaCl, 125 ml metanol-víz 70:30 arányú elegye
Mintaelőkész szítés 4. Szűrlet hígítása 5. Tisztítás immunaffinitás oszlopon
Mintaelőkész szítés 6. Minta szárazra párlása nitrogénáram alatt 7. Visszaoldás minimális mennyiségű, megfelelő oldószerben 8. HPLC-s analízis
Mintavétel tel Legyen reprezentatív!!! A penészesedés és így az aflatoxinok gócpontokban jelentkeznek!
Mintavétel tel
Azaz a teljes folyamat Mintavétel Mintaelőkészítés Homogenizálás Extrakció Szűrés Tisztítás Kromatográfiás mérés
Egyéb b lehetséges célvegyc lvegyületekletek A mintában µg/kg ill. mg/kg koncentrációban előforduló szerves vegyületek. Így például: Növényvédőszer-maradványok Állatgyógyászati szermaradványok Egyéb mikotoxinok Koleszterin Tartósítószerek Édesítőszerek Koffein, teobromin Színezékek Vitaminok.
Köszönöm m a figyelmet!