Hagyományos HPLC. Powerpoint Templates Page 1

Átírás

1 Hagyományos HPLC Page 1

2 Elválasztás sík és térbeli ábrázolása Page 2

3 Elválasztás elvi megoldásai 3 kromatográfiás technika: frontális kiszorításos elúciós Page 3

4 Kiszorításos technika minta diszkrét mennyisége jut a kolonnára beáll az egyensúlyi állapot komponensek fajlagos szorpciójuk szerint kötődnek meg ezután mindennél nagyobb fajlagos szorpciójú kiszorító anyaggal leszorítjuk a komponenseket (növekvő fajl. szorpciójuk szerint) Page 4

5 Elúciós technika Mozgófázis pulzálásmentes áramoltatása Minta felvitele (injektálás) impulzusszerűen Lamináris eluensáram a mintát dugószerűen felviszi az kolonnára Szorpciós-deszorpciós folyamatok Page 5

6 Szorpció-deszorpció Page 6

7 Állófázissal szemben támasztott követelmények Mechanikai stabilitás Kis szemcseméret Kis szemcseméret-eloszlás Energetikailag homogén felület Page 7

8 Mozgófázissal szemben támasztott követelmények D Arcy egyenlet: Lu p 2 d p Kis viszkozitás Jó UV áteresztő képesség Szilárd szennyező-mentes oldószerek Nem túl illékony Nem toxikus Olcsó Polaritás, módszer specifikus Page 8

9 Csoportosítás Normál fázisú (NP-HPLC) Fordított fázisú (RP-HPLC) Fordított fázisú ionpár (RP-IP-HPLC) Ion kromatográfia (IC) Ion kizárásos kromatográfia (IEC) Méret kizárásos kromatográfia (SEC) Page 9

10 NP-HPLC: állófázisok Szilikagél alapú OH Si O OH Si O Si H O O Si H H O OH Si Alumínium-oxid alapú Módosított szilikagél alapú Szilárd váz árnyékoló kölcsönható Powerpoint távtartó Templates Page 10

11 NP-HPLC: mozgófázisok Oldószerelegyek: apoláris, poláris Snyder-féle eluenserősség R e t e n c i ó, s z e l e k ti v it á s Alkánok Klórozott szénhidrogének Éterek Észterek Alkoholok Nitrilek Aminok Savak Víz E lu e n se rő ss é g, p ol ar it ás Hexán, Heptán, Izooktán Dikórmetán, Diklóretán, Kloroform Diizopropil-éter, Diizobutiléter, MTBE, THF, Dioxán Metil-acetát, Etil-acetát Etanol, Izopropanol Acetonitril Trietil-amin, Butil-amin Ecetsav Víz Page 11

12 NP-HPLC: mozgófázisok Alap oldószerek: alkánok: hexán, heptán, izooktán Oldhatóságot növelő oldószerek: Diklórmetán, diklóretán, kloroform Módosítószerek (modifikátorok) Lokalizáltan (erős H-hidas) Nem lokalizáltan adszorbeálódó (gyenge H-híd kölcsönhatás, mintakomponens kiszoríthatja őket a felületről) Page 12

13 RP-HPLC: állófázisok Monomer módosítás: O Si O Si O Si OH OH OH + Cl O CH 3 Si OH CH 3 -HCl O Si C 18 H 37 Si O Si C 18 H 37 O CH 3 Si OH CH 3 Átmeneti módosítás Polimer módosítás Page 13

14 RP-HPLC: állófázisok ph tűrés hidrolízis sebesség H + szilárd CH 2 Si O Si R CH oldhatóság alsó ph határ felsõ ph határ Page 14

15 RP-HPLC: állófázisok Egyéb töltetek: Szén alapú Szerves polimer alapú Alumínium-oxid alapú Kapszulázott töltetek Titán-oxid alapú Cirkónium-oxid alapú Page 15

16 RP-HPLC: mozgófázisok víz<metanol<acetonitril<etanol<2- propanol<tetrahidrofurán Etanol, 2-propanol viszkozitása nagy Dioxin poláris oldószer, de reaktív és mérgező Tetrahidrofurán esetében stabilitási problémák (levegő oxigénjével peroxidosodik, ezért stabilizálni kell, pl. 3,5- diizobutil-4-hidroxi-toluolt) Page 16

17 RP-HPLC: mozgófázisok Pufferek használata: Ionos vagy könnyen ionizálható vegyületek vizsgálata esetén az előnytelen erős kölcsönhatások kiküszöbölésére Pufferelt mozgófázisok alkalmazásának speciális területe az RP-IP-HPLC Követelmények: Detektálásnál ne legyen probléma, (kis UV cut-off) Adott mérési körülmények között nagy pufferkapacitás Szilárdanyag mentesség (szűrés) Lehető legtisztább puffer Pufferkompatibilitás: nagy szervesanyag-tartalomnál ne váljon ki Page 17

18 Műszerezettség 1. Nagynyomású szivattyú 4. Detektor 2. Mintaadagoló 5. Vezérlőegység 3. Kolonna 6. Adatfeldolgozó Page 18

19 Műszerezettség: Mozgófázis Kis viszkozitás Jó UV áteresztő képesség Szilárd szennyező-mentes oldószerek Nem túl illékony Nem toxikus Olcsó Oxigén mentes Polaritás, módszer specifikus Page 19

20 Műszerezettség: Nagynyomású szivattyú Kb. 400 bar nyomásesés ellenében 0,01-10ml/min pulzálásmentes áramlás biztosítása Korrózió állóság Működtetés és szabályozás számítógép által Page 20

21 Műszerezettség: 3. mintaadagoló és kolonna Mintaadagolás: 6 ágú csappal Kolonna: Analitikai Preparatív Sub-2µm Page 21

22 Műszerezettség: 4. detektor UV, UV-VIS, DAD Fluoreszcens Elektrokémiai (amperometriás, kulometriás) Vezetőképességi detektorok Törésmutató különbség mérésén (RI) Kapcsolt technikák (MS, ELSD) Page 22

23 Műszerezettség: 4. detektor UV/VIS Page 23

24 Műszerezettség: 4. detektor DAD Page 24

25 Műszerezettség: 4. detektor DAD AU Minutes Page 25

26 Műszerezettség: 4. detektor DAD AU AU Minutes triamcinolone AU nm Minutes Page 26

27 Műszerezettség: 4. detektor Fluoreszcens Page 27