Immunfixáció diagnosztikai lehetőségek Miklós Kata OGYK MIT-MLDT 2006
Immunfixáció immunelektroforézis Elektroforézis majd reakció monospecifikus antiszérumokkal IgG, IgA, IgM kappa és lambda mosás festés kiértékelés szérum vizelet Kimutatás érzékenysége: egy nagyságrenddel nagyobb szérum: 120 mg/l paraprotein vizelet: 50 mg/l szabad könnyűlánc, Bence Jones Protein (BJP) 20 mg/l egyéb immunglobulin Interpretálás: monoklonális gammopathia biklonális gammopathia oligoklonális gammopathia könnyűlánc gammopathia nehézlánc gammopathia vizelet: BJP ürül/nem ürül
normál kontroll Immunelektroforézis - AHS + minta IgG lambda típusú monoklonális gammopathia
Immunfixáció Sebia hydrasis készülék AHS IgG IgA IgM ĸ λ agaróz membránon a minta elektroforézise 6 sávban a fehérjék fixálása mind a 6 sávban anti-humán szérummal (AHS) ez a referencia sáv, valamint anti-γ-, α-, µ- nehézlánc, ill anti-ĸ-, λ könnyűlánc specifikus antiszérumokkal Tehát minden nehéz- és könnyűláncot más-más sávban vizsgálunk, így a monoclonalis komponens azonosítható
mosás: a nem reagáló fehérjék kimosódnak festés: a rögzült fehérjék festése (amidofekete vagy savanyú viola) 4 férőhelyes lemez kevés minta, ritka vagy sürgős kérés 9 minta vizsgálatára alkalmas lemez sok minta, gyors analízise
normál (negatív) immunfixációs kép
Éles, homogén festődési csík egy nehéz és egy könnyűláncban azonos magasságban, (M) komponens IgG lambda IgG kappa típusú monoklonális gammopathia
Biklonális gammopathia: két homogén csík két különböző nehézláncban vagy két homogén csík ugyanazon nehéz- ill. könnyűláncban IgA kappa IgG lambda IgG kappa IgM lambda két klón? kettős mobilitás? monomer/dimer? IgA lambda IgM kappa
oligoklonális gammopathia: egy vagy több csík egy vagy több nehézláncban rendszerint mindkét könnyűlánccal IgG kappa, IgG lambda, IgM lambda IgG kappa/lambda α-, µ- nehézlánc
Könnyűlánc gammopathia: homogén csík csak a könnyűláncban IgG lambda típusú monoklonális gammopathia mellett lambda könnyűlánc nehézlánc nélkül IgA lambda típusú monoklonális gammopathia mellett lambda könnyűlánc nehézlánc nélkül
lambda könnyűlánc nehézlánc nélkül ritka monoklonális gammopathia immunfixáció IgD (IgE) antiszérummal monoclonalis szabad könnyűlánc
Nehézlánc gammopathia: homogén csík csak a nehézláncban IgA nehézlánc betegség
rejtett M komponens IgA lambda típusú monoklonális gammopathia
Immunfixáció pentavalens antiszérummal 12 minta párhuzamos vizsgálata agaróz gélen egy minta két sávban fut anti-humán szérum pentavalens szérum IgG, IgA, IgM, κ, λ
Nagyszámú minta gyors szűrővizsgálata M komponens irányában költséghatékony, biztonságos, első megjelenéskor elengedhetetlen
bizonytalan monoklonalitás IgG kappában, fél év múlva kontroll javasolt
Cryoglobulinok osztályozása immunfixációval monoklonális IgM kappa és poliklonális IgG II-es típusú cryoglobulinaemia
Immunotyping Kapilláris elektroforézishez kifejlesztett immunfixáció A mintacső mellett 5 küvettában 5 különböző antiszérum anti-igg, anti-iga, anti-igm, anti-ĸ és anti-λ alap elektroforézis görbe antiszérum nélkül M komponens gammában
Az öt antitestet egymást követve egyenként méri a mintához, specifikus reakció esetén immunkomplex alakul ki, mely csökkenti a mobilitást, eltérés a referencia görbéhez képest M komponens gammában anti-igg anti-iga anti-igm anti-kappa anti-lambda IgG kappa/lambda gammopathia
Vizeletvizsgálat immunfixációval
Vizelet immunfixáció vizelet bekoncentrálás (érzékenység növelés) elektroforetikus fehérje szétválasztás immunfixáció specifikus ellenanyagokkal: szabad könnyűláncokkal is festés ELP GAM K L Kf Lf ELP GAM K L Kf Lf Bence Jones protein (BJP) nem ürül szabad könnyűlánc (BJP) ürül AHS GAM ĸ λ free ĸ free λ
Vizeletfixáció 9 férőhelyes lemezen
Hydragel urine profil(e) I. Sebia Hydrasys készülékre kifejlesztett rendszer vizeletfehérjék kimutatására és azonosítására futtatás agaróz gélen tubuláris és glomeruláris proteinuria vizsgálata és elkülönítése egy lépésben az azonosítható vizeletfehérjék köre bővül a vizelet előzetes bekoncentrálását nem igényli, mert az immunfixáció során nem alkalmaz diluenst elsősorban nefrológiai centrumoknak ajánljuk, ahol differenciál diagnosztikai szempontból szükség van a glomeruláris és tubuláris proteinuriák elkülönítésére.
4 minta futtatására alkalmas agaróz gél
Hydragel urine profil(e) II. Tub: tubuláris fehérjék: β2-mikroglobulin, retinol kötő fehérje (Retinol Binding Protein, RBP) α1-mikroglobulin Alb,aM: albumin, α2-makroglobulin GAM: IgG, IgA, IgM nehézlánc DE: IgD, IgE nehézlánc K: szabad és kötött kappa L: szabad és kötött lambda K f : szabad kappa könnyűlánc L f : szabad lambda könnyűlánc ELP: polivalens
Urine profil(e) - alkalmazási példák fiziológiás proteinuria: nyomokban albumin ürül tubuláris proteinuria szelektív glomelurális proteinuria: albumin ürül nem szelektív glomeruláris proteinuria: albumin, kappa és szabad kappa könnyűlánc (monoclonalis is), BJP ürül kevert proteinuria, BJP ürül
Köszönet: Barta Beáta Lovasi Lászlóné, Edit Köszönöm a figyelmet!