Immunszerológia I. Agglutináció, Precipitáció. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE-KK

HTML
DOWNLOAD

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Immunszerológia I. Agglutináció, Precipitáció. Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE-KK"

Renáta Jónás
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Immunszerológia I. Agglutináció, Precipitáció Immunológiai és Biotechnológiai Intézet PTE-KK

2 Antigén Antitest Alapok Antigén: vvt,, baktérium, latex gyöngy felszínén (µm( m nagyságú partikulum) Antitest: főleg f IgM, IgA,, ritkábban IgG Direkt Indirekt Aktív - Passzív

4 Miért agglutinál jól az IgM?

5 Direkt és indirekt agglutináció Direkt (IgM( IgM) Indirekt (IgG( IgG)

6 Az agglutinációt befolyásoló tényezők Hőmérséklet ph Inkubációs idő Antigén antitest arány Ionerősség

7 Antigén Antitest arány

8 Aktív Passzív agglutináció Aktív: : a részecske saját felszíni antigén struktúrájával vesz részt a reakcióban pl. vvt vércsoport meghatározás bakt.. sejtfelszíni ag kimutatás Passzív: : a részecskére tetszőleges haptén (epitóp) köthető hordozó szerep (latex( agglutinációs reakciók)

9 Az agglutináció élettani szerepe 1.

10 Az agglutináció élettani szerepe 2.

11 Agglutináció felhasználása klinikumban Autoantitestek kimutatása (autoimmun hemolitikus anaemia, rheumathoid arthritis (RA), szisztémás lupus erythematosus (SLE)). C-reaktív protein (CRP) kimutatása latex agglutinációval. HCG latex terhességi gyorsteszt Vércsoport szerológia Bakteriális antigének kimutatása (pl. Bordetella pertussis, Leptospira sp., Treponema pallidum) Baktérium agglutináció Indirekt hemagglutináció gátlás Latex agglutináció (pl. Streptococcus hemophilus) Vírus antigének kimutatása indirekt hemagglutináció gátlással (pl. Rubeola)

HCG latex terhességi gyorsteszt Vércsoport szerológia Bakteriális antigének kimutatása (pl. Bordetella pertussis, Leptospira sp.

12 Latex agglutináció 1. pl. : RF, ASO, HCG, SLE, CRP

13 Latex agglutináció 2.

14 Haemagglutináció 1.

15 Haemagglutináció in vivo

16 Coombs - teszt AIHA = autoimmun haemolíticus anaemia Direkt Coombs - teszt Indirekt Coombs - teszt

18 NZB egér szérumok

19 Immundiffúzió Szemi-kvantitatív szérum antigén antitest vizsgálatra alkalmas módszer. Mancini módszer: egy antigén tartalmú gél vályújába cseppentett beteg szérum radiálisan szétdiffundál és a vályútól távolodva csökken a szérumban található antitestek koncentrációja. Az antigén antitest optimális arányának helyén látható immunkomplex formálódik.

radiálisan szétdiffundál és a vályútól távolodva csökken a szérumban található

20 Mancini módszer

21 Ouchterlony módszer Egy gél két vályújába egy csepp antigén és egy csepp szérumot helyezünk el. Mindkét minta radiálisan a gélbe diffundál. Precipitációs ívek formálódnak ott, ahol az antigén-antitest arány optimális az immunkomplexek kialakulásához.

22 Ouchterlony módszer

23 Elektroforezis (ELFO) A minta komponensei az elektromos térben töltésüknek megfelelően en mozdulnak el Az ELFO közege: a) Szilárd (papír, cellulóz-acetát vagy nitrocellulóz membrán) b) Fél-folyékony (agaróz( vagy poliakrilamid gél) c) Folyékony (elektrolit)

24 Elektroforezis (ELFO) Szeparáció: a proteinek különböző sebességén alapul, amely függ: a) feszültségtől b) a proteinek méretétől l és töltési viszonyaitól c) a közeg ellenállásától

25 ELFO szérum fehérje analízis A szérum ELFO-t általában enyhén alaklikus közegben (ph 8.6) végzik. Ezen a ph-n a legtöbb szérum protein a pozitív elektróda felé mozdul el.

26 ELFO szérum fehérje analízis Az albumin a legnagyobb frakció. α-globulinok (pl. α1 antitripszin, coeruloplazmin, Retinol Binding Protein, akut fázis fehérjék stb.) β-globulinok (pl. transzferrin, β-2 mikroglobulin stb.) γ-globulinok (immunglobulinok) Normal szérum elektroforetikus mintázat és denzitometriás diagram.

27 Poliklonális gammopátia

28 Alfa-1 antitrypsin hiány Általában genetikai háttér kimutatható Korai életkorban emfizéma,, krónikus pancreatitis, cirrhosis.

29 Immunelektroforézis

30 Immunelektroforezis

31 ELFO ielfo policlonal antibody IgM κ többlet (cirrhosis) 1:1 1:4 1:8 anti-κ anti-igm 1:1 1:2 1:1 1:16 anti-λ 1:4

32 ielfo poliklonális antitest ELFO Monoklonális IgG λ többlet (Myeloma) 1:1 anti-λ Anti-IgG 1:8 1:32 1:2 1:64 1:1 1:4 anti-κ 1:4 1:8

33 Poliklonális hipergammaglobulinaemia (RA, chronic inflamm.) ELFO Norm. ielfo poliklonális antiestek 1:1 1:2 1:4 1:8 anti-λ anti-κ

34 Immunfixáció

35 Immunfixáció 1. Normál szérum 2. Myeloma multiplex IgG paraproteinnel 3. Waldenström macroglobulinaemia IgM paraproteinnel 4. Myeloma multiplex IgA paraproteinnel

36 Rakéta Immunelfo Ma már csak monoklonális antitestekkel végzik Alkalmas koncentráció meghatározásra A rakéták távolsága az antigén vályúktól arányos a mintában lévő antigén koncentrációval.

37 2D immunelfo polivalens szérum segítségével több antigén vizsgálata A precipitációs ívek alatti terület arányos a mintában lévő antigén koncentrációjával.

38 LASER Nefelometria

39 Turbidimetria

Hasonló dokumentumok

Bajtay Zsuzsa

Immunológia II GY 2018.03.23. Bajtay Zsuzsa 5. Antigén ellenanyag kapcsolódáson alapuló módszerek II. A kapcsolódást követő másodlagos reakciókon alapuló kódszerek; precipitáció, agglutináció, komplement