conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-1 01/2009:1646 PLASMA HUMANUM COAGMENTATUM CONDITUMQUE AD EXSTIGUENDUM VIRUM Humán plazma, kevert, vírus-inaktiválás céljából kezelt DEFINÍCIÓ A kevert és vírus inaktiválás céljából kezelt humán plazma olyan fagyasztott vagy fagyasztva szárított, steril, pirogénmentes készítmény, amelyet azonos AB0 vércsoportba tartozó donoroktól származó humán plazmából nyernek. Használat előtt a készítményt infúziós oldat készítése céljából felolvasztják vagy feloldják. A felhasznált humán plazma feleljen meg a Humán plazma frakcionálás céljára (0853) című cikkely előírásainak. ELŐÁLLÍTÁS A felhasználandó plazmaegységeket a sejtek elkülönítése után hat órán belül, és minden esetben a vérvétel után 24 órán belül 30 C-ra vagy alacsonyabb hőmérsékletre kell hűteni. A kevert plazmát úgy hozzák létre, hogy azonos AB0-vércsoporthoz tartozó plazmaegységeket elegyítenek. A kevert plazmát megfelelően érzékeny és specifikus módszerekkel hepatitisz- B felületi antigénre (HBsAg) és HIV antitestekre is vizsgálni kell. A kevert plazmának ezekre a vizsgálatokra negatív eredményt kell adnia. Hepatitisz-A vírus RNS. A kevert plazmát vizsgálni kell hepatitisz-a vírus RNS-re, validált nukleinsav-amplifikációs módszerrel (2.6.21). A vizsgálat egy 1,0 10 2 NE/ml hepatitisz-a vírus RNS pozitív kontrollt, és az inhibitorok vizsgálatához egy belső kontrollt is tartalmaz, melyet úgy készítenek, hogy a plazmakeverék mintájához megfelelő jelzőanyagot adnak. A vizsgálat nem értékelhető, ha a pozitív kontroll negatív eredményt ad, vagy ha a belső kontrollal kapott eredmény inhibitorok jelenlétére utal. A kevert plazma megfelel a vizsgálat követelményének, ha a vizsgálat a hepatitisz-a-vírus RNSre negatív eredményt ad. Hepatitisz-C vírus RNS. A kevert plazmát vizsgálni kell hepatitisz-c vírus RNS-re, validált nukleinsav-amplifikációs módszerrel (2.6.21). A vizsgálat egy 1,0 10 2 NE/ml hepatitisz-c vírus RNS pozitív kontrollt, és az inhibitorok vizsgálatához egy belső kontrollt is tartalmaz, melyet úgy készítenek, hogy a
conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-2 plazmakeverék mintájához megfelelő jelzőanyagot adnak. A vizsgálat nem értékelhető, ha a pozitív kontroll negatív eredményt ad, vagy ha a belső kontrollal kapott eredmény inhibitorok jelenlétére utal. A kevert plazma megfelel a vizsgálat követelményének, ha a vizsgálat a hepatitisz-c-vírus RNSre negatív eredményt ad. Pozitív kontrollként a BRP NAT-vizsgálat céljára szánt hepatitisz-c vírus RNS alkalmazható. A plazmaelegyek potenciális B19 vírus szennyezésének korlátozása érdekében a plazma-elegyet validált nukleinsav-amplifikációs módszerrel (2.6.21) B19 vírusra is vizsgálni kell. B19 vírus DNS: legfeljebb 10,0 NE/µl a plazmaelegyben. A vizsgálat egy µl-enként 10,0 NE B19 vírus DNS-t tartalmazó pozitív kontrollt és az inhibitorok vizsgálatához egy belső kontrollt is tartalmaz, melyet úgy készítenek, hogy a plazmakeverék mintájához megfelelő jelzőanyagot adnak. A vizsgálat nem értékelhető, ha a pozitív kontroll negatív eredményt ad, vagy ha a belső kontrollal kapott eredmény inhibitorok jelenlétére utal. Pozitív kontrollként a BRP NAT-vizsgálat céljára szánt B19 vírus DNS alkalmazható. Az előállítási eljárást úgy kell megtervezni, hogy bármely véralvadási faktor aktivációja a lehető legkisebbre csökkenjen (a trombogén hatás lehetőségének minimalizálása érdekében). A folyamatnak olyan lépéseket is tartalmaznia kell, melyekről igazolták, hogy az ismert fertőző ágensek eltávolítására vagy inaktiválására alkalmasak. Ha speciális anyagokat használnak vírusinaktiválásra, a soron következő tisztítási folyamat validálásával igazolni kell, hogy ezen anyagok koncentrációja elfogadható szintre csökken, és az esetleges maradék nem csökkenti a készítmény biztonságosságát a betegek szempontjából. Inaktiválási eljárás. A lipoidburokkal rendelkező vírusok inaktiválásának jellegzetes módszere az oldószer-detergens eljárás, amelyben a kezelést tributil-foszfát és oktoxinol-10 kombinációjával végzik. A reagenseket ezután olajos vagy szilárd fázisú extrakcióval eltávolítják, úgy, hogy a végtermék tributil-foszfát-tartalma kevesebb legyen 2 g/ml-nél, illetve oktoxinol-10- tartalma 5 g/ml-nél. Mikrobiológiai tartósítószer nem alkalmazható. Az oldatot baktériumszűrőn bocsátják át, aszeptikusan letöltik a végső tartályokba, majd azonnal fagyasztják, esetleg fagyasztva szárítják. A műanyag tartályoknak meg kell felelniük az Emberi vér és vérkészítmények tárolására szánt, steril műanyagtartályok (3.2.3) fejezet követelményeinek. Az üvegtartályoknak meg kell felelniük a Gyógyszeres üvegtartályok (3.2.1) fejezet követelményeinek.
conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-3 SAJÁTSÁGOK A fagyasztott készítmény a felolvasztás után tiszta vagy enyhén opálos, szilárd és kocsonyás részecskéktől mentes folyadék. A fagyasztva szárított készítmény csaknem fehér vagy enyhén sárga por vagy porlékony szilárd anyag. A vizsgálandó készítményt a címkén feltüntetett módon közvetlenül az azonossági vizsgálatok, a tisztasági vizsgálatok, ill. a tartalmi meghatározás előtt oldjuk fel vagy olvasztjuk fel. AZONOSÍTÁS A. Elektroforézis (2.2.31), összehasonlításhoz humán normál plazmát alkalmazva. Az elektroferogramokon azonos sávok legyenek láthatók. B. A készítmény feleljen meg az anti-a- és anti-b-hemagglutinin vizsgálat (lásd Vizsgálatok) követelményeinek. VIZSGÁLATOK ph (2.2.3): 6,5 és 7,6 között. Ozmolalitás (2.2.35): legalább 240 mosmol/kg. Összes fehérje: legalább 45 g/l. A készítményt R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatával hígítjuk, úgy, hogy 2 ml oldat várhatóan kb. 15 mg fehérjét tartalmazzon. Kerek aljú centrifugacsőben az oldat 2,0 ml-éhez R nátrium-molibdenát 75 g/l töménységű oldatának 2 ml-ét, valamint 30 térfogatrész R víz és 1 térfogatrész R nitrogénmentes tömény kénsav elegyének 2 ml-ét adjuk. Az elegyet összerázzuk, 5 percig centrifugáljuk, majd a felülúszó folyadékot leöntjük, és a fejjel lefelé fordított csövet szűrőpapírra helyezzük, hogy az felszívja a maradék nedvességet. A csapadék nitrogéntartalmát kénsavas roncsolásos módszerrel (2.5.9) határozzuk meg; a fehérjetartalmat az eredményt 6,25-dal szorozva számítjuk. Aktivált alvadási faktorok (2.6.22). A készítmény feleljen meg az aktivált véralvadási faktorokra irányuló vizsgálat követelményeinek. A vizsgálatot a tízszeres és százszoros hígítások helyett a vizsgálandó készítmény 0,1 ml-ével végezzük el. A vizsgálandó készítményt tartalmazó kémcsőben az alvadási idő legalább 150 másodperc legyen. Anti-A- és anti-b-hemagglutinin (2.6.20). A hemagglutinin (anti-a vagy anti- B) jelenléte feleljen meg a címkén megjelölt vércsoportnak. Hepatitisz-A vírus antitestek: milliliterenként legalább 1,0 NE. A vizsgálatot megfelelő immunkémiai módszerrel (2.7.1) végezzük.
conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-4 Összehasonlító készítményként a BRP humán hepatitisz-a immunglobulin alkalmazható. Irreguláris vörösvérsejt antitestek. A hígítatlan vizsgálandó készítményben indirekt antiglobulin teszttel irreguláris vörösvérsejt antitestek ne legyenek kimutathatók. Citrát. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó készítményt R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatának azonos térfogatrésznyi mennyiségével hígítjuk. Az oldatot 0,45 µm pórusméretű szűrővel szűrjük. Összehasonlító oldat. 0,300 g R trinátrium-citrátot R vízzel 100,0 ml-re oldunk. Oszlop: méretei: l = 0,3 m, Ø = 7,8 mm, állófázis: R kationcserélő gyanta (9 m). Mozgófázis: R tömény kénsav 0,51 g/l töménységű oldata. Áramlási sebesség: 0,5 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 215 nm-en. Egyensúly beállítása: 15 perc. Injektálás: 10 µl. Retenciós idő: citrát kb. 10 perc. Követelmény: citrát: legfeljebb 25 mmol/l. Kalcium: legfeljebb 5,0 mmol/l. Atomabszorpciós spektrometria (2.2.23. I. módszer). Fényforrás: kalcium vájtkatód lámpa; spektrális sávszélesség 0,5 nm. Hullámhossz: 622 nm. Atomizáló egység: levegő-acetilén vagy acetilén-propán láng. Kálium: legfeljebb 5,0 mmol/l. Atomemissziós spektrometria (2.2.22. I. módszer). Hullámhossz: 766,5 nm. Nátrium: legfeljebb 2,00 10 2 mmol/l. Atomemissziós spektrometria (2.2.22. I. módszer). Hullámhossz: 589 nm.
conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-5 Víztartalom. A fagyasztva szárított termék esetén a megfelelő módszerrel, pl. félmikro vízmeghatározással (2.5.12), a szárítási veszteség mérésével (2.2.32) vagy közeli infravörös spektrofotometriával (2.2.40) mért víztartalomnak az illetékes hatóság által jóváhagyott határértéken belül kell lennie. Sterilitás (2.6.1). A készítmény feleljen meg a sterilitási vizsgálat követelményeinek. Pirogének (2.6.8). A készítmény feleljen meg a pirogén vizsgálat követelményeinek. A nyulaknak testtömegkilogrammonként legalább 3 ml-t fecskendezünk be. TARTALMI MEGHATÁROZÁS VIII. faktor. Elvégezzük a humán VIII. véralvadási faktor hatóértékének meghatározását (2.7.4) olyan összehasonlító plazmát használva, amelyet a plazmában található VIII. véralvadási faktor Nemzetközi Standardjára van beállítva. A becsült hatóérték legalább 0,5 NE/ml legyen. A becsült hatóérték legyen. V. faktor. Elvégezzük a humán V. véralvadási faktor alább leírt hatóértékmeghatározását, olyan összehasonlító plazmát használva, amely a plazmában található V. véralvadási faktor Nemzetközi Standardjára van beállítva. R imidazol tompítóoldatot (ph 7,3) használva elkészítjük a vizsgálandó készítmény 3 felező hígítását, a tízszerestől a negyvenszeres hígításig. Lehetőleg két-két párhuzamost készítünk. Az egyes hígításokat a következőképp vizsgáljuk: 1 térfogatrész R V. faktor-mentes plazmaszubsztrátumot, 1 térfogatrész vizsgálandó hígítást, 1 térfogatrész R tromboplasztint és R kalcium-klorid 3,5 g/l töménységű oldatának 1 térfogatrészét elegyítjük. Ezt követően megmérjük az elegyek alvadási idejét, azaz a kalcium-klorid oldat hozzáadásának pillanatától a fibrin képződésének első jeléig eltelt időt. A fibrinképződést vizuálisan vagy megfelelő segédeszközzel észleljük. Hasonló módon meghatározzuk a humán normál plazma ugyancsak R imidazol tompítóoldattal (ph 7,3) készült négy felező hígításának alvadási idejét (a tízszerestől a nyolcvanszoros hígításig). Az általánosan alkalmazott statisztikai módszerekkel (pl. 5.3) ellenőrizzük a vizsgálat érvényességét, és kiszámítjuk a vizsgálati készítmény hatóértékét. A becsült hatóérték legalább 0,5 NE/ml legyen. A becsült hatóérték legyen.xi. faktor. Elvégezzük a humán XI. véralvadási faktor hatóértékének meghatározását (2.7.22) olyan összehasonlító plazmát alkalmazva, amely a
conditumque ad exstinguendum virum Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.6.3-6 plazmában található XI. véralvadási faktor Nemzetközi Standardjára van beállítva. A becsült hatóérték legalább 0,5 NE/ml legyen. A becsült hatóérték megbízhatósági intervalluma (P = 0,95) a becsült hatóérték 80 125%-a között legyen.c-fehérje. Elvégezzük a humán C-fehérje hatóértékének meghatározását (2.7.30), olyan összehasonlító plazmát használva, amely a plazmában található humán C-fehérje Nemzetközi Standardjára van beállítva. A becsült hatóérték legalább 0,7 NE/ml legyen. A becsült hatóérték legyen. S-fehérje. Elvégezzük a humán S-fehérje hatóértékének meghatározását (2.7.31), olyan összehasonlító plazmát használva, amely a plazmában található humán S-fehérje Nemzetközi Standardjára van beállítva. A becsült hatóérték az adott termékre jóváhagyott határértékek között legyen. A becsült hatóérték megbízhatósági intervalluma (P = 0,95) a becsült hatóérték 80 120%-a között legyen. Plazmin inhibitor (α 2 -antiplazmin). Elvégezzük a humán plazmin inhibitor hatóérték meghatározását (2.7.25), olyan összehasonlító plazmát alkalmazva, amely a humán normál plazmára van beállítva. A human plazmin inhibitor egy egysége 1 ml humán normál plazma aktivitásával egyenlő. A humán normál plazmát úgy készítjük, hogy legalább 30 donor plazmáját elegyítjük, és 30 C-on vagy annál alacsonyabb hőmérsékleten tároljuk. A becsült hatóérték legalább 0,2 NE/ml legyen. A becsült hatóérték legyen. FELIRAT A feliraton fel kell tüntetni: az AB0 vércsoportot, a vírus-inaktiválásra használt módszert.