Vérplazma fehérjék glikozilációjának vizsgálata

Hasonló dokumentumok
Fehérjék glikozilációja, a cukorláncok heterogenitása, és ennek tömegspektrometria alapú vizsgálata

Bioinformatikai és proteomikai módszerek fejlesztése és alkalmazása a glikoproteomikai kutatásokban

Peptidek LC-MS/MS karakterisztikájának javítása fluoros kémiai módosítással, proteomikai alkalmazásokhoz

Németh Anikó 1,2, Kosáry Judit 1, Fodor Péter 1, Dernovics Mihály 1

Az alfa-1 savas glikoprotein mint biomarkerizoformjainak. Doktori tézisek Budai Lívia. Semmelweis Egyetem Gyógyszertudományok Doktori Iskola

Elválasztástechnikai és bioinformatikai kutatások. Dr. Harangi János DE, TTK, Biokémiai Tanszék

Vérplazma fehérjék glikozilációjának vizsgálata

Statikus és dinamikus elektroenkefalográfiás vizsgálatok Alzheimer kórban

Bioinformatika előadás

Bioinformatika 2 10.el

Zárójelentés. ICP-OES paraméterek

Kromatográfiás módszerek

Biotechnológiai gyógyszergyártás

~ 1 ~ Ezek alapján a következő célokat valósítottuk meg a Ph.D. munkám során:

ÉLVEZETI SZEREK ELEMZÉSE KÖRNYEZETI VIZEKBEN FOLYADÉK ÉS GÁZKROMATOGRÁFIA TÖMEGSPEKTROMETRIA FELHASZNÁLÁSÁVAL

Kromatográfia Bevezetés. Anyagszerkezet vizsgálati módszerek

TDK lehetőségek az MTA TTK Enzimológiai Intézetben

Biocidok és kábítószerek mérési tanulmánya a gázkromatográfia- tömegspektrometria felhasználásával: elemzésük környezeti vízmintákban

Műszeres analitika. Abrankó László. Molekulaspektroszkópia. Kémiai élelmiszervizsgálati módszerek csoportosítása

KÖRNYEZETI VIZEK SZERVES SZENNYEZŐINEK ELEMZÉSE GC- MS/MS MÓDSZERREL

Tudásmenedzsment és gyógyszerinnováció

Toxikológiai Vizsgálatok a PTE Laboratóriumi Medicina Intézetében. Lajtai Anikó és Lakatos Ágnes PTE Laboratóriumi Medicina Intézet

OLIGOSZACHARID-SZERKEZETÉNEK VIZSGÁLATA

Biomassza anyagok vizsgálata termoanalitikai módszerekkel

Fordított fázisú folyadékkromatográfiás módszerek peptidek és fehérjék elválasztásában és izolálásában. Tézisfüzet. Szerző: Bobály Balázs

PhD DISSZERTÁCIÓ TÉZISEI

Doktori tézisek. Sedlák Éva. Semmelweis Egyetem Gyógyszertudományok Doktori Iskola

UV-sugárzást elnyelő vegyületek vizsgálata GC-MS módszerrel és kimutatásuk környezeti vízmintákban

A Proteomika Szolgáltató Laboratóriumban elérhető szolgáltatások

TRIPSZIN TISZTÍTÁSA AFFINITÁS KROMATOGRÁFIA SEGÍTSÉGÉVEL

Adatgyőjtés, mérési alapok, a környezetgazdálkodás fontosabb mőszerei

Korszerű tömegspektrometria a. Szabó Pál MTA Kémiai Kutatóközpont

SZILÁRD FÁZISÚ EXTRAKCIÓ MINDIG UGYANÚGY

Igény a pontos minőségi és mennyiségi vizsgálatokra: LC-MS/MS módszerek gyakorlati alkalmazása az élelmiszer-analitikában

Mesterséges és természetes ellenanyagokon alapuló analitikai módszerek antiepileptikumok meghatározására

Norvég Finanszírozási Mechanizmus által támogatott projekt HU-0115/NA/2008-3/ÖP-9 ÚJ TERÁPIÁS CÉLPONTOK AZONOSÍTÁSA GENOMIKAI MÓDSZEREKKEL

Tömegspektrometria. Mintaelőkészítés, Kapcsolt technikák OKLA 2017

Formalinnal fixált, paraffinba ágyazott szövetminták N-glikánjainak kapilláris elektroforetikus analízise

A preventív vakcináció lényege :

Gamma-röntgen spektrométer és eljárás kifejlesztése anyagok elemi összetétele és izotópszelektív radioaktivitása egyidejű elemzésére

Felhő használata mindennapi alkalmazások futtatására. Németh Zsolt MTA SZTAKI

SZTE-ELTE PROTEOMIKAI INNOVÁCIÓ: KONCEPCIÓ, EREDMÉNYEK, JÖVŐKÉP

ATOMEMISSZIÓS SPEKTROSZKÓPIA

Véralvadásgátló hatású pentaszacharidszulfonsav származék szintézise

Bioinformatikai és proteomikai módszerek fejlesztése és alkalmazása a glikoproteomikai kutatásokban

Sciex X500R készülék bemutatása a SWATH alkalmazásai tükrében. Szabó Pál, MTA TTK

Endogén szteroidprofil vizsgálata folyadékkromatográfiával és tandem tömegspektrométerrel. Karvaly Gellért

A proteomika új tudománya és alkalmazása a rákdiagnosztikában

Szénhidrátkémiai kutatások bioinformatikai esetek. Dr. Harangi János DE, TTK, Biokémiai Tanszék

Röntgen-gamma spektrometria

5/11/2015 TÖMEGSPEKTROMETRIA. Tömegspektrometria - áttekintés. Ionizáció és analizátor. Tömegspektrométer. Analizátor: KVADRUPOL

A plazminogén metilglioxál módosítása csökkenti a fibrinolízis hatékonyságát. Léránt István, Kolev Kraszimir, Gombás Judit és Machovich Raymund

Vízben oldott antibiotikumok (fluorokinolonok) sugárzással indukált lebontása

A TÖMEGSPEKTROMETRIA ALAPJAI

A mérések általános és alapvető metrológiai fogalmai és definíciói. Mérések, mérési eredmények, mérési bizonytalanság. mérés. mérési elv

SZABADALMI IGÉNYPONTOK. képlettel rendelkezik:

Vízben oldott antibiotikumok (fluorokinolonok) sugárzással indukált lebontása

Hús és hústermék, mint funkcionális élelmiszer

KROMATOGRÁFIÁS VIZSGÁLATI MÓDSZEREK

A fogorvostanhallgatók önálló orvosi kémia és biokémia képzésének kidolgozása

Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen

A BETEGBIZTONSÁG FEJLESZTÉSI LEHETŐSÉGEI. 40. Betegbiztonsági Fórum június 8.

Modern Fizika Labor. A mérés száma és címe: A mérés dátuma: Értékelés: Infravörös spektroszkópia. A beadás dátuma: A mérést végezte:

Szakmai zárójelentés OTKA-PD sz. pályázat Készítette: Szekeres András

Mangalica specifikus DNS alapú módszer kifejlesztés és validálása a MANGFOOD projekt keretében

Modern Fizika Labor Fizika BSC

Klórbenzol lebontásának vizsgálata termikus rádiófrekvenciás plazmában

Fehérje O-glikoziláció tömegspektrometriás vizsgálata. Darula Zsuzsanna MTA Szegedi Biológiai Kutatóközpont Proteomikai Laboratórium

A MALDI-TOF tömegspektrometria alkalmazási és fejlesztési lehetőségei a patogén mikroorganizmusok vizsgálatában

Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia (HPLC)

Modern Fizika Labor. 11. Spektroszkópia. Fizika BSc. A mérés dátuma: dec. 16. A mérés száma és címe: Értékelés: A beadás dátuma: dec. 21.

Kvalitatív elemzésen alapuló reakciómechanizmus meghatározás

A tremor elektrofiziológiai vizsgálata mozgászavarral járó kórképekben. Doktori tézisek. Dr. Farkas Zsuzsanna

GALAKTURONSAV SZEPARÁCIÓJA ELEKTRODIALÍZISSEL

Fehérjék nyomás által indukált szerkezetváltozásainak jellemzése infravörös és fluoreszcencia spektroszkópiai módszerekkel

nyomelem, étrendi forrásainak vizsgálata Dr. Gergely Valéria Bükfürdő 2010.

SZILÁRD FÁZISÚ EXTRAKCIÓ OFFLINE AUTOMATIZÁLÁSÁNAK LEHETŐSÉGEI BIOTAGE KÉSZÜLÉKEKKEL

9. Hét. Műszeres analitika Folyadékkromatográfia Ionkromatográfia Gélkromatográfia Affinitás kromatográfia Gázkromatográfia. Dr.

A SZTE KDI képzési terve

Proteomika Peptid szekvenálás. Dr. Csősz Éva Debreceni Egyetem ÁOK Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet Proteomika Szolgáltató Laboratórium

Agilent MassHunter szoftvercsalád

Környezet nehézfém-szennyezésének mérése és terjedésének nyomon követése

GNTP. Személyre Szabott Orvoslás (SZO) Munkacsoport. Kérdőív Értékelő Összefoglalás

Nagy számok törvényei Statisztikai mintavétel Várható érték becslése. Dr. Berta Miklós Fizika és Kémia Tanszék Széchenyi István Egyetem

Anyagszerkezet vizsgálati módszerek

Modern fizika laboratórium

Készítette: NÁDOR JUDIT. Témavezető: Dr. HOMONNAY ZOLTÁN. ELTE TTK, Analitikai Kémia Tanszék 2010

A Kémiai Laboratórium feladata

A Debreceni Egyetem Intézményfejlesztési Terve

Dr. Dinya Elek egyetemi tanár

Minta-előkészítési módszerek és hibák a szerves analitikában. Volk Gábor WESSLING Hungary Kft.

Érzelmi megterhelődés, lelki kiégés az egészségügyi dolgozók körében

Fehérjék nemkovalens komplexképzésének és glikozilációjának tömegspektrometriás vizsgálata

A diffúz reflektancia spektroszkópia (DRS) módszerének alkalmazhatósága talajok ásványos fázisának rutinvizsgálatában

A T sejt receptor (TCR) heterodimer

A tömegspektrometria alapjai és alkalmazási köre a laboratóriumi diagnosztikában. Dr. Karvaly Gellért Balázs SE Laboratóriumi Medicina Intézet

Jegyzet. Kémia, BMEVEAAAMM1 Műszaki menedzser hallgatók számára Dr Csonka Gábor, egyetemi tanár Dr Madarász János, egyetemi docens.

Antigén, Antigén prezentáció

Az SZTE KDI képzési terve

Hogyan lesznek új gyógyszereink? Bevezetés a gyógyszerkutatásba

Átírás:

Vérplazma fehérjék glikozilációjának vizsgálata Doktori tézisek Dr. Tóth Eszter Semmelweis Egyetem Gyógyszertudományok Doktori Iskola Témavezető: Dr. Vékey Károly DSc, osztályvezető Hivatalos bírálók: Dalmadiné dr. Kiss Borbála PhD, tudományos munkatárs Dr. Takátsy Anikó PhD, egyetemi adjunktus Szigorlati bizottság elnöke: Dr. Török Tamás DSc, egyetemi tanár Szigorlati bizottság tagjai: Dr. Szökő Éva DSc, egyetemi tanár Dr. Lelik László CSc, egyetemi docens Budapest 2016

Bevezetés A proteom a szervezet teljes fehérjeállományát jelenti. A proteomika a fehérjék szerkezetének és funkcióinak megismerésével foglalkozó tudományterület. Elsődleges feladata a fehérjék azonosítása és mennyiségi meghatározása. Ezen túlmenően, ide tartozik fehérjék egymással és környezetükkel (szénhidrátokkal, lipidekkel, nukleinsavakkal, gyógyszerekkel) való kölcsönhatásainak felderítése, fehérjék módosulatainak vizsgálata, az egyes fehérjék térbeli eloszlásának meghatározása és a különböző élettani és patológiai folyamatok mechanizmusának megismerése is. A fehérjék sokféleségének kialakításában és a folyamatos változások fenntartásában, valamint a fehérjék egyedi és speciális szerepének betöltésében a poszt-transzlációs módosulatoknak kiemelkedő szerepük van. A glikoziláció emlősök esetén az egyik leggyakoribb poszt-transzlációs módosulás, és a fehérjék több, mint felénél előfordul. A fehérjék glikozilációjának szerkezeti jellemzésével és funkciójának meghatározásával a glikoproteomika foglalkozik. A glikoziláció során a fehérjék peptid láncának bizonyos aminosavaihoz különböző oligoszacharid szerkezetek (glikánok) kötődnek. Azokat az aminosavakat, ahova az oligoszacharidok kötődnek, glikozilációs helyeknek nevezzük. Egy adott glikozilációs helyhez ugyanazon fehérje esetében különböző glikánok kötődhetnek, ezt a jelenséget hívják mikroheterogenitásnak és ennek eredményeképpen jönnek létre a különböző glikoformok. A glikoziláció fontos szerepet játszik a fehérjék végső térszerkezetének és szerkezeti stabilitásának kialakításában, a sejtek közötti kölcsönhatásokban és kommunikációban (sejtadhézió, endocitózis, molekuláris felismerés), különböző fehérje-fehérje és fehérjék más molekulákkal való kölcsönhatásaiban (receptor aktiváció), az immunválaszban pedig antigén szerepet tölt be. A glikoziláció befolyásolja a terápiában alkalmazott fehérjék hatásmechanizmusát, farmakokinetikai tulajdonságait és stabilitását is. Emellett a glikoproteinek biomarkerként is jól használhatók, azaz a diagnosztikában alkalmasak lehetnek egészséges és beteg csoportok elkülönítésére. A különböző sejtekben, szövetekben, illetve szervekben található fehérjék azonosítása, és a fehérjék speciális tulajdonságainak, köztük poszt-transzlációs módosulatainak meghatározása nagyon összetett feladat. A vizsgálatok több tudományterület: a biokémia, molekuláris biológia, elválasztástechnika, analitikai kémia és a bioinformatika szoros együttműködését és folyamatos fejlesztését igénylik.

A glikoproteinek vizsgálata napjainkban még nem rutinszerű, és szükség van megfelelő technikák kidolgozására, illetve a már meglévő módszerek folyamatos továbbfejlesztésére és speciális alkalmazására. A vérplazmában található proteinek sokfélesége rendkívüli. Ezen túlmenően, az egyes fehérjék, illetve az ezekhez tartozó különböző glikoformok koncentrációiban is több nagyságrendnyi különbségek vannak. Mindezek miatt a vérplazma fehérjék glikozilációs mintázatának meghatározása különösen nagy kihívást jelent. A minták komplexitásának csökkentése elengedhetetlen, ezért az analízist a legmodernebb analitikai technikák, így a tömegspektrometria esetében is többdimenziós elválasztási lépések előzik meg.

Célkitűzés Doktori munkám során célom volt a vérplazma fehérjék helyspecifikus glikozilációs mintázatának meghatározása. Az első lépés a plazma fehérjék glikozilációs mintázatának meghatározására alkalmas módszer kifejlesztése és optimálása volt. Ennek érdekében célom volt: a vérplazma minták komplexitásának csökkentésére szolgáló depletálásból és frakcionálásból álló módszer kidolgozása; valamint az ezt követő nano-hplc-ms(/ms) mérések optimálása és reprodukálhatóságának javítása. A módszerek kidolgozását és optimálását követően több fehérje helyspecifikus glikozilációs mintázatát szerettem volna meghatározni, először egészséges emberek-, majd sugárterápiával kezelt betegek mintáiban. Célom volt az ionizáló sugárzás glikozilációra való hatását megvizsgálni és az esetleges változásokat azonosítani.

Módszerek Vérplazma fehérjék helyspecifikus glikozilációs mintázatának meghatározására egy több lépésből álló minta-előkészítési, analitikai és értékelési módszert dolgoztam ki, optimáltam és alkalmaztam. A teljes folyamat az alábbi ábrán látható: A plazmából az albumin és immunglobulin G fehérjéket affinitás kromatográfiával, előtöltött oszlopon távolítottam el manuális elúcióval. Az így kapott depletált plazmát analitikai méretű fordított fázisú kromatográfiás oszlopon HPLC készülék és UVdetektálás segítségével frakciókra szedtem szét. Az egyes frakciókban található fehérjéket redukáltam, alkiláltam és tripszines emésztéssel peptidekre és glikopeptidekre bontottam. A peptid keverékek összetételét nano-hplc-ms(/ms) módszerrel vizsgáltam. A frakciók fehérjetartalmának meghatározása céljából adatfüggő MS/MS méréseket végeztem, így ciklusonként egy teljes MS spektrumot és a három legintenzívebb ion MS/MS spektrumából álló adatsort vettem fel. A glikozilációs helyek és a főbb glikoformok azonosítására ettől eltérő műszerbeállítás mellett (nagyobb tömegtartományban és alacsonyabb ütközési energián) felvett adatfüggő MS/MS méréseket végeztem. A kis koncentrációjú glikoformok azonosítását és az összes glikoform kvantitatív meghatározását kiterjesztett dinamikus tartományú MS mérésekkel valósítottam meg. A mérési adatok értékelését több, részben kereskedelmi, részben pedig a kutatócsoportban fejlesztett szoftver alkalmazásával végeztem el. A frakciók

fehérjetartalmának azonosítása ProteinLynx Global Server, Mascot Server és SwissProt humán fehérje szekvencia adatbázis alkalmazásával történt. A glikozilációs helyek és az intenzívebb glikoformok azonosítását a GlycoMiner szoftver segítségével és manuális értékeléssel végeztem. A kisebb intenzitású glikoformok azonosítása során a glikoformokhoz tarozó m/z értékeket manuálisan kerestem le az MS spektrumokban. Csak azokat a glikoformokat fogadtam el valósnak, amelyek töltése, izotópeloszlása és HPLC retenciós ideje a vártnak megfelelő volt. A nem egyértelműen azonosítható glikoformok esetében a kiválasztott komponensekből egyedi MS/MS spektrumokat vettem fel, és ezek értékelésével azonosítottam a glikoformokat. A glikoformok intenzitását (relatív koncentrációját) a GlycoPattern szoftver segítségével határoztam meg. A programot a további méréseknél nem csak az intenzitás értékek meghatározására, hanem a glikoformok azonosítására is felhasználtam. A lehető legtöbb valós glikopeptid azonosítása és a hamis találatok kiszűrése érdekében optimáltam a keresési paraméterkészletet, majd ezt követően az értékelést részben automatizáltam.

Eredmények (1) A vizsgálatokat zavaró fehérjék eltávolítására, majd a vérplazma ezt követő fordított fázisú kromatográfiával történő frakcionálására szolgáló minta-előkészítési módszert dolgoztam ki és optimáltam. Igazoltam, hogy ez a módszer nagymértékben csökkenti a vérplazma minták komplexitását, lehetővé téve nem csak az egyes fehérjék, hanem a különböző kis koncentrációban jelenlévő glikoformok analízisét is. A módszer alkalmas a fehérjék részletes, helyspecifikus glikozilációs mintázatának meghatározására. Ezenkívül igazoltam, hogy az analitikai célra szolgáló (4,6 illetve 2,1 mm átmérőjű) HPLC oszlopokkal olyan mennyiségű fehérje izolátum állítható elő, amely elegendő számos plazma fehérje glikozilációs mintázatának meghatározására. [1] (2) Igazoltam, hogy az egyes fehérjék különböző glikoformjai a kidolgozott, fordított fázisú HPLC frakcionálás során számottevően nem válnak el egymástól. Ennek eredményeképpen egy fehérje glikozilációs mintázata meghatározható egy frakcióból. Megállapítottam továbbá, hogy a fordított fázisú tölteten keresztül történő áthaladás a glikozilációs mintázatokat nem torzítja, azaz a glikoformok eloszlását nem változtatja meg. Ez nagyban eltér a fehérje izolálásra szolgáló számos más módszerektől, amelyek a glikoformokat egymástól elválasztják, így nagymértékben nehezítik a glikozilációs mintázatok meghatározását. [1] (3) Egyszerű statisztikai módszerek alkalmazásával jellemeztem több napon át tartó nano-hplc-ms méréssorozatok reprodukálhatóságát. Megállapítottam, hogy a szórás jelentős mértékben függ az adott komponens intenzitásától, és a kimutatási határ közelében levő komponensek esetén jelentősen megnő. Ezenkívül megállapítottam, hogy nano-hplc esetén a reprodukálhatóság (a HPLC-MS-nél megszokottnál) lényegesen rosszabb, intenzív csúcsok esetén is 15% körüli érték. A vizsgálatok azt mutatták, hogy a rossz reprodukálhatóságot nem csak véletlen szórás okozza, hanem az egyes csúcsok intenzitása az időben (több nap alatt) jelentősen megváltozik. Kimutattam, hogy különböző komponensek intenzitása az időben különböző mértékben (és különböző irányban) változik. [2] (4) Megállapítottam, hogy az ion intenzitások több nap alatt bekövetkező változását jól le lehet írni egy negyedfokú polinommal. Módszert dolgoztam ki az így leírt időbeli változás korrigálására. Megállapítottam, hogy ennek a módszernek az alkalmazásával (a dolgozatban bemutatott példa esetén) a szórást 15%-ról 8%-ra lehetett csökkenteni. A

korrekció nem csak a mérések reprodukálhatóságát növeli, hanem az időfüggésből származó szisztematikus hibákat is csökkenti. [2] (5) A minta-előkészítési, mérési és értékelési módszerek optimálását követően meghatároztam a nagyobb koncentrációjú vérplazma fehérjék helyspecifikus glikozilációs mintázatát. Ezek több esetben részletesebbek voltak, mint az irodalomban megtalálható mintázatok, pedig szigorúbb elfogadási követelményeket alkalmaztam. Olyan fehérjék gilkoformjait is sikerült azonosítanom, amelyek helyspecifikus mintázatát az irodalomban nem találtam meg. A vérplazma fehérjéken azonosított glikoformok száma eléri a nagy mennyiségben hozzáférhető, tisztított standard fehérjék esetén azonosított glikoformok számát, ami azt jelenti, hogy fehérje szinten történő további tisztítási vagy izolálási lépések beiktatása már nem szükséges. (6) Elsőként tanulmányoztam az ionizáló sugárzás glikozilációra való hatását humán vizsgálatban, vérplazma fehérjéken. Radioterápiás sugárkezelést megelőző, a kezelés során, valamint a kezelés befejezését 1-1,5 hónappal követően vett vérplazma mintákból meghatároztam 7 fehérje helyspecifikus glikozilációs mintázatát. Megállapítottam, hogy a sugárkezelés mind a fehérjék koncentrációját, mind pedig a glikozilációs mintázatokat megváltoztatja. [3] (7) Megállapítottam, hogy a glikozilációs mintázatokban bekövetkező változások a sugárkezelést követően hosszú ideig fennmaradnak. A sugárkezelés során indukált változások nagy része a kezelés befejezését követően 1-1,5 hónappal még fennállt, bár mértékük kisebb volt, mint a besugárzás során. Ez azt jelenti, hogy a kezelést követően a glikoziláció hosszú időre megváltozik. A fehérjék glikozilációja lassan visszatér a besugárzás előtti állapotba, de ez több hónapig is eltarthat. [3]

Következtetések Vizsgálataim megerősítik azt a feltételezést, hogy a fehérjék fordított fázisú elválasztásában a peptidlánc tulajdonságainak van a legnagyobb szerepe, és a glikoziláció kevés befolyással van arra. Ennek nagy előnye, hogy a fordított fázisú frakcionálás lehetővé teszi a glikozilációs mintázatok egy frakcióból történő meghatározását. Ez valószínűleg nem csak a glikoziláció, hanem más poszt-transzlációs módosulásokra is igaz. Kezdeti eredményeim ezt igazolják foszforiláció esetén is, bár részletes vizsgálatokat csak a glikozilációra végeztem. A negyedfokú polinom illesztésén alapuló korrekciós módszer nagymértékben csökkenti a tömegspektrometriai mérések szórását. A módszert teljesen azonos és egymástól kismértékben különböző minták esetén is teszteltem, ahol kismértékű különbségeket kellett meghatározni. A polinomiális korrekció általánosan használható hosszú időtartamú méréssorozatok esetén, így azt várjuk, hogy széleskörűen el fog terjedni. A módszer iránt a gyógyszeripar részéről is érdeklődés mutatkozik. Az általunk vizsgált vérplazma fehérjék helyspecifikus glikozilációs mintázata az irodalomban talált mintázatoknál részletesebb, néhány esetben teljesen újnak tekinthető. Az újonnan azonosított glikoformok közelebb vihetnek a fehérjék biológiai jelentőségének alaposabb megismeréséhez és működésük mélyebb megértéséhez. Az így azonosított glikoformok különböző betegségekben történő vizsgálata új, vagy a korábbiaknál szelektívebb biomarkereket eredményezhet. Laboratóriumunkban a kutatást ilyen irányban terjesztjük ki. Az ionizáló sugárzás a glikozilációt több fehérje esetén is befolyásolja, és ezek a változások hosszú távon fennállnak. Mivel a glikoziláció számos immunológiai folyamat és a sejtek közötti kommunikáció lényeges eleme, az így kimutatott változások a sugárterápiás kezelés hatékonyságát, illetve mellékhatásait is jelentősen befolyásolhatják. Ennek orvosbiológiai következményeit lengyel kollégáink tanulmányozzák.

Saját publikációk jegyzéke Az értekezés témájában megjelent közlemények [1] Toth E, Ozohanics O, Bobaly B, Gomory A, Jeko A, Drahos L and Vekey K. (2014) HPLC enrichment/isolation of proteins for post-translational modification studies from complex mixtures. J Pharm Biomed Anal, 98:393-400. IF (2014): 2,979 10.1016/j.jpba.2014.06.025 [2] Toth E, Hever H, Ozohanics O, Telekes A, Vekey K and Drahos L. (2015) Simple correction improving long-term reproducibility of HPLC MS. J Mass Spectrom, 50:1130-1135. IF (2014): 2,379 10.1002/jms.3629 [3] Toth E, Vekey K, Ozohanics O, Jeko A, Dominczyk I, Widlak P and Drahos L. (2016) Changes of protein glycosylation in the course of radiotherapy. J Pharm Biomed Anal, 118:380-386. IF (2014): 2,979 10.1016/j.jpba.2015.11.010

Egyéb közlemények Vekey K, Ozohanics O, Toth E, Jeko A, Revesz A, Krenyacz J and Drahos L. (2013) Fragmentation characteristics of glycopeptides. Int J Mass Spectrom, 345-347:71-79. IF (2013): 2,227 10.1016/j.ijms.2012.08.031 Bobaly B, Toth E, Drahos L, Zsila F, Visy J, Fekete J and Vekey K. (2014) Influence of acid-induced conformational variability on protein separation in reversed phase high performance liquid chromatography. J Chromatogr A, 1325:155-162. IF (2014): 4,169 10.1016/j.chroma.2013.12.022 Krajsovszky G, Toth E and Ludanyi K. (2014) Tandem mass spectrometric study of annelation isomers of the novel thieno[3,2 :4,5]pyrido[2,3-d]pyridazine ring system. ARKIVOC, 5:158-169. IF (2014): 1,165 10.3998/ark.5550190.0015.500