LIQUORDIAGNOSZTIKA. Dr. Seres Erika

Átírás

1 LIQUORDIAGNOSZTIKA Dr. Seres Erika SZTE ÁOK Klinikai Kémia K Intézet Magyar Laboratóriumi Diagnosztikai Társaság (MLDT) és a Magyar Immunológiai Társaság (MIT) közös szakmai továbbképzése: Testfolyadékok laboratóriumi vizsgálata

2

3 LIQUOR CEREBROSPINALIS MINTA NYERÉSE Lumbalpunctio Cysternapunctio Kamradrain Spinaldrain

4 LUMBALPUNCTIO INDICATIO-CONTRAINDICATIO CONTRAINDICATIO Indicatio: KIR gyulladásos folyamatai demyelinisatios kórképek SAH-nál,, ha a CT negatív Contraindicatio: emelkedett intracranialis nyomás komplett spinalis subarachnoidalis elzáródás véralvadási zavar és antikoaguláns ns kezelés gennyes gócok g az LP helyén n ill. bakteraemia allergia a beadandó anyagra

5 LIQUOR CEREBROSPINALIS PREANALITIKA 1. Páciens előkész szítése se (lipaemia( lipaemia,, parallel mv.) 2. Mintavétel: tel: frakcionált, 2-2ml/frakci2 2ml/frakció 3. Minta azonosítása sa 4. Száll llítása: friss v. centrifugált fagyasztott formában 5. TárolT rolása: -80 o C-on 6. Vizsgálati módszer m kiválaszt lasztásasa

6 LIQUOR CEREBROSPINALIS ANALITIKA Rutin liquordiagnosztika (Sangur teszt, sejtszám m (vvt( vvt, fvs)-, összfehérje-,, cukor-, laktát-, ionmeghatároz rozás,, spektrofotometria) Mennyiségi fehérjeanal rjeanalízis (radiális immundiffúzi zió, turbidimetria, nephelometria, ELISA, RIA stb.) Minőségi fehérjeanal rjeanalízis (agar-elektroforézis, IEF, immunoblot) Mikrobiológiai vizsgálatok

7 LIQUOR CEREBROSPINALIS ANALITIKA spinalis ventricularis cysternalis centr.előtt Víztiszta, színtelen Víztiszta, színtelen Víztiszta, színtelen centr. után Víztiszta, színtelen Víztiszta, színtelen Víztiszta, színtelen Vvt Nem tartalmaz Nem tartalmaz Nem tartalmaz Fvs 5-7xM/L Ly, Mo 1-3xM/L Ly, Mo 3-5xM/L Ly, Mo Összfeh mg/L mg/L mg/L Cukor vércukor 60%-a a spinalisnál mint a spinalis Laktát mmol/l ph

8 VÉRES LIQUOR PROBLÉMAK MAKÖRE arteficiális patologiás Makroszkóp. véres víztiszta alvadék egyenletesen véres folyékony Felülúszó színtelen xanthochrom Vvt ép, csoportos, 700:1 frakciók számával zsugorodott, elkülönült, leukocytaszaporulat, erythrophag, siderophag SPG-415nm-nél E:0.23< E:0.23>

9 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 1. Makroszkópos értékelés s (víztiszta, zavaros, xanthochrom,, véres v ) Sangur teszt (vér kimutatása sa-vvt szám<700/l) Sejtszáml mlálás s (vvt( vvt, fvs) Cytológiai vizsgálat Spektrofotometria Összfehérjemérés Cukor- és laktát meghatároz rozás

10 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 2. SEJTSZÁML MLÁLÁS

11 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 3. CYTOLÓGIA

12 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 4. CYTOLÓGIA

13 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 5. CYTOLÓGIA

14 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 6. CYTOLÓGIA

15 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 7. CYTOLÓGIA

16 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 8. SPEKTROFOTOMETRIA ELV: A xanthochrom liquorok abszorpciós maximuai alapján n eldönthet nthető,, hogy a liquorban oxi-, met-hgb Hgb,, rövid r vagy hosszú hullámhosszon abszorbeáló bilirubin van jelen. Jellemző abszorbciós maximumok: met-hgb Hgb: : nm, 408nm, kisérő csúcs:540, cs:540, 575nm oxy-hgb Hgb: : nm, 414nm, kisérő csúcs:540, cs:540, 575nm S-bilirubin: nm 430nm L-bilirubin: 460nm

17 RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 9. Összfehérjemérés: Festékk kkötésen alapuló reakciók TCA, szulfoszalicilsavas kicsapás s utáni turbidimetriás nefelometriás (Biuret-módszer) Mértékegysége: ge: liquorban: : mg/l szérumban: g/l

18 MENNYISÉGI ANALÍZIS 1. Nem elég g az összfehérjemérés Pándy-reakció (telített tett karbolsav) (Weichbrodt, Nonne-Apelt Apelt, Takata-Ara stb.) Mancini-féle radiális immundiffúzi zió, turbidimetria, nefelometria,, ELISA, RIA stb. (speciális vizsgálatok (NSE, S100 protein, MBP, CEA, TPHA, ACE, TNF-alfa alfa, citokinek, interleukinek,, kötő-k és s neutralizáló antitestek stb.) Metodikafüggő, saját referencia tartomány!

19 MENNYISÉGI ANALÍZIS 2. Albuminhányados: nyados: Li-alb/Se-alb Korfügg ggő! Kor 15 évig 40 évig 60 évig Q Alb x IgG index: Li-IgG/Se-IgG/Li-alb/Se-alb Metodikafügg ggő! Liquor és s szérum Albumin, IgG, IgA, IgM meghatároz rozása

20 MENNYISÉGI ANALÍZIS 3.

21 MENNYISÉGI ANALÍZIS 4.

22

23 LIQUORDIAGNOSZTIKA SCLEROSIS MULTIPLEX Andersson, M., Alvarez-Cermeno, J., Bernardi, G., Cogato I., Fredman P., Fredriksen J., Fredrikson S., Gallo P., Grimaldi ML., Gronning M., Keir G., Lamers K., Link H., Magalhaes A., Massaro RA., Öhman S., Reiber H., Rönnback L., Schluep M., Schuller E., Sindic CJM., Thompson EJ., Trojano M., Wurster U: Cerebrospinal fluid in the diagnosis of multiple sclerosis: a consensus report. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry, 1994, 57,

24 LIQUORDIAGNOSZTIKA (SM) Esszenciális teszt: izoelektromos fókuszálás Kiegészítő tesztek: -A vér-liquor gát integritásának vizsgálata -Az IgG index meghatározása -A liquor sejtszám mérése Választható tesztek: -IgM meghatározás -IgA meghatározás -Szabad kappa és lambda könnyűláncok kimutatása -Vírus-specifikus antitest index

25 MINŐSÉGI ANALÍZIS 1. Diffuse γ-szaporulat OGP Normális fehérjeeloszlás

26 MINŐSÉGI ANALÍZIS 2.

27 MINŐSÉGI ANALÍZIS 3. SCLEROSIS MULTIPLEX OGP (IEF) OGP Agarose-elfo Normális fehérjeeloszlás

28 WESTERN BLOTTING IgG-re Li Normál Se Li Azonos csíkok liquorban és szérumban Se

29 WESTERN BLOTTING IgG-re Li Liquorra korlátozott OGB-s és járulékos szérum csíkok Se Se Li Se Liquorra korlátozott oligoclonalis csíkok (OGB-s)

30 Klinikailag definitív SM-nél előfordul forduló abnormális liquor gyakorisága ga Oligoclonalis IgG (IEF) >95% Abnormális vér-liquor gát (VLG) 12% Megnövekedett QIgG (IgG index) 70-80% Megnövekedett sejtszám (>4/μl <35/μl) 50% Vírus elleni AT localis synthesis 94% Szabad κ és λ könnyűláncok 60-80% Megnövekedett QIgM (IgM index) 30-60% Kötő és neutralizáló antitestek 60-70%

31 KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!