Antibakteriális szerek

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Antibakteriális szerek"

Diána Faragóné
8 évvel ezelőtt
Látták:

1 Antibiotikum érzékenység meghatározása Antibakteriális szerek Célja: a mikroba érzékenységének, illetve rezisztenciájának meghatározása az antimikrobás szerrel szemben. A tesztelni kívánt antibiotikumok köre függ: A patogéntől és annak generikus rezisztenciájától. A fertőzés helyétől és az antibiotikum penetrációjától. Pl. meningitis esetén attól, hogy a szer képes-e a liquorba jutni. Nozokomiális vagy közösségben szerzett fertőzés. A vizsgálatokhoz a megfelelő módszert kell választani. Pl. anaerobok esetén a korongdiffúziós módszer nem használható. Definíciók MIC: minimum inhibitory concentration, minimális gátló koncentráció. Az a legkisebb koncentrációja egy antimikrobás szernek, amely még hatásosan gátolja az adott törzs növekedését. Minél kisebb a MIC értéke, annál hatásosabb az antimikrobás szer. A mikroba faj jellemzésére az alábbi populációs mutatókat használjuk: MIC értékhatárok: a törzsek között tapasztalható két szélső MIC érték. MIC 50: az a koncentráció, amely a törzsek 50%-át gátolja. MIC 90: az a koncentráció, amely a törzsek 90%-át gátolja. Ezeknek a populációs mutatóknak a határértékek meghatározásában van szerepe. Határértékek: MIC értékek, amelyek kijelölik az érzékenységi kategóriákat. Ha a törzs MIC értéke az alsó határértékkel megegyezik vagy az alatt van, a törzs érzékeny az adott szerrel szemben. Ha a törzs MIC értéke az felső határértékkel megegyezik vagy a fölött van, a törzs rezisztens az adott szerrel szemben. Ha a törzs MIC értéke a két határérték között van, a törzs mérsékelten érzékeny. MBC (minimum bactericidal concentration, minimális baktericid koncentráció) és MFC (minimum fungicidal concentration, minimális fungicid koncentráció): egy antibiotikum azon legkisebb koncentrációja, amely a kórokozó egyedeinek döntő többségét (99.9 %) elpusztítja. Ha ez az érték nem különbözik jelentősen a MIC értéktől, a szer baktericid/fungicid. Ha ez a különbség nagy, a szer bakteriosztatikus/fungisztatikus. Ezek a szerek is képesek a mikroba elpusztítására, de olyan magas koncentrációban, amely a szervezet számára toxikus. 1

meningitis esetén attól, hogy a szer képes-e a liquorba jutni. Nozokomiális vagy közösségben szerzett fertőzés. A vizsgálatokhoz a megfelelő módszert kell választani. Pl.

2 SBT SBT: serum bactericidal titer, szérum baktericid koncentráció: a beteg szérumának (esetleg liquornak) az a legnagyobb hígítása, amely mikrobicid a betegből izolált mikrobával szemben Az antibiotikum hatásosságát a kezelt beteg szérumában vizsgáljuk. Hígítási sort készítünk a szérumból, majd a betegből izolált törzsön elvégezzük a tesztet. Azt a legnagyobb hígítást keressük, ahol baktericid hatás érvényesül. Idő-ölőhatás görbék Adott mennyiségű antibiotikummal kiegészített, inokulált leves tápfolyadékon végezzük. Csíraszám meghatározást végzünk a leoltás pillanatában, ezután meghatározott időpontokban. A csíraszám-változást az idő függvényében ábrázolva kapjuk meg az időölőhatás görbét. Információt nyújt az antibiotikum hatásának kinetikájáról. Rutin diagnosztikában nem használatos. Munkaigényes, nem standardizálható. Néhány krónikus fertőzés esetén fontos lehet a teszt elvégzése. Több antibiotikum együttes hatása vizsgálható, majd a kapott görbe összehasonlítható az antibiotikumok különkülön felvett görbéivel. Szinergizmus: a kombináció hatása nagyobb a két szer külön-külön mért hatásának összegénél. Additív kölcsönhatás: a két szer hatása összeadódik. Indifferens kölcsönhatás: a kombináció hatása nem tér el jelentősen a hatékonyabb szer önmagában mért hatásától. Antagonizmus: a kombináció hatása kisebb a hatékonyabb szer önmagában mért hatásánál. Agarhígításos módszer Tápagart tartalmazó csészesorozaton végezzük. A táptalajok kettes léptékű antibiotikum hígítási sort tartalmaznak. Minden csészére azonos sűrűségű inokulumot oltunk. A MIC egyenlő azon legkisebb antibiotikum koncentrációval, ahol növekedés még nem tapasztalható. Ha a növekedési kontrollon nincs növekedés. Ha alacsonyabb antibiotikum koncentráció esetén nincs növekedés, míg nagyobb antibiotikum koncentráció esetén van. Ha a negatív kontrollon is van növekedés. Leveshígításos módszer A vizsgálatokat hasonló az agarhígításos módszerben, de folyékony táptalajban végezzük. A MIC egyenlő azon legkisebb antibiotikum koncentrációval, amely még jelentősen gátolta a növekedést (nincs látható zavarosság). Mikrodilúció: mikroplate-n végezzük kis térfogatban ( µl). Előnye, hogy kisebb anyagmennyiségekkel dolgozhatunk. Makrodilúció: üvegcsövekben végezzük nagyobb térfogatban (1 ml). Előnye, hogy az eredmények könnyebben leolvashatók. Vancomycin sensitivity testing in MRSA isolates Drága és időigényes módszer. ld. az agarhígításnál. Ann. Trop. Med. Publ. Health (2012) 5:

Azt a legnagyobb hígítást keressük, ahol baktericid hatás érvényesül. Idő-ölőhatás görbék Adott mennyiségű antibiotikummal kiegészített, inokulált leves tápfolyadékon végezzük.

3 MBC/MFC meghatározása A MIC meghatározásához használt mikro- és makrodilúciós csöveket használjuk hozzá. A MIC érték feletti csövekből (ahol nem volt növekedés) leoltást végzünk szilárd táptalajra. MBC/MFC az a koncentráció, ahol a mikrobák 99,9%-a elpusztul. Általában két párhuzamos leoltást végzünk. Ha a párhuzamosok közt a különbség kétszeresnél nagyobb, nem értékelhető a teszt. Baktericid antibiotikum MBC MIC Bakteriosztatikus antibiotikum MBC MIC antibiotikum koncentráció (mg/l) antibiotikum koncentráció (mg/l) E-teszt Alapja egy műanyag csík, amely egyik felszínén hordozó anyagba felvitt antibiotikumot tartalmaz, koncentráció gradiens szerint. Az antibiotikum a táptalajba diffundál. A koncentráció gradiens a táptalajban is fennmarad. Az antibiotikum gátolja a mikroba növekedését elliptikus zónában a gradiensnek megfelelően. Ahol a gátlási zóna metszi a csíkot az a koncentráció érték a MIC. Könnyű használni, de drága. Határérték módszer Az antimikrobás hatást a két határértéknek megfelelő koncentráció értéken vizsgáljuk. Folyékony és szilárd táptalajon is beállíthatjuk a két koncentráció értéket. Ha egyik csőben vagy táptalajon sincs növekedés, a mikroba érzékeny. Ha a magasabb koncentráció mellett nincs, de a kisebb mellett van növekedés, a mikroba mérsékelten érzékeny. Ha mindkét koncentráció mellett van növekedés, a mikroba rezisztens. Ha a magasabb koncentrációnál van, a kisebbnél nincs növekedés. A negatív kontrollban van növekedés. Az antibiotikum mentes csőben nincs növekedés. 3

Baktericid antibiotikum MBC MIC Bakteriosztatikus antibiotikum MBC MIC 16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.12 0.06 0.

4 Rezisztencia szűrés Hasonló a határérték módszerhez, de csak a magasabb koncentráció értéket használjuk. Ha növekedést látunk a mikroba rezisztens. Heterorezisztencia vizsgálatra és Enterococcusok aminoglikozid rezisztenciájának azonosítására használható. Korongdiffúziós vagy Kirby-Bauer módszer Antibiotikummal átitatott papír lemezeket helyezünk agar táptalajra, melyre előzőleg kioltottuk a baktériumokat. Az antibiotikum a táptalajba diffundál. Nem használható anaerobok, lassan növő mikrobák esetén, de olcsó, könnyen használható. A gátló zónák mérete függ: Az antibiotikum koncentrációjától. A baktérium antibiotikum-érzékenységétől. Az antibiotikum diffúziós képességétől. A megfelelő standardokkal a zónaátmérőkből következtethetünk a mikroba érzékenységére. Korong diffuziós vagy Kirby-Bauer módszer Amennyiben az antibiotikum könnyen képes a táptalajba diffundálni, a gátló zónák átmérőjéből kalibrációs görbe készíthető a MIC meghatározására. A korongdiffúziós módszer mellett kvantitatív módszert is kell végezni a különböző törzseknél MIC értékek kvantitatív meghatározásához. A zónaátmérőket a MIC értékek logaritmusának függvényében ábrázoljuk. Ha egyenes illeszthető a pontokra, az ismeretlen MIC meghatározható a zóna átmérőből. Ha nem illeszthető a pontokra megfelelő egyenes, nem állapítható meg biztonsággal az ismeretlen MIC. β-laktamázok kimutatása Mikor fontos? Ha csak a β-laktamáz felelős a rezisztenciáért (Haemophilus). Ha a tenyésztéses módszernél megbízhatóbb (N. gonorrhoeae). Hátrány: ha nincs β-laktamáz aktivitás, még nem jelenti, hogy a törzs érzékeny β-laktámokra. Hogyan detektálható: Nitrocefin próba: a nitrocefin egy cefalosporin származék, amelynél ha a laktám-gyűrű felhasad színes termék keletkezik (sárgából piros színváltozás). Haemophilus, Neisseria, Staphylococcus, Enterococcus. Jodometriás próba: a laktámgyűrű felhasadásakor redukáló hatású csoport keletkezik, amely a jódot redukálja, és ez keményítővel kimutatható. N. gonorrhoeae. Acidimetriás próba: a laktámgyűrű felhasadásakor keletkező karboxil csoport okozta ph csökkenés indikátorral kimutatható. N., Staphy., Haemoph ESBL kimutatása A III generációs cefalosporinok hidrolizisére is képes. A β-laktamázok β-laktamáz inhibitorokkal gátolhatók. Így a cefalosporin hatásos az inhibitor jelenlétében (in vitro). E-teszt esetén az egyik vég cefalosporinnal, a másik cefalosporinnal és klavulánsavval átitatott. Korongdiffúziós módszer esetén egy cefalosporinnal átitatott, és egy másik, cefalosporint és klavulánsavat tartalmazó korongot helyezünk ugyanarra a leoltott agarra. A teszt pozitív, ha a két zóna közti különbség nagyobb, mint 5 mm. Cefalosporintól 2 cm-re elhelyezett klavulánsav-tartalmú korong felé a cefalosporin gátlási zónája megnyúlik. 4

Korongdiffúziós vagy Kirby-Bauer módszer Antibiotikummal átitatott papír lemezeket helyezünk agar táptalajra, melyre előzőleg kioltottuk a baktériumokat. Az antibiotikum a táptalajba diffundál.

5 Meticillin rezisztens S. aureus PBP2a fehérjéjének kimutatása Monoklonális antitestek segítségével, latex agglutinációval. A rezisztencia gének kimutatása közvetlenül is történhet PCR segítségével. 5

Hasonló dokumentumok

Nemzeti Akkreditáló Testület. MÓDOSÍTOTT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAT-1-1436/2014 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz

Nemzeti Akkreditáló Testület. MÓDOSÍTOTT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAT-1-1436/2014 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz Nemzeti Akkreditáló Testület MÓDOSÍTOTT RÉSZLETEZŐ OKIRAT (1) a NAT-1-1436/2014 nyilvántartási számú akkreditált státuszhoz A Csongrád Megyei Kormányhivatal Népegészségügyi Főosztály Laboratóriumi Osztály