Különböző Capsicum annuum var. grossum paprikafajták endofita baktériumainak izolálása, jellemzése és molekuláris biológiai vizsgálata

Méret: px

Mutatás kezdődik a ... oldaltól:

Download "Különböző Capsicum annuum var. grossum paprikafajták endofita baktériumainak izolálása, jellemzése és molekuláris biológiai vizsgálata"

Bence Bogdán
5 évvel ezelőtt
Látták:

1 Élelmiszertudományi Kar, Mikrobiológiai és Biotechnológiai Tanszék, Budapest Különböző Capsicum annuum var. grossum paprikafajták endofita baktériumainak izolálása, jellemzése és molekuláris biológiai vizsgálata FÜSTÖS Zoltán, BELÁK Ágnes, KOVÁCS Mónika, HÉHER Bernadett, MARÁZ Anna

2 Bevezetés Endofita baktériumok Növényi vitalitás Abiotikus és biotikus stressz Csírázás serkentése Növényi kórokozók elleni védelem (antimikrobás anyagok, biofilm képzés) Xenobiotikumok lebontása Újabb kutatások Humánpatogének bejutásának segítése/gátlása a növényi szövetekbe Gátlás esetén biokontroll törzsként történő alkalmazásuk Humánpatogének segítése élelmiszerbiztonsági kockázat Kutatás célja 1. Víz- és talajkultúrás Capsicum annuum var. grossum csemgepaprika Ho és KPA fajtáiból endofita baktériumok izolálása és jellemzése 2. Endofita növényre gyakorolt hatás (csírázási tesztek) 3. Endofita humánpatogén kölcsönhatás vizsgálat

Baktériumok izolálása és jellemzése Baktériumok izolálása: Felületi fertőtlenítés

TGE, Kromogén differenciáló (WL), Kóliform szelektív (VRBL) tápagarokon.

Vízkultúrás paprikák 6 hetes palánták 88 7 hónapos növények terméssel 53 9 hónapos

Talajkultúrás paprikák 7 hetes palánták 67 6 hónapos növények terméssel 53 8 hónapos

3 Baktériumok izolálása és jellemzése Baktériumok izolálása: Felületi fertőtlenítés (etanol+hipoklorit) Tenyésztés TGE tápfolyadékban Színtenyészetek létrehozása : Komplett TGE, Kromogén differenciáló (WL), Kóliform szelektív (VRBL) tápagarokon. Izolátumok származása Darabszám I. Vetőmagok 25 II. Vízkultúrás paprikák 6 hetes palánták 88 7 hónapos növények terméssel 53 9 hónapos termések 12 III. Talajkultúrás paprikák 7 hetes palánták 67 6 hónapos növények terméssel 53 8 hónapos termések 25 Ho és KPA összesen 323 Baktériumok jellemzése: Sejt és telepmorfológia Gram szerinti vizsgálat Spórázási képesség Kataláz-, oxidáz-próba OF vizsgálat VRBL izolátumok Statsoft - STATISTICA 10 Fenotípusos tipizálás

4 Baktériumok izolálás és jellemzés Ho fajtából származó Gram negatív izolátumok fenogramja

Kontrollhoz viszonyított csírázás (%) SEF-PR-K-4 SE-SR-K-2 SE-PR-H-6 SE-PR-K-12 SEF-PR-K-7 SEF-PR-K-2 SE-SR-K-16 SEF-SR-K-4 SE-PR-K-9 13 SE-PR-H-4 SEF-PR-H-11 Csírázási tesztek SE-L-H-1 SEF-PR-H-5a_V

5 Kontrollhoz viszonyított csírázás (%) SEF-PR-K-4 SE-SR-K-2 SE-PR-H-6 SE-PR-K-12 SEF-PR-K-7 SEF-PR-K-2 SE-SR-K-16 SEF-SR-K-4 SE-PR-K-9 13 SE-PR-H-4 SEF-PR-H-11 Csírázási tesztek SE-L-H-1 SEF-PR-H-5a_V SE-PR-H-1 SE-PR-H-18 SE-PR-H-9 SEF-PR-H-1 SE-PR-H-4 SE-PR-H-1-K SE-PR-H-2 SE-PR-H-11 SE-PR-K-13 SE-PR-K-11 SE-S-K-2 SEF-PR-K-8 SEF-PR-K-12 SEF-PR-K-15 SEF-PR-K-16 SE-SR-K-17 SEF-S-K-10 SEF-SR-K-1 SE-PR-K-23 SE-PR-K-19 SE-SR-K-1 SE-PR-K-15 SE-PR-K-6 Módszer: 50 mag/izolátum Fertőzés sejt/ml sejtszuszpenzióval Keverés: 6 óra Csíráztatási idő: 10 nap Izolátumokkal fertőzött Kontroll Serkentés Erős gátlás Gyenge gátlás Nincs gátlás 50 0

6 rep-pcr Molekuláris biológiai vizsgálatok rdns-rflp (ARDRA) Pseudomonas nemzetség-specifikus PCR eredménye Pseudomonas nemzetség Nem Pseudomonas nemzetség Pseudomonas nemzetség

FP-BBI-K-5 HP-SR-K-4 HP-PR-K-2 HP-S-K-1 HP-S-K-2 HP-S-K-4 HP-PR-H-4 HP-L-K-1 FP-S-H-2 FP-S-H-3 HP-BBI-H-3 HP-BBI-H-5 FP-BBI-H-6 FP-BBI-H-8 FP-BBI-H-7 FP-BBI-H-9 FP-BBI-K-3 Negatív kontroll rdns

Pseudomonas izolátum Pseudomonas nemzetség-specifikus PCR alapján: 24 Pseudomonas izolátum rpob gén szekvenálása M Pseudomonas nemzetség-specifikus PCR M Nemzetségek Acetobacter, Acidovorax,

7 FP-BBI-K-5 HP-SR-K-4 HP-PR-K-2 HP-S-K-1 HP-S-K-2 HP-S-K-4 HP-PR-H-4 HP-L-K-1 FP-S-H-2 FP-S-H-3 HP-BBI-H-3 HP-BBI-H-5 FP-BBI-H-6 FP-BBI-H-8 FP-BBI-H-7 FP-BBI-H-9 FP-BBI-K-3 Negatív kontroll rdns szekvenálás és identifikálás valamint a nemzetség-specifikus PCR eredményei Faj szintű azonosítás: rdns gén amplikonjainak szekvencia analízise alapján: 13 Pseudomonas izoltáum 35 nem Pseudomonas izolátum Pseudomonas nemzetség-specifikus PCR alapján: 24 Pseudomonas izolátum rpob gén szekvenálása M Pseudomonas nemzetség-specifikus PCR M Nemzetségek Acetobacter, Acidovorax, Agrobacterium, Comamonas, Cupriavidus, Delftia, Enterobacter, Erwinia, Leclercia, Mesorhizobium, Nanobacterium, Pantoea, Ralstonia, Rhizobium, Serratia, Stenotrophomonas, Thermoleophilum, Xanthomonas, Bacillus

8 Következtetések I. Potenciális endofita baktériumok sikeres izolálása minden fejlődési stádiumából, termesztési körülményektől függetlenül => baktériumok végigkísérik a növény életciklusát II. Klonálisan megegyező izolátumok sikeres azonosítása: azonos növényi részekről származnak, de nem mindig => migráció a növényben legtöbbször azonos termesztésű és az azonos paprika fajtából származnak III. A csírázási teszt alkalmas az endofitaként izolált bakériumok növényekre gyakorolt hatásának kimutatására

9 KÖSZÖNÖM A MEGTISZTELŐ FIGYELMÜKET! Támogatók: - OTKA számú projekt - TÁMOP A/ Nemzeti Kiválóság Program

Hasonló dokumentumok

Doktori (PhD) értekezés tézisei

Doktori (PhD) értekezés tézisei FÜSTÖS ZOLTÁN Budapest 2016 SZENT ISTVÁN EGYETEM ÉTKEZÉSI PAPRIKA (CAPSICUM ANNUUM L. VAR. GROSSUM) TENYÉSZTHETŐ ENDOFITA BAKTÉRIUMAINAK BIODIVERZITÁSA ÉS KOLONIZÁCIÓJUK